阅读说明：本技术 一种豚鼠动脉阻塞mcao模型的制作方法 (Manufacturing method of guinea pig arterial occlusion MCAO model ) 是由 缪薇 韩剑虹 杨斐 李春艳 贾文姬 王爱梅 于 2019-10-22 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种豚鼠动脉阻塞MCAO模型的制作方法,所述方法包括以下步骤：现配麻醉剂,豚鼠称重,并依据豚鼠重量给予一定量的麻醉剂腹腔注射,使得豚鼠麻醉；把豚鼠置于温控毯并固定于手术台上,保证豚鼠的躯体平直无张力,用理发器刮掉豚鼠颈部毛发,通过安尔碘局部消毒；沿豚鼠颈旁正中切开皮肤,将颈前筋膜剪开,使右侧的胸锁乳突肌暴露,然后再分离颈前部肌群及胸锁乳突肌,细丝线牵拉,使肌肉组织分离开,直至观察到完整的颈总动脉CCA。本发明再灌注后从颈总动脉直接通过颈内动脉供血,较传统的颈总动脉插栓方法,再灌注后直接结扎颈总动脉,再灌注供血只能通过侧支循环,能达到与临床相似的再灌注效果,且模型制备的成功率高。(The invention discloses a manufacturing method of a guinea pig artery occlusion MCAO model, which comprises the following steps: the anesthetic is prepared on site, the guinea pigs are weighed, and a certain amount of anesthetic is given for intraperitoneal injection according to the weight of the guinea pigs, so that the guinea pigs are anesthetized; the guinea pig is placed on a temperature control blanket and fixed on an operating table, the body of the guinea pig is ensured to be straight and tension-free, hair on the neck of the guinea pig is scraped off by a hair cutter, and local disinfection is carried out by using an iodine solution; the skin was incised along the medial border of the guinea pig neck, the anterior cervical fascia was dissected to expose the right sternocleidomastoid muscle, the anterior cervical muscle group and sternocleidomastoid muscle were then separated, and the muscle tissue was separated by string traction until a complete common carotid artery CCA was observed. Compared with the traditional common carotid artery plugging method, the invention directly supplies blood from the common carotid artery through the internal carotid artery after reperfusion, directly ligates the common carotid artery after reperfusion, and the reperfusion blood supply can only circulate through a collateral branch, thereby achieving the reperfusion effect similar to clinic and having high success rate of model preparation.)

一种豚鼠动脉阻塞MCAO模型的制作方法

技术领域

本发明涉及动物模型技术领域，具体为一种豚鼠动脉阻塞MCAO 模型的制作方法。

背景技术

脑是人体对缺氧最为敏感的器官，脑组织缺血将会导致局部脑组织及其功能的损害，其损害程度与缺血时间长短及残存血流量多少有关，短期不完全性缺血只引起可逆性损害，而长时间的完全缺血或严重缺血会引起梗死，组织学变化脑最明显的组织学变化是脑水肿及脑细胞坏死，大脑中动脉是缺血性脑卒中最常见的受累血管，传统的颈总动脉插栓方法，再灌注后直接结扎颈总动脉，再灌注供血只能通过侧支循环，不能达到与临床相似的再灌注效果，因此有必要对现有技术进行改进，以解决上述问题。

发明内容

(一)解决的技术问题

本发明的目的在于提供一种豚鼠动脉阻塞MCAO模型的制作方法，以解决上述背景技术中提出的传统的颈总动脉插栓方法，再灌注后直接结扎颈总动脉，再灌注供血只能通过侧支循环，不能达到与临床相似的再灌注效果的问题。

(二)技术方案

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种豚鼠动脉阻塞 MCAO模型的制作方法，所述方法包括以下步骤：

S1：现配麻醉剂，豚鼠称重，并依据豚鼠重量给予一定量的麻醉剂腹腔注射，使得豚鼠麻醉；

S2：把豚鼠置于温控毯并固定于手术台上，保证豚鼠的躯体平直无张力，用理发器刮掉豚鼠颈部毛发，通过安尔碘局部消毒；

S3：沿豚鼠颈旁正中切开皮肤，将颈前筋膜剪开，使右侧的胸锁乳突肌暴露，然后再分离颈前部肌群及胸锁乳突肌，细丝线牵拉，使肌肉组织分离开，直至观察到完整的颈总动脉CCA；

S4：再在甲状软骨上缘分离出颈外动脉ECA和颈内动脉ICA，电凝并剪断枕动脉及甲状腺动脉；

S5：丝线结扎颈外动脉ECA，远端电凝处将颈外动脉ECA剪断，分离出颈总动脉CCA近心端及颈内动脉ICA，通过微型血管夹暂时夹闭颈总动脉CCA近分叉处和颈内动脉ICA远端；

S6：在颈外动脉ECA残端通过显微外科剪形成适当的小口，使用豚鼠专用线栓进入切口，当线栓准确进入颈内动脉ICA后再将颈外动脉ECA的松结结扎，最后将颈内动脉ICA远处留置的动脉夹打开，线栓***距离颈内动脉ICA和颈外动脉ECA分叉处8mm-9mm，感到阻力后即停止***线栓，此时线栓越过大脑中动脉MCA，到达较细的大脑前动脉ACA起始部，系紧颈外动脉ECA残端上的活结以固定住线栓，使线栓完全固定，将动脉夹取下，即成功构建大脑中动脉MCA阻塞；

S7：彻底清洗并缝合手术切口，单笼饲养观察，注意术后保暖，避免死亡；

S8：上述MCAO模型处理2h后，将线栓退至颈外动脉ECA残端，给予再灌注；

S9：上述再灌注后的MCAO模型，拔出线栓2min，通过动脉夹夹闭双侧颈总动脉CCA，再开放动脉夹恢复血流，15s缺血，30s再通处理。

优选的，所述S1中豚鼠设置为毛色为白、棕、黑三杂色的英国品种豚鼠。

优选的，所述S1中麻醉剂设置为1％戊巴比妥钠，所述麻醉剂量与豚鼠质量的比例设置为40mg/Kg，且所述麻醉剂的麻醉起效的标志为提起豚鼠尾部，豚鼠无张力自然下落。

优选的，所述S2中温控毯保持的豚鼠直肠温度为38摄氏度。

优选的，所述S6中线栓设置为硅胶线栓。

优选的，所述S6中线栓***大脑中动脉MCA的具体方法为：将线栓于颈外动脉ECA剪口处***颈总动脉CCA，此时在颈外备一活结并先固定住线栓，并调整线栓角度进入颈内动脉ICA，将线栓经颈内动脉ICA缓慢***大脑中动脉MCA。

优选的，所述S3-S7均在手术显微镜下操作。

(三)有益效果

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明较传统的经颈总动脉直接***线栓方法更能保证动物的再灌注效果，再灌注后从颈总动脉直接通过颈内动脉供血，而传统的颈总动脉插栓方法，再灌注后直接结扎颈总动脉，再灌注供血只能通过侧支循环，不能达到与临床相似的再灌注效果，所以本发明的方法具有保证再灌注效果的优势。

(2)本发明采用硅胶线栓，避免损坏豚鼠神经，插线深度合适，插线方法合理准确，制得模型的成功率较高。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供的以下实施例：

实施例1

一种豚鼠动脉阻塞MCAO模型的制作方法，包括以下步骤：

S1：现配麻醉剂，豚鼠称重，并依据豚鼠重量给予一定量的麻醉剂腹腔注射，使得豚鼠麻醉；

S2：把豚鼠置于温控毯并固定于手术台上，保证豚鼠的躯体平直无张力，用理发器刮掉豚鼠颈部毛发，通过安尔碘局部消毒；

S3：沿豚鼠颈旁正中切开皮肤，将颈前筋膜剪开，使右侧的胸锁乳突肌暴露，然后再分离颈前部肌群及胸锁乳突肌，细丝线牵拉，使肌肉组织分离开，直至观察到完整的颈总动脉CCA；

S4：再在甲状软骨上缘分离出颈外动脉ECA和颈内动脉ICA，电凝并剪断枕动脉及甲状腺动脉；

S5：丝线结扎颈外动脉ECA，远端电凝处将颈外动脉ECA剪断，分离出颈总动脉CCA近心端及颈内动脉ICA，通过微型血管夹暂时夹闭颈总动脉CCA近分叉处和颈内动脉ICA远端；

S6：在颈外动脉ECA残端通过显微外科剪形成适当的小口，使用豚鼠专用线栓进入切口，当线栓准确进入颈内动脉ICA后再将颈外动脉ECA的松结结扎，最后将颈内动脉ICA远处留置的动脉夹打开，线栓***距离颈内动脉ICA和颈外动脉ECA分叉处8mm，感到阻力后即停止***线栓，此时线栓越过大脑中动脉MCA，到达较细的大脑前动脉ACA起始部，系紧颈外动脉ECA残端上的活结以固定住线栓，使线栓完全固定，将动脉夹取下，即成功构建大脑中动脉MCA阻塞；

S7：彻底清洗并缝合手术切口，单笼饲养观察，注意术后保暖，避免死亡；

S8：上述MCAO模型处理2h后，将线栓退至颈外动脉ECA残端，给予再灌注；

S9：上述再灌注后的MCAO模型，拔出线栓2min，通过动脉夹夹闭双侧颈总动脉CCA，再开放动脉夹恢复血流，15s缺血，30s再通处理。

进一步，S1中豚鼠设置为毛色为白、棕、黑三杂色的英国品种豚鼠。

进一步，S1中麻醉剂设置为1％戊巴比妥钠，所述麻醉剂量与豚鼠质量的比例设置为40mg/Kg，且所述麻醉剂的麻醉起效的标志为提起豚鼠尾部，豚鼠无张力自然下落。

进一步，S2中温控毯保持的豚鼠直肠温度为38摄氏度，温度对梗死大小影响非常显著，必须严格控制温度。

进一步，S6中线栓设置为硅胶线栓，避免使用多聚赖氨酸线栓，这是因为多聚赖氨酸对血管内皮细胞损伤严重，容易引起血小板聚集，导致血栓形成。

进一步，S6中线栓***大脑中动脉MCA的具体方法为：将线栓于颈外动脉ECA剪口处***颈总动脉CCA，此时在颈外备一活结并先固定住线栓，并调整线栓角度进入颈内动脉ICA，将线栓经颈内动脉 ICA缓慢***大脑中动脉MCA。

进一步，S3-S7均在手术显微镜下操作。

实施例2

一种豚鼠动脉阻塞MCAO模型的制作方法，包括以下步骤：

S1：现配麻醉剂，豚鼠称重，并依据豚鼠重量给予一定量的麻醉剂腹腔注射，使得豚鼠麻醉；

S2：把豚鼠置于温控毯并固定于手术台上，保证豚鼠的躯体平直无张力，用理发器刮掉豚鼠颈部毛发，通过安尔碘局部消毒；

S3：沿豚鼠颈旁正中切开皮肤，将颈前筋膜剪开，使右侧的胸锁乳突肌暴露，然后再分离颈前部肌群及胸锁乳突肌，细丝线牵拉，使肌肉组织分离开，直至观察到完整的颈总动脉CCA；

S4：再在甲状软骨上缘分离出颈外动脉ECA和颈内动脉ICA，电凝并剪断枕动脉及甲状腺动脉；

S5：丝线结扎颈外动脉ECA，远端电凝处将颈外动脉ECA剪断，分离出颈总动脉CCA近心端及颈内动脉ICA，通过微型血管夹暂时夹闭颈总动脉CCA近分叉处和颈内动脉ICA远端；

S6：在颈外动脉ECA残端通过显微外科剪形成适当的小口，使用豚鼠专用线栓进入切口，当线栓准确进入颈内动脉ICA后再将颈外动脉ECA的松结结扎，最后将颈内动脉ICA远处留置的动脉夹打开，线栓***距离颈内动脉ICA和颈外动脉ECA分叉处9mm，感到阻力后即停止***线栓，此时线栓越过大脑中动脉MCA，到达较细的大脑前动脉ACA起始部，系紧颈外动脉ECA残端上的活结以固定住线栓，使线栓完全固定，将动脉夹取下，即成功构建大脑中动脉MCA阻塞；

S7：彻底清洗并缝合手术切口，单笼饲养观察，注意术后保暖，避免死亡；

S8：上述MCAO模型处理2h后，将线栓退至颈外动脉ECA残端，给予再灌注；

S9：上述再灌注后的MCAO模型，拔出线栓2min，通过动脉夹夹闭双侧颈总动脉CCA，再开放动脉夹恢复血流，15s缺血，30s再通处理。

进一步，S1中豚鼠设置为毛色为白、棕、黑三杂色的英国品种豚鼠。

进一步，S1中麻醉剂设置为1％戊巴比妥钠，所述麻醉剂量与豚鼠质量的比例设置为40mg/Kg，且所述麻醉剂的麻醉起效的标志为提起豚鼠尾部，豚鼠无张力自然下落。

进一步，S2中温控毯保持的豚鼠直肠温度为38摄氏度，温度对梗死大小影响非常显著，必须严格控制温度。

进一步，S6中线栓设置为硅胶线栓，避免使用多聚赖氨酸线栓，这是因为多聚赖氨酸对血管内皮细胞损伤严重，容易引起血小板聚集，导致血栓形成。

进一步，S6中线栓***大脑中动脉MCA的具体方法为：将线栓于颈外动脉ECA剪口处***颈总动脉CCA，此时在颈外备一活结并先固定住线栓，并调整线栓角度进入颈内动脉ICA，将线栓经颈内动脉 ICA缓慢***大脑中动脉MCA。

进一步，S3-S7均在手术显微镜下操作。

工作原理：硅胶线栓由切口进入颈外动脉ECA，再***颈总动脉 CCA，并调整线栓角度进入颈内动脉ICA，再缓慢***大脑中动脉MCA，最后到达较细的大脑前动脉ACA起始部，系紧颈外动脉ECA残端上的活结以固定住线栓，使线栓完全固定，将动脉夹取下，即成功构建大脑中动脉MCA阻塞，在豚鼠大脑中动脉阻塞MCAO模型的基础上完成脑缺血再灌注及缺血后适应处理过程，较传统的经颈总动脉直接***线栓方法更能保证动物的再灌注效果，再灌注后从颈总动脉直接通过颈内动脉供血，而传统的颈总动脉插栓方法，再灌注后直接结扎颈总动脉，再灌注供血只能通过侧支循环，不能达到与临床相似的再灌注效果，所以本发明的方法具有保证再灌注效果的优势。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。