阅读说明：本技术 牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法 (Method for extracting and purifying peony pollen flavonoid ) 是由 张孟琴 龙金花 石庆丹 罗彪 于 2019-07-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法,将牡丹花粉加入水后,加入纤维素酶进行酶解,酶解1-3h后,加入乙醇至终浓度为60-90％,进行超声波浸提,浸提3-4h后；将浸提液浓缩、干燥,制成粗提物,制成的粗提物用浓度为70～75％的乙醇溶解,制成浓度为10～20mg/mL的溶液,在搅拌条件下加入乙酸锌盐溶液；调节溶液的pH值为8～10,进行络合反应,乙醇和丙酮的体积比为2:1,清洗后的金属络合物溶解于浓度为30～35％的乙醇中,加入EDTA进行解络合反应,振荡反应至沉淀完全溶解,冷却至室温,旋转蒸干,用甲醇溶解过滤,将滤液浓缩、干燥即得纯化后的茶叶黄酮类化合物,本发明能够从牡丹花粉高效的提取黄酮类化合物,且大大缩短了纯化周期,更加方便快捷。(The invention discloses a method for extracting and purifying peony pollen flavonoids, which comprises the steps of adding water into peony pollen, adding cellulase for enzymolysis, adding ethanol to a final concentration of 60-90% after enzymolysis for 1-3h, performing ultrasonic extraction, and extracting for 3-4 h; concentrating and drying the leaching liquor to prepare a crude extract, dissolving the prepared crude extract by using ethanol with the concentration of 70-75% to prepare a solution with the concentration of 10-20 mg/mL, and adding a zinc acetate solution under the stirring condition; adjusting the pH value of the solution to 8-10, performing a complexation reaction, wherein the volume ratio of ethanol to acetone is 2:1, dissolving the cleaned metal complex in 30-35% ethanol, adding EDTA to perform a decomplexation reaction, performing an oscillation reaction until the precipitate is completely dissolved, cooling to room temperature, performing rotary evaporation, dissolving and filtering with methanol, and concentrating and drying the filtrate to obtain the purified tea flavonoid compound.)

牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法

技术领域

本发明涉及技提取纯术领域，具体涉及牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法。

背景技术

牡丹花粉有丰富的黄酮类化合物，黄酮类化合物具有清除自由基、抗氧化、抗癌、抗菌等多种生理活性及药理作用,且无毒无害,对治疗和预防肿瘤、心血管病等疾病的有显著的效果，对延缓人体的衰老有重要意义，因阳黄酮成为近年来研究、开发和利用的热点。目前的黄酮类化合物的纯化主要为硅胶柱层析法，纯化周期较长，因此，寻求一种更加方便快捷、生产周期短的纯化方法成为研究热点。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了克服现有技术不足，现提出牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法，能够从牡丹花粉高效的提取黄酮类化合物，且大大缩短了纯化周期，更加方便快捷。

(二)技术方案

本发明通过如下技术方案实现：本发明提出了牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法，其特征在于，包括步骤如下：

1)将牡丹花粉加入水后，搅拌混合，再加入纤维素酶进行酶解，酶解1-3h 后，加入乙醇至终浓度为60-90％，进行超声波浸提，浸提3-4h后；将浸提液浓缩、干燥，制成粗提物。

2)制成的粗提物用浓度为70～75％的乙醇溶解，制成浓度为10～20mg/mL 的溶液，在搅拌条件下加入乙酸锌盐溶液；调节溶液的pH值为8～10，进行络合反应，反应结束后收集金属络合物沉淀；将金属络合物用清洗液进行清洗；其中清洗液是浓度为20％的乙醇丙酮水溶液，其中乙醇和丙酮的体积比为2:1，制备络合物。

3)金属络合物的解离，清洗后的金属络合物溶解于浓度为30～35％的乙醇中，加入EDTA进行解络合反应，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后的茶叶黄酮类化合物。

进一步的，所述步骤(1)搅拌混合后还有过滤步骤，干燥时间为24h。

进一步的，所述步骤(2)中络合反应温度为50～60℃，时间为30～60min。

进一步的，所述步骤(3)中EDTA的加入终浓度为15-40mg/m，解络合反应的温度为55～65℃。

(三)有益效果

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

提取牡丹花粉中黄酮类化合物含量达到50％以上，与已有的方法相比，不但纯化周期大大缩短，而且不影响黄酮类物质的得率和纯度，更加方便快捷。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明的牡丹花粉黄酮类物质的提取纯化方法，包括步骤如下：

1)将牡丹花粉加入水后，搅拌混合，再加入纤维素酶进行酶解，酶解1-3h 后，加入乙醇至终浓度为60-90％，进行超声波浸提，浸提3-4h后；将浸提液浓缩、干燥，制成粗提物。

2)制成的粗提物用浓度为70～75％的乙醇溶解，制成浓度为10～20mg/mL 的溶液，在搅拌条件下加入乙酸锌盐溶液；调节溶液的pH值为8～10，进行络合反应，反应结束后收集金属络合物沉淀；将金属络合物用清洗液进行清洗；其中清洗液是浓度为20％的乙醇丙酮水溶液，其中乙醇和丙酮的体积比为2:1，制备络合物。

3)金属络合物的解离，清洗后的金属络合物溶解于浓度为30～35％的乙醇中，加入EDTA进行解络合反应，振荡反应至沉淀完全溶解，冷却至室温，旋转蒸干，用甲醇溶解过滤，将滤液浓缩、干燥即得纯化后的茶叶黄酮类化合物。

其中，所述步骤(1)搅拌混合后还有过滤步骤，干燥时间为24h；所述步骤(2)中络合反应温度为50～60℃，时间为30～60min；所述步骤(3)中EDTA 的加入终浓度为15-40mg/m，解络合反应的温度为55～65℃。

实施例

将牡丹花粉加入水后，搅拌混合，过滤出杂质，再加入纤维素酶进行酶解，酶解1-3h后，加入乙醇至终浓度为60-90％，进行超声波浸提，浸提3-4h后；将浸提液浓缩、干燥24h，制成粗提物,粗提物用浓度为70～75％的乙醇溶解，制成浓度为10～20mg/mL的溶液，在搅拌条件下加入乙酸锌盐溶液；调节溶液的pH值为8～10，进行络合反应,反应温度为50～60℃,时间为30～60min，反应结束后收集金属络合物沉淀；将金属络合物用清洗液进行清洗；其中清洗液是浓度为20％的乙醇丙酮水溶液，其中乙醇和丙酮的体积比为2:1，制备络合物,DTA的加入终浓度为15-40mg/m，解络合反应的温度为55～65℃,对最终的终获得的提取物进行分析，提取物中黄酮类物质的质量百分比含量为升高为67.3％；且换算后黄酮类物质的总量没有变化，表明用清洗液进行清洗后明显提高了纯度。

上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和范围进行限定。在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入到本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。