具体实施方式

＜芹菜提取物＞

“芹菜”的学名为“Apium graveolens var.dulce”，是伞形科的植物。芹菜被分类为浅色蔬菜，大致上有中间种、绿色种、黄色种、东洋原有种这4个品种在流通。本发明中，使用芹菜的茎、叶、或茎及叶。芹菜提取物是指从芹菜的茎或叶中去掉非水溶性成分后的液体成分。

芹菜提取物可以通过准备作为原料的芹菜、并进行粉碎、榨汁、过滤、固液分离、以及根据需要进行的纯化来制造。在榨汁时，可以向粉碎了的芹菜中添加溶剂。通过该操作，可以从芹菜中高效地提取液体成分。

作为从芹菜中提取液体成分的溶剂，可以使用水或1，3-丁二醇、或其他有机溶剂(也包括含有有机溶剂的水。)。有机溶剂在典型的情况下可以举出甲醇、乙醇，然而广泛地包含丙酮、二乙醚、乙酸乙酯、己烷等公知的有机溶剂。在使用水作为提取溶剂的情况下，从使所得的芹菜提取物的pH稳定的观点出发，优选使用磷酸缓冲液。

例如，向给定量的芹菜中加入给定量的水，将芹菜用搅拌机粉碎，并进行过滤及离心分离后，采集透明的上清液，可以得到芹菜提取物。芹菜和水的使用量例如为使芹菜粉碎物的重量与水的体积的比率达到1/5～1/0.2的量。通过使芹菜和水的使用量为该范围，所得的芹菜提取物的稳定性提高。芹菜粉碎物的重量与水的体积的比率优选为1/2～1/0.5，更优选为1/1.5～1/0.7。

作为芹菜提取物的原料，可以使用浓缩芹菜汁或还原芹菜汁，通过如此操作，可以省略所述芹菜的准备、破碎及榨汁之类的工序。也可以使用作为准医药品销售的芹菜提取物。

芹菜提取物的使用量以AGEs形成抑制用组合物的体积为基准为0.2～5.0重量％。通过使芹菜提取物的使用量为上述范围，AGEs形成抑制效果提高。芹菜提取物的使用量以AGEs形成抑制用组合物的体积为基准，优选为0.4～3.0重量％，更优选为0.7～2.0重量％。

＜芦丁＞

芦丁是高等植物、蔬菜、水果中广泛包含的无味、无臭的类黄酮类的一种，很早以来就作为具有以如下作用为首的多种功能的天然提取物受到关注，是在作为医药品、医药品原料的用途中有实际成果的物质，所述作用为与维生素C一起加强、改善脆化了的毛细血管的作用、类黄酮类所具有的防止着色、氧化的作用。

芦丁例如可以通过从荞麦的新芽等富含芦丁的植物中提取来制造。芦丁例如可以使用市售的产品。芦丁也可以是以使水溶性增大的方式经过改变的芦丁。作为该水溶性芦丁的具体例，可以举出α葡糖基化芦丁。

芦丁的使用量以AGEs形成抑制用组合物的体积为基准为20～500μM(微摩/升)。通过使芦丁的使用量为上述范围，AGEs形成抑制效果提高。芦丁的使用量以AGEs形成抑制用组合物的体积为基准，优选为50～250μM，更优选为80～150μM。

＜AGEs形成抑制用组合物＞

本发明的AGEs形成抑制用组合物作为AGEs形成抑制剂显示出优异的AGEs形成抑制效果。本发明的AGEs形成抑制用组合物例如不仅在头皮中抑制AGEs的形成，还抑制已经存在于头皮、毛乳头中的AGEs所致的内皮细胞障碍、炎症反应，由此来支持生发。本发明的AGEs形成抑制用组合物在包含于肥皂及化妆品等中而作为外用剂使用时，特别是在包含于洗发剂、护发素及生发剂等中而作为外用剂使用时，有用性极高。

实施例

＜关于CR2(芹菜提取物+芦丁)的作用＞

使用属于准医药品并作为药用皂、洗发剂/护发素等、脱毛剂、生发剂、其他药用化妆品、防腋臭剂、禁忌剂、沐浴用剂得到承认的两个成分芹菜提取物和芦丁，对AGEs形成抑制效果、以及AGEs所致的氧化应激产生和RAGE基因表达抑制作用进行了研究。首先，向新鲜的芹菜50g中加入50ml的磷酸缓冲液，用搅拌机粉碎后，用纱布过滤，进行离心分离后，采集透明的上清液并作为芹菜提取物用于实验中。芦丁从和光纯药购入纯度90％的产品。

1)AGEs形成抑制作用

在0.2M磷酸缓冲液(pH7.4)溶液中，将25mg/ml的牛血清白蛋白和2mM的甘油醛(还原糖)在最终浓度1％芹菜提取物、最终浓度100μM芦丁的存在、不存在条件下以37度培养1天。其后，将样品用磷酸缓冲液透析后，利用使用了针对AGEs的单克隆抗体的ELISA法像已经报道过的那样测定出AGEs化了的白蛋白量(参考：非专利文献2)。将标准曲线中的AGEs化了的白蛋白的50％抑制浓度设为1U。

结果：利用ELISA法，对来自于甘油醛的AGEs进行特异性测定，其结果是，在芦丁、芹菜提取物各自单独施用时，AGEs的形成虽然有受到抑制的趋势，然而其效果在统计学上不显著。但是，在最终浓度1％芹菜提取物和最终浓度100μM芦丁的共同存在下，发现AGEs的形成得到显著抑制(图2、各组N＝5、结果为平均值±标准偏差。对统计利用Student t检验进行分析。*，p<0.05)。

2)对内皮细胞中的氧化应激产生和作为AGEs受体的RAGE基因表达诱导的作用

将人内皮细胞在1％芹菜提取物存在、不存在条件下以100μg/ml的AGEs化了的白蛋白(以下称作AGEs)或非糖化对照白蛋白(以下称作白蛋白)进行处理，分别在30分钟后利用荧光试剂法分析氧化应激产生，在4小时后利用RT-PCR法分析RAGE基因表达。

结果：得到明确的是，利用1％芹菜提取物，可以在内皮细胞中抑制AGEs所致的氧化应激产生和RAGE基因的表达诱导(图3和图4、氧化应激的各组N＝12、RAGE基因表达的各组N＝5、结果为平均值±标准偏差。对统计利用Student t检验进行分析。*，p<0.05，**，p<0.01，白蛋白+2mM甘油醛(1天))。

＜考察＞

本研究中，在世界上首次明确，通过将2个作为准医药品的芹菜提取物和芦丁合在一起(CR2)，可以显著抑制AGEs的形成。此外显示，芹菜提取物借助抗氧化、RAGE表达抑制作用，在内皮细胞中降低对AGEs的反应性。根据以上的结果可以考虑如下的可能性，即，CR2不仅抑制头皮中的AGEs的形成，而且抑制已经存在于头皮、毛乳头中的AGEs所致的内皮细胞障碍、炎症反应，由此支持生发。鉴于AGEs-RAGE系的对皱纹、斑点、稀发等美容的不良影响，可以预想CR2是作为洗发剂/护发素、生发剂而言有用性极高的成分的组合。