一种含噻吩结构的化合物及其在医药上的应用
阅读说明：本技术 一种含噻吩结构的化合物及其在医药上的应用 (Compound containing thiophene structure and application thereof in medicine ) 是由 魏群超 王岩石 吴宝金 吴海翔 刘鹏 孔晓华 郑志超 张士俊 李玉荃 黄长江 于 2021-04-21 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种式(I)结构的化合物及其药用盐以及其在用于预防和/或治疗血栓栓塞性疾病和/或血栓栓塞并发症的药物中的用途,其中所有变量如说明书所定义。(The present invention provides a compound of formula (I) wherein all variables are as defined in the specification, and pharmaceutically acceptable salts thereof, and their use in medicaments for the prevention and/or treatment of thromboembolic disorders and/or thromboembolic complications.)
技术领域
本发明属于医药技术领域。具体地，本发明涉及一类含噻吩结构的化合物及其药用盐、其制备方法和用途以及包含所述化合物及其药用盐的药物组合物。
背景技术
血栓栓塞性疾病不仅发病率高，而且致死率和致残率也很高，如由血栓栓塞引起的心肌梗死、脑梗死、肺梗死居各种死亡原因之首。对血栓性疾病的防治药物主要包括抗凝血、抗血小板和溶栓药物，出血是目前临床抗栓药物防治最主要、最常见的并发症。传统的抗凝药物，如华法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)，以及近年上市的新药，如FXa抑制剂(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制剂(达比加群酯、水蛭素等)，对减少血栓形成均具有较好效果，但都还面临着共同的不足——可能引起出血并发症。因此，研发具有出血副作用小的抗栓新药具有重要价值。
凝血因子Ⅺ(FⅪ)作为凝血接触激活途径的一员首先被大家认识，其在体内活化形成凝血因子Ⅺa(FⅪa)。然而随着研究的深入，人们对传统的瀑布凝血理论进行了修正，修正的理论认为：FⅪ可被凝血酶激活形成FⅪa，并且在持续不断的凝血酶的生成和纤维蛋白溶解的抑制中发挥作用。近年来，有关人类FⅪ缺陷或FⅪ水平升高的临床资料，以及动物FⅪ缺陷或被抑制的抗栓实验研究表明，FⅪ及FⅪa是出血风险小的抗栓防治新靶点，针对FⅪ及FⅪa靶点的抗栓药物出血副作用小。因此，开发FⅪa抑制剂类药物有望克服传统抗凝药物的共同缺点：出血并发症，具有重要的临床需求和广阔的市场前景。
Ola等人于2015年1月28日发表在PLOS ONE|DOI:10.1371/journal.pone.0113705上的题为“Creating Novel Activated Factor XI Inhibitorsthrough Fragment Based Lead Generation and Structure Aided Drug Design”的文章报道了一系列有活性的2-氧代-1，2-二氢喹啉类FⅪa抑制剂。然而，已知的FⅪa抑制剂还有很多缺陷如溶解度等理化性质不理想，不利于成药。因此，本领域亟需溶解性好，有利于吸收的新型FⅪa抑制剂的研究。
发明内容
本发明的一个目的是提供溶解性好，有利于吸收且对FⅪa具有抑制作用的含噻吩结构的化合物及其药用盐。
本发明的另一个目的是提供本发明所述化合物的制备方法。
本发明的再一个目的是提供一种药物组合物，其包含本发明所述的式(Ⅰ)结构的化合物及其药用盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明的还一个目的是提供本发明所述化合物及其药用盐的用途。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一方面，本发明提供一种式(I)结构的化合物及其药用盐:
其中：
R1选自-CHR4R5、-(CH2)qCH(NH2)CO2H、-CH2R8、
R2选自H、C1-6烷基；
R3选自-OR11、-OCH2OC(O)OCH2CH3、-NHR12、
R4选自-NH2、-NHCH3、-NHCH2CH3、-NHCH(CH3)2、-NHCH(CH3)CH2CH3、-NHC(CH3)3；
R5选自H、C1-6烷基、-CH2CO2H、-(CH2)2CO2H；
R6选自-NH2、-NHCH3、-NHCH2CH3、-NHCH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-NHCH(CH3)CH2CH3、-CH2NH2、-CH2NHCH3、-CH2NHCH2CH3、-CH2NHCH(CH3)2、-CH2NHC(CH3)3、-CH2NHCH(CH3)CH2CH3、-N(CH3)2、-CH2N(CH3)2；
R7选自-NH2、-NHCH3、-NHCH2CH3、-NHCH(CH3)2、-NHC(CH3)3、-NHCH(CH3)CH2CH3、-N(CH3)2；
R8选自-NR9R10；
R9和R10各自独立的选自C1-6烷基；
R11选自H、C1-6的烷基和C3-6环烷基；
R12选自H、-CH2CO2H、-CH(CH3)CO2H、-CH(CH(CH3)2)CO2H、-(CH2)4CH(NH2)CO2H、-CH(CO2H)(CH2)4NH2、-CH(CH2CH(CH3)2)CO2H、-CH(CH(CH3)CH2CH3)CO2H；
W选自-CH2-、-NH-、-N(CH3)-、-N(CH2CH3)-、-N(CH2CH(CH3)2)-、-N(CH(CH3)2)-、-N(C(CH3)3)-、-NH(CH(CH3)CH2CH3)-；
X选自O、S、N；
Y选自C、N；
Z选自C；
A选自-CH2-、O、-NH-、-N(CH3)-、-N(CH2CH3)-、-N(CH(CH3)2)-、-N(C(CH3)3)-、-N(CH2CH(CH3)2)-、-NH(CH(CH3)CH2CH3)-；
i选自1、2、3和4；
m、p和q各自独立的选自1和2。
在本发明某些优选的实施方案中，在所述式(Ⅰ)所示的化合物及其药用盐，其中：
R1选自-CHR4R5、-(CH2)qCH(NH2)CO2H、-CH2R8、
R2选自H、C1-3烷基；
R3选自-OR11、-NHR12、
R4选自-NH2、-NHCH3；
R5选自H、C1-4烷基、-CH2CO2H、-(CH2)2CO2H；
R6选自-NH2、-NHCH3；
R7选自-NH2、-NHCH3；
R8选自-NR9R10；
R9和R10各自独立的选自C1-3烷基；
R11选自H、C1-6的烷基；
R12选自H、-CH2CO2H、-CH(CH3)CO2H、-CH(CH(CH3)2)CO2H、-(CH2)4CH(NH2)CO2H、-CH(CO2H)(CH2)4NH2、-CH(CH2CH(CH3)2)CO2H、-CH(CH(CH3)CH2CH3)CO2H；
W选自-CH2-、-NH-、-N(CH3)-；
X选自O、N；
Y选自C、N；
Z选自C；
A选自-CH2-、O、-NH-、-N(CH3)-；
i选自1、2、3和4；
m、p和q各自独立的选自1和2。
在本发明某些更优选的实施方案中，在所述式(Ⅰ)所示的化合物及其药用盐，其中：
R1选自-CHR4R5、-(CH2)qCH(NH2)CO2H、-CH2R8、
R2选自H、-CH3；
R3选自-OR11、-NHR12、
R4选自-NH2；
R5选自H、-CH3、-CH(CH3)2、-CH(CH3)CH2CH3、-CH2CO2H、-(CH2)2CO2H；
R6选自-NH2；
R7选自-NH2；
R8选自-NR9R10；
R9和R10各自独立的选自-CH3；
R11选自H、-CH3；
R12选自H、-CH2CO2H、-(CH2)4CH(NH2)CO2H、-CH(CO2H)(CH2)4NH2；
W选自-CH2-、-NH-、-N(CH3)-；
X选自O、N；
Y选自C、N；
Z选自C；
A选自-CH2-、O；
i选自1、2、3和4；
m、p和q各自独立的选自1和2。
在本发明某些优选的实施方案中，所述式(Ⅰ)所示的化合物及其药用盐选自如下化合物：
另一方面，本发明提供一种制备式(I)结构化合物的方法，该方法包括以下步骤：
方法一：
(1)将化合物A与化合物B反应，再脱除保护基得到化合物C；
(2)将化合物C与化合物D反应，得到化合物E；
(3)将化合物E还原，得到化合物F；
(4)将化合物F与相应试剂反应，脱除保护基，得到式(Ⅰ)所示的部分化合物，或将化合物F与相应试剂反应直接得到式(Ⅰ)所示的部分化合物；
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z的定义如前所述。
方法二：
(1)将化合物A与化合物B反应，再脱除保护基得到化合物C；
(2)将化合物C与化合物G反应，得到化合物H；
(3)将化合物H还原，得到化合物I；
(4)将化合物I与相应试剂反应，得到化合物J；
(5)将化合物J脱除保护基得化合物K；
(6)化合物K与相应试剂反应，再脱除相应保护基得到式(Ⅰ)所示的部分化合物，或将化合物K与相应试剂反应直接得到式(Ⅰ)所示的部分化合物；
其中，R1、R2、R3、X、Y、Z的定义如前所述。
再一方面，本发明提供一种药物组合物，其包含本发明式(Ⅰ)所述的化合物及其药用盐和药学上可接受的辅料。
在本发明中，所述药学上可接受的辅料是指不影响本发明式(Ⅰ)所述的化合物及其药用盐发挥其药效的常规的载体和/或赋形剂等。
又一方面，本发明提供本发明式(Ⅰ)所述的化合物及其药用盐在制备用于预防和/或治疗血栓栓塞性疾病和/或血栓栓塞并发症的药物中的用途。
再一方面，本发明提供一种预防和/或治疗血栓栓塞性疾病和/或血栓栓塞并发症的方法，所述方法包括给予患者本发明所述的式(Ⅰ)所述的化合物及其药用盐，或者给予患者包含本发明所述的式(Ⅰ)所述的化合物及其药用盐的药物组合物。
在本发明范围内，“血栓栓塞性疾病”尤其包括疾病例如具有ST段抬高(STEMI)和不带有ST段抬高(无STEMI)的心肌梗塞，稳定/不稳定心绞痛，冠状动脉介入治疗例如血管成形术或主动脉冠状动脉旁路手术后的再阻塞和再狭窄，外周血管闭塞性疾病、肺栓塞、深度静脉血栓形成和肾静脉血栓形成，暂时性缺血发作以及血栓形成型和血栓栓塞型脑卒中。
所述的血栓栓塞性疾病还包括心脏性血栓栓塞，例如中风、脑缺血、全身血栓栓塞和缺血，还例如急性、间歇性或持续性心脏心律不齐、心脏复律、心脏瓣膜疾病等。
所述的血栓栓塞性疾病还包括动脉粥样硬化血管疾病和炎症性疾病(如运动系统风湿性疾病)，以及由其他疾病(如糖尿病、肿瘤疾病，特别是进行了大外科介入或放/化疗的患者)引起的血栓栓塞。
所述的血栓栓塞性疾病还包括弥散型内渗凝血(DIC)。
所述的血栓栓塞并发症包括微血管溶血性贫血，诸如血液透析和心脏瓣膜修复术的体外血液循环情况下发生的并发症。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明涉及到被多个取代基取代时，各取代基可以相同或不相同。
本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C、14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
术语“烷基”是指饱和的脂肪族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，非限制性实施例包括，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正壬基，及其各种支链异构体等；更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯基、杂环烷巯基。
“任选”、“任选的”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“芳基任选被烷基取代”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释和说明性的，绝不意味着以任何方式限制本发明的范围。
化合物的结构是通过核磁共振氢谱(1H NMR)和/或质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AV400型核磁共振波谱仪。
MS的测定是用Thermo scientific(ESI)质谱仪进行的。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm,薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于百灵威科技，阿拉丁科技等公司。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
实施例中如无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中如无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中如无特殊说明，反应温度是室温。
室温为最适宜的反应温度，为20～30℃。
中间体1：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸的合成
第一步：(R)-(2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-氧代丙基)碘化锌(1b)的合成
将碘(400mg，1.08mmol)加入到锌粉的DMF混悬液中，氮气保护，室温搅拌10min，将化合物1a(3.45g，10.5mmol)和碘(400mg，1.08mmol)加入到混悬液中，室温搅拌30min，无需纯化直接进行下一步反应。
第二步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸甲酯(1c)的合成
将无水DMF(5mL)加入到装有2-硝基-5-溴吡啶(2.6g，12.8mmol)、Pd2(dba)3(292mg，0.318mmol)和SPhos配体(0.52g，1.27mmol)氮气保护的反应瓶中，室温搅拌5min，氮气氛围下将准备好的锌试剂1b加入到反应液中，60℃加热6h，冷却至室温，以硅藻土过滤，经柱层析得到化合物1c。
第三步：(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸(中间体1)的合成
将LiOH(800mg，19mmol)水溶液(10mL)加入到化合物1c的甲醇(10mL)溶液中，室温搅拌2h，减压蒸除溶剂，柱层析分离得中间体1(1.4g，两步收率43％)
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.59(s,1H),8.00(d,1H),8.24(d,1H),7.33(d,1H),4.56(t,1H),3.54(m,1H),3.17(m,1H),1.39(s,9H)。
MS m/z＝312.24[M+H]+。
中间体2：6-氯-4-((甲基氨基)甲基)喹啉-2(1H)-酮的合成
第一步：N-(4-氯苯基)-3-氧代丁酰胺(2b)的合成
将4-氯苯胺(2a)(12.0g，94.1mmol)、DMAP(11.5g，94.1)和吡啶(48mL)加至二甲苯(240mL)中，加热回流反应。8h后，反应完毕。将反应液降至室温，倾至2N盐酸(240mL)和乙酸乙酯(240mL)的混合溶液中，搅拌20min。分层，水层用乙酸乙酯(120mL×2)洗涤。合并有机层，减压浓缩至干，经柱层析得到标题化合物2b(10.7g，产率53.7％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.2(s,1H),7.57-7.60(m,2H),7.33-7.36(m,2H),3.54(s,2H),2.19(s,3H)。
MS m/z＝211.99[M+H]+。
第二步：4-溴-N-(4-氯苯基)-3-氧代丁酰胺(2c)的合成
室温下，向N-(4-氯苯基)-3-氧代丁酰胺(2b)(1.0g，4.72mmol)的冰乙酸(10mL)溶液中，加入碘(1mg)，缓慢滴加溴素(0.8g，4.96mmol)的冰乙酸(15mL)溶液。加毕，室温反应18h。将反应液倒入250mL冰水中，搅拌，析出白色固体，抽滤，水洗，室温干燥，得标题化合物4-溴-N-(4-氯苯基)-3-氧代丁酰胺(2c)(1.1g，产率80.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ10.2(s,1H),7.56-7.63(m,2H),7.35-7.40(m,2H),4.47(s,2H),3.73(s,2H)。
MS m/z＝289.96[M+H]+。
第三步：4-(溴甲基)6-氯喹啉-2(1H)-酮(2d)的合成
室温下，4-溴-N-(4-氯苯基)-3-氧代丁酰胺(2c)(100mg，0.38mmol)加入浓硫酸(0.5mL)。加毕，80℃反应3h。将反应液倒入冰水(15mL)中，搅拌，析出白色固体，抽滤，水洗，室温干燥12h，得标题化合物4-(溴甲基)6-氯喹啉-2(1H)-酮(2d)(70mg，产率67.8％)。
MS m/z＝272.06[M+H]+。
第四步：6-氯-4-((甲基氨基)甲基)喹啉-2(1H)-酮(中间体2)的合成
向4-(溴甲基)6-氯喹啉-2(1H)-酮(2d)(110mg，0.40mmol)的四氢呋喃(1mL)和二氧六环(1mL)的悬浊液中，滴加40％甲胺水溶液(1mL)。加毕，30℃反应12h。加入水(10mL)，析出白色固体，抽滤，50℃干燥3h，得标题化合物中间体2(35mg，产率38.9％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.7(s,1H),7.83(d,1H),7.70(d,1H),7.37(d,1H),6.54(s,1H),3.82(s,2H),2.33(s,3H)。
MS m/z＝223.00[M+H]+。
中间体3：5-氨基甲酰基噻吩-2-甲酸的合成
第一步：5-氨基甲酰基噻吩-2-甲酸甲酯(3b)的合成
将3a(2.18g，11.7mmol)以无水四氢呋喃(16mL)溶解，-25℃等却下加入三乙胺(2.1mL，15.2mmol)，再滴入氯甲酸甲酯(1.52g，14.0mmol)，继续搅拌2h，滴入25％的氨水(4.7g，69.1mmol)，5min后移至室温搅拌3h，以乙酸乙酯萃取，水洗有机相，饱和氯化钠溶液洗有机相，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩，所得粗品直接进行下一步反应。
第二步：5-氨基甲酰基噻吩-2-甲酸(中间体3)的合成
将上步所得3b粗品溶于甲醇(10mL)，加入LiOH(440mg，10.5mmol)的水溶液(2mL)，室温搅拌5h，蒸除部分溶剂，以1N盐酸调至酸性析出大量白色固体，抽滤，以水冲洗滤饼，干燥，得中间体3。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.36(s,1H),8.14(s,1H),7.74–7.66(m,2H),7.61(s,1H).
MS m/z＝171.93[M+H]+。
中间体4：(S)-5-((3-(6-氨基吡啶-3-基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-甲酸甲酯的合成
第一步：(S)-(1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酸叔丁酯(4a)的合成
将中间体1(1.00g，3.21mmol)和6-氯-4-((甲基氨基)甲基)喹啉-2(1H)-酮(中间体2)(0.72g，3.22mmol)溶于DMF(15mL)中，加入HOBT(0.87g，6.44mmol)、DIEA(1.25g，9.66mmol)和EDCI(1.23g，6.44mmol)，室温搅拌反应。30h后，向反应液中加入水(30mL)，析出固体。抽滤，用水(10mL)洗涤，45℃干燥3h，得标题化合物4a(1.25g，产率75.4％)。
第二步：(S)-2-氨基-N-((6-氯-2-oxo-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)-N-甲基-3-(6-硝基吡啶-3-基)丙酰胺(4b)的合成
向化合物5a(1.20g，2.33mmol)中，加入乙酸乙酯(12mL)。搅拌下，缓慢加入1M氯化氢的乙酸乙酯溶液(50mL)，在室温反应20h。反应完毕，抽滤。用乙酸乙酯洗涤，45℃干燥3h，得标题化合物4b(1.00g，产率94.9％)。
第三步：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸甲酯(4c)的合成
将4b(1.00g，2.21mmol)、5-(甲氧羰基)噻吩-2-羧酸(420mg，2.22mmol)、HOBT(600mg，4.44mmol)、EDCI(850mg，4.44mmol)和DIEA(860mg，6.66mmol)溶于DMF(30mL)中，室温搅拌反应6h。TLC显示反应结束后，加入水(300mL)，析出固体。打浆洗涤，抽滤，得标题化合物4c(1.11g，产率86.0％)。
第四步：(S)-5-((3-(6-氨基吡啶-3-基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸甲酯(中间体4)的合成
向4c(500mg，0.86mmol)中，加入甲醇(25mL)和THF(5mL)。搅拌下，加入锌粉(562mg，8.60mmol)和氯化铵(460mg，8.60mmol)。加毕，室温搅拌反应24h。过滤，将滤液浓缩，析出固体。抽滤，得中间体4(450mg，产率94.2％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.69(d,1H),8.50(dd,1H),7.91(d,1H),7.89–7.57(m,3H),7.36(d,1H),7.00–6.77(m,2H),6.44–6.41(m,1H),6.36–6.32(m,1H),5.05(dt,1H),4.62(d,2H),4.34(d,1H),3.77(d,3H),3.04(s,1H),2.87(d,3H),2.76(q,2H).
MS m/z＝553.87[M+H]+
中间体5：(S)-5-((3-(4-氨基苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-甲酸甲酯的合成
在本中间体合成的第一步中，使用Boc-4-硝基-L-苯基丙氨酸(5a)代替中间体4合成中第一步中的(S)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-(6-硝基吡啶-3-基)丙酸(中间体1)，采用与中间体4合成的类似方法得到中间体5。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.73(d,1H),9.10(dd,1H),7.95(d,1H),7.89–7.57(m,3H),7.53(dt,1H),7.32(d,1H),7.00–6.77(m,2H),6.44–6.41(m,1H),6.36–6.32(m,1H),4.95(dt,1H),4.82(d,J＝32.4Hz,2H),4.70(d,1H),3.82(d,3H),3.29(s,1H),2.95(d,3H),2.87(q,2H).
MS m/z＝552.77[M+H]+。
中间体6：(S)-N-(3-(4-氨基苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代丙基-2-基)噻吩-2,5-二甲酰亚胺的合成
中间体6合成的第三步中使用5-氨基甲酰基噻吩-2-甲酸(中间体3)代替中间体4合成第三步的5-(甲氧羰基)噻吩-2-羧酸，采用与中间体4合成的类似方法得到中间体6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),8.98(t,1H),7.87(d,1H),7.80(d,1H),7.70(d,1H),7.58–7.53(m,2H),7.33(d,1H),7.01–6.95(m,2H),6.48–6.40(m,2H),6.36(d,2H),4.88(s,2H),4.71(s,2H),2.98(s,3H),2.94(d,1H),2.88(d,2H).
MS m/z＝538.64[M+H]+
实施例1：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-(环丙甲酰胺)吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸(化合物1)的合成
第一步：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-(环丙甲酰胺)吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸甲酯(7a)的合成
将中间体4(200mg，0.36mmol)、环丙甲酸(31mg，0.36mmol)、HOBT(97mg，0.72mmol)、EDCI(138mg，0.72mmol)和DIEA(140mg，1.08mmol)溶于DMF(10mL)中，室温搅拌反应24h，加入水和乙酸乙酯，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，析出固体。抽滤，45℃干燥3h，得化合物7a(193mg，产率86.1％)。
第二步：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-(环丙甲酰胺)吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸(化合物1)的合成
将化合物7a(174mg，0.28mmol)溶于甲醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)的混合溶液中。加入一水合氢氧化锂(59mg，1.4mmol)的水(6mL)溶液，室温搅拌反应3h。向体系中滴加1M盐酸至pH3～5,乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得标题化合物1(112mg，产率64.3％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),10.67(s,1H),9.22(d,1H),8.28(d,1H),7.92(dd,2H),7.79–7.68(m,3H),7.59–7.46(m,3H),7.32(d,1H),6.33(s,1H),5.12(d,2H),4.74(s,2H),3.09(s,3H),1.94(d,2H),0.87–0.70(m,8H).
MS m/z＝607.89[M+H]+。
实施例2：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(6-(环戊甲酰胺)吡啶-3-基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸(化合物2)的合成
在本实施例中，使用环戊甲酸代替实施例1中的环丙甲酸，采用与实施例1相同方法得到标题化合物2。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),10.30(s,1H),9.21(d,1H),8.27(d,1H),7.93(dd,2H),7.79–7.67(m,3H),7.63–7.46(m,4H),7.32(d,1H),6.33(s,1H),5.17–4.95(m,2H),4.74(d,2H),3.08(d,4H),1.85–1.73(m,3H),1.65(dd,6H),1.55–1.43(m,4H).
MS m/z＝635.92[M+H]+。
实施例3：(S)-5-((1-((((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙烷甲酰胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物3)的合成
在本实施例中，使用中间体5代替实施例1中的中间体4，采用与实施例1相同方法得到标题化合物3。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.27(s,1H),11.83(s,1H),10.10(s,1H),9.18(d,1H),7.91(d,1H),7.79(d,1H),7.69(d,1H),7.54(ddd,2H),7.47(d,2H),7.35(dd,22H),7.26(d,2H),7.08(d,1H),6.34(s,1H),5.06(dt,1H),4.72(s,2H),2.95(s,2H),1.83–1.65(m,1H),0.75(d,4H).
MS m/z＝607.05[M+1]
实施例4：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙烷甲酰亚胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物4)的合成
第一步：甲基(S)-5-((1-((((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙烷甲酰亚胺基)苯基)-1-氧丙烷-2-基氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸酯(10a)的合成
将中间体5(150mg，0.27mmol)溶于DMF(2mL)中，加入环丙烷甲亚胺酸乙酯(46mg，0.41mmol)和冰醋酸(25mg，0.41mmol)，室温搅拌反应40h。以5％的NaHCO3水溶液(5mL)淬灭反应，乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗有机相，无水NaSO4干燥，过滤，浓缩，柱层析分离，得化合物10a(109mg，产率65.3％)。
本实施例第二步与实施例1第二步使用相同方法得到标题化合物4。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.82(d,1H),8.99(d,1H),8.43(s,1H),7.78(s,1H),7.71–6.65(m,8H),6.45–6.15(m,1H),5.12(d,1H),4.93–4.53(m,2H),3.20–2.99(m,4H),2.94(s,2H),1.97(s,1H),1.34–0.55(m,5H).
MS m/z＝606.39[M+1]
实施例5：甲基(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧-1,2，二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羧酰胺基)苯基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸酯(化合物5)的合成
在本实施例中，使用1-甲基氮杂环丁烷-3-甲酸代替实施例1中的环丙甲酸，中间体5代替中间体4，采用与实施例1第一步相同方法得到标题化合物5。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.76(d,1H),10.39–9.96(m,1H),9.20(dd,1H),7.98(d,1H),7.84–7.59(m,2H),7.57–7.10(m,5H),6.30(s,1H),5.13–4.95(m,1H),4.70(s,2H),3.81(d,5H),3.06–2.66(m,7H),1.23(d,4H),0.90(dt,1H).
MS m/z＝650.14[M+1]
实施例6：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(1-甲基氮杂环丁烷-3-羧酰胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物6)的合成
在本实施例采用与实施例1第二步相同方法得到标题化合物6。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.81(d,1H),10.04(d,1H),8.89(dd,1H),8.04–7.63(m,2H),7.65–7.44(m,3H),7.43–7.32(m,2H),7.28(dd,2H),6.22(d,1H),5.07(q,1H),4.91(dt,1H),4.84–4.56(m,2H),3.91(t,2H),3.68(t,2H),3.56(p,2H),2.95(s,1H),2.54(d,3H),1.38–1.14(m,3H).
MS m/z＝635.09[M+1]
实施例7：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(1-甲基哌啶-4-羧酰胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物7)的合成
在本实施例第一步中，使用1-甲基哌啶-4-甲酸代替实施例3第一步中的环丙甲酸，采用与实施例3相同方法得到中间体11a。
在本实施例第二步中，采用与实施例1第二步相同方法得到标题化合物7。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.85(s,1H),9.92(s,1H),8.99(d,1H),7.95(s,1H),7.87–7.64(m,2H),7.58–7.53(m,1H),7.50–7.43(m,2H),7.36(dd,8.5Hz,2H),7.26(t,Hz,2H),6.33(s,1H),5.05(d,1H),4.83–4.63(m,2H),3.76(s,1H),3.17(s,2H),3.03–2.96(m,2H),2.95(s,1H),2.89(s,3H),2.73(s,3H),1.93–1.70(m,3H),1.29–1.17(m,2H).
MS m/z＝664.23[M+1]
实施例8：(S)-5-((3-(4-(2-氨基乙酰氨基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-甲酸(化合物8)的合成
在本实施例第一步中，使用N-Boc-甘氨酸代替实施例3第一步中的环丙甲酸，采用与实施例3相同方法得到中间体12a。
第二步：(S)-5-((3-(4-(2-氨基乙酰氨基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物8)的合成
将(S)-甲基-5-((3-(4-(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙酰氨基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸酯(12a)(200mg，0.28mmol)溶于甲醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)的混合溶液中。加入6M盐酸水溶液(5mL)，室温搅拌反应3h。减压浓缩浓缩至干，向体系中加入一水合氢氧化锂(59mg，1.4mmol)的水(6mL)溶液，室温搅拌反应3h。向体系中滴加1M盐酸水溶液至pH3～5，乙酸乙酯萃取，干燥，旋干得标题化合物8(110mg，产率65.9％)。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.82(d,1H),10.86(d,1H),9.19(dd,1H),8.55–8.16(m,3H),7.97(d,1H),7.78(d,1H),7.68(dd,1H),7.58–7.43(m,3H),7.42(s,1H),7.31(d,1H),7.20(dd,1H),6.19(d,1H),5.14–4.99(m,1H),4.99–4.77(m,1H),4.71(s,1H),3.74(dd,3H),3.04(d,1H),3.02(s,2H),2.94(s,1H).
MS m/z＝596.05[M+1]
实施例9：5-(((S)-3-(4-((S)-2-氨基丙酰胺基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物9)的合成
在本实施例第一步中，使用Boc-L-丙氨酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物9。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.90(s,1H),10.48(d,1H),9.03(dd,2H),7.96–7.69(m,4H),7.62–7.52(m,5H),7.38(d,3H),6.88–6.61(m,1H),6.39(d,1H),5.14(q,1H),4.89–4.66(m,3H),4.03(s,1H),1.44(d,5H).
MS m/z＝610.14[M+1]
实施例10：5-(((S)-3-(4-((S)-2-氨基-3-甲基丁酰胺基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-(基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物10)的合成
在本实施例第一步中，使用Boc-L-缬氨酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物10。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.74(d,1H),10.38(d,1H),9.11(dd,1H),7.90(d,1H),7.80(d,1H),7.68–7.47(m,3H),7.37(dd,2H),7.18(dd,1H),6.21(d,1H),5.13–4.96(m,1H),4.86–4.67(m,1H),3.67(dd,1H),3.05(d,3H),2.96(s,1H),2.57–2.52(m,1H),2.15(dt,1H),2.00(q,1H),1.61–1.33(m,1H),1.24(d,3H),1.18–0.69(m,6H).
MS m/z＝638.20[M+1]
实施例11：5-(((S)-3-(4-((2S，3S)-2-氨基-3-甲基戊氨基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物11)的合成
在本实施例第一步中，使用N-Boc-L-异亮氨酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物11。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.74(d,1H),10.43(d,1H),9.14(dd,1H),7.92(d,1H),7.80(d,1H),7.67(dd,1H),7.60–7.48(m,2H),7.37(dd,2H),7.18(dd,1H),6.49–6.23(m,1H),5.23–4.58(m,3H),3.74(dd,1H),3.48(d,1H),3.05(d,3H),3.01–2.78(m,2H),2.54(s,1H),2.23–1.64(m,2H),1.56(ddd,1H),1.43–0.40(m,8H).
MS m/z＝652.24[M+1]
实施例12：5-(((S)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-(4-((S)-吡咯烷-2-羧酰胺基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物12)的合成
在本实施例第一步中，使用Boc-L-脯氨酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物12。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.77(d,1H),10.45(d,1H),9.29–8.70(m,1H),7.91–7.66(m,2H),7.61–7.44(m,3H),7.40–7.28(m,2H),7.25–7.07(m,1H),6.33(d,1H),5.21–4.64(m,3H),4.24(d,1H),3.36(d,3H),3.25–2.85(m,7H),2.27(s,1H),1.87(s,2H),1.50–1.08(m,1H).
MS m/z＝636.10[M+1]
实施例13：(S)-5-((3-(4-(1-氨基环己烷甲酰胺基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物13)的合成
在本实施例第一步中，使用1-(Boc-氨基)环己甲酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物13。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.84(s,1H),9.99(d,1H),9.18(dd,1H),7.93(t,1H),7.79(t,1H),7.73–7.65(m,1H),7.59–7.49(m,2H),7.44(q,1H),7.38–7.23(m,2H),7.18(dd,1H),6.44–6.26(m,1H),5.14–4.96(m,1H),4.88–4.53(m,2H),3.07–2.97(m,4H),2.15(d,1H),2.03–1.89(m,1H),1.80–1.55(m,6H),1.52–1.07(m,6H).
MS m/z＝664.14[M+1]
实施例14：(S)-5-((3-(4-(1-氨基环丙烷甲酰胺基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物14)的合成
在本实施例第一步中，使用Boc-1-氨基环丙基甲酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物14。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.73(d,1H),9.74(d,1H),9.12(dd,1H),7.91(d,1H),7.78(d,1H),7.73–7.53(m,2H),7.54–7.46(m,2H),7.30(dd,2H),7.15(dd,1H),6.45–6.23(m,1H),5.30–4.84(m,2H),4.85–4.59(m,2H),2.98(d,6H),2.80(d,1H),1.28(dq,2H),0.99(dt,2H).
MS m/z＝622.11[M+1]
实施例15：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-(4-(2-(哌啶-1-基)乙酰氨基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物15)的合成
在本实施例第一步中，使用哌啶-1-基-乙酸盐酸盐代替实施例7第一步中的1-甲基哌啶-4-甲酸，采用与实施例7相同方法得到标题化合物15。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.83(s,1H),9.79(d,1H),9.19(d,1H),7.92(d,1H),7.79(d,1H),7.69(t,1H),7.63(dd,3.2Hz,1H),7.59–7.47(m,3H),7.40(d,1H),7.32(dd,2H),7.17(dd,1H),6.32(s,1H),5.09(q,1H),4.73(d,1H),3.05(d,4H),2.96(s,1H),2.65(s,4H),1.61(p,4H),1.43(d,2H),1.24(d,2H).
MS m/z＝664.15[M+1]
实施例16：((S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(2-吗啉代乙酰胺基)苯基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物16)的合成
在本实施例第一步中，使用吗啉-4-基乙酸代替实施例7第一步中的1-甲基哌啶-4-甲酸，采用与实施例7相同方法得到标题化合物16。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.82(s,1H),9.67(d,1H),9.20(d,1H),7.92(d,1H),7.78(d,1H),7.70(d,1H),7.63(dd,3.1Hz,1H),7.56–7.48(m,3H),7.30(dd,3H),7.15(dd,1H),6.29(s,1H),5.14–5.02(m,1H),4.72(d,1H),3.62(dt,4H),3.16(s,2H),3.03(d,3H),2.94(s,1H),2.55(d,4H),1.22(s,1H).
MS m/z＝666.06[M+1]
实施例17：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(2-(二甲基氨基)乙酰氨基)苯基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物17)的合成
在本实施例第一步中，使用N,N-二甲基甘氨酸代替实施例7第一步中的1-甲基哌啶-4-甲酸，采用与实施例7相同方法得到标题化合物17。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.87(s,1H),10.62(d,1H),9.28–9.11(m,1H),7.94(d,1H),7.80(d,1H),7.71(d,1H),7.64(dd,1H),7.60–7.31(m,7H),7.19(dd,1H),6.33(s,1H),5.10(q,1H),4.74(d,1H),3.97(d,2H),2.98(d,3H),2.77(d,6H),1.23(s,1H).
MS m/z＝624.16[M+1]
实施例18：(S)-5-((3-(4-(4-氨基四氢-2H-吡喃-4-羧酰胺基)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧丙烷-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物18)的合成
在本实施例第一步中，使用4-(Boc-氨基)四氢吡喃-4-甲酸代替实施例8第一步中的N-Boc-甘氨酸，采用与实施例8相同方法得到标题化合物18。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.85(s,1H),10.23(d,1H),9.24(d,1H),7.93(d,1H),7.80(d,1H),7.72(d,1H),7.62–7.54(m,3H),7.51–7.45(m,1H),7.38–7.25(m,3H),7.21–7.15(m,1H),6.30(s,1H),5.11(td,1H),4.79(d,1H),3.06(d,5H),2.96(d,2H),2.41(td,2H),1.99(dt,1H),1.87–1.70(m,4H),1.26–1.21(m,1H).
MS m/z＝666.04[M+1]
实施例19：(S)-5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-(4-(2-(吡咯烷基-1-基)乙酰氨基)苯基)丙-2-基)氨基甲酰基)噻吩-2-羧酸(化合物19)的合成
在本实施例第一步中，使用2-(1-吡咯烷基)乙酸代替实施例7第一步中的1-甲基哌啶-4-甲酸，采用与实施例7相同方法得到标题化合物19。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.85(s,1H),9.90(d,1H),7.64–7.47(m,5H),7.32(dd,3H),7.12(d,1H),6.32(s,1H),5.08(q,1H),4.81–4.68(m,2H),3.05(d,4H),2.95(d,2H),2.82(d,4H),1.80(dq,4H).
MS m/z＝650.17[M+1]
实施例20：(S)-3-氨基-4-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物20)的合成
第一步：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-4-氧代丁酸甲酯(24a)的合成
将中间体6(54mg，0.10mmol)、叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯(29mg，0.10mmol)、PyBop(78mg，0.15mmol)、DIPEA(129mg，0.30mmol)溶于DMF(10mL)中，室温搅拌反应12h，加入水和乙酸乙酯，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，析出固体。抽滤，45℃干燥3h，得化合物24a(62mg，产率76％)。
第二步：(S)-3-氨基-4-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物20)的合成
将化合物24a(55mg，0.067mmol)溶于三氟乙酸(3mL)溶液中。室温搅拌反应12h。蒸干溶剂，甲基叔丁基醚打浆，抽滤、所得固体在45℃真空干燥箱干燥得标题化合物20(30mg，产率69％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.82(s,1H),10.40(s,1H),9.08(d,1H),8.07(s,1H),7.85(d,1H),7.78(s,1H),7.68(d,1H),7.61–7.51(m,2H),7.50–7.43(m,2H),7.34(dd,8.0Hz,4H),7.17(dd,1H),6.29(s,1H),5.08(q,1H),4.72(d,2H),4.01(q,1H),3.18–2.85(m,7H).
MS m/z＝653.34[M+1]
实施例21：(S)-4-氨基-5-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(化合物21)的合成
在本实施例第一步中，使用N-Boc-L-谷氨酸-5-叔丁酯代替实施例20第一步中的叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯，采用与实施例20类似方法得到标题化合物21。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),10.43(s,1H),9.09(d,1H),8.26(s,3H),7.86(d,1H),7.78(d,1H),7.69(d,1H),7.55(td,2H),7.51–7.44(m,2H),7.42–7.29(m,3H),7.18(dd,8.6Hz,1H),6.31(s,1H),5.09(q,1H),4.82–4.62(m,2H),4.01(q,1H),3.24–2.76(m,7H).
MS m/z＝667.13[M+1]
实施例22：(S)-2-氨基-4-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-4-氧代丁酸(化合物22)的合成
在本实施例第一步中，使用N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸1-叔丁酯代替实施例20第一步中的叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯，采用与实施例20类似方法得到标题化合物22。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),10.15(s,1H),9.07(d,1H),8.20(s,3H),7.85(d,1H),7.78(d,1H),7.68(d,1H),7.60–7.53(m,2H),7.48–7.41(m,2H),7.31(dt,4H),6.31(s,1H),5.15–5.03(m,1H),4.72(s,2H),4.31–4.17(m,1H),3.13–2.85(m,7H).
MS m/z＝653.23[M+1]
实施例23：(S)-2-氨基-5-((4-((S)-2-(5-氨基甲酰噻吩-2-甲酰胺基)-3-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-丙酰)苯基)氨基)-5-氧代戊酸(化合物23)的合成
在本实施例第一步中，使用Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯代替实施例20第一步中的叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯，采用与实施例20类似方法得到标题化合物23。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.83(s,1H),9.94(s,1H),9.06(d,1H),8.24(s,3H),7.85(d,1H),7.78(d,1H),7.68(d,1H),7.56(td,2H),7.49–7.43(m,2H),7.34(dd,2H),7.29–7.23(m,2H),6.31(s,1H),5.06(q,1H),4.72(s,2H),4.07–3.98(m,1H),3.22–2.88(m,7H).
MS m/z＝667.53[M+1]
实施例24：N-((2S)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代-3-(4-(吡咯烷-2-甲酰胺)苯基)丙烷-2-基)噻吩-2,5-二甲酰胺(化合物24)的合成
在本实施例第一步中，使用N-Boc-脯氨酸代替实施例20第一步中的叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯，采用与实施例20类似方法得到标题化合物24。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.82(s,1H),10.45(s,1H),9.08(d,1H),8.07(s,1H),7.85(d,1H),7.78(d,1H),7.69(d,1H),7.59–7.51(m,3H),7.51–7.43(m,3H),7.35(dd,4H),7.15(d,1H),6.29(s,1H),5.09(d,1H),4.73(dd,2H),4.27(d,2H),3.04(s,4H),1.92(dt,4H).。
MS m/z＝634.93[M+H]+。
实施例25：(S)-N-(3-(4-(1-氨基环己烷-1-甲酰胺)苯基)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基)噻吩-2,5-二甲酰胺(化合物25)
在本实施例中，使用1-((叔丁氧羰基)氨基)环己烷-1-甲酸代替实施例20中的第一步中的叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯，采用与实施例20相同方法得到标题化合物25。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.83(s,1H),9.88(d,1H),9.09(d,1H),8.25–8.04(m,3H),7.82(dd,2H),7.73–7.65(m,1H),7.54(ddd,4H),7.37(dd,3H),7.18(dd,1H),6.17(d,1H),5.10(d,1H),4.73(dd,2H),3.15–2.88(m,5H),2.14(d,2H),1.82–1.44(m,7H),0.88–0.76(m,2H).
MS m/z＝663.11[M+H]+。
实施例26：N-6-(5-(((S)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙基甲酰胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-羰基)-L-赖氨酸(化合物26)的合成
第一步：N2-(叔丁氧羰基)-N6-(5-(((S)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙甲酰胺)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-羰基)-L-赖氨酸甲酯(30a)的合成
将化合物3(219mg，0.36mmol)、N2-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸甲酯(94mg，0.36mmol)、HOBT(97mg，0.72mmol)、EDCI(138mg，0.72mmol)和DIEA(140mg，1.08mmol)溶于DMF(10mL)中，室温搅拌反应12h，加入水和乙酸乙酯，萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，析出固体。抽滤，45℃干燥3h，得化合物30a。
本实施例第二步，采用与实施例8第二步类似方法，得到标题化合物26。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.83(s,1H),10.10(s,1H),9.06(d,1H),8.60(t,1H),8.17(s,2H)7.86(d,1H),7.78(d,1H),7.68(d,1H),7.54(d,2H),7.46(d,2H),7.34(dd,1H),7.25(d,2H),6.32(s,1H),4.02(q,2H),1.97(s,2H),1.73(d,5H),1.59–1.33(m,6H),1.16(t,2H),0.74(d,5H).
MS m/z＝735.18[M+1]
实施例27：(5-(((S)-1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙基甲酰胺基)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-羰基)-L-赖氨酸(化合物27)的合成
在本实施例第一步中，使用N6-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸甲酯代替实施例26第一步中的N2-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸甲酯，采用与实施例26类似方法得到标题化合物27。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ12.75(s,1H),11.76(d,1H),10.06(d,1H),9.09(d,1H),8.84–8.65(m,1H),7.95–7.76(m,2H),7.67(t,2H),7.54(d,1H),7.46(d,2H),7.37–7.30(m,2H),7.25(d,J＝7.8Hz,2H),6.32(s,1H),5.23–4.50(m,4H),2.77(t,3H),2.17–1.66(m,4H),1.47(dq,6H),0.74(dt,5H).
MS m/z＝735.26[M+1]
实施例28：(S)-(5-((1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基)-3-(4-(环丙甲酰胺)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)氨基甲酰)噻吩-2-羰基)甘氨酸(化合物28)的合成
在本实施例第一步中，使用甘氨酸甲酯代替实施例26第一步中的N2-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸甲酯，采用与实施例26类似方法得到中间体32a。
本实施例第二步采用实施例3第二步相同方法得到化合物28。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.84(s,1H),10.07(d,1H),9.10(d,1H),8.94–8.66(m,1H),7.89(d,1H),7.79(d,1H),7.74(d,1H),7.55(dd,1H),7.47(d,2H),7.35(dd,2H),7.25(dd,2H),6.34(s,1H),5.24–4.79(m,3H),4.72(s,2H),3.83(dd,3H),1.41–1.16(m,2H),0.92–0.60(m,5H).
MS m/z＝664.10[M+1]
实施例29：(S)-N-(1-(((6-氯-2-氧代-1,2-二氢喹啉-4-基)甲基)(甲基)氨基-3-(4-(环丙甲酰胺)苯基)-1-氧代丙烷-2-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基)噻吩-2-甲酰胺(化合物29)的合成
在本实施例第一步中，使用1-甲基哌嗪实替换施例26第一步中的N2-(叔丁氧羰基)-L-赖氨酸甲酯，采用与实施例26类似方法得到标题化合物29。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.84(s,1H),10.07(d,1H),9.11(d,1H),7.88(d,1H),7.79(d,1H),7.60–7.51(m,2H),7.47(d,2H),7.40–7.32(m,2H),7.26(d,1H),6.33(s,1H),5.08(q,J＝7.7Hz,1H),4.72(s,2H),3.60(t,5H),2.33(t,5H),2.20(s,4H),1.24(s,2H),0.77(s,5H).
MS m/z＝689.24[M+1]
对照例1：对照化合物1(PLOS ONE|DOI:10.1371/journal.pone.0113705文献中的化合物13)的合成
按照该文献的方法合成对照化合物1。
测试例：
测试例1、化合物对FⅪa体外酶活性抑制作用
以下方法可用来测定化合物体外对人源FⅪa活性的抑制作用。
FⅪa酶购自：Haematologic Technologies。
BIOPHEN CS-21(66)活化蛋白C底物购自：HYPHEN BioMed。
溶液配制：反应缓冲液：0.05M Tris，0.3M NaCl，pH＝7.4，Tris606mg,NaCl1753mg，加ddH2O 80mL，用HCl调pH＝7.4，定容至100mL。
BIOPHEN CS-21(66)活化蛋白C底物储备液(10mM):一支BIOPHEN CS-21(66)活化蛋白C底物(25mg)溶于5mL无菌去离子水，4℃保存，避光。
BIOPHEN CS-21(66)活化蛋白C底物工作液：临用前用反应缓冲液稀释4倍使用。
FⅪa工作液：储备液浓度为50μg/ml，-20℃冻存，临用前稀释1000倍。
方法：在96孔板中加入15μL受试样品溶液(对照组加入15μLDMSO)、15μL FXIa工作液和100μL缓冲液，混匀，37℃孵育5分钟,加入CS-21(66)底物工作液20μL,启动反应，测定405nm处吸光值，每5分钟测定一次，在线性反应期内对信号值-时间做线性回归分析，计算斜率为反应速率。按以下公式计算酶活抑制率。
抑制率％＝(V0-Vi)/V0 x100％
式中：V0为对照孔(不加待测化合物，用相同体积的DMSO代替)的反应速率，Vi为待测化合物的反应速率。
结果如表1所示。
表1.体外FⅪa酶活性测定实验结果
注释：a.937nM,FⅪa抑制率47.7％；b.937nM,FⅪa抑制率14.7％
由表1可见，本发明化合物具有明显的FXIa抑制作用。
测试例2、化合物对体外凝血的影响
试剂：aPTT试剂购自美德太平洋(天津)生物科技有限公司。
凝血途径包括外源性凝血途径和内源性凝血途径。与外源性凝血途径相关的参数为凝血酶原时间，用PT(prothrombin time)表示；与内源性凝血途径相关的参数为活化部分凝血活酶时间，用aPTT(activated partial thromboplatin time)表示。
aPTT(活化部分凝血活酶时间)检测方法：
兔血液抗凝后，离心分离血浆，并等量分成多份，加入待测化合物，使待测化合物的终浓度为0.83-13.32μM，混匀后37℃孵育，然后把样品放入凝血分析仪进行aPTT的检测。空白血浆中加入等体积的溶剂DMSO，记录样本与空白血浆的aPTT值。以aPTT值对样品相对应的浓度做直线回归，以回归方程计算受试样品相对于空白样品延长aPTT一倍的时间，结果见表2。
表2.化合物1对兔aPTT的影响
注：aPTT ED2x：相对空白样品延长aPTT一倍的浓度
由表2可见，本发明化合物具有明显的aPTT延长作用，表明本发明化合物通过抑制FXIa而达到抗内源性凝血的效果。
测试例3、溶解度试验
称取一定量的研成细粉的化合物加至具塞锥形瓶中，于25℃±2℃加入一定容量pH值8.0的缓冲液，每隔5分钟强力振摇30秒；观察30分钟内的溶解情况，如无目视可见的溶质颗粒或液滴时，即视为完全溶解；如果不能完全溶解，补加一定容量pH值8.0的缓冲液，并重复以上操作，直至完全溶解。试验结果见表3。
表3化合物在pH值8.0缓冲液中的溶解性
由表3可见，本发明化合物在pH值8.0缓冲液中溶解度良好，超过对照化合物1的溶解度的500倍以上。本发明具有较高的溶解度将有利于药物制剂的开发以及更好的给药，对药物的吸收非常有利。
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