一种具有化学动力学效用的化合物及纳米囊泡的制备方法
阅读说明：本技术 一种具有化学动力学效用的化合物及纳米囊泡的制备方法 (Compound with chemical kinetics effect and preparation method of nano vesicle ) 是由 刘昕 刘季 孟迟 钱建强 凌诗佳 凌勇 于 2021-06-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种具有化学动力学效用的化合物及纳米囊泡的制备方法,化合物合成方法如下：以二氯甲烷/MeOH(1：2,v/v,30mL)的混合物为反应介质,以TBTA和Cu(CNCH-3)4PF-6为催化剂,4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3’,4’：6,7]吲哚并[1-2,b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：1在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂后,将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝100/1)纯化,得到浅黄色固体,即为目标产物。本发明的化合物喜树碱前药能够降低肿瘤内部的酸度以及增加H-2O-2的含量。(The invention discloses a compound with chemical kinetics effect and a preparation method of nano vesicles, wherein the synthesis method of the compound comprises the following steps: TBTA and Cu (CNCH) in a mixture of dichloromethane/MeOH (1: 2, v/v, 30mL) as reaction medium 3 )4PF 6 As catalyst, 4-ethyl-3, 14-dioxo-3, 4,12, 14-tetrahydro-1H-pyrano [3', 4': 6,7]Indolo [1-2, b ]]Quinolin-4-yl (2- (prop-2-yn-1-yloxy) ethyl) disulfanyl) ethyl) carbonate and (2- (6-azidohexyloxy) oxy) methyl]Cyclopent-2, 4-dien-1-yl) (cyclopent-2, 4-dien-1-yl) iron in a molar ratio of 1:1 stirred at room temperature for 12 hours. After the solvent was removed under reduced pressure,the crude product was purified by column chromatography (dichloromethane/methanol ═ 100/1) to give a pale yellow solid, which was the target product. The camptothecin prodrug of the compound can reduce acidity in tumors and increase H 2 O 2 The content of (a).)
技术领域
本发明涉及肿瘤治疗
技术领域
，具体为一种具有化学动力学效用的化合物及纳米囊泡的制备方法。背景技术
在临床上，化学疗法，光动力疗法，放射疗法和外科手术已被用作抑制肿瘤增殖的主要方法。然而，由于这些肿瘤固有的治疗抗性，异质性和转移性，这些方法只能取得有限的治疗效果。近年来，化学动力学疗法(CDT)受到了广泛的关注，它利用铁介导的芬顿或类芬顿反应将肿瘤内或细胞内的H2O2转化为羟基自由基(·OH)来提高细胞内的氧化应激水平，从而对肿瘤产生杀伤效果。并且由于半衰期短和高氧化能力，生成的·OH仅在产生部位产生有效的损伤，从而避免了对周围正常组织的副作用。尽管H2O2在癌细胞中过量产生，但是并不足以产生足够的·OH来杀伤肿瘤。此外，用于芬顿反应的最佳pH为这使得一般肿瘤的酸性微环境并不是最合适的反应条件。因此，如何选择性地增加肿瘤组织的H2O2的量并降低其pH已成为实现更好的CDT的关键因素。
葡萄糖氧化酶(GOx)可以特异性地将β-D-葡萄糖氧化为葡萄糖酸(H+)和H2O2，这是降低肿瘤酸度和提高H2O2水平的完美条件。同时基于Warburg效应，肿瘤组织的葡萄糖浓度也比正常细胞的高。GOx耗尽肿瘤内葡萄糖可有效消耗肿瘤生长所需的能量，并迫使肿瘤细胞饥饿甚至死亡。因此，GOx诱导的饥饿疗法和·OH诱导的CDT的整合可以通过协同增效作用来发挥更好的治疗作用。实际上，可用于芬顿反应的可用游离铁离子在人体内部很少。目前，大多数报道的CDT或GOx组合CDT系统是由铁或其他基于过渡金属的无机或金属-有机骨架纳米材料构成的，而其他种类的纳米粒子，例如脂质体纳米粒子，聚合物纳米粒子和超分子纳米粒子很难用于CDT中。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有化学动力学效用的化合物及纳米囊泡的制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种具有化学动力学效用的化合物，所述化合物为喜树碱前药化合物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁的结构如下：
优选的，合成方法如下：
以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：1在室温下搅拌12小时，减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物。
优选的，所述4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯的结构式如下：
优选的，一种纳米囊泡，采用喜树碱前药和水溶性水溶性柱[6]芳烃的组装纳米囊泡[email protected]。
优选的，一种纳米囊泡的制备方法，具体制备方法如下：
将该喜树碱前药10mM溶于300μL DMF/丙酮溶液中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为1:0,1:1,2:1,4:1,6:1和8:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀；然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min；待振摇完成后，三蒸水中透析过夜；冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs；将不同浓度的GOx溶解在含有水溶性柱[6]芳烃的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液获得3mL最终溶液；将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡；将混合物在去离子水中渗析4h进一步纯化，最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明的化合物喜树碱前药能够降低肿瘤内部的酸度以及增加H2O2的含量。喜树碱前药中的二茂铁通过芬顿反应催化H2O2产生·OH，从而对肿瘤产生杀伤效果。最后GOx诱导的饥饿疗法，喜树碱的化疗能力和·OH诱导的CDT可以通过协同增效作用来发挥更好的治疗作用。
附图说明
图1为喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃组装的纳米粒子的粒径分布图；
图2为本发明[email protected](1×10-4mol·L-1)在葡萄糖(1mg/mL)和3,3'，5,5'-四甲基联苯胺(TMB)下，不同时间下的紫外吸收光谱图；
图3为本发明单独GOx、T-NPs(1×10-4mol·L-1)、[email protected](1×10-4mol·L-1)在葡萄糖(1mg/mL)下，检测羟基自由基的电子自旋共振(ESR)结果示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明提供如下技术方案：一种具有化学动力学效用的化合物，所述化合物为喜树碱前药化合物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁的结构如下：
其中，合成方法如下：
以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：1在室温下搅拌12小时，减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇＝100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物。
所述4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯的结构式如下：
实施例一
(一)中间体4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯的合成。
在氮气下，将三光气(237mg，0.8mmol)和DMAP(1.075g，8.0mmol)加入到100mL无水氯仿中，并将混合物于室温搅拌0.5h。然后将喜树碱(696mg，2.0mmol)于室温在2小时内分三批连续添加到反应混合物中，最后缓慢加入2-((2-(2--2-丙-2-丙氧基)乙基)二硫烷基)乙烷-1-醇(0.5g，2.6mmol)的无水氯仿溶液。将所得混合物在室温下再搅拌12小时。减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法纯化，使用二氯甲烷/甲醇(v/v，100：1)作为洗脱剂，得到浅黄色固体状的中间体4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯。
(二)具有化学动力学效用的喜树碱前药的合成：以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：1在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁。
产率：82.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.40(s,1H),8.23(d,J＝8.0Hz,1H),7.95(d,J＝8.0Hz,1H),7.84(ddd,J＝8.4,6.9,1.4Hz,1H),7.68(ddd,J＝8.1,6.9,1.1Hz,1H),7.52(s,1H),7.34(s,1H),5.70(d,J＝17.2Hz,1H),5.39(d,J＝17.2Hz,1H),5.29(s,2H),4.59(s,2H),4.39–4.28(m,4H),4.25(s,1H),4.21(t,J＝1.8Hz,2H),4.14–4.11(m,6H),3.70(td,J＝6.2,0.9Hz,2H),3.38(t,J＝6.5Hz,2H),2.93–2.83(m,4H),2.28(dd,J＝14.0,7.5Hz,1H),2.15(dd,J＝14.0,7.5Hz,1H),1.87(dt,J＝14.6,7.4Hz,3H),1.54–1.49(m,2H),1.38–1.26(m,5H),1.01(t,J＝7.5Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ167.34,157.27,153.44,152.26,148.85,146.51,145.59,144.74,131.23,130.74,129.65,128.46,128.22,128.18,128.10,122.40,120.17,95.96,83.56,78.00,77.25,69.59,69.44,69.08,68.40,68.29,67.07,66.63,64.37,50.24,50.02,38.74,36.34,31.86,30.21,29.44,26.26,25.59,7.65.HRMS:(ESI,m/z)Calcd for C45H49FeN5O8S2[M]2+:907.23610,found907.23584.
实施例二
(一)中间体的合成：同实施例1。
(二)具有化学动力学效用的喜树碱前药的合成：以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：3在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁。
产率：80.4％。合成产物的表征数据同实施例1。
实施例三
(一)中间体的合成：同实施例1。
(二)具有化学动力学效用的喜树碱前药的合成：以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：5在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁。
产率：80.4％。合成产物的表征数据同实施例1。
实施例四(一)中间体的合成：同实施例1。
(二)具有化学动力学效用得喜树碱前药的合成：以二氯甲烷/MeOH(1：2，v/v，30mL)的混合物为反应介质，以TBTA和Cu(CNCH3)4PF6为催化剂，4-乙基-3,14-二氧代-3,4,12,14-四氢-1H吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1-2，b]喹啉-4-基(2-(碳酸(2-(丙-2-炔-1氧基)乙基)二硫烷基)乙基)碳酸酯与(2-(6-叠氮基己氧基)氧基)甲基]环戊-2,4-二烯-1基)(环戊-2,4-二烯-1-基)铁以摩尔比1：7在室温下搅拌12小时。减压除去溶剂后，将粗产物通过柱色谱法(二氯甲烷/甲醇100/1)纯化，得到浅黄色固体，即为目标产物环戊-2,4-二烯-1-基(2-(6-(4-(2-(2-(4-乙基-3,14-二氧3,4,12,14-四氢-1H-吡喃并[3'，4'：6,7]吲哚并[1,2-b]喹啉-4基)氧基)羰基)氧基)乙基)二硫烷基)乙氧基)甲基)-1H-1,23-三唑1-基)己基氧基)甲基)环戊-2,4-二烯-1-基)铁。
产率：84.2％。合成产物的表征数据同实施例1。
一种纳米囊泡，采用喜树碱前药和水溶性水溶性柱[6]芳烃的组装纳米囊泡[email protected]。
一种纳米囊泡的制备方法，具体制备方法如下：
将该喜树碱前药10mM溶于300μL DMF/丙酮溶液中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为1:0,1:1,2:1,4:1,6:1和8:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀；然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min；待振摇完成后，三蒸水中透析过夜；冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs；将不同浓度的GOx溶解在含有水溶性柱[6]芳烃的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液获得3mL最终溶液；将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡；将混合物在去离子水中渗析4h进一步纯化，最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例一
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为1:0的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μLCPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例二
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为1:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μLCPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例三
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为2:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例四
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为4:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例五
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为6:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
实施例六
将该喜树碱前药(10mM)溶于300μL DMF/丙酮溶液(v/v＝2:1)中，分别按照喜树碱前药与水溶性柱[6]芳烃为8:1的摩尔比，将水溶性柱[6]芳烃溶于三蒸水中，振荡均匀。然后滴加喜树碱前药的DMF/丙酮溶液，待滴加完成后，迅速振荡，并放入摇床上振摇30min。待振摇完成后，三蒸水中透析过夜。冷冻干燥后，即制备成功喜树碱前药和水溶性柱[6]芳烃的组装纳米粒子[email protected] NPs。
将不同浓度的GOx(200、400、600、800μg/mL)溶解在含有WP6的去离子水中，然后快速加入60μL CPT-G的DMF/丙酮储备溶液(v/v＝2：1)获得3mL最终溶液(相同的CPT-G浓度为100μM)。将混合物摇动10分钟并静置过夜以形成稳定的超分子GOx负载的囊泡。为了除去有机溶剂和卸载GOx，将混合物在去离子水中渗析(分子量截断为300000)4h进一步纯化。最后成功制备了GOx-负载的囊泡，并将其表示为[email protected]。
[email protected]化学动力学效用实验
仪器与试剂：1H NMR使用Mercury-400BB型核磁共振仪测定，TMS为内标。元素分析使用Flash EA 1112型元素分析仪测定；熔点使用X-4数字显示显微熔点测定仪(温度计未校正)测定；紫外光谱使用岛津UV-2550紫外-可见吸收光谱仪(1cm石英液池)测定。溶剂为三次蒸馏水和二甲基亚砜(DMSO，分析纯)。其它试剂均为市售分析纯。
1.·OH的检测实验
将溶于DMSO中的25μL TMB(10.6mg/mL)和50μL葡萄糖水溶液(24mg/mL)添加到[email protected]溶液中以获得混合悬浮液(CPT-G 100μM，TMB 1mM，GOx 40μg/mL，葡萄糖1mg/mL)。·OH诱导的TMB氧化通过在37℃下不同时间段的紫外可见光谱记录665nm处的吸光度值变化进行监测。
结果发现[email protected]溶液的颜色从淡黄色逐渐变暗为蓝色，紫外可见光谱中652nm处的吸收峰随着时间不断升高。
综上所述，本发明的化合物喜树碱前药能够降低肿瘤内部的酸度以及增加H2O2的含量。喜树碱前药中的二茂铁通过芬顿反应催化H2O2产生·OH，从而对肿瘤产生杀伤效果。最后GOx诱导的饥饿疗法，喜树碱的化疗能力和·OH诱导的CDT可以通过协同增效作用来发挥更好的治疗作用。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
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