阅读说明：本技术 樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备及其抗肿瘤活性 (Preparation of camphor thiosemicarbazone compound and antitumor activity thereof ) 是由 王石发 张燕 徐徐 王忠龙 谷文 杨益琴 徐海军 匡红波 周新成 于 2018-05-30 设计创作，主要内容包括：本发明公开了樟脑基缩氨基硫脲类化合物及其制备方法和抗肿瘤活性研究。本发明利用樟脑为原料,在碱性催化条件下,分别与不同的芳香醛进行羟醛缩合反应得到系列α,β-不饱和酮,再经浓盐酸催化,与硫代氨基脲缩合得到系列樟脑基缩氨基硫脲类化合物,并对所有目标产物进行了抗肿瘤活性的研究。实验表明,樟脑基缩氨基硫脲类化合物对人多发性骨髓瘤细胞(RPMI-8226)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和人非小细胞肺癌细胞(A549)具有较好的抑制活性,且对正常细胞人胃粘膜细胞(GES-1)毒性较小,因此具有潜在的抗肿瘤应用价值。(The invention discloses camphor thiosemicarbazone compounds, a preparation method thereof and antitumor activity research. According to the invention, camphor is used as a raw material, and is subjected to aldol condensation reaction with different aromatic aldehydes under the alkaline catalysis condition to obtain a series of alpha, beta-unsaturated ketones, and is subjected to concentrated hydrochloric acid catalysis and condensation with thiosemicarbazide to obtain a series of camphor-based thiosemicarbazone compounds, and research on anti-tumor activity of all target products is carried out. Experiments show that the camphor thiosemicarbazone compound has good inhibitory activity on human multiple myeloma cells (RPMI-8226), human breast cancer cells (MDA-MB-231) and human non-small cell lung cancer cells (A549), and has low toxicity on normal cell human gastric mucosal cells (GES-1), so that the camphor thiosemicarbazone compound has potential anti-tumor application value.)

樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备及其抗肿瘤活性

技术领域

本发明属于有机合成和药物合成技术领域，涉及樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备及抗肿瘤活性。

背景技术

肿瘤是危害人类健康最严重的一类疾病，由于肿瘤细胞易迁移、繁殖速度快、易发生突变，癌症的发病率和死亡率一直居高不下。治疗癌症最常用的手段是化疗，但化疗的毒副作用很大，而且很多辅助的抗癌药物也是因为毒性大使临床应用有限制，所以仍然需要致力于研发一些低毒高效的抗癌药物。由于天然产物结构的多样性和广泛的生理活性，从天然产物中获取抗肿瘤药物成为国内外开发抗肿瘤药物的热门领域。樟脑是我国丰产的一种天然产物，除手性催化方面的应用外，樟脑及其衍生物在医药领域也应用广泛。

缩氨基硫脲是由硫代氨基脲与醛或酮缩合得到的一类席夫碱，此类化合物中含有N、S杂原子和C＝N活性基团，当左侧接上不同的化学结构或基团时，具有广泛的生物活性，如抗菌、抗病毒、抗虫、抗肿瘤活性等，因此，将缩氨基硫脲片段接入低毒的天然产物中，具有抗肿瘤药物开发的前景。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于探求一种由天然产物樟脑为原料制得的具有潜在抗肿瘤活性并且低毒的缩氨基硫脲类化合物。本发明的另一目的是提供一种樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备方法。本发明还有一目的是提供一种樟脑基缩氨基硫脲类化合物的应用。

技术方案：

樟脑基缩氨基硫脲类化合物，该类化合物的结构通式为：

式中：R分别为2-氟苯基、4-氟苯基、2-氯苯基、4-氯苯基、2-溴苯基、4- 溴苯基、2-甲基苯基、4-甲基苯基、2-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-羟基苯基、 4-羟基苯基、2-吡啶基、4-吡啶基、4-二甲氨基苯基、苯基、2，4-二氯苯基、2，3，4- 三甲氧基苯基、4-蒽基苯基、2-羟基-3-甲氧基苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-羟基苯基。

所述的樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备方法，包括如下工艺步骤：

(1)采用樟脑为起始原料，叔丁醇钾为催化剂，与不同的芳香醛进行羟醛缩合反应得到3-芳亚甲基樟脑类化合物；

(2)3-芳亚甲基樟脑类化合物与硫代氨基脲在浓盐酸催化下发生席夫碱的缩合反应，得到樟脑基缩氨基硫脲类化合物。

所述的3-芳亚甲基樟脑类化合物的制备方法，其特征在于步骤(1)中，具体合成步骤如下：

1)在配有磁力搅拌器、温度计和回流冷凝管的50ml三口烧瓶中，依次加入樟脑(8mmol)，叔丁醇(35mL)和叔丁醇钾(8～16mmol)，开启搅拌器；

2)待樟脑和叔丁醇钾溶解后加入芳香醛(10mmol)，加热回流反应数小时，至樟脑的转化率达到95％以上(GC跟踪检测)；

3)反应结束后，反应液浓缩除去叔丁醇后，加入乙酸乙酯，分别用蒸馏水和饱和食盐水洗涤至中性，再用无水的Na₂SO₄干燥，经过滤、浓缩后得3-芳亚甲基樟脑类化合物粗产物；

4)粗产物经甲醇重结晶后得到3-芳亚甲基樟脑类化合物。

所述的樟脑基缩氨基硫脲类化合物的制备方法，其特征在于步骤(2)中，具体合成步骤如下：

1)在配有磁力搅拌器、温度计和回流冷凝管的50ml三口烧瓶中，依次加入硫代氨基脲(2mmol)，乙醇(35mL)，开动搅拌使硫代氨基脲溶解；

2)加入3-芳亚甲基樟脑(2mmol)后，升温至90℃，滴加3滴浓盐酸，继续回流反应数小时，采用TLC跟踪检测；

3)反应结束后，反应液经浓缩除去乙醇，得到缩氨基硫脲类化合物粗产物；

4)粗产物经柱层析法提纯，得到樟脑基缩氨基硫脲类化合物。

所述的樟脑基缩氨基硫脲类化合物对人多发性骨髓瘤细胞(RPMI-8226)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和人非小细胞肺癌细胞(A549)具有较好的抑制活性，可作为具潜力的抗肿瘤化合物。

该发明的优点如下：

(1)樟脑原料廉价易得，来源丰富，产物樟脑基缩氨基硫脲类化合物制备工艺简单，有利于工业化生产；

(2)樟脑基缩氨基硫脲类化合物与阳性对照依托泊苷相比，活性相当，但毒性小于依托泊苷。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1

2-(3-(2′-氟亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 1)的制备：

在配有磁力搅拌器、温度计和回流冷凝管的50ml三口烧瓶中，依次加入硫代氨基脲(2mmol)，乙醇(35mL)，开动搅拌使硫代氨基脲溶解，加入3-(2′-氟苯亚甲基)樟脑(2mmol)后，升温至90℃，滴加3滴浓盐酸，继续回流反应48h小时(TLC跟踪检测)，反应结束后，反应液经浓缩除去乙醇，得到黄色粗产物，粗产物经柱层析法提纯(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶6，1％TEA)，得到得到淡黄色固体粉末。产率78.9％；m.p.156.1～156.5℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.22(s，1H)， 7.36(s，1H)，7.25-7.32(m，2H)，7.23(s，1H)，7.07-7.18(m，2H)，6.40(s，1H)，2.72(d， J＝4Hz，1H)，1.99-2.05(m，1H)，1.80-1.88(m，1H)，1.47-1.56(m，2H)，1.05(s，3H)， 0.91(s，3H)，0.77(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.97，161.28，158.26， 143.29，130.23，129.94，129.05，123.97，122.35，115.68，54.39，52.19，47.75，33.52， 26.09，20.02，18.14，11.27；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₈H₂₂FN₃S，[M+H]⁺ 332.1597，found 332.1595。

实施例2

2-(3-(4′-氟亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 2)的制备：

制备方法同实施例1。以4-氟苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率79.4％；m.p.192.5～192.9℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.18(s，1H)，7.30(t， J＝4Hz，2H)，7.27(s，1H)，7.21(s，1H)，7.07(t，J＝8Hz，2H)，6.40(s，1H)，2.86(d，J＝ 4Hz，1H)，2.05-2.10(m，1H)，1.77-1.87(m，1H)，1.53(d，J＝12Hz，1H)，1.04(s，3H)， 0.91(s，3H)，0.75(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.92，161.20，158.90， 141.22，132.18，130.86，128.72，115.72，54.17，51.71，47.97，33.42，25.77，20.01， 18.19，11.28；HR-MS(ESI)：m/zcalculated for C₁₈H₂₂FN₃S，[M+H]⁺332.1597，found 332.1591。

实施例3

2-(3-(2′-氯亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 3)的制备：

制备方法同实施例1。以2-氯苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率82.6％；m.p.199.7～200.5℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.24(s，1H)， 7.41-7.43(m，1H)，7.39(s，1H)，7.32(s，1H)，7.26(t，J＝4Hz，2H)，7.21-7.24(m，1H)， 6.46(s，1H)，2.66(d，J＝4Hz，1H)，1.97-2.03(m，1H)，1.81-1.86(m，1H)，1.51(d，J＝ 8Hz，2H)，1.05(s，1H)，0.89(s，1H)，0.80(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ 179.96，158.11，142.78，134.71，133.85，130.24，129.62，129.33，126.77，117.60， 54.37，51.67，47.75，33.36，25.90，20.07，18.12，11.26；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₈H₂₂ClN₃S；[M+H]⁺348.1301，found348.1297。

实施例4

2-(3-(4′-氯亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 4)的制备：

制备方法同实施例1。以4-氯苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色晶体。产率82.8％；m.p.157.1～157.8℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.20(s，1H)，7.34(t，J＝4 Hz，3H)，7.31(s，1H)，7.25(s，1H)，7.20(s，1H)，6.51(s，1H)，2.85(d，J＝4Hz，1H)， 2.06-2.09(m，1H)，1.81-1.85(m，1H)，1.48-1.53(m，2H)，1.04(s，3H)，0.91(s，3H)， 0.75(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.90，158.78，141.88，134.58，134.07， 130.37，128.71，119.49，54.17，51.77，47.98，33.39，25.74，20.02，18.18，11.28； HR-MS(ESI)：m/z calculatedfor C₁₈H₂₂ClN₃S；[M+H]⁺348.1301，found 348.1295。

实施例5

2-(3-(2′-溴亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 5)制备：

制备方法同实施例1。以2-溴苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率81.4％；m.p.203.2～203.8℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.25(s，1H)，7.61 (d，J＝8.0Hz，1H)，7.37(d，J＝8Hz，1H)，7.33(d，J＝8Hz，1H)，7.27(s，2H)， 7.17-7.21(m，1H)，6.46(s，1H)，2.64(d，J＝4Hz，1H)，1.96-2.02(m，1H)，1.78-1.85 (m，1H)，1.51(d，J＝8Hz，2H)，1.05(s，3H)，0.89(s，3H)，0.81(s，3H)；¹³C NMR(100 MHz，CDCl₃)：δ179.98，158.09，142.44，136.54，132.83，130.26，129.00，127.23， 124.12，120.09，54.38，51.53，47.78，33.29，25.94，20.12，18.12，11.27；HR-MS(ESI)： m/z calculated for C₁₈H₂₂BrN₃S；[M+H]⁺392.0796，found 392.0795。

实施例6

2-(3-(4′-溴亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 6)的制备：

制备方法同实施例1。以4-溴苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率80.3％；m.p.159.1～159.8℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.20(s，1H)，7.51 (d，J＝8Hz，2H)，7.37(s，1H)，7.18(d，J＝4Hz，2H)，6.48(s，1H)，2.85(d，J＝4Hz， 1H)，2.05-2.10(m，1H)，1.79-1.85(m，1H)，1.48-1.52(m，2H)，1.04(s，3H)，0.91(s， 3H)，0.74(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.92，158.74，141.96，135.03，131.73，130.63，128.58，122.30，54.17，51.78，47.98，33.39，25.73，20.02，18.18，11.28； HR-MS(ESI)：m/z calculatedfor C₁₈H₂₂BrN₃S；[M+H]⁺392.0796，found 392.0788。

实施例7

2-(3-(2′-甲基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物7)的制备：

制备方法同实施例1。以2-甲基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率78.9％；m.p.186.2～186.7℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.21(s，1H)，7.35(s， 1H)，7.29(s，1H)，7.20-7.22(m，2H)，7.18(t，J＝4Hz，2H)，6.41(s，1H)，2.66(d，J＝4 Hz，1H)，2.29(s，3H)，1.96-2.02(m，1H)，1.80-1.85(m，1H)，1.50(d，J＝8Hz，2H)， 1.05(s，3H)，0.88(s，3H)，0.78(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.84， 158.76，141.83，136.45，135.41，130.13，128.91，128.21，125.76，119.36，54.41，51.64， 47.62，33.48，26.03，20.13，20.13，18.09，11.25；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃S；[M+H]⁺328.1847，found 328.1843。

实施例8

2-(3-(4′-甲基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物8)的制备：

制备方法同实施例1。以4-甲基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率80.8％；m.p.164.1～164.6℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.21(s，1H)，7.24(s， 1H)，7.22(s，2H)，7.18(t，J＝8Hz，3H)，6.43(s，1H)，2.92(d，J＝4Hz，1H)，2.37(s， 3H)，2.04-2.09(m，1H)，1.80-1.86(m，1H)，1.57-1.60(m，1H)，1.47-1.52(m，1H)， 1.04(s，3H)，0.91(s，3H)，0.74(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.80， 159.26，140.57，138.30，133.27，129.24，129.18，120.81，54.15，51.85，47.96，33.46， 25.83，21.32，20.00，18.24，11.32；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃S； [M+H]⁺328.1847，found 328.1841。

实施例9

2-(3-(2′-甲氧基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物9)的制备：

制备方法同实施例1。以2-甲氧基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得橘黄色固体粉末。产率84.6％；m.p.181.4～181.7℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.32(s，1H)， 7.38(s，2H)，7.29-7.33(m，1H)，7.24(d，J＝8Hz，1H)，6.96(t，J＝8Hz，1H)，6.90(d， J＝8Hz，1H)，6.36(s，1H)，3.85(s，3H)，2.80(d，J＝4Hz，1H)，2.00-2.06(m，1H)， 1.79-1.85(m，1H)，1.48-1.55(m，2H)，1.04(s，3H)，0.90(s，3H)，0.77(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.71，159.07，157.38，140.76，129.69，128.87，125.66， 120.16，116.14，110.57，55.48，54.29，51.85，47.80，33.52，25.98，20.06，18.23，11.31； HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃OS；[M+H]⁺344.1797，found 344.1791。

实施例10

2-(3-(4′-甲氧基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物10)的制备：

制备方法同实施例1。以4-甲氧基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得黄色固体粉末。产率83.7％；m.p.174.6～174.9℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.13(s，1H)，7.28(s， 1H)，7.23(s，1H)，7.21(s，1H)，7.13(s，1H)，6.85(s，1H)，6.83(s，1H)，6.35(s，1H)， 3.77(s，3H)，2.85(d，J＝4Hz，1H)，1.97-2.02(m，1H)，1.72-1.79(m，1H)，1.38-1.45 (m，2H)，0.96(s，3H)，0.84(s，3H)，0.67(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ 179.72，159.50，157.67，139.49，130.74，129.73，128.65，114.01，55.32，54.12，51.82， 48.01，33.48，25.80，20.00，18.27，11.33；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃OS；[M+H]⁺344.1797，found 344.1797。

实施例11

2-(3-(2′-羟基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物11)的制备：

制备方法同实施例1。以2-羟基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率82.6％；m.p.178.7～189.1℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.63(s，1H)，7.36(s， 2H)，7.18(t，J＝8Hz，1H)，7.11(d，J＝8Hz，1H)，6.87-6.92(m，2H)，6.43(s，1H)，2.75 (d，J＝4Hz，1H)，1.97-2.03(m，1H)，1.78-1.85(m，1H)，1.49(d，J＝8Hz，2H)，1.03(s， 3H)，0.89(s，3H)，0.77(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.30，159.87， 153.92，141.86，129.63，129.05，125.08，123.48，120.32，116.06，54.48，51.71，47.70， 33.30，26.05，20.08，18.16，11.37；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₈H₂₃N₃OS； [M+H]⁺330.1640，found 330.1461。

实施例12

2-(3-(4′-羟基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物12)的制备：

制备方法同实施例1。以4-羟基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率81.1％；m.p.157.5～157.8℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.22(s，1H)，7.36(s， 1H)，7.25-7.32(m，2H)，7.23(s，1H)，7.07-7.18(m，2H)，6.40(s，1H)，2.7(d，J＝4Hz， 1H)，1.99-2.05(m，1H)，1.80-1.88(m，1H)，1.47-1.56(m，2H)，1.05(s，3H)，0.91(s， 3H)，0.77(s，3H)；¹³CNMR(100MHz，DMSO)：δ179.20，160.86，157.40，137.33， 130.69，129.73，127.27，115.45，53.61，50.71，47.35，32.79，25.64，19.75，18.05，11.47； HR-MS(ESI)：m/z calculatedfor C₁₈H₂₃N₃OS；[M+H]⁺330.1640，found 330.1638。

实施例13

2-(3-(2′-吡啶基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物13) 的制备：

制备方法同实施例1。以2-吡啶醛替代2-氟苯甲醛，得橘黄色固体粉末。产率82.3％；m.p.181.1～181.5℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.36(s，1H)，8.63(s， 1H)，8.50(d，J＝4Hz，1H)，7.64-7.66(d，J＝7.9Hz，1H)，7.30-7.36(m，2H)，7.06(s， 1H)，6.38(s，1H)，2.91(d，J＝4Hz，1H)，2.13-2.19(m，1H)，1.81-1.88(m，1H)， 1.75-1.78(m，1H)，1.59-1.62(m，1H)，1.07(s，1H)，0.94(s，4H)，0.88(s，3H)，0.78(s， 1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ178.72，156.37，150.02，148.19，145.05，135.53， 132.60，123.35，116.87，54.68，49.74，49.39，32.63，26.11，20.70，17.52，13.86； HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₇H₂₂N₄S；[M+H]⁺315.1643，found 357.1641。

实施例14

2-(3-(4′-吡啶基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物14)

制备方法同实施例1。以4-吡啶醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率83.5％；m.p.162.3～162.5℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.36(s，1H)， 8.58-8.59(m，2H)，7.20-7.21(m，3H)，6.99(s，1H)，6.51(s，1H)，2.93(d，J＝4Hz，1H)， 2.12-2.20(m，1H)，1.78-1.82(m，1H)，1.70-1.74(m，1H)，1.58-1.61(m，1H)，1.06(s， 1H)，0.94(s，4H)，0.86(s，3H)，0.78(s，1H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ180.14， 157.95，150.09，147.18，144.79，126.70，123.97，117.86，54.18，51.86，48.00，33.23， 25.73，20.05，18.11，11.25；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₇H₂₂N₄S；[M+H]⁺ 315.1643，found 357.1642。

实施例15

2-(3-(4′-二甲氨基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺 (化合物15)的制备：

制备方法同实施例1。以4-二甲氨基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得橘黄色晶体。产率84.8％；m.p.135.3～135.6℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.19(s，1H)，7.28 (d，J＝12Hz，3H)，7.16(s，1H)，6.70(d，J＝8Hz，2H)，6.28(s，1H)，3.01(s，3H)，2.97 (d，J＝4Hz，1H)，2.07-2.10(m，1H)，1.78-1.85(m，1H)，1.56-1.59(m，1H)，1.45-1.59 (m，1H)，1.02(s，3H)，0.91(s，3H)，0.74(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ 179.53，160.15，150.22，137.10，130.82，130.64，123.83，111.81，54.05，52.00，48.09， 40.19，33.55，25.85，19.99，18.36，11.38；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₂₀H₂₈N₄S； [M+H]⁺357.2113，found 357.2106。

实施例16

2-(3-亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物16)的制备：

制备方法同实施例1。以苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率83.2％；m.p.126.5～126.8℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.24(s，1H)，7.39(t，J＝8 Hz，3H)，7.34(s，2H)，7.30-7.32(m，2H)，6.45(s，1H)，2.92(d，J＝4Hz，1H)， 2.04-2.10(m，1H)，1.81-1.87(m，1H)，1.47-1.59(m，2H)，1.04(s，3H)，0.91(s，3H)， 0.75(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ179.86，159.07，141.33，136.14，129.93， 129.17，128.51，120.80，54.18，51.79，47.94，33.45，25.83，20.03，18.21，11.31； HR-MS(ESI)：m/z calculatedfor C₁₈H₂₃N₃S；[M+H]⁺314.1691，found 314.1685。

实施例17

2-(3-(2′，4′-二氯亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物17)的制备：

制备方法同实施例1。以2，4-二氯苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率79.6％；m.p.149.7～150.6℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.33(s，1H)， 7.42(s，1H)，7.23(s，2H)，7.20(d，J＝8Hz，1H)，7.17(s，1H)，6.28(s，1H)，2.70(d，J＝ 4Hz，1H)，2.05-2.13(m，1H)，1.78-1.87(m，1H)，1.70-1.76(m，1H)，1.46-1.52(m， 1H)，1.05(s，1H)，0.90(s，4H)，0.88(d，J＝8Hz，7H)，0.79(s，1H)；¹³C NMR(100 MHz，CDCl₃)：δ178.74，156.09，145.12，134.99，133.70，130.47，129.51，126.95， 125.54，116.46，54.78，51.73，49.49，32.56，26.18，20.68，17.45，13.85；HR-MS(ESI)： m/z calculated for C₁₈H₂₁Cl₂N₃S；[M+H]⁺382.0911，found 382.0903。

实施例18

2-(3-(2′，3′，4′-三甲氧基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲胺 (化合物18)的制备：

制备方法同实施例1。以2，3，4-三甲氧基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率79.9％；m.p.155.7～155.9℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.19(s， 1H)，7.20(s，1H)，6.58(s，1H)，6.56(s，2H)，6.42(s，1H)，3.88(d，J＝4Hz，9H)，2.95 (d，J＝4Hz，1H)，2.05-2.14(m，1H)，1.82-1.89(m，1H)，1.58-1.63(m，1H)，1.48-1.51 (m，1H)，1.05(s，3H)，0.93(s，3H)，0.77(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ 179.85，158.96，153.17，140.75，131.59，130.01，120.93，106.65，60.95，56.20，54.17， 52.20，48.00，33.43，25.70，20.04，18.25，11.32；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₂₁H₂₉N₃O₃S；[M+H]⁺404.2008，found 404.1998。

实施例19

2-(3-(4′-蒽亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物 19)的制备：

制备方法同实施例1。以9-蒽醛替代2-氟苯甲醛，得黄色固体粉末。产率 78.4％；m.p.218.5～218.9℃；¹H NMR(400MHz，CDCl₃)：δ9.50(s，1H)，8.46(s，1H)， 8.02-8.05(m，4H)，7.86(s，1H)，7.48-7.51(m，5H)，6.45(s，1H)，1.98(d，J＝4Hz，1H)， 1.71-1.78(m，1H)，1.59-1.63(m，1H)，1.31-1.37(m，1H)，1.09(s，3H)，0.91(s，3H)， 0.71(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，CDCl₃)：δ180.11，157.54，145.40，131.38，129.86， 128.84，127.31，126.58，125.89，125.74，125.36，117.72，54.80，51.99，47.46，32.98， 25.62，20.29，17.95，14.20；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₂₆H₂₇N₃S；[M+H]⁺ 414.2004，found 414.1995。

实施例20

2-(3-(2′-羟基-3′-甲氧基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物20)的制备：

制备方法同实施例1。以2-羟基-3-甲氧基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率80.6％；m.p.120.5～120.9℃；¹H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.83(s， 1H)，8.94(s，1H)，8.35(s，1H)，7.63(s，1H)，7.36(s，1H)，6.91-6.95(m，1H)， 6.81-6.83(m，2H)，3.81(s，3H)，2.74(d，J＝4Hz，1H)，1.95-2.02(m，1H)，1.74-1.80 (m，1H)，1.37-1.48(m，2H)，1.02(s，3H)，0.87(s，3H)，0.72(s，3H)；¹³C NMR(100 MHz，DMSO)：δ179.75，160.00，148.15，145.03，140.17，125.53，124.27，121.57， 119.12，112.16，60.20，56.32，54.24，47.59，33.33，26.16，20.23，18.45，11.82；HR-MS (ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃O₂S；[M+H]⁺360.1746，found 360.1738。

实施例21

2-(3-(2′-羟基-4′-甲氧基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物21)的制备：

制备方法同实施例1。以2-羟基-4-甲氧基苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率80.9％；m.p.180.6～181.8℃；¹H NMR(400MHz，DMSO)：δ9.74(s，2H)，8.31(s， 1H)，7.59(s，1H)，7.31(s，1H)，7.15(d，J＝8Hz，1H)，6.41-6.49(m，2H)，3.72(s，3H)， 2.75(d，J＝4Hz，1H)，1.99-2.03(m，1H)，1.73-1.79(m，1H)，1.38-1.48(m，2H)，1.01 (s，3H)，0.87(s，3H)，0.71(s，3H)；¹³C NMR(100MHz，DMSO)：δ179.09，160.39， 159.89，156.71，137.74，129.97，124.75，116.23，105.12，101.08，54.99，53.68，50.82， 47.23，32.87，25.71，19.72，18.02，11.36；HR-MS(ESI)：m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃O₂S；[M+H]⁺360.1746，found 360.1738。

实施例22

2-(3-(3′-甲氧基-4′-羟基亚苄基)-1，7，7-三甲基二环[2.2.1]庚-2-亚基)肼硫代甲酰胺(化合物22)的制备：

制备方法同实施例1。以4-羟基-3-甲氧基苯甲醛替代2-氟苯甲醛，得淡黄色固体粉末。产率81.2％；m.p.207.1～207.6℃；¹H NMR(400MHz，DMSO)δ：9.99(s，1H)，9.32(s，1H)，8.26(s，1H)，7.54(s，1H)，7.28(s，1H)，6.93(s，1H)，6.78～6.88(m， 2H)，3.79(s，3H)，2.89(d，J＝4Hz，1H)，1.99～2.07(m，1H)，1.69～1.81(m，1H)， 1.39～1.50(m，2H)，1.01(s，3H)，0.89(s，3H)，0.72(s，3H)；¹³C NMR(100MHz， DMSO)：δ179.75，161.11，147.87，147.29，138.11，130.47，128.27，122.79，116.06， 113.76，56.01，54.13，51.41，47.87，33.32，26.06，20.27，18.55，11.99；HR-MS(ESI)： m/z calculated for C₁₉H₂₅N₃O₂S；[M+H]⁺360.1746，found 360.1738。

实施例23

樟脑基缩氨基硫脲类化合物1～22的抗肿瘤活性测定：

樟脑基缩氨基硫脲类化合物1～22对人多发性骨髓瘤细胞(RPMI-8226)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)和人非小细胞肺癌细胞(A549)的抗肿瘤活性测定的具体实验步骤如下：

(1)样品配制：用减重法精确称取样品，溶于DMSO中，振荡器使其充分溶解后配制成50mmol/L的原液，将其分装保存。

(2)细胞复苏与传代：从液氮中小心取出含肿瘤细胞的冻存管，放入37℃的水中快速解冻，用培养基(含基础培养基95％，新生胎牛血清5％，青霉素-链霉素双抗1％)转移肿瘤细胞到离心管中离心，离心后吸掉上层液体后，用培养液将肿瘤细胞转移到含有培养液的培养瓶里，置于培养箱中(5％CO₂，37℃)孵育。倒置显微镜下观察细胞形态和细胞融合度，当融合度达到70％～80％时，若是贴壁细胞(MDA-MB-231，A549)，则吸出原培养瓶中的培养基，用PBS缓冲液润洗细胞1-2次，用吸管吸出残余的PBS，加1ml含EDTA的胰酶消化(通常控制在1～2min)，镜下观察，待在细胞边缘缩小，部分贴壁细胞开始运动时去掉胰酶，轻轻拍打培养瓶，大片细胞滑落时加入培养基终止消化，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散，转入离心管离心后，吸去上清液，用培养基将细胞尽量吹散为单个细胞后转入新的培养瓶中，再置于培养箱中培养；若是悬浮细胞，则免去消化过程，直接离心，操作过程与上述一样。

(3)细胞铺板：处于对数期增长的细胞，执行与(1)相同的步骤，取20μL细胞液和80μL PBS混匀，吸取90μL细胞细胞悬液与10μL的染色剂台盼蓝混合，吸取10μL稀释后的细胞液到血球计数板上，数四个方格内的细胞为n，则细胞数/mL＝n/4×稀释倍数，铺板浓度为1×10⁵，若铺板需要y个细胞，则需要的细胞悬液体积v＝y/每毫升的细胞数。取一定细胞液体积，并补充完全培养基到所需的体积，充分将细胞吹打均匀。96板外侧的一圈边缘孔先空着，其余孔每孔加入 90μL稀释好的细胞液。置于培养箱中培养24h。

(4)加样：用基础培养基将原液稀释100倍得50μmol/L的样品液，则样品液中DMSO的含量为1％，再用含1％DMSO的基础培养基二倍稀释成25、12.5、 6.25、3.12、1.55、0.75、0.37μmol/L的样品液(细筛用)或五倍稀释成10μmol/L 的样品液(粗筛用)，每个样每个浓度设置3个复孔做平行试验，并设置不加药组和阳性药组作为对照。含有细胞的孔中加入10μL样品液，周边孔每孔加100 μLPBS。置于培养箱中培养72小时。

(5)测OD值：每孔加入10μLMTS溶液，继续培养。待未加药组的OD值与加药组的OD值相差3倍以上时停止孵育，在490nm波长下用酶标仪测每个孔的OD值。

根据抑制率的结果，用GraphPad Prism 5.0软件进行数据处理并计算对肿瘤细胞和正常细胞株增殖的半数抑制浓度(IC₅₀)。

表1化合物1～22对三株肿瘤细胞的抗增殖活性

Table 1 Antiproliferative activities of compounds 1～22

缩氨基硫脲类化合物1～22的抗肿瘤活性由如表1所示，由表可知，化合物 1、3、5、7、11、13、18、19、20、21、22等十一个化合物对MDA-MB-231， RPMI-8226和A549三种肿瘤细胞都表现出良好的抑制效果，其中化合物19的活性最强，对MDA-MB-231细胞的IC₅₀值为3.90，对RPMI-8226细胞的IC₅₀值为6.56μM和对A549细胞的IC₅₀值为10.46μM，并且对正常的人胃粘膜细 GES-1没有显著的细胞毒性，而阳性药依托泊苷对MDA-MB-231细胞抑制活性与化合物19相当，对RPMI-8226细胞抑制活性要优于化合物19，对A549细胞的抑制活性也与化合物19相当，但对正常细胞的GES-1的毒性要明显高于化合物19。上述研究结果表明，化合物19对三株肿瘤细胞均表现出明显的抑制作用，具有开发抗肿瘤药物的潜力。