一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法

文档序号：1663607 发布日期：2019-12-31 浏览：27次 >En<

阅读说明：本技术 一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法 (Method for extracting and preparing total flavonoids of cotton rose leaves ) 是由王平蒋锦燕江瑜于 2019-07-31 设计创作，主要内容包括：本发明提供的一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法,包括以下步骤：(1)将木芙蓉叶原料烘干、粉碎、过筛；(2)将过筛后的木芙蓉叶粉末与低共熔溶剂混合均匀,经超声辅助提取,抽滤得澄清的含有总黄酮的木芙蓉叶提取液,旋转蒸发浓缩后得到木芙蓉叶总黄酮。作为优选,所述步骤(1)中的过筛为过《中华人民共和国药典》规定的4号筛。作为优选,所述步骤(2)中,过筛后的木芙蓉叶原料与低共熔溶剂按照料液比计重量体积比为1:5～1:35的比例混合。(The invention provides an extraction and preparation method of total flavonoids in cotton rose leaves, which comprises the following steps: (1) oven drying folium Hibisci Mutabilis, pulverizing, and sieving; (2) mixing sieved folium Hibisci Mutabilis powder with eutectic solvent, ultrasonic-assisted extracting, vacuum filtering to obtain clear folium Hibisci Mutabilis extractive solution containing total flavonoids, and rotary evaporating for concentrating to obtain folium Hibisci Mutabilis total flavonoids. Preferably, the sieving in the step (1) is a No. 4 sieve specified in pharmacopoeia of the people's republic of China. Preferably, in the step (2), the sieved cotton rose hibiscus leaf raw material and the eutectic solvent are mixed according to a weight-volume ratio of the raw material to the eutectic solvent of 1: 5-1: 35.)

一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法

技术领域

本发明属于药材提取工艺领域，特别是涉及一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法。

背景技术

木芙蓉叶是我国传统的一味中药，又名芙蓉叶、拒霜叶，发源已久，在众多古代医书中皆有记载。《本草图经》和《本草纲目》中记载其特性为“味辛，平，无毒”，具有凉血解毒、消肿止痛等药理作用。现代药理学试验证明，木芙蓉叶有效提取成分可进行体外抑虫、抑菌，抗非特异性炎症，保护肾缺血再灌注损伤等。其中，黄酮苷是其主要活性成分之一，主要包含有芸香苷、山奈酚–3–O–β–芸香糖苷、山奈酚–3–O–β–刺槐双糖苷等，临床作用效果显著。现代文献报道中较多的木芙蓉叶总黄酮的提取方法有水提法、有机溶剂萃取法、超声法、微波辅助法等。由于传统提取方法普遍存在效率低、有机溶剂残留、提取成分损耗大等缺点，亟待研究一些新型的溶剂提取方法在木芙蓉叶总黄酮中的应用。

近年来，随着科学技术的发展与创新，人们对环境保护的意识不断提高，绿色化学的应用越来越多受到重视。低毒无污染、环保安全的绿色化学试剂越来越受到学者们的追捧，而低共熔溶剂，作为一种新型的介质溶剂，其独特的溶解能力方面，使其可以有选择性的对无机或有机材料等成分进行溶解，并具有极性，在中药材等的提取分离工艺中具有良好的应用前景。低共熔溶剂是一种由氢键受体(如季铵盐等)和氢键供体(如糖类、氨基酸等)组成的离子液体，具有熔点低、组成成分简单、绿色安全、价格低廉、易降解等特点，相关实验报道中已证明其是适应现代需求的一种高效的萃取剂。并且，低共熔溶剂的种类繁多，通过改变季铵盐等与氢键供体的不同比例，即可设计组合形成不同的低共熔溶剂体系，性质则也发生改变，这一可变性也证实了其异于寻常试剂的特殊潜力。段莉等(CN201711061313.8)通过制备表达式为[N(CH₃)₃CH2CH2OH]+[X·zY]－的胆碱类低共熔溶剂来提取金莲花的黄酮碳苷，结果发现该发明中提供的胆碱类低共熔溶剂可以高效、选择性提取金莲花中三种重要的黄酮碳苷，与传统的甲醇溶剂提取相比，不仅能够提高其提取率，而且提取物中杂质少，因此在该纯化工艺过程中，无需反复使用硅胶柱分离，大大减少分离纯化步骤、降低分离纯化成本。

赵龙山等(CN201810149224.7)以淫羊藿为原料，利用低共熔溶剂，尤其是胆碱类低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮苷类化合物，发现该提取方法对于黄酮苷类成分提取效率更高，提取更加彻底，提取效率可接近100％。除了提取条件温和，操作简便，该类方法还具有提取剂不燃爆、不挥发、损耗小、耗能低等特点，可用于黄酮苷类化合物的高效绿色规模化生产和实现淫羊藿资源的综合利用。Hertel R.M.等(WO/2012/145522)、Naik P.K.等(2016，Fluid Phase Equilibria，423，146-155)和TAzizi N.等(2012，Comptes rendus-Chimie，15，768-773)等均用不同类型的低共熔溶剂，从不同原料中提取黄酮，证实了采用低共熔溶剂提取黄酮的可行性和高效性。木芙蓉叶总黄酮中是木芙蓉叶中的主要活性成分，如芸香苷、山奈酚–3–O–β–芸香糖苷、山奈酚–3–O–β–刺槐双糖苷等，本发明方法采用绿色新型的低共熔溶剂作为木芙蓉叶总黄酮的提取溶剂，加以超声辅助传质增强其提取效果，与传统的有机溶剂提取法、水提法、酶提法相比，该方法更加绿色安全，对黄酮的损失也一定程度上有所减少，且反应条件温和、操作简单，易于推广应用。

发明内容

本发明提供的一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法，包括以下步骤：

(1)将木芙蓉叶原料烘干、粉碎、过筛；

(2)将过筛后的木芙蓉叶粉末与低共熔溶剂混合均匀，经超声辅助提取，抽滤得澄清的含有总黄酮的木芙蓉叶提取液，旋转蒸发浓缩后得到木芙蓉叶总黄酮。作为优选，所述步骤(1)中的过筛为过《中华人民共和国药典》规定的4号筛。作为优选，所述步骤(2)中，过筛后的木芙蓉叶原料与低共熔溶剂按照料液比计重量体积比为1:5～1:35的比例混合。

作为优选，所述步骤(2)中，过筛后的木芙蓉叶原料与低共熔溶剂的料液比计重量体积比为1:30。

作为优选，所述步骤(2)中的低共熔溶剂选自氯化胆碱、乙二醇和水的混合溶液，氯化胆碱、丙三醇和水的混合溶液，氯化胆碱、1,3-丁二醇和水的混合溶液，氯化胆碱、乙二酸和水的混合溶液，氯化胆碱、柠檬酸和水的混合溶液，氯化胆碱、尿素和水的混合溶液，氯化胆碱、葡萄糖和水的混合溶液，氯化胆碱、乙酰胺和水的混合溶液。

作为优选，所述氯化胆碱、乙二醇和水的混合溶液中氯化胆碱和乙二醇的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、丙三醇和水的混合溶液中氯化胆碱和丙三醇的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、1,3-丁二醇和水的混合溶液中氯化胆碱和1,3-丁二醇的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、乙二酸和水的混合溶液中氯化胆碱和乙二酸的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、柠檬酸和水的混合溶液中氯化胆碱和柠檬酸的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、尿素和水的混合溶液中氯化胆碱和尿素的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、葡萄糖和水的混合溶液中氯化胆碱和葡萄糖的摩尔比为1:2，所述氯化胆碱、乙酰胺和水的混合溶液中氯化胆碱和乙酰胺的摩尔比为1:2。

作为优选，所述步骤(2)中，低共熔溶剂的含水量不高于80％。

作为优选，所述步骤(2)中，低共熔溶剂的含水量为40％。

作为优选，所述步骤(2)中，超声辅助提取时间为10～60min，超声辅助提取温度为20～80℃。

作为优选，所述步骤(2)中，超声辅助提取时间为30min，超声辅助提取温度为60℃。

作为优选，所述步骤(2)中，木芙蓉叶提取液的抽滤液经NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH的显色反应，用紫外分光光度计测定吸光度，计算总黄酮浓度。

本发明专利提供了一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法，具有提取溶剂绿色安全，反应条件温和、操作简单、提取效率高等优点，且适用范围广，可用于中药材中活性成分的提取。

附图说明

图1：芦丁标准曲线

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，发现了一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法，具有提取溶剂绿色安全，反应条件温和、操作简单、提取效率高等优点，且适用范围广，可用于中药材中活性成分的提取。

发明人在已知浓度的黄酮标准样品溶液中加入经亚硝酸钠使其发生显色反应，然后测定其紫外吸光度，制作标准曲线，然后利用该标准曲线来定量不用实验条件下提取得到的木芙蓉叶总黄酮的浓度，从而获得优选的实验条件，并利用最佳实施例来证明该提取制备方法的优越性。

下面结合具体实施例对本发明做出详细说明：

实施例一低共熔溶剂的制备方法

所有化学试剂，包括氯化胆碱、尿素、乙二醇、丙三醇、1,3-丁二醇、柠檬酸、葡萄糖、乙二酸、乙酰胺，按照氢键受体：氢键供体＝1:2的固定摩尔比称量好各化学试剂，并将其混合于烧杯中，烧杯置于磁力搅拌器中以80℃的温度水浴加热，磁力搅拌约30min，得到均一透明的液体，放置冷却，无结晶或其他异常现象。

实施例二黄酮的显色方法及吸光度测定

精密吸取样品液1ml置于25ml容量瓶中，加5％的NaNO₂溶液1ml，摇匀，放置6min；加10％的Al(NO₃)₃溶液1ml，摇匀，放置6min；加4％的NaOH溶液10ml，用纯净水添加至刻度；摇匀，放置15min后于510nm处进行紫外吸光度的测定。

标准曲线的建立：将芦丁标准品(购自上海源叶生物科技有限公司，型号B20771，HPLC≧98％)，分别用体积浓度65％的乙醇水溶液稀释成浓度为0.021mg/mL、0.042mg/mL、0.063mg/mL、0.084mg/mL、0.105mg/mL的对照液，经NaNO₂-Al(NO₃)₃-NaOH显色完毕后，在510nm处测紫外吸光度，分别得到吸光度值为：0.180、0.361、0.551、0.719、0.905。以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘出芦丁对照品的标准曲线(图1所示)，标准曲线方程为：y＝8.6095x+0.0008(R²＝0.9997)。

实施例三低共熔溶剂组成种类的考察

本实施例以木芙蓉叶为黄酮原料

一种木芙蓉叶总黄酮的提取制备方法，包括以下步骤：