阅读说明：本技术 三叶木通果皮多酚的提取分离方法 (The extraction separation method of Akebia trifoliate koiaz Peels polyphenol ) 是由 张孟琴 田玉婷 罗彪 于 2019-07-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种三叶木通果皮多酚的提取分离方法,将三叶木通果皮洗净、干燥、粉碎、过滤,得到粉末；接着酶解,向粉末中加入所述粉末重量的纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶和水混合搅拌均匀,并用超声波处理,停止超声,于下水浴保温,得酶解液；向上述酶解液中加入所述酶解液重量的氯化铝,并将pH调整为5.5-6.5,静置12-24h后,于2000-2400r/min下离心10-15min,过滤分离出滤液,将混合沉淀用酸溶解成液体,并向液体中添加等量的乙酸乙酯萃取,乙酸乙酯的体积浓度为40-60％,得萃取液；用截留分子量为1-3万的PES膜对萃取液进行超滤,膜面流速为2-2.5m/s,操作温度为35-45℃,跨膜压力为0.1-0.2MPa,超滤后对滤液进行浓缩,干燥,得到三叶木通皮多酚粉末,提取成本低,适合大规模生产。(The invention discloses a kind of extraction separation methods of Akebia trifoliate koiaz Peels polyphenol, and Akebia trifoliate koiaz Peels are cleaned, is dry, are crushed, filtering, obtain powder；Then it digests, cellulase, pectase, neutral proteinase and the water that the powder weight is added into powder are mixed evenly, and with ultrasonication, stop ultrasound, keep the temperature in lower water-bath, obtain enzymolysis liquid；The aluminium chloride of the enzymolysis liquid weight is added into above-mentioned enzymolysis liquid, and pH is adjusted to 5.5-6.5, after standing 12-24h, 10-15min is centrifuged under 2000-2400r/min, filtrate is filtered to isolate, by mixed precipitation acid dissolution at liquid, and the ethyl acetate of addition equivalent extracts into liquid, the volumetric concentration of ethyl acetate is 40-60%, obtains extract liquor；Ultrafiltration, crossflow velocity 2-2.5m/s are carried out to extract liquor with the PES film that molecular cut off is 1-3 ten thousand, operation temperature is 35-45 DEG C, transmembrane pressure is 0.1-0.2MPa, and filtrate is concentrated after ultrafiltration, dry, threeleaf akebia skin polyphenol powder is obtained, extraction cost is low, is suitble to large-scale production.)

三叶木通果皮多酚的提取分离方法

技术领域

本发明涉及提取分离技术领域，具体涉及三叶木通果皮多酚的提取分离方法。

背景技术

三叶木通属于属落叶木质藤本植物，形似香蕉，故称“野香蕉”，其鲜果含有丰富的蛋白质、可溶性糖、有机酸和人体必需的氨基酸、矿质元素等，据《日华子本草》记载，三叶木通具有舒肝理气、活血止疼、除烦利尿之功效。

目前对三叶木通果实的开发和利用已经取得了初步的成效,但其果皮厚重,几乎占总果重的40％～69.1％之多,常被丢弃，三叶木通果皮可以提取果皮多酚,不仅能提高三叶木通的经济效益,而且还能解决因果皮丢弃带来的环境污染问题。

发明内容

(一)要解决的技术问题

为了克服现有技术不足，现提出三叶木通果皮多酚的提取分离方法，通过超声波辅助酶解对三叶木通果皮进行破壁、沉淀提取多酚、膜滤法进行除杂等一系列技术手段相结合，使产品得率高，纯度高，且操作方法简单，设备要求低，提取成本低，适合大规模生产。

(二)技术方案

本发明通过如下技术方案实现：本发明提出了三叶木通果皮多酚的提取分离方法，其特征在于，包括步骤如下：

1)将三叶木通果皮洗净，放入干燥箱中，于55-65℃下烘干10-12h，粉碎，过35-45目筛，得到粉末，备用。

2)向粉末中加入所述粉末重量0.6-0.8％的纤维素酶、1.5-2.5％的果胶酶、0.1-0.3％的中性蛋白酶和60-70％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理6-9min，停止超声，于42-54℃下水浴保温3-5h，得酶解液。

3)向上述酶解液中加入所述酶解液重量2-5％的氯化铝，并将pH调整为 5.5-6.5，静置12-24h后，于2000-2400r/min下离心10-15min，过滤分离出滤液，得一次沉淀；向滤液中加入所述滤液重量3-8％的氯化钙，并将pH调整为8-10，静置6-8h后，于2000-2400r/min下离心 10-15min，过滤，得二次沉淀；将所述一次沉淀和二次沉淀混合，得混合沉淀。

4)将上述混合沉淀用酸溶解成液体，并向所述液体中添加等量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯的体积浓度为40-60％，得萃取液。

5)用截留分子量为1-3万的PES膜对上述的萃取液进行超滤，膜面流速为2-2.5m/s，操作温度为35-45℃，跨膜压力为0.1-0.2MPa，超滤后对滤液进行浓缩，干燥，得到三叶木通皮多酚粉末。

进一步的，所述步骤(2)酶解时，向粉末中加入所述粉末重量0.6％的纤维素酶、0.3％的果胶酶、0.3％的中性蛋白酶和70％的水混合搅拌均匀。

进一步的，所述步骤(2)中超声波的功率为150-250W，频率为20-35KHz。

进一步的，所述步骤(4)中酸为食品级硝酸或食品级盐酸。

进一步的，所述步骤(5)中浓缩的温度不超过75℃，干燥为真空干燥。

(三)有益效果

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

1.通过超声波辅助酶解对三叶木通果皮进行破壁，沉淀提取多酚，膜滤法进行除杂等一系列技术手段，使产品得率高，纯度高，且操作方法简单，设备要求低，提取成本低，适合大规模生产。

2.酶解步骤中，超声波可提高酶活力，加上纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶协同增效，加快酶反应速度，提高了芒果皮细胞的破碎和溶解程度，使多酚物质能最、大程度的释放、渗出，且果胶酶和中性蛋白酶还将细胞中的蛋白质和果胶溶解成小分子物、质，降低了蛋白质和果胶的含量，进而减少了多酚类物质与蛋白质、多糖的结合，进一步提高了游离多酚物质的含量。

3.沉淀步骤中，采用氯化铝与氯化钙联合沉淀，先用氯化铝沉淀出大部分多酚物质，再用氯化钙再次沉淀，可使多酚沉淀完全，提高了得率和纯度；在超滤、浓缩和干燥步骤中，用PES膜对萃取液进行超滤，可进一步去除杂质，提高纯度。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明中的三叶木通果皮多酚的提取分离方法，包括步骤如下：

1)将三叶木通果皮洗净，放入干燥箱中，于55-65℃下烘干10-12h，粉碎，过35-45目筛，得到粉末，备用。

2)向粉末中加入所述粉末重量0.6-0.8％的纤维素酶、1.5-2.5％的果胶酶、0.1-0.3％的中性蛋白酶和60-70％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理6-9min，停止超声，于42-54℃下水浴保温3-5h，得酶解液。

3)向上述酶解液中加入所述酶解液重量2-5％的氯化铝，并将pH调整为 5.5-6.5，静置12-24h后，于2000-2400r/min下离心10-15min，过滤分离出滤液，得一次沉淀；向滤液中加入所述滤液重量3-8％的氯化钙，并将pH调整为8-10，静置6-8h后，于2000-2400r/min下离心 10-15min，过滤，得二次沉淀；将所述一次沉淀和二次沉淀混合，得混合沉淀。

4)将上述混合沉淀用酸溶解成液体，并向所述液体中添加等量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯的体积浓度为40-60％，得萃取液。

5)用截留分子量为1-3万的PES膜对上述的萃取液进行超滤，膜面流速为2-2.5m/s，操作温度为35-45℃，跨膜压力为0.1-0.2MPa，超滤后对滤液进行浓缩，干燥，得到三叶木通皮多酚粉末。

其中，所述步骤(2)酶解时，向粉末中加入所述粉末重量0.6％的纤维素酶、0.3％的果胶酶、0.3％的中性蛋白酶和70％的水混合搅拌均匀；所述步骤 (2)中超声波的功率为150-250W，频率为20-35KHz；所述步骤(4)中酸为食品级硝酸或食品级盐酸；所述步骤(5)中浓缩的温度不超过75℃，干燥为真空干燥。

实施例

首先原料粉碎，将三叶木通果皮洗净，放入干燥箱中，于55-65℃下烘干 10-12h，粉碎，过35-45目筛，得到粉末，备用；接着酶解，向粉末中加入所述粉末重量0.6-0.8％的纤维素酶、1.5-2.5％的果胶酶、0.1-0.3％的中性蛋白酶和60-70％的水混合搅拌均匀，并用超声波处理6-9min，停止超声，于 42-54℃下水浴保温3-5h，得酶解液；沉淀：向上述酶解液中加入所述酶解液重量2-5％的氯化铝，并将pH调整为5.5-6.5，静置12-24h后，于2000-2400r/min 下离心10-15min，过滤分离出滤液，得一次沉淀；向滤液中加入所述滤液重量3-8％的氯化钙，并将pH调整为8-10，静置6-8h后，于2000-2400r/min下离心10-15min，过滤，得二次沉淀；将所述一次沉淀和二次沉淀混合，得混合沉淀；萃取：将上述混合沉淀用酸溶解成液体，并向所述液体中添加等量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯的体积浓度为40-60％，得萃取液；超滤、浓缩和干燥：用截留分子量为1-3万的PES膜对上述的萃取液进行超滤，膜面流速为2-2.5m/s，操作温度为35-45℃，跨膜压力为0.1-0.2MPa，超滤后对滤液进行浓缩，干燥，得到三叶木通皮多酚粉末，设备要求低，提取成本低，适合大规模生产。

上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和范围进行限定。在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通人员对本发明的技术方案做出的各种变型和改进，均应落入到本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。