具体实施方式

本发明提供了一种口腔黏膜细胞采样拭子，所述采样拭子包括采样头和手柄；所述采样头的外边缘为锯齿样；所述采样头有凹槽；所述采样头的材质包括聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚氯乙烯(PVC)、聚苯乙烯(PS)、丙烯腈─丁二烯─苯乙烯共聚合物(ABS)、竹材或木材。

在本发明中，所述口腔黏膜细胞采样拭子的形状优选为勺状，更优选为直柄勺状，便于采集。

在本发明中，所述凹槽的最深处的深度优选为0.4～0.6cm，更优选为0.5cm；所述凹槽的设置便于采样拭子伸入口腔进行口腔黏膜细胞采集和收集。

在本发明中，所述采样头和手柄可分离，便于将采样头直接放入样本保存液中。

在本发明中，所述采样头的宽度小于细胞冻存管的内径；所述采样头的长度小于细胞冻存管的高度，与手柄分离后的采样头能够直接放入细胞冻存管中，以保证采集到的口腔黏膜细胞全部进入细胞冻存管中。在本发明中，所述采样头的长度优选为2～4cm，更优选为3cm；所述采样头的宽度优选的≤1.1cm；所述采样头的厚度优选为0.2～0.4cm，更优选为0.3cm。这一尺寸的采样头和规格为2mL的细胞冻存管相适配。

在本发明中，所述手柄与采样头的连接处优选为镂空结构，便于在外力作用下能够使所述镂空结构断裂，使所述采样头与手柄分离；所述镂空的形状优选为圆形；所述镂空优选的沿垂直于手柄的方向间隔设置；所述镂空的数量优选为2～4个，更优选为1个。在本发明中，所述手柄与采样头的连接处的材质包括聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚氯乙烯(PVC)、聚苯乙烯(PS)、丙烯腈─丁二烯─苯乙烯共聚合物(ABS)、木材或竹材。

在本发明中，所述手柄的形状为片状；所述手柄的长度优选为8～10cm，更优选为9cm；所述手柄的宽度优选为0.9～1.3cm，更优选为1.1cm；所述手柄的厚度优选为0.2～0.4cm，更优选为0.3cm。这一尺寸的手柄便于握持。

在本发明中，所述口腔黏膜细胞采样拭子的总长度优选为10～14cm，更优选为11～13cm，最优选为12cm。这一尺寸便于握持和操作。

在本发明中，所述手柄的表面刻有波纹；所述波纹位于所述手柄的中部；所述波纹的作用是增大手柄与拇指的摩擦，防止在刮取口腔黏膜的过程中，手柄滑动或滑落，而对采集对象造成伤害。

本发明还提供了一种口腔黏膜细胞采集盒，包括上述方案所述的口腔黏膜细胞采样拭子、保存液和细胞冻存管；所述保存液包括DNA保存液和/或RNA保存液。

在本发明中，所述细胞冻存管的规格为2mL或5mL。

本发明对所述DNA保存液和RNA保存液的配方没有特殊限制，采用本领域常规DNA保存液和RNA保存液即可。

在本发明中，所述口腔黏膜细胞采集盒的使用方法包括以下步骤：

在所述细胞冻存管中加入DNA保存液或RNA保存液；

采用所述口腔黏膜细胞采样拭子进行口腔黏膜细胞采集；

采集后，分离口腔黏膜细胞采样拭子的采样头放入盛装有DNA保存液或RNA保存液的细胞冻存管中。

在本发明中，所述口腔黏膜细胞采集的方式优选为刮取被采集人口腔面颊。

在本发明中，上述方案中盛装有采样头的细胞冻存管的保存温度优选为-80℃。

在本发明中，在将分离口腔黏膜细胞采样拭子的采样头放入盛装有DNA保存液的细胞冻存管中后，还包括于37℃条件下解冻20～40min、清洗口腔黏膜细胞采样拭子，将清洗液和DNA保存液合并，得到合并液，提取所述合并液的DNA。在本发明中，所述解冻的时间优选为25～35min，更优选为30min。在本发明中，所述清洗口腔黏膜细胞采样拭子的试剂包括细胞裂解液；清洗口腔黏膜细胞采样拭子的目的是避免采样拭子上少量DNA残留。本发明对提取所述合并液的DNA的方法没有特殊限制，采用本领域常规方法即可。

在本发明中，在将分离口腔黏膜细胞采样拭子的采样头放入盛装有RNA保存液的细胞冻存管中后，还包括于37℃条件下解冻20～40min、清洗口腔黏膜细胞采样拭子，将清洗液和RNA保存液合并，得到合并液，提取所述合并液的RNA。在本发明中，所述解冻的时间优选为25～35min，更优选为30min。在本发明中，所述清洗口腔黏膜细胞采样拭子的试剂包括细胞裂解液；清洗口腔黏膜细胞采样拭子的目的是避免采样拭子上少量RNA残留。本发明对提取所述合并液的RNA的方法没有特殊限制，采用本领域常规方法即可。

下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例中采用的口腔黏膜细胞采样拭子正面图和侧面图分别如图1和图2所示，口腔黏膜细胞采样拭子的材质优选为聚丙烯，一体成型。

该采集拭子由采样头和手柄两部分组成。手柄部分可分离，图1中在采样头和手柄的连接处有三个圆点为镂空结构。该采集拭子总长度为12cm，采集头长度为3.5cm，手柄长度为8.5cm。采集拭子的宽度为1.1cm，厚度为0.3cm。其中采样头凹槽最宽处1.1cm，最深处为0.5cm。手柄上有刻纹。

实施例1

1.被采集人用清水漱口，采用口腔黏膜细胞采样拭子轻轻刮取被采集人口腔面颊，可见脱落的液体落在采集头的凹槽内。折断镂空结构分离采集头，将采集头放入放有DNA保存液(天根，北京)的2mL冻存管内，零下80℃长期储存，需要提取DNA时化冻样本30min，期间标好EP管，准备QIAGEN DNAMicro Kit的试剂盒(货号：163050316)。

2.解冻后的样本用干净的小镊子轻轻夹出里面的采集拭子，其余液体加入2mlEP管，离心(6000g/5min)。

3.小心吸出步骤2中的液体，留底部沉淀，约留30μl体积，弃上清。

4.在2mlEP中加入600μlATL和600μlAL，再加入20μlProteinase(用之前混匀)，剧烈震荡10秒以上。

5.将步骤4中样本置于56℃金属浴中15min，期间每3min取出震荡。

6.在2mlEP管中加入600μl无水乙醇，马上震荡混匀，涡旋5s后瞬离，静置5min。

7.取出吸附柱，从2mlEP管中，吸出700μl液体，小心加入该柱，静置1min，16000g/2min离心，弃下层液体，换新收集管(此步骤重复两次，第一次EP管口正对轴承(正向)，第二次则相反(反向)。

8.向离心后的柱子中加入500μlAW1，16000g/2min，离心(正向)。

9.弃步骤9中下层液体，换新收集管，加入500μlAW2，16000g/2min，离心(反向)。

10.弃步骤10中下层液体，换新收集管，空转离心16000g/3min。

11.空转后离心柱晾干5min，期间标2套1.5mlEP管。

12.晾干完成后，将吸附柱放入1.5mlEP管，小心加入50μlTE，56℃金属浴1min，室温静置4min后离心(16000g/2min)。

13.上机检测。

依据第一次检测结果，在保证第二次洗脱浓度达到40ng/μl的基础上，计算加入TE的体积后重复步骤13。

结果显示：上机检测的DNA浓度为136.8ng/μl；总量为6.84μg，本发明的方法不仅可以有效提取口腔黏膜DNA，而且还能很好的完成预期目标。

实施例2

1.被采集人用清水漱口，采用口腔黏膜细胞采集拭子，轻轻刮取其口腔面颊，可见脱落的液体落在采集头的凹槽内。将采集头放入盛有RNA保存液(Thermo，美国)的2mL冻存管内，零下80℃长期储存，需要提取DNA时化冻样本30min。

2.弃采样头，转移液体于2mlEP管子里，12000转4℃离心5min，弃上清留沉淀，用吸水纸控干。

3.加入1mlTrizol，用枪头吹打混匀，避免形成团块，涡旋2min，直至该体系内无明显沉淀。

4.加入200μl氯仿剧烈震荡，涡旋45s混匀静置5min。

5.取上清500μl，放入1.5mlEP管子中标记好。

6.加入500μl异丙醇，混匀，负20℃、静置2.5h。

7.13000g，4℃、15min离心。

8.弃上清加入500μl75％的乙醇。

9.13000g，4℃、10min离心。

10.弃上清，13000g，4℃、5min离心，吸干管底液体，晾干。

11.依据沉淀量用50μl无酶水溶解。

12.金属浴60℃、2min。

13.上机检测。

结果显示：检测RNA浓度为336.3ng/μl，总量为16.81μg，该采样片可以有效采取口腔黏膜细胞，并可以很好提取RNA。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。