阅读说明：本技术 一种总铁结合力检测试剂盒及其制备方法 (total iron binding force detection kit and preparation method thereof ) 是由 袁嘉扬 张凤 于 2019-09-12 设计创作，主要内容包括：本发明涉及生物技术领域,涉及一种总铁结合力检测试剂盒,尤其涉及一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法,包括试剂R1的制备以及试剂R2的制备,将配液罐放在磁力搅拌器上,使溶液保持中速转动状态,边搅拌边投入Tris缓冲液、亚铁嗪、抗坏血酸、第二缓冲液,搅拌30分钟至物料完全溶解,溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后,然后定容至最终体积。本发明的优点是：本试剂盒是采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行总铁结合力的检测,在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来,再被还原剂还原为Fe2+,后者与亚铁嗪生成紫红色化合物,通过分光光度计检测562nm处吸光度值检测血清、血浆样品中的总铁含量,线性范围可做到50-400μmol/L。(the invention relates to the technical field of biology, and relates to a total iron binding force detection kit, in particular to a preparation method of the total iron binding force detection kit, which comprises the steps of preparing a reagent R1 and preparing a reagent R2, wherein a liquid preparation tank is placed on a magnetic stirrer, so that a solution keeps a medium-speed rotation state, Tris buffer solution, ferrous oxazine, ascorbic acid and a second buffer solution are added while stirring, the stirring is carried out for 30 minutes until materials are completely dissolved, and after no precipitate is left at the bottom of the clear and transparent liquid preparation tank, the solution is subjected to constant volume until the final volume is reached. The invention has the advantages that: the kit adopts a spectrophotometry method to detect the total iron binding force by taking the ferrochrome as a substrate, serum iron bound with transferrin in an acidic medium is dissociated from the transferrin and then reduced into Fe2+ by a reducing agent, the Fe2+ and the ferrochrome generate a mauve compound, the total iron content in serum and plasma samples is detected by detecting the absorbance value at 562nm by a spectrophotometer, and the linear range can reach 50-400 mu mol/L.)

一种总铁结合力检测试剂盒及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及一种总铁结合力检测试剂盒，尤其涉及一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法。

背景技术

总铁结合力的测定是常规检验项目，众多临床资料表明，缺铁性贫血、急性肝炎等疾病导致总铁结合力降低，而肝硬变，肾病，***和血色沉着症等疾病可导致总铁结合力增高，测定总铁结合力的含量，对相关疾病的确诊、治疗效果的观察具有重要的临床价值。

目前，临床测定总铁结合力主要采用经轻质碳酸镁吸附的原子吸收法和各种络合光度法。原子吸收法不仅需要专用昂贵仪器，还需沉淀、离心，检测成本高，操作步骤繁琐，临床上难以普及。

发明内容

本发明的目的是：针对上述不足，提供一种总铁结合力检测试剂盒及其制备方法。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种总铁结合力检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：

所述试剂R2的各组分集浓度包括：

所述第一防腐剂和第二防腐剂包括叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。

所述试剂R1的pH值在4.00-5.00之间。

所述试剂R2的pH值在7.00-8.30之间。

一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、硫脲、盐酸羟胺、硫酸亚铁铵、TritonX-100、第一防腐剂，搅拌10-30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到4.00-5.00之间，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

在配液罐中先加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、亚铁嗪、抗坏血酸、第二缓冲液，搅拌10-30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到7.00-8.30之间，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。

与现有技术相比，本发明所达到的技术效果是：本试剂盒是采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行总铁结合力的检测，在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来,再被还原剂还原为Fe2+,后者与亚铁嗪生成***化合物,通过分光光度计检测562nm处吸光度值检测血清、血浆样品中的总铁含量,线性范围可做到50-400μmol/L。

附图说明

图1是本发明实施例4采用标准品进行定标的曲线图。其中X轴表示标准品浓度，Y轴表示dOD。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：

本发明的一种总铁结合力检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为80mmol/L、硫脲，其浓度为30mmol/L、盐酸羟胺，其浓度为150mmol/L、硫酸亚铁铵，其浓度为5mmol/L、TritonX-100，其浓度为0.2％、Proclin-950，其浓度为0.8ml/L；

所述试剂R2的各组分集浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为30mmol/L、亚铁嗪，其浓度为20mmol/L、抗坏血酸，其浓度为10mmol/L，Proclin-950，其浓度为0.8ml/L。

所述试剂R1的pH值在4.00。

所述试剂R2的pH值在7.00。

一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、硫脲、盐酸羟胺、硫酸亚铁铵、TritonX-100、第一防腐剂，搅拌10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到4.00，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

在配液罐中先加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、亚铁嗪、抗坏血酸、第二缓冲液，搅拌10分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到7.00之间，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。

实施例二：

本发明的一种总铁结合力检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为120mmol/L、硫脲，其浓度为45mmol/L、盐酸羟胺，其浓度为220mmol/L、硫酸亚铁铵，其浓度为20mmol/L、TritonX-100，其浓度为1.0％、Proclin-300，其浓度为1.2ml/L；

所述试剂R2的各组分集浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为55mmol/L、亚铁嗪，其浓度为35mmol/L、抗坏血酸，其浓度为30mmol/L，Proclin-300，其浓度为1.2ml/L。

所述试剂R1的pH值在4.5。

所述试剂R2的pH值在7.6。

一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、硫脲、盐酸羟胺、硫酸亚铁铵、TritonX-100、第一防腐剂，搅拌20分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到4.5，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

在配液罐中先加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、亚铁嗪、抗坏血酸、第二缓冲液，搅拌20分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到7.6，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。

实施例三：

本发明的一种总铁结合力检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为160mmol/L、硫脲，其浓度为60mmol/L、盐酸羟胺，其浓度为300mmol/L、硫酸亚铁铵，其浓度为30mmol/L、TritonX-100，其浓度为2.0％、硫柳汞，其浓度为2.0ml/L；

所述试剂R2的各组分集浓度包括：Tris缓冲液，其浓度为80mmol/L、亚铁嗪，其浓度为50mmol/L、抗坏血酸，其浓度为50mmol/L，硫柳汞，其浓度为2.0ml/L。

所述试剂R1的pH值在5.00。

所述试剂R2的pH值在8.30。

一种总铁结合力检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：

在配液罐中加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、硫脲、盐酸羟胺、硫酸亚铁铵、TritonX-100、第一防腐剂，搅拌30分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到5.00，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识；

B)、试剂R2制备：

在配液罐中先加入70％的纯化水，将配液罐放在磁力搅拌器上，打开磁力搅拌器电源开关，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入Tris缓冲液、亚铁嗪、抗坏血酸、第二缓冲液，搅拌30分钟至物料完全溶解，溶液清澈透明配液罐底部无沉淀后，调节pH值到8.30，然后定容至最终体积；

溶解完的配液按照微孔过滤器操作规程，通过微孔滤膜过滤，过滤后的溶液存放在成品罐中，进行标识。

实施例四：

对本产品使用标准品进行定标，结果如表1所示，定标曲线如图1所示。

表1：定标结果

线性范围可做到50-400μmol/L.

其精密度CV如表2所示：

精密度CV＜5％。

综上所述，与现有技术相比，本发明所达到的技术效果是：本试剂盒是采用分光光度法以亚铁嗪为底物进行总铁结合力的检测，在酸性介质中与转铁蛋白结合的血清铁从转铁蛋白中解离出来,再被还原剂还原为Fe2+,后者与亚铁嗪生成***化合物,通过分光光度计检测562nm处吸光度值检测血清、血浆样品中的总铁含量,线性范围可做到50-400μmol/L。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。