阅读说明：本技术 一种辣椒素酯类化合物、其药学上可接受的盐及其制备方法和应用 (Capsinoid compound, pharmaceutically acceptable salt thereof, and preparation method and application thereof ) 是由 刘晓艳 龚云 杨秀伟 赵威 于 2019-09-09 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种辣椒素酯类化合物、其药学上可接受的盐及其制备方法和应用。该辣椒素酯类化合物的结构为首次报道,并且其来源于鸡血藤,可以作为鸡血藤中辣椒素酯类物质鉴别的标准品。本发明提供的辣椒素酯类化合物是从鸡血藤正品的乙酸乙酯萃取物中分离得到,意外地,我们还发现该化合物具有良好的镇痛效果,有望作为一种镇痛药物。(The invention provides a capsaicine ester compound, pharmaceutically acceptable salts thereof, and a preparation method and application thereof. The structure of the capsinoid compound is reported for the first time, and the capsinoid compound is derived from caulis spatholobi and can be used as a standard substance for identifying capsinoid substances in the caulis spatholobi. The capsaicine ester compound provided by the invention is separated from the ethyl acetate extract of the quality caulis Spatholobi, and surprisingly, the compound is also found to have good analgesic effect and is expected to be used as an analgesic drug.)

一种辣椒素酯类化合物、其药学上可接受的盐及其制备方法 和应用

技术领域

本发明属于天然植物化学领域，更具体地，涉及一种由鸡血藤中获得的辣椒素酯类化合物及其制备方法和应用。

背景技术

辣椒素酯类化合物与辣椒素类化合物相比，没有辣椒素类化合物的辣味和细胞活性，因此具有更好的应用价值。已知研究表明，其具有增强免疫系统、促进脂肪代谢、抑制肥胖、镇痛等作用。CN1791400A公开其具有降低受试者总血清胆固醇量并改善其动脉硬化指数的作用。尽管辣椒素酯类化合物已经受到足够的关注，但其合成存在一定困难，并且对其活性研究仍不够深入，仍有待研究人员深入研究发现。

鸡血藤是豆科植物密花豆的干燥藤茎，鸡血藤中化学成分包括黄酮类、木脂素类、萜类、甾醇类、蒽醌类、酚酸类及其苷类等。尽管知道了一些大的分类，研究人员还是可以在日益先进的提取方法中，分离出新的化合物，部分新化合物经研究，发现比结构类似已知的化合物在某方面具有更佳的活性，有助于化学工作者探索新的药物、农用或其他化学用品。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种辣椒素酯类化合物。该辣椒素酯类化合物的结构为首次报道，并且其来源于鸡血藤，可以作为鸡血藤中辣椒素酯类物质鉴别的标准品。令人意外地，该辣椒素酯类化合物还表现出良好的镇痛性能，有望用于制备或开发新的镇痛药物。

本发明的另一目的在于提供所述辣椒素酯类化合物的制备方法。

本发明的另一目的在于提供所述辣椒素酯类化合物的应用。

本发明的上述目的通过如下技术方案予以实现：

一种辣椒素酯类化合物及其药学上可接受的盐，所述辣椒素酯类化合物具有如式(Ⅰ)所示结构式：

所述辣椒素酯类化合物药学上可接受的盐具有如式(Ⅱ)所示结构式：

M为碱金属或碱土金属，n＝1或2。

该辣椒素酯类化合物是首次发现的辣椒素酯类化合物，可以命名为4-氧代壬酸高香草醇酯；其可以作为鸡血藤中辣椒素酯类物质鉴别的标准品。

本申请中，所述碱金属选自钾、钠、锂；所述碱土金属选自钙、镁、钡。

所述辣椒素酯类化合物的制备方法，包括如下步骤：

S1.鸡血藤正品药材加水回流提取，浓缩，干燥，获得鸡血藤干浸膏；

S2.将S1.所得鸡血藤干浸膏用水溶解，采用乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取物；

S3.用氯仿：甲醇体积比(70～90):1的体系在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1；

S4.Fr.1经硅胶色谱以氯仿-甲醇依次用60:1、(50～40):1、(30～20):1、10:1的比例体系进行梯度洗脱，收集10:1比例得到的组分命名为Fr.1-4；

S5.Fr.1-4经TLC及HPLC检识，采用RP-SP-HPLC依次采用体积比为2:3、11:9、4:1的乙腈：水体系洗脱，并收集4:1洗脱得到的组分，即为Fr.1-4-3，Fr.1-4-3再在体积比(40～50):(60～50)的乙腈：水溶剂，结合RP-SP-HPLC，获得所述辣椒素酯类化合物。

本发明中，所述鸡血藤正品药材为豆科植物密花豆Spatholobus suberectusDunn.的干燥藤茎。

优选地，S1.中，所述鸡血藤与水的质量比为1:5。

优选地，S1.中，提取次数为2次。

优选地，S1.中，所述浓缩为减压浓缩。

优选地，S1.中，所述干燥为75℃真空干燥。

优选地，S2.中，所述萃取的次数为8次。

优选地，S3.中，氯仿-甲醇的体积比为80:1。

优选地，S4.中，所述氯仿与甲醇的梯度洗脱比例为60:1、40:1、20；1、10；1。

优选地，S4.Fr.1经硅胶色谱以氯仿-甲醇依次用60:1、40:1、20:1、10:1的比例进行洗脱时，进行TLC跟踪，当用同一比例的洗脱剂得到的洗脱液显示成分发生变化时，更换下一种比例的洗脱剂。

优选地，S5.中，所述乙腈：水溶剂的体积比为45:55。

在得到所述辣椒素酯类化合物后，可以通过将其与对应的碱金属或碱土金属形成的无机碱反应，获得对应的盐。

本申请同时提供一种所述辣椒素酯类化合物的人工合成方法，包括如下步骤：4-氧代壬酸进行酰氯化，然后与高香草醇反应得到所述辣椒素酯类化合物。

更具体的反应条件是：

4-氧代壬酸与吡啶溶于溶剂中，在-2～2℃下缓慢加入二氯亚砜，滴加完毕后，转移至室温继续搅拌1h，然后加热回流，TLC检测反应，直至酰氯反应完毕。

优选地，所述4-氧代壬酸与二氯亚砜的摩尔比为1:1.5～2.5。更优选为1:2。

所述溶剂优选为丙酮。

滴加的速度控制二氯亚砜在1小时内滴完。

所述辣椒素酯类化合物在作为检测鸡血藤中辣椒素酯类物质含量的标准品中的应用。

通过镇痛实验我们意外发现，所述辣椒素酯类化合物的镇痛效果优于壬酸高香草醇酯，因而有望用于制备或开发新的镇痛药物。同样地，所述辣椒素酯类化合物在药学上可接受的盐也有望用于制备或开发新的镇痛药物。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明公开一种新的辣椒素酯类化合物及其在药学上可接受的盐，该辣椒素酯类化合物从鸡血藤正品中提取分离获得，可以作为检测鸡血藤中辣椒素类物质含量的标准品。通过镇痛实验我们意外发现，所述辣椒素酯类化合物的镇痛效果优于壬酸高香草醇酯，因而该辣椒素酯类化合物及其在药学上可接受的盐有望用于制备或开发新的镇痛药物。

附图说明

图1为本发明所述辣椒素酯类化合物的质谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的简单修改或替换，均属于本发明的范围；若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1化合物4-氧代壬酸高香草醇酯的提取和分离

鸡血藤正品药材2016年3月采自云南，并鉴定为豆科植物密花豆Spatholobussuberectus Dunn.的干燥藤茎，凭证标本(Y008-1608010)保存在北京大学药学院天然药物及仿生药物国家重点实验室。

称取干燥鸡血藤药材70kg，加5倍量水回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压浓缩，75℃真空干燥7h，得鸡血藤干浸膏6kg(收率为8.57％)，留存1kg，其余5kg用6L去离子水溶解，依次用适量乙酸乙酯萃取8次，分别合并各萃取液，减压浓缩蒸干，得乙酸乙酯萃取物320g(按投料生药计算收率为0.46％)。

取乙酸乙酯萃取物(270g)进行硅胶柱色谱分离，用氯仿-甲醇体系80:1洗脱，得组分Fr.1。

Fr.1(19.9g)经硅胶柱色谱，依次用60:1、40:1、20:1、10:1的氯仿-甲醇混合液进行洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积，收集10:1比例得到的组分即Fr.1-4；

Fr.1-4经TLC及HPLC检识，采用RP-SP-HPLC依次采用体积比为2:3、11:9、4:1的乙腈：水体系洗脱，并收集4:1洗脱得到的组分，即为Fr.1-4-3，Fr.1-4-3再在体积比45:55的乙腈：水溶剂，结合RP-SP-HPLC，获得所述辣椒素酯类化合物(5.6mg，tR＝39.1min)。

实施例2

化合物4-氧代壬酸高香草醇酯在提取和分离过程中，S3.中氯仿与甲醇体系的体积比也可以用70:1在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1；其他步骤均按实施例1所述提取和分离过程进行，得到本发明所述化合物。

实施例3

化合物4-氧代壬酸高香草醇酯在提取和分离过程中，S3.中氯仿与甲醇体系的体积比也可以用90:1在硅胶柱上洗脱S2.所得乙酸乙酯萃取物，得到组分Fr.1；

其他步骤均按实施例1所述提取和分离过程进行，得到本发明所述化合物。

实施例4

化合物4-氧代壬酸高香草醇酯在提取和分离过程中，S4.中氯仿与甲醇体系的梯度洗脱比例也可以是60:1、50:1、30:1、10:1，其他步骤均按实施例1所述提取和分离过程进行，得到本发明所述化合物。

实施例5化合物4-氧代壬酸高香草醇酯的结构鉴定

所述辣椒素酯类化合物的氢谱、碳谱、质谱数据如下：

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:6.80(1H,d,J＝1.9Hz,H-2),6.69(1H,d,J＝8.0Hz,H-5),6.60(1H,dd,J＝8.0,1.9Hz,H-6),2.74(2H,t,J＝7.0Hz,H-7),

4.13(2H,t,J＝7.0Hz,H-8),3.74(3H,s,3-OMe),2.44(2H,t,J＝6.7Hz,H-2'),2.66(2H,t,J＝6.7Hz,H-3'),2.39(2H,t,J＝7.4Hz,H-5'),1.45(2H,m,H-6'),1.25(4H,m,H-7',8'),0.85(3H,t,J＝7.1Hz,H-9')。

13C-NMR(100MHz,DMSO-d6)δ:128.6s(C-1),113.2d(C-2),147.6s(C-3),145.3s(C-4),115.5d(C-5),121.1d(C-6),36.7t(C-7),65.0t(C-8),55.7q(3-OMe),172.4s(C-1'),27.8t(C-2'),34.1t(C-3'),209.1s(C-4'),41.8t(C-5'),23.1t(C-6'),30.9t(C-7'),22.1t(C-8'),14.0q(C-9')。

HRESIMS m/z 321.1699[M-H]-(calcd for C₁₈H₂₅O₅,321.1702)，详见图1。

实施例6辣椒素酯类化合物的人工合成方法

将4-氧代壬酸(10.00g，59.46mmol，1.00eq)和吡啶(23.52g，5.00eq)溶于50ml丙酮溶液中，在-2～2℃搅拌下缓慢滴加二氯亚砜(14.18g，2.00eq)，1h内滴加完毕，随后转移至室温继续搅拌1h，加热回流，TLC板监测反应，直至酰氯化反应完全。向反应体系中加入高香草醇(10.24g，1.00eq)，30-35℃条件下反应4h，反应结束后，加入去离子水100ml，乙酸乙酯100ml，分两次萃取，合并有机层，无水硫酸钠干燥，旋蒸，得所述辣椒素酯化合物(16.57g，86.44％)。经质谱、氢谱验证，与实施例1分离得到的化合物一致。

4-氧代壬酸高香草醇酯化合物的镇痛实验

醋酸扭体实验是通过醋酸刺激引起小鼠腹膜炎症而产生疼痛，是外周镇痛的经典模型，常作为评价和筛选镇痛药的方法之一。将一定容积和浓度的醋酸注入小鼠腹腔内，刺激脏层和壁层腹膜，引起深部较大面积、较长时间的炎性疼痛，致使小鼠出现腹部内凹、躯干与后肢伸张、臀部高起等行为反应，称为扭体反应。该反应在注射后15min内出现频率高，故以注射后15min内发生的扭体次数或发生反应的鼠数为疼痛定量指标。

实验动物：健康成年雌雄小鼠各20只，随机分为8组，每组5只，分别为模型对照组(生理盐水)、阳性对照组(阿司匹林，20mg/kg)；对比化合物高剂量组(壬酸高香草醇酯，1.0mg/kg)，对比化合物中剂量组(壬酸高香草醇酯，0.5mg/kg)，对比化合物低剂量组(壬酸高香草醇酯，0.1mg/kg)，化合物高剂量组(1.0mg/kg)、化合物中剂量组(0.5mg/kg)、化合物低剂量组(0.1mg/kg)。

化合物为本发明所述4-氧代壬酸高香草醇酯化合物。

各组均于给药后60分钟腹腔注射化学刺激物醋酸溶液2.0％(0.1mL/10g)，记录注射醋酸后15min内小鼠扭体数，评判药物镇痛效果，结果如表1所示。

表1

组别	剂量	15min内平均扭体次数
			模型对照组	/	107.4±3.65
阳性对照组	20	55.4±4.04<sup>a</sup>
			对比化合物低剂量组	0.1	105±7.68
对比化合物中剂量组	0.5	95±5.61<sup>a</sup>
			对比化合物高剂量组	1.0	79±4.95<sup>a</sup>
化合物低剂量组	0.1	94.8±5.40<sup>ab</sup>
			化合物中剂量组	0.5	75.2±4.76<sup>ab</sup>
化合物高剂量组	1.0	67.6±4.28<sup>ab</sup>

a：与模型对照组比存在极显著性差异p<0.001，b：与同等剂量的对比化合物比，存在显著性差异p<0.05；

实验结果表明：与模型对照组比较，除了对比化合物的低剂量组外，均显示具有镇痛效果，进一步地，本发明的辣椒素酯类化合物与对比化合物相比，具有更好的镇痛效果。