阅读说明：本技术 一种具有显影功能及ucst响应性的栓塞微球及其制备方法 (Embolism microsphere with developing function and UCST responsiveness and preparation method thereof ) 是由 张超 黄丹 刘景龄 许昶昊 于 2019-08-06 设计创作，主要内容包括：本发明提出了一种具有显影功能及UCST(高临界溶解温度)响应性的栓塞微球及其制备方法。以丙烯酰胺(AAm)、丙烯腈(AN)为反应单体,N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBAAm)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,通过反向悬浮乳液聚合法制备上述微球；同时通过原位聚合的方法,在微球中引入具有显影功能及近红外发热性质的微纳米材料。通过该方法制备的微球,其尺寸可随温度升高而增大,且升温过程可通过外加近红外波段电磁波调控；同时,上述微球可包载、释放抗肿瘤药物,通过近红外波段电磁波调控,可控制药物释放,在肿瘤介入栓塞化疗应用中具有较好的应用前景。(The invention provides an embolization microsphere with developing function and UCST (high critical solution temperature) responsiveness and a preparation method thereof. Preparing the microspheres by using acrylamide (AAm) and Acrylonitrile (AN) as reaction monomers, using N, N-methylene bisacrylamide (MBAAm) as a cross-linking agent and using Azobisisobutyronitrile (AIBN) as AN initiator through a reverse suspension emulsion polymerization method; meanwhile, by an in-situ polymerization method, a micro-nano material with a developing function and near-infrared heating property is introduced into the microspheres. The size of the microsphere prepared by the method can be increased along with the rise of the temperature, and the temperature rise process can be regulated and controlled by additional near-infrared band electromagnetic waves; meanwhile, the microspheres can encapsulate and release anti-tumor drugs, can control the drug release by regulating and controlling near-infrared band electromagnetic waves, and have good application prospects in tumor interventional embolization chemotherapy applications.)

一种具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球及其制备方法

技术领域

本发明属于高分子化学、生物医学工程和生物医用材料领域，具体涉及一种具有显影功能及UCST(高临界溶解温度)响应性的栓塞微球及其制备方法。

背景技术

介入栓塞治疗是肿瘤治疗的最新发展趋势，主要基于肿瘤饥饿疗法。用于介入栓塞治疗的材料主要包括线圈、凝胶、微球等。目前临床上对患者进行的栓塞治疗，使用的材料主要为微球。微球具有较好的流动性以及较好的弹性，便于医生操作，同时具有较好的栓塞效果。目前，临床使用的栓塞微球粒径分布在20μm-1000μm之间。在肝癌、肾癌、肺癌、***癌、子宫肌瘤或脾肿瘤等的栓塞治疗中，栓塞微球具有较好的应用前景。

临床上在对肿瘤栓塞的同时，会采取药物化疗协同***疾病，然而临床上对栓塞微球药物的释放是无法控制；由于人体的免疫功能，在微球进入肿瘤血管之前，大部分药物已经被排出，使得药物化疗的作用微乎其微。所以，研究可控制释放药物的微球，对临床介入栓塞的进步具有推动性的作用。

临床上用于肿瘤栓塞的大多数微球在介入栓塞时需要借助可溶性造影剂间接追踪栓塞微球的位置。然而，可溶性造影剂在较短的时间内会在体内消失，无法实时监测患者的栓塞状态，运用起来也相当复杂。因此，需要具有显影功能的栓塞微球来解决介入栓塞微球存在的不足，这些显影微球对介入栓塞手术的整个治疗过程可以进行实时反馈，同时能够实时观察其在肿瘤组织中的分布状况，具有广泛的应用前景。名为《一种栓塞剂及其制备方法和应用》的中国发明专利(申请号：CN201810738914.6)中，将端基为羟基的聚(丙烯酰胺-co-丙烯腈)共聚物与多元酸发生缩合反应，交联而成粒径小于20μm的水凝胶微球；显影材料如Fe₃O₄则通过直接混合搅拌引入，并且该无机纳米材料表面无修饰，没法控制药物的释放。

本发明基于目前临床微球存在的缺陷，主要是制备了具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球，该显影微球可以协助医生实时观测肿瘤的栓塞状态，不需要借助可溶解性的造影剂显影；通过该方法制备的微球，其尺寸可随温度升高而增大，且升温过程可通过外加近红外波段电磁波调控；该微球可包载、释放抗肿瘤药物，通过外加近红外波段电磁波调控微球的温度，控制微球的药物释放，当红外光照时，微球释药速率增大，停止红外光照，微球释药速度减慢；可以较好地控制微球的药物释放，在临床肿瘤介入治疗中，具有较好的应用前景。同时该微球粒径可控，本专利通过该方法成功制备出粒径20-1000μm粒径的一种具有显影功能及高临界溶解温度响应性的微球，完全符合临床对栓塞微球粒径的要求。因而，具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球对临床栓塞微球的研究具有推动性的作用，是一种及具有研究价值以及研究意义的栓塞微球。

发明内容

本发明的目的在克服现有技术的不足，提供一种具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球及其制备方法。该微球既能实现自显影功能，又具备高临界溶解温度响应性，负载药物后可实现药物的可控释放。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

本发明提出了一种具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备方法，该微球直接以丙烯酰胺(AAm)、丙烯腈(AN)为单体，N,N-亚甲基双丙烯酰胺(MBAAm)为交联剂，偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂，通过反向悬浮乳液聚合法制备上述微球；同时通过原位聚合的方法，在微球中引入具有显影功能及近红外发热性质的微纳米材料。

进一步的，本发明微球的制备过程中使用交联剂，引发剂、溶剂、油相和分散剂，所述交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺，所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)，所述溶剂为水相，所述油相为矿物油或石蜡油，所述分散剂为EM90、Span80、Span60、土温20、土温80中的一种或几种。

更进一步的，所述分散剂占所述油相质量百分数为0.2-5％，所述丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在1:1-6:1之间。

更进一步的，所述交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为0.5-2％，所述引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为0.5％-1％。

进一步的，所述显影纳米材料为聚多巴胺包裹的Fe₃O₄、Au、Ag、Bi纳米颗粒，如：Fe₃O₄@PDA、[email protected]、[email protected]、[email protected]中的任一种或多种，该显影纳米材料具有显影功能及近红外发热性质。

更进一步的，所述显影纳米材料采用原位聚合法，包裹于微球的内部，占AAm单体质量的0.5-20％。

更进一步的，所述Fe₃O₄@PDA、[email protected]、[email protected]、[email protected]纳米粒子的制备方法如下：将50-100mg的Au、Ag、Fe₃O₄或Bi纳米粒分散于500mL pH＝8.5的Tris-HCl溶液中标记为A溶液，把60-100mg的PDA迅速溶于约0.5-2mLpH＝8.5的Tris-HCl溶液中，迅速逐滴滴加入A溶液中，边滴加边搅拌，在避光的室温中反应24h后收样，用去离子水清洗3遍，冻干备用。

更进一步的，所述制备方法中涉及的反应温度在55-80℃，搅拌速率在100-700rad/min。

本发明还提供了上述具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备方法。

本发明还提供了上述具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球在肿瘤介入栓塞治疗中的应用。

本发明现有技术对比存在如下有益效果：

第一、本发明申请通过丙烯酰胺、丙烯腈两种小分子单体以及交联剂的自由基聚合，快速制备水凝胶栓塞微球，避免了通过聚(丙烯酰胺-co-丙烯腈)聚合物或预聚物与交联剂之间的缓慢反应。

第二、本发明申请通过反向悬浮聚合法将两个单体交联形成栓塞微球，微球材料的粒径范围大并且可控，并且微球粒径完全符合临床栓塞对微球粒径的要求，目前已经上市的微球最小的粒径在50μm，本发明微球粒径可控在20-1000μm。

第三，本发明申请引入显影材料是通过原位聚合法，在可显影纳米粒的表面包裹一层聚多巴胺，聚多巴胺可以通过化学键的作用包裹在微球的内部，避免出现纳米粒泄露的现象，同时使得栓塞材料中显影材料分布更均匀。

第四，本发明申请的显影材料有PDA修饰，由于其具有近红外发热性质，使得本材料可通过外加近红外波段电磁波调控，能够实现药物可控释放。

本发明申请制备的微球具有高临界溶解温度响应性，随着温度的升高，微球的体积增大。在微球内部包裹可显影功能的Fe₃O₄@PDA等纳米粒子，该微球可以在体内较好的显影，便于实时追踪微球的动态以及去向。同时，由于加入了Fe₃O₄@PDA，该纳米粒具有较强的红外NIR吸收能力，通过近红外照射，Fe₃O₄@PDA纳米粒子吸收近红外光使得微球的温度升高，在控制药物释放的同时通过热疗的作用杀死肿瘤细胞。

附图说明

图1为Poly(AAm-co-AN)栓塞微球的显微镜图片。

图2为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的显微镜图片。

图3为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球随着温度的升高，微球平均粒径变化图。

图4.1为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的体外CT显影图。

图4.2为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的体外CT显影结果的折线图。

图5为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球在不同浓度下的体外升温图。

图6为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球在不同功率下的体外升温图。

图7为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球体外可重复升温数据图。

图8为Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球由808纳米红外激光控制药物释放图。

图9为栓塞手术前兔子动脉解剖图。

图10为栓塞手术前兔子肝脏肿瘤显影图。

图11为栓塞手术后兔子肝脏显影图。

图12为兔子肝脏肿瘤处的升温图。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

(1)具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球的制备：

配制质量浓度5-35％的AAm的水溶液；5-30mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为0.5-2％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为0.5％-1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在1:1-6:1之间，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，55-80℃反应4-12h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用。

配制含量为0.2-5％EM90或者Span80的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴滴加入量为0.2-5％EM90或者Span80的矿物油中，边滴加边搅拌，于55-80℃反应4-12h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

(2)具有显影功能及UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的制备：

Poly(AAm-co-AN)/([email protected])栓塞微球的制备过程与Poly(AAm-co-AN)栓塞微球的制备过程类似，其中不同之处是提前把所需质量的Fe₃O₄@PDA、[email protected]、[email protected]、[email protected]等纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1-2h；再将该混合溶液，逐滴加入含有0.2-5％EM90或者Span80的矿物油中，55-80℃反应4-12h后收样；分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

实施例1

具有UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度5％的AAm的水溶液；5mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为0.5％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为0.5％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，60℃反应4h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用；配制含量为0.2％EM90的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴加入含量为0.2％EM90或Span80的矿物油，边滴加边搅拌，于60℃反应4h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。图1为实例1制备的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球显微镜图片。

实施例2

具有UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度10％的AAm的水溶液；15mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在3:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，70℃反应6h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用。配制含量为2％EM90的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴滴加入量为2％EM90或者Span80的矿物油中，边滴加边搅拌，于70℃反应6h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

实施例3

具有UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度20％的AAm的水溶液；20mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为2％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在6:1之间，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，80℃反应12h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用。配制含量为4％EM90的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴滴加入量为4％EM90或者Span80的矿物油中，边滴加边搅拌，于80℃反应12h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

实施例4

具有UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；20mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为2％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在5:1之间，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，80℃反应12h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用。配制含量为5％EM90的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴滴加入量为5％EM90的矿物油中，边滴加边搅拌，于80℃反应12h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

实施例5

具有UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；20mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂为N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为2％，引发剂为偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比在6:1之间，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；反应充分的溶液逐滴滴加入含有乳化剂的矿物油中，80℃反应12h；反应结束后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、纯水清洗三遍，冷冻干燥备用。配制含量为4％Span80的矿物油，作为反应溶剂；

把AAm、AN、AIBN、MBAAm的混合溶液逐滴滴加入量为4％EM90或者Span80的矿物油中，边滴加边搅拌，于80℃反应12h后，分别用正己烷或者丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性的Poly(AAm-co-AN)栓塞微球。

实施例6

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度5％的AAm的水溶液；5mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为0.5％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为0.5％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的Fe₃O₄@PDA、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有0.2％EM90的矿物油中，于60℃反应4h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球。

实施例7

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度10％的AAm的水溶液；10mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的Fe₃O₄@PDA、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有2％EM90的矿物油中，于60℃反应12h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球。图2为实例7制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的显微镜图片，该图结果说明了Fe₃O₄@PDA纳米粒被成功包裹进微球里面。图3为本例制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球平均粒径随着温度的升高的变化图，由图3可看到，随着温度升高，微球的平均粒径增大。当温度从高温降到低温时，微球的粒径又逐渐降低，说明该微球随着温度的升高，体积变化具有可恢复性。图4.1为实例7制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的体外CT显影图，由图中可以看出，随着微球浓度的增大，该微球的显影效果增强，同时很好的证明了该微球具有较好的显影功能。图4.2基于具体的灰度数值，以折线图的形式直观的反映了图4.1的结果。图5为按实例7制备的微球在808nm红外激光(1.5W/cm₂)作用下，不同浓度的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球的体外升温图，从图中可以看出，微球的浓度越高，其体外升温效果越强。图7为实例7制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球体外可重复升温数据图，从该图可看出此微球具有较好的可重复升温的特性，为其进一步在动物实验中的兔子体内栓塞打下基础。图8为实例7制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球由808nm红外激光控制药物释放图，由该图可看出此微球在红外808nm光照的作用下，微球具有突释药物的效果，进一步验证了红外光照可以控制药物释放。

实施例8

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；10mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的Fe₃O₄@PDA、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有4％Span80的矿物油中，于60℃反应12h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球。图6为实例8制备的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球在不同功率下的体外升温图，从该图可知功率越大，微球的体外升温效率越高。

实施例9

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；30mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的Fe₃O₄@PDA、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有4％Span80的矿物油中，于60℃反应12h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球。

实施例10

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；30mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的[email protected]、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有4％Span80的矿物油中，于60℃反应12h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/([email protected])栓塞微球。

实施例11

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的制备

配制质量浓度35％的AAm的水溶液；30mg/mL的AIBN、MBAAm溶液；按照配比，交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺占AAm单体的质量百分数为1％，引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)占AAm单体质量百分数为1％，丙烯酰胺与丙烯腈的摩尔比为1:1，分别加入相应含量的AIBN、MBAAm、AN；把所需质量的[email protected]、纳米粒子分别提前加入到AAm与AN的混合液中，反应1h；把反应充分的溶液逐滴滴加入含有4％Span80的矿物油中，于60℃反应12h后，分别用丙酮、无水乙醇、去离子水清洗3遍，冷冻干燥备用，制备得到具有UCST响应性同时具有显影功能的Poly(AAm-co-AN)/([email protected])栓塞微球。

实施例12

具有显影功能及UCST响应性的栓塞微球的动物栓塞实验

动物实验按照《广东实验动物管理条例》进行，并经中山大学动物实验伦理委员会批准。用Poly(AAm-co-AN)/(Fe₃O₄@PDA)栓塞微球栓塞接种了VX2肿瘤新西兰大白兔的肝动脉，进行肝动脉栓塞实验，其中，介入操作在数字减影血管造影机(DSA)下严格按照无菌操作执行：取正常的日本大耳兔，耳缘静脉注射2％戊巴比妥钠麻醉，按照标准用量注射，兔仰卧位固定，于右侧腹股处分离远端股动脉。经直导丝引入4F血管鞘并用近心端预留丝线固定。注入栓塞微球，栓塞结束后剖开兔子肝脏，直接使用808nm红外激光照射肝脏肿瘤部位，功率设置为1.0W/cm²，照射10-30min。照射完毕后缝合伤口，等兔子苏醒后进行下一步的观察。图9为实施例12栓塞手术前兔子动脉解剖图。图10为实施例12栓塞手术前兔子肝脏肿瘤显影图，红色部分为兔子肝脏肿瘤。图11为实施例12栓塞手术后兔子肝脏显影图。图12为实施例12兔子肝脏肿瘤处的升温图，此图可看出肿瘤处温度达到60℃，该温度足以杀死肿瘤细胞。

本发明申请制备的微球可以包载如阿霉素、紫杉醇、顺铂等抗肿瘤药物，在近红外波段电磁波调控的作用下，可以控制药物的释放；近红外波段电磁波照射时，该微球的体积增大，药物释放速度增大，当停止近红外波段电磁波照射时，该微球体积变小，同时药物释放速率减慢，在肿瘤介入栓塞治疗中具有较好的应用前景。