载脂蛋白c2校准品的冻干制备工艺
阅读说明：本技术 载脂蛋白c2校准品的冻干制备工艺 (Freeze-drying preparation process of apolipoprotein C2 calibrator ) 是由 刘阳 李慧婷 潘晓恒 孟令洋 崔秀雲 张瑞 夏冬梅 于 2019-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺,属于医疗器械生化体外诊断技术领域。本发明的冻干制备工艺包括以下步骤：步骤1、使用载脂蛋白C2抗原、及30～50％的乙醇,配制待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；步骤2、冻干步骤1制备的液体载脂蛋白C2校准品,冻干参数包括以下步骤：①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度2～8℃,产品预冻10～30min；降温至-5～-20℃,产品预冻1～3h；降温至-30～-50℃,产品预冻1～3h；②一次干燥阶段：温度升高至-5～-20℃,真空条件下,保持5～8h；升温至20～50℃,保持5～8h；③解析干燥阶段：调节温度至30～40℃,真空条件下,保持3～6h。该工艺冻干时间短,制备的冻干校准品水分含量低,效期长,易于溶解、且溶解后液体澄清。(The invention relates to a freeze-drying preparation process of an apolipoprotein C2 calibrator, belonging to the technical field of biochemical in-vitro diagnosis of medical instruments. The freeze-drying preparation process comprises the following steps: step 1, preparing a liquid apolipoprotein C2 calibrator to be freeze-dried by using an apolipoprotein C2 antigen and 30-50% ethanol; step 2, lyophilizing the liquid apolipoprotein C2 calibrator prepared in step 1, wherein the lyophilization parameters comprise the following steps: freezing control stage: the temperature of a freeze drying chamber is 2-8 ℃, and the product is pre-frozen for 10-30 min; cooling to-5-20 ℃, and pre-freezing the product for 1-3 h; cooling to-30 to-50 ℃, and pre-freezing the product for 1 to 3 hours; a primary drying stage: raising the temperature to-5 to-20 ℃, and keeping for 5 to 8 hours under the vacuum condition; heating to 20-50 ℃, and keeping for 5-8 h; analysis and drying stage: and adjusting the temperature to 30-40 ℃, and keeping for 3-6 h under a vacuum condition. The process has short freeze-drying time, and the prepared freeze-dried calibrator has low water content, long effective period, easy dissolution and clear liquid after dissolution.)
技术领域
本发明属于医疗器械生化体外诊断技术领域，具体涉及一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺。
背景技术
载脂蛋白C是血浆中一组水溶性低分子量蛋白质，包括载脂蛋白C1、C2、C3和新近发现的C4，共四个亚型，它们主要分布在乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和高密度脂蛋白(HDL)。其中载脂蛋白C2是CM、VLDL和HDL的结构蛋白之一，分别占其蛋白成份的14％、7％～10％及1％～3％。血清载脂蛋白C2(APOC2)水平的改变可能比血清胆固醇异常更早、能更敏感的反映脂质代谢异常状态。积极控制脂代谢紊乱对脑梗死的防治具有重要作用。
生化用载脂蛋白C2校准品是指在开展人血清中载脂蛋白C2检测项目在临床生化检测使用过程中对检测系统进行校准的校准物质；在临床的应用中非常的广泛；由于载脂蛋白C2抗原在溶液中不稳定，所以目前使用的载脂蛋白C2校准品多为冻干剂型。因此能够找到一种合适的冻干制备工艺参数，缩短冻干时间，使冻干品水分含量低，易于溶解，溶解后液体澄清，具有非常好的临床实用性，也非常利于临床的推广及发展。
发明内容
本发明的目的是提供一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，该工艺冻干时间短，制备的冻干校准品水分含量低，效期长，易于溶解、且溶解后液体澄清。
为了实现上述目的，本发明的技术方案具体如下：
本发明提供一种载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺，包括以下步骤：
步骤1、使用载脂蛋白C2抗原、及30～50％的乙醇，配制待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
步骤2、冻干步骤1制备的液体载脂蛋白C2校准品，冻干参数包括以下步骤：
①冷冻控制阶段：
冷冻干燥室温度2～8℃，产品预冻10～30min；
降温至-5～-20℃，产品预冻1～3h；
降温至-30～-50℃，产品预冻1～3h；
②一次干燥阶段：
温度升高至-5～-20℃，真空条件下，保持5～8h；
升温至20～50℃，保持5～8h；
③解析干燥阶段：
调节温度至30～40℃，真空条件下，保持3～6h。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段和解析干燥阶段的真空度均为0.15-0.20mba。
在上述技术方案中，优选冷冻控制阶段在30～60min内降温至-5～-20℃。
在上述技术方案中，优选冷冻控制阶段在40～90min内降温至-30～-50℃。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段在30～60min内升温至-5～-20℃。
在上述技术方案中，优选一次干燥阶段在60～120min内升温至20～50℃。
本发明的有益效果是：
1)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺中使用30％-50％的乙醇溶液替代水溶液，由于乙醇溶液具有挥发性，可以有效缩短冻干时间及降低冻干品水分含量，从而提高冻干品质量。使用水溶液制备的校准品冻干需要40h以上，而本发明冻干24h即可满足要求，由于干燥时间缩短可以在提高生产效率的同时节约能耗。
2)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品。
3)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品水分含量低，避免水分高影响冻干品浓度的稳定性，提高冻干品效期稳定性。
4)本发明提供的载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺制备的冻干品易于溶解，且溶解后液体澄清。
附图说明
下面结合附图和
具体实施方式
对本发明作进一步详细说明。
图1是13个月载脂蛋白C2校准品测值稳定性跟踪图。
图2是13个月载脂蛋白C2校准品衰减变化图。
图3是载脂蛋白C2校准品高温37℃加速7天、11天、15天效期加速模拟衰减变化图。
图4是载脂蛋白C2校准品复溶后2-8℃条件下开封6、8天效期模拟衰减变化图。
图5是载脂蛋白C2校准品复溶分装后-20℃条件下31天开封测试结果图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明做以详细说明。
实施例1
本实施例描述的是本发明的适用于载脂蛋白C2校准品的冻干制备工艺参数及稳定性的验证方法；
具体冻干制备工艺参数及验证方法及步骤如下：
实验组
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用40％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度5℃，产品预冻20min；
40min内降温至-10℃，产品预冻1h；
60min内降温至-40℃，产品预冻2h。
②一次干燥阶段：60min内温度升高至-5℃，真空度为0.18mba条件下，保持5h；
90min内升温至35℃，保持6h。
③解析干燥阶段：调节温度至40℃，真空度为0.18mba条件下，保持4h。
对照组
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度5℃，产品预冻2h；
40min内降温至-10℃，产品预冻4h；
60min内降温至-40℃，产品预冻4h。
②一次干燥阶段：60min内温度升高至-5℃，真空度为0.18mba条件下，保持12h；
90min内升温至35℃，保持12h。
③解析干燥阶段：调节温度至40℃，真空度为0.18mba条件下，保持10h。
实施例2
载脂蛋白C2校准品的性能评价
用卡尔费休水分测定仪测试制备完的载脂蛋白C2校准品，实验组水分为2.9035％，对照组水分为8.7864％。
将制备完的实验组和对照组的载脂蛋白C2校准品分别用1mL纯化水溶解20分钟，观察校准品全部溶解，溶解后液体澄清。
将制备完的实验组和对照组载脂蛋白C2校准品分别平均分成12份，储存在2-8℃的环境中，选取载脂蛋白C2测定试剂盒(免疫比浊法)(选自北京九强生化技术股份有限公司生产的试剂盒)，CS-1200全自动生化分析仪器首先用北京九强载脂蛋白C2校准品进行定标，定标成功后，每3个月分别对制备好的载脂蛋白C2校准品实施检测，连续检测13个月，观察校准品的结果的变化情况，并形成校准品稳定性跟踪图(图1)，并分别在零时间通道下测试，计算衰减，并形成衰减变化图(图2)。高温37℃加速7天、11天、15天效期加速模拟(图3)，复溶后2-8℃条件下开封6、8天效期模拟(图4)，复溶分装后-20℃条件下31天效期模拟(图5)。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟。并且由图1-5可知：本发明的冻干制备工艺制备的校准品在2-8℃贮存至少可稳定12个月性能不发生改变，37℃至少可稳定15天性能不发生改变，复溶后2-8℃至少可稳定7天性能不发生改变，复溶分装后-20℃条件下至少可稳定30天性能不发生改变，本发明可用于多种冻干剂型试剂使用。
实施例3
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用30％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度2℃，产品预冻10min；
30min内降温至-5℃，产品预冻2h；
40min内降温至-30℃，产品预冻1h。
②一次干燥阶段：30min内温度升高至-10℃，真空度为0.16mba条件下，保持6h；
60min内升温至20℃，保持6h。
③解析干燥阶段：调节温度至30℃，真空度为0.16mba条件下，保持3h。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品，水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟，溶解后液体澄清。
实施例4
在载脂蛋白C2校准品制备工艺中使用50％乙醇溶液替代水溶液，制备出待冻干的液体载脂蛋白C2校准品；
按照以下参数进行冻干：
①冷冻控制阶段：冷冻干燥室温度8℃，产品预冻30min；
60min内降温至-20℃，产品预冻3h；
90min内降温至-50℃，产品预冻3h。
②一次干燥阶段：40min内温度升高至-20℃，真空度为0.16mba条件下，保持8h；
120min内升温至50℃，保持8h。
③解析干燥阶段：调节温度至35℃，真空度为0.16mba条件下，保持6h。
本发明的冻干制备工艺制备的校准品外观：呈饼状，瓶塞不粘有冻干品，水分含量低于5％，溶解时间低于30分钟，溶解后液体澄清。
应当理解的是，本发明不限于上述的举例，对本领域的普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。