阅读说明：本技术 一种产地趁鲜糠烘枳壳及其炮制方法和应用 (Bitter orange baked with bran while being fresh in producing area and processing method and application thereof ) 是由 祝婧 钟凌云 张金莲 杨明 龚千锋 黄艺 刘海平 于 2019-10-10 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种产地趁鲜糠烘枳壳的炮制方法,涉及中药炮制技术领域,包括以下步骤：产地采收酸橙未成熟果实后,除去果瓤,将果皮切成0.2～0.3cm厚的细丝,趁鲜与谷糠混合均匀后,在160℃条件下烘制2h,取出后筛去谷糠,即得产地趁鲜糠烘枳壳；所述谷糠用量为每100kg酸橙未成熟果实,加入10kg谷糠。采用产地趁鲜切制技术,减少反复干燥及水处理过程,节约了人力；有效提高水稻次生产物谷糠的利用率；较之糠炒工艺,糠烘技术可实现枳壳炮制过程中的热传递能效可控,饮片成品质量更加均一。产地趁鲜糠烘枳壳中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林、D-柠檬烯及γ-松油烯等有效成分含量更高,“宽中除胀”作用更好。(The invention provides a processing method of bitter orange baked with bran when the bitter orange is fresh in a producing area, which relates to the technical field of traditional Chinese medicine processing and comprises the following steps: collecting immature fruits of sour oranges in a production place, removing pulp, cutting peel into thin threads with the thickness of 0.2-0.3 cm, uniformly mixing the thin threads with bran coat while the fruits are fresh, drying the mixture at 160 ℃ for 2 hours, taking out the mixture, and screening off the bran coat to obtain the dried bitter oranges with the fresh bran in the production place; the dosage of the bran coat is 10kg per 100kg of immature fruit of Citrus aurantium L. The production area fresh cutting technology is adopted, repeated drying and water treatment processes are reduced, and manpower is saved; the utilization rate of rice secondary product bran coat is effectively improved; compared with a bran frying process, the bran drying technology can realize controllable heat transfer efficiency in the processing process of the fructus aurantii, and the quality of the finished product of the decoction pieces is more uniform. The effective components such as naringin, hesperidin, neohesperidin, synephrine, D-limonene, gamma-terpinene and the like in the bitter orange baked in the production place while the bitter orange is fresh bran have higher content, and the effect of relieving epigastric distention is better.)

一种产地趁鲜糠烘枳壳及其炮制方法和应用

技术领域

本发明属于中药炮制技术领域，具体涉及一种产地趁鲜糠烘枳壳及其炮制方法和应用。

背景技术

枳壳为芸香科植物酸橙及其栽培变种的干燥未成熟果实，具有理气宽中、行滞消胀之功效，主治胸胁气滞、胀满疼痛、食积不化等证。2015版《中国药典》收载饮片品种为枳壳、麸炒枳壳，2008版《江西省中药饮片炮制规范》亦收载有糠炒枳壳等。传统中医药理论认为枳壳生品燥性较强，易伤津液，经麸制、糠制后可发挥“减燥增效”的作用，更加适应于临床应用。传统枳壳饮片在炮制过程中，一方面因产地加工、药材软化切制过程中，对药材进行反复浸泡与干燥，导致了其中有效成分的流失；另一方面，在大生产投料量较大时，传统炒炙技术易导致饮片受热不均，且炒炙机较之烘箱更加难以精确控温，而导致了不同批次之间、同一批次之间枳壳炒炙饮片质量难以均一、可控。

发明内容

本发明的目的在于提供一种产地趁鲜糠烘枳壳的炮制方法，提高炮制后枳壳中Q-Marker(柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、辛弗林)以及醇提物、挥发油、芳香水中主要有效成分含量，提高枳壳“宽中除胀”的治疗作用。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种糠烘枳壳的炮制方法，包括以下步骤：

产地采收酸橙未成熟果实后，除去果瓤，将果皮趁鲜切成0.2～0.3cm厚的细丝，与谷糠混合均匀后，在160℃环境下烘制2h；所述谷糠的用量为每100kg酸橙未成熟果实，加入10kg谷糠。

在所述烘制完成后，还包括筛去所述谷糠后，晾凉。

本发明还提供了利用所述炮制方法制备得到的糠烘枳壳。

本发明还提供了所述糠烘枳壳在制备提高枳壳醇溶性有效成分含量的糠烘枳壳饮片中的应用。

优选的，所述枳壳醇溶性有效成分包括柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、辛弗林、D-柠檬烯以及γ-松油烯等。

本发明还提供了所述糠烘枳壳在制备提高枳壳挥发性成分含量的糠烘枳壳饮片中的应用。

优选的，所述挥发性成分包括D-柠檬烯和γ-松油烯。

本发明提供了一种产地趁鲜糠烘枳壳的炮制方法，利用HPLC、UHPLC-Q-TOF/MS及GC-MS成分分析检测技术，对枳壳生品、麸炒枳壳、糠烘枳壳、糠炒枳壳4个枳壳炮制品种进行成分检测，并结合PCA等数理统计学方法，分析不同炮制方法对枳壳主要有效成分、醇提液、挥发油、芳香水中化合物种类及含量的影响。通过将柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、辛弗林4种成分作为指标进行综合加权评分后发现，枳壳炮制品中以糠烘枳壳综合评分最高，为初步筛选出的最佳饮片品种；通过鉴定枳壳不同饮片中化学成分种类，并分析其中14个具有生理活性的化学标记物在不同炮制品间的差异后发现，糠烘枳壳中有13种成分含量升高，仅有1种成分含量降低，成分物质基础优于其他炮制品种，且以14个化学标记物作为指标进行综合加权评分后发现，糠烘枳壳亦为最佳炮制品种，所以糠烘枳壳功效优于其他炮制品种；通过检测枳壳挥发性成分种类，可知D-柠檬烯与γ-松油烯为挥发油及芳香水中含量最高的2种成分，且为枳壳挥发性成分中最主要的药效物质。通过比较不同炮制品中D-柠檬烯、γ-松油烯相对含量，发现糠烘枳壳中上述成分含量最高。通过比较枳壳不同炮制品对功能性消化不良(FD)大鼠胃残留、肠推进的影响发现，产地趁鲜糠烘枳壳对FD大鼠的治疗作用最好，证明本发明优选的产地趁鲜糠烘枳壳工艺可提高药物有效成分含量，并增强疗效。

附图说明

图1为枳壳内柚皮苷、新橙皮苷和橙皮苷含量测定HPLC结果图，其中字母A为对照品，B为供试品；数字1为柚皮苷，2为橙皮苷，3为新橙皮苷；

图2为枳壳内辛弗林含量测定HPLC结果图，其中字母A为对照品，B为供试品；数字1为辛弗林。

图3为产地趁鲜糠烘枳壳在正离子模式下的UPLC-Q-TOF/MS总离子流图；

图4为产地趁鲜糠烘枳壳挥发油总离子流图；

图5为产地趁鲜糠烘枳壳芳香水总离子流图。

具体实施方式

本发明提供了一种产地趁鲜糠烘枳壳的炮制方法，包括以下步骤：产地采收酸橙未成熟果实后，除去果瓤，将果皮趁鲜切成0.2～0.3cm厚的细丝，与谷糠混合均匀后，在160℃环境下烘制2h；所述谷糠的用量为每100kg酸橙未成熟果实，加入10kg谷糠。

本发明所述酸橙采自江西新干农户，经鉴定为芸香科植物酸橙Citrus aurantiumL.的新鲜未成熟果实。

本发明的所述炮制方法中，在所述烘制完成后，优选还包括筛去所述谷糠后，晾凉。

本发明还提供了利用所述炮制方法制备得到的糠烘枳壳。

本发明还提供了所述产地趁鲜糠烘枳壳在制备提高枳壳醇溶性有效成分含量的糠烘枳壳饮片中的应用。

本发明所述枳壳醇溶性有效成分优选包括柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷和辛弗林。

本发明还提供了所述产地趁鲜糠烘枳壳在制备提高枳壳挥发性成分含量的糠烘枳壳饮片中的应用。

本发明所述挥发性成分优选包括D-柠檬烯和γ-松油烯。

下面结合实施例对本发明提供的一种产地趁鲜糠烘枳壳及其炮制方法和应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

将采自江西新干农户果园的新鲜酸橙对半剖开，除去果瓤，切0.3cm细丝，加入适量谷糠混合均匀，置烘箱内在160℃条件下烘2h至干燥，取出，筛去谷糠，放凉。每100kg酸橙，加入10kg谷糠。

实施例2

将采自江西新干农户果园的新鲜酸橙对半剖开，除去果瓤，切0.2cm细丝，加入适量谷糠混合均匀，置烘箱内在160℃条件下烘2h至干燥，取出，筛去谷糠，放凉。每100kg酸橙，加入10kg谷糠。

实验1：对实施例1和2中制备得到的产地趁鲜糠烘枳壳进行枳壳Q-Marker含量测试

1实验仪器

UltiMate 3000型液相色谱仪(美国Dionex公司，含PDA-3000型二极管阵列紫外检测器，Chromeleon工作站)；Raytek Raynger ST20红外测温仪(美国雷泰公司)，电热鼓风干燥箱(上海***实业有限公司医疗设备厂)，KQ-500E型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，中草药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市子华仪器有限责任公司)。

2试剂

柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品(四川省维克奇生物科技有限公司，批号分别为wkq16051305、wkq15123105、wkq16041804)，辛弗林对照品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，批号BCTG-0709)，甲醇、乙腈[色谱纯，德国默克生物科技(中国)有限公司]，水为娃哈哈纯净水，其他试剂为分析纯。

3对照药物的制备

枳壳生品：按照2015版《中国药典》“枳壳”项下炮制方法制备。除去杂质，洗净，润透，切薄片，干燥后筛去碎落的瓤核。

麸炒枳壳：按照2015版《中国药典》“麸炒枳壳”项下炮制方法制备。先将锅烧热，均匀撒入定量麦麸，用中火加热，待烟起投入枳壳片，不断翻动，炒至淡黄色时取出，筛去麦麸，放凉。每100kg枳壳片，用麦麸10kg。

糠炒枳壳：参照2008版《江西省中药饮片炮制规范》中“麸炒枳壳”项下炮制方法制备。先将锅烧热，均匀撒入定量谷糠，用中火加热，待烟起投入枳壳片，不断翻动，炒至淡黄色时取出，筛去谷糠，放凉。每100kg枳壳片，用谷糠10kg。

4供试品溶液的制备

精密称取枳壳生品、麸炒枳壳、糠炒枳壳、糠烘枳壳饮片粉末(过3号筛)各0.1g，分别置于具塞锥形瓶中，加入甲醇各50mL，称定重量，加热回流1.5h，冷却至室温后再次称定重量，并用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10mL，分别置于25mL的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。

5方法和结果

5.1柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量测定

5.1.1色谱条件

Inertsil/WondaSil C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相乙腈-水(20：80，磷酸调PH为3)，流速为1.0mL·min^-1，柱温30℃，检测波长283nm，进样量10μL，结果如图1所示，柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷分离度良好，无其他杂质干扰。

5.1.2对照品溶液的制备

精密称取柚皮苷、橙皮苷及新橙皮苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成质量浓度均为2.00，0.20，2.00g·L^-1的对照品溶液，作为储备液。依次精密量取上述对照品贮备液2mL置于同一50mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，得混合对照品溶液。

5.1.3线性关系考察

精密吸取对照品溶液1，5，10，15，20L，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归，得柚皮苷、橙皮苷与新橙皮苷的回归方程分别为Y＝23.912X+1.0440(r＝0.9992)，Y＝25.317X-0.0635(r＝0.9993)，Y＝26.511X+0.3054(r＝0.9995)，线性范围依次为0.080～1.600，0.008～0.160，0.080～1.600μg。

5.1.4精密度试验

分别取柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷对照品溶液各20μL，按照上述色谱条件连续进样5次，计算三者峰面积的RSD分别为0.5％、0.4％、0.6％，表明仪器精密度良好。

5.1.5稳定性试验

取同一枳壳生品饮片，将上述制备得到的供试品溶液，分别于0，2，4，8，12h按所述色谱条件测定，结果柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷峰面积的RSD分别为1.2％、1.5％、1.9％，表明供试品溶液在12h内稳定性较好。

5.1.6重复性试验

精密称取枳壳生品粉末6份，每份0.5g，将按照上述方法制备得到的供试品溶液，按所述色谱条件测定，计算柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷峰面积的RSD分别为1.7％、1.8％和2.3％。

5.1.7加样回收试验

精密称取已知含量的枳壳样品粉末(过三号筛)约0.1g，共6份，分别精密加入等量的柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷储备液的稀释液，按上述方法制备供试品溶液，按所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表1。

表1产地趁鲜糠烘枳壳中柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量

5.1.8样品测定

分别取枳壳生品、麸炒枳壳、糠炒枳壳、产地趁鲜糠烘枳壳饮片粉末(过三号筛)各0.1g，精密称定，按所述供试品溶液制备方法及所述色谱条件，精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并根据回归方程计算各样品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量，结果见表2。

表2枳壳不同炮制品中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量(n＝3)

5.2辛弗林的含量测定

5.2.1色谱条件

Inertsil/WondaSil C₁₈色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈：水(0.1％十二烷基硫酸钠和0.1％磷酸)＝32：68，流速为1.0mL·min^-1，柱温30℃，检测波长224nm，进样量为10μL，色谱图见图2。

5.2.2对照品溶液的制备

精密称取辛弗林对照品1.14mg置于10mL的容量瓶中，加50％的乙醇超声溶解并定容到刻度，摇匀，制成质量浓度为0.114g·L^-1的对照品储备溶液。取辛弗林对照品储备溶液0.1，0.5，1.0，1.5，2mL，分别置于10mL容量瓶中，加入50％的乙醇稀释定容至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得浓度分别为0.00114，0.0057，0.0114，0.0171，0.0228mg·mL^-1的辛弗林对照品溶液。

5.2.3线性关系考察

精密吸取不同浓度辛弗林对照品溶液各10μL注入液相色谱仪，按1.2.4.1项下色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归，即得对照品辛弗林的回归方程为y＝816.22x+1.3571(r＝0.9993)，说明辛弗林在0.0114～0.228μg范围内线性关系良好。

5.2.4精密度试验

取辛弗林对照品溶液10μL，按所述色谱条件连续进样5次，计算其峰面积的RSD为0.4％，表明仪器精密度良好。

5.2.5稳定性试验

取同一糠烘枳壳饮片，按所述方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12h按所述色谱条件测定，结果辛弗林峰面积的RSD分别为2.6％，表明供试品溶液在12h内稳定性较好。

5.2.6重复性试验

精密称取糠烘枳壳粉末6份，每份0.5g，按所述方法制备供试品溶液，按所述色谱条件测定，计算辛弗林峰面积的RSD为2.1％。

5.2.7加样回收试验

精密称取已知含量的糠烘枳壳样品约0.1g，共6份，分别精密加入等量的辛弗林对照品溶液，按所述方法制备供试品溶液，按所述色谱条件测定，计算回收率，结果见表3。

表3产地趁鲜糠烘枳壳中辛弗林含量测定

5.2.8样品测定

分别取枳壳生品、麸炒枳壳、产地趁鲜糠烘枳壳、糠炒枳壳粉末(过三号筛)各0.1g，精密称定，按所述供试品溶液制备方法及所述色谱条件，精密吸取对照品溶液和供试品溶液，分别注入高效液相色谱仪，测定峰面积，并根据回归方程计算各样品中辛弗林的含量，结果如表4。

表4枳壳不同炮制品中辛弗林的含量(n＝3)

5.3不同炮制品主要有效成分含量比较

通过采用多指标综合加权评分方法，对枳壳饮片品种中柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、辛弗林等成分含量进行综合评分。柚皮苷、新橙皮苷作为《中国药典》中的枳壳饮片指控指标，权重系数均设定为0.3，橙皮苷、辛弗林作为枳壳主要药效成分，权重系数设定为0.2，上述成分含量越高则提示炮制品种质量越好，故以含量最高的样品为100分，如柚皮苷在糠烘枳壳中含量最高，为100分，则枳壳生品中柚皮苷含量得分是8.45/9.23×100＝91.55，橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林含量得分计算方法相同。上述成分按照权重相加得分即为该饮片品种主要成分含量的综合得分，如产地趁鲜糠烘枳壳总分为:Y_糠烘＝8.45/8.45×100×0.3+6.42/6.84×100×0.3+1.21/1.32×100×0.2+0.32/0.32×100×0.2＝96.48，结果见表5。

表5枳壳不同炮制品主要有效成分含量综合得分(n＝3)

由上述实验可知，采用高效液相色谱法，建立了对枳壳中主要有效成分柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷及辛弗林的含量检测方法，该方法稳定可靠、重现性好，可以用来检测枳壳中上述成分的含量。通过综合加权分析，发现糠烘枳壳综合得分最高，而传统枳壳制品中则以枳壳生品饮片综合评分为高，故而推测不同炮制方法均可在一定程度上破坏枳壳中有效成分，而产地鲜切则可使黄酮、生物碱等有效成分免于过多流失。

实验2：对产地趁鲜糠烘枳壳中化学成分进行全面分析

采用UHPLC-Q-TOF/MS法对枳壳生品、麸炒枳壳、产地趁鲜糠烘枳壳、糠炒枳壳醇提液中化学成分进行了检测，并通过SIMCA-P13.0统计软件进行主成分分析(principalcomponent analysis，PCA)。

2.1实验材料

2.1.1实验仪器

Triple TOF TM5600型LC-MS质谱(AB SCIEX，配备DuoSprayTM离子源，30A型液相色谱系统)，AE 240型十万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)，FA1004B型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，TGL-16B型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，GZX-9076MBE型电热鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)，KQ-250E型医用超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)，FW135型中药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

2.1.2药材

同实验1中制备枳壳饮片方法。

2.1.3试剂与试药

柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品(四川省维克奇生物科技有限公司，批号分别为wkq16051305、wkq15123105、wkq16041804，质量分数均≥98.0％)，辛弗林对照品(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，批号BCTG-0709，质量分数≥98.0％)，桔皮素、柚皮芸香苷、伞型花内酯、川陈皮素、橙皮油内酯对照品(实验室自制，经1H-NMR、13C-NMR、ESIMS鉴定，HPLC峰面积归一法计算纯度不低于98.0％)，甲醇、乙腈、甲酸[质谱纯，德国默克生物科技(中国)有限公司]，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2.2方法与结果

2.2.1供试品溶液的制备

精密称取枳壳不同炮制品粉末(过三号筛)各50mg，分别精密加入甲醇5mL，置于超声波清洗机中50℃条件下超声提取30min，取出后4000r·min－1条件下离心15min，取上清液，0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.2.2对照品溶液的制备

为了准确鉴定枳壳中的主要成分，分别精密称取橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林、桔皮素、柚皮芸香苷、伞型花内酯、川陈皮素、橙皮油内酯对照品各5mg，加入甲醇溶解并分别定容于10mL容量瓶中，即得各对照品储备液。吸取各对照品储备液适量，分别加入甲醇稀释后，即得各对照品溶液。将对照品溶液放置于4000r·min^－1条件下离心15min，并以0.45μm微孔滤膜滤过，供UPLC-QTOF-MS分析。

2.2.3色谱条件

ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.7μm)；流动相为0.1％甲酸水(A)-0.1％甲酸乙腈(B)，梯度洗脱(0～10min，95％～65％A；10～18min，65％～25％A；18～21min，25％～0％A；21～24min，0％A；24～24.1min，0％～95％A；24.1～28min，95％A)，流速0.4mL·min^－1；柱温40℃；进样量2μL。

2.2.4质谱条件

ESI离子源，在正离子模式下采集数据。干燥气N₂流速10L·min^－1，干燥气温度325℃，保护气温度350℃，保护气流速10L·min^－1，雾化器压力275.8kPa。正离子模式下喷嘴电压500V，毛细管电压4kV，扫描范围m/z50～1200。

2.2.5数据采集和成分鉴定

分别取枳壳生品、麸炒枳壳、糠烘枳壳、糠炒枳壳饮片各8批次，按照2.2.1项下条件制备供试品；分别取按照2.2.2项下条件制备的橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林、桔皮素、柚皮芸香苷、伞型花内酯、川陈皮素、橙皮油内酯对照品溶液，上述供试品及对照品溶液均按照2.2.3和2.2.4项下色谱条件进行检测。

结合柚皮苷等9种对照品的保留时间和质谱信息，最终从枳壳中鉴定出55个化合物，如图3所示，其中各峰的标号与表6中编号一一对应，经鉴定得出化合物的名称、保留时间、分子式、误差、离子碎片等详细信息见表6。

表6 UHPLC-Q-TOF/MS鉴别所得枳壳不同饮片中的化学成分信息

枳壳经麸、糠炒后，未发现有新的成分产生，趁鲜切制与传统切制枳壳亦未导致成分的质变，不同炮制方法对枳壳中化合物含量的影响不完全相同。经过麸炒后，有7种化合物峰面积明显升高(CI＞1.5)；6种化合物峰面积明显降低(CI<0.5)；经过糠烘后，有11种化合物峰面积明显升高，2种化合物峰面积显著降低；经过糠炒后，有5种化合物峰面积明显升高，3种化合物峰面积明显降低。枳壳各炮制品在正离子模式下的离子峰面积及炮制前后变化指数见表7。

表7枳壳各炮制品在正离子模式下的离子峰面积及其炮制前后变化指数

2.2.6 UHPLC-Q-TOF/MS数据的偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)

采用偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discriminantanalysis，PLS-DA)分析各变量的重要性投影(variable importance plot，VIP)，VIP可综合概括模型中某一变量对于X矩阵和Y矩阵的重要性，VIP值越大表明变量对模型越重要，通常将VIP＞1的变量视为模型的重要标记物。通过构建枳壳不同炮制品的PLS-DA(R2X[1]＝0.629，R2X[2]＝0.0961)模型，筛选出14个VIP＞1的成分作为质量标记物，分别为：橙皮素(VIP＝3.33781)、枸橘苷(VIP＝3.3014)、柚皮芸香苷(VIP＝2.64193)、柚皮苷(VIP＝2.64193)、橙皮苷(VIP＝2.56968)、新橙皮苷(VIP＝2.56968)、橙皮内酯(VIP＝2.51306)、柚皮素(VIP＝2.2463)、去乙酰闹米林(VIP＝2.23414)、5-去甲川陈皮素(VIP＝1.67091)、橙皮素5-O-葡萄糖苷(VIP＝1.60005)、橙皮素7-O-葡萄糖苷(VIP＝1.60005)、新北美圣草苷(VIP＝1.50899)和4’，5’-二氢补骨脂素(VIP＝1.09209)。

2.2.7不同炮制品物质基础比较

采用综合加权评分的方法，对枳壳不同炮制品中14个化学标记物峰面积进行综合评分，其中VIP>2的成分权重系数设定为8％，VIP>1的成分权重系数设定为5.6％，上述成分峰面积越高则提示物质基础越好，故以峰面积最高的样品为100分。将14个化学标记物按照权重相加得分即为该饮片品种主要成分含量的综合得分，见表8。

表8枳壳不同炮制品化学标记物含量综合得分

经产地趁鲜切制后以谷糠烘制，枳壳中含量发生显著升高的成分种类，明显高于传统枳壳炒炙饮片，而含量发生显著降低成分种类则未表现出明显规律，提示产地趁鲜糠烘枳壳更有助于提升枳壳中化学成分含量；经炮制后橙皮苷及橙皮素均有不同程度上升，且以糠烘枳壳中含量最高；麸(糠)炒使新橙皮苷含量不同程度降低，糠烘则可使新橙皮苷含量升高；枳壳经麸炒后有8种成分的含量升高，6种成分含量降低；糠烘后有13种成分含量升高，1种成分含量降低；糠炒后有9中成分含量升高，5种成分含量降低。通过以14个化学标记物峰面积作为评价指标，经过多指标加权评分后发现糠烘枳壳中上述成分含量最高，为枳壳优势炮制品种。

实验3：GC-MS结合PCA技术分析枳壳不同炮制品挥发油及芳香水中化学成分

3.1实验材料

3.1.1实验仪器

7890B-5977A型气质联用仪(美国安捷伦科技有限公司)，DB-5石英毛细管柱(0.25μm×250μm×30.0m)，ZNHW型智能恒温电热套(巩义市予华仪器责任有限公司)，FA1004B型电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，FW135型中药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，Raytek Raynger ST20红外测温仪(美国雷泰公司)，双档调温电炒锅(广东省湛江市家用电器工业公司)。

3.1.2药材

同实验1中饮片制备方法。

3.1.3试剂与试药

***(广东陇西科学股份有限公司)，无水硫酸钠(天津迪博化工股份有限公司)。

3.2方法与结果

3.2.1挥发油的提取

按照2015版《中国药典》附录XD挥发油提取方法，取枳壳生、制品饮片适量，粉碎后过3号筛，精密称取枳壳不同炮制品粉末各50g，置于1L圆底烧瓶中，加入600mL水和数粒碎瓷片，浸泡30min，将圆底烧瓶放置于电热套中，连接好挥发油提取装置后加热提取8h，挥发油提取器馏出液中上层油层即为枳壳挥发油，取出后加入无水硫酸钠静置过夜，再加适量***配制成1g·L-1的样品溶液，经0.22μm微孔滤膜滤过，即得。枳壳生品挥发油为黄色透明油，经麸制、糠制后颜色为深黄色，并具有特殊浓郁香气。

3.2.2芳香水的提取

采用水蒸汽蒸馏法提取芳香水，挥发油提取器馏出液中下层水层即为枳壳芳香水，收集后置于分液漏斗中加入2倍量体积***充分振荡，重复萃取3次后合并萃液，减压回收***后加入无水硫酸钠静置过夜，经0.22μm微孔滤膜滤过，即得芳香水中挥发油。所得枳壳生、制品芳香水均为澄明至半澄明状水液，具有类似于枳壳挥发油的特殊香气。

3.2.3气相色谱条件

样口温度260℃，传输线温度250℃，载气为氦气，流速1.0mL·min^-1，分流比10:1，进样量1μL；程序升温为起始柱温70℃，以2℃·min^-1升至150℃，保持2min，以6℃·min^-1升至240℃，保持3min，再以25℃·min^-1升至300℃，保持2min后结束。

3.2.4质谱条件

电离方式为电子轰击电离源(EI)，电子碰撞能量70eV，离子源温度230℃，加速电压34.6V，分辨率2500，倍增器电压1.388kV，四极杆温度150℃，m/z 10～650，扫描数4.45次/s，记录总离子流图，质谱图经NIST08标准质谱图库检索鉴定各化学成分，并以峰面积归一化法计算各成分的相对含量。

枳壳挥发油(图4，按相对百分含量计，共包括：莰烯0.03％，α-水芹烯0.09％，α-萜品烯0.53％，D-柠檬烯66.75％，间伞花烃3.17％，γ-松油烯16.98％，α-甲基-α-[4-甲基-3-戊烯基]环氧乙烷甲醇0.07％，异松油烯1.09％，顺式氧化芳樟醇0.19％，芳樟醇1.72％，(-)-4-萜品醇0.56％，α-松油醇0.57％，(1R，5R)-rel-香芹醇0.03％，百里酚0.13％，反式石竹烯0.09％，A-可巴烯0.01％，朱栾倍半萜0.01％，1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢-7-甲基-4-亚甲基-1-(1-甲基乙基)萘0.04％，双环大根香叶二烯0.08％，(1S，8aR)-1-异丙基-4，7-二甲基-1，2，3，5，6，8a-六氢萘0.16％，斯巴醇0.06％，Α-毕橙茄醇0.03％，棕榈酸0.01％，(1S)-(-)-α蒎烯2.47％，(1S)-(-)-β-蒎烯2.47％，3-蒈烯0.01％，L-柠檬烯0.18％，5-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-4-己烯-1-醇乙酸酯0.01％，双环[3.1.0]-4-甲基-1-异丙基己烷二脱氢衍生物0.6％，双环[3.1.0]-4-甲基-1-异丙基-2-己烯2.29％，双环[4.2.0.]-6，7-二甲基辛烷0.01％，(+)-氧化柠檬烯0.02％，1-甲基-4-丙-1-烯-2-基-环己-2-烯-1-醇0.03％，7，7-二甲基-2-亚甲基-双环[2.2.1]庚烷0.02％，环丙烷甲脒盐酸盐0.02％，香芹醇10.06％，(+)-4-蒈烯0.02％，左旋香芹酮0.05％，(Z)-beta-金合欢烯0.22％，[S-(E，E)]-1-甲基-5-亚甲基-8-(1-甲基乙基)-1，6-环癸二烯1.28％，表圆形藻烯0.01％，α-金合欢烯0.01％，1-乙烯基-1-甲基-4-丙-2-亚基-2-丙-1-烯-2-基环己烷0.01％，香橙烯氧化物2 0.01％，γ-芹子烯0.03％，γ-雪松烯0.01％，(-)-Α-古芸烯0.01％)与芳香水(图5，按相对百分含量计，共包括：(1R)-(+)-α蒎烯0.68％，β-蒎烯0.93％，β-月桂烯1.41％，α-萜品烯0.45％，D-柠檬烯79.60％，γ-松油烯12.13％，9-氧-新戊酰基-N-乙酰基秋水仙醇0.08％，(+)-4-蒈烯0.46％，[S-(E，E)]-1-甲基-5-亚甲基-8-(1-甲基乙基)-1，6-环癸二烯0.15％，对伞花烃1.9％，二十五烷0.08％，二十八烷0.07％，碘代十八烷0.08％，9-辛基-十七烷0.04％，7，9-二叔丁基-1-噁螺[4.5]-6，9-癸二烯-2，8-二酮0.11％，2，2'-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)0.48％，3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸甲酯0.05％，早熟素Ⅱ0.11％，二十二烷0.06％，4-胆甾烯-3-酮-缩氨基脲4.16％)中所含成分的种类及总数存在一定差异，生品挥发油中鉴定出65个成分，其中D-柠檬烯(66.75％)和γ-松油烯(16.98％)共占生品挥发油组分的83.73％，而生品芳香水中共鉴定出42个成分，其中与挥发油共有成分10个，另外32种成分仅在芳香水中检出，而D-柠檬烯(79.60％)与γ-松油烯(12.13％)在芳香水中含量上升至91.73％；此外，麸炒枳壳芳香水((1R)-(+)-α蒎烯0.7％，β-月桂烯2.89％，α-水芹烯0.03％，α-萜品烯0.12％，D-柠檬烯76.11％，γ-松油烯15.39％，异松油烯1.14％，顺式氧化芳樟醇0.19％，芳樟醇0.89％，(-)-4-萜品醇0.36％，α-松油醇0.41％，(1R，5R)-rel-香芹醇0.08％，5-异丙烯基-2-亚甲基环己醇0.04％，右旋香芹酮0.02％，反式石竹烯0.01％，反式-β-金合欢烯0.04％，棕榈酸甲酯0.01％，顺-Α，Α-5-三甲基-5-乙烯基四氢化呋喃-2-甲醇0.36％，1，3，8-P-孟三烯3.11％，2-(4-甲基苯基)丙-2-醇0.06％，正二十烷0.01％，7，7-二甲基-2-亚甲基-双环[2.2.1]庚烷0.05％，[S-(E，E)]-1-甲基-5-亚甲基-8-(1-甲基乙基)-1，6-环癸二烯0.08％，对薄荷-1(7)，3-二烯1.1％，二十五烷0.02％，十六烷0.04％，二丁基羟基甲苯0.07％，二十七烷0.03％，二十八烷0.03％，碘代十八烷0.01％，9-辛基-十七烷0.04％，二十一烷0.04％，7，9-二叔丁基-1-噁螺[4.5]-6，9-癸二烯-2，8-二酮0.02％，2-甲基十九烷0.01％，十八烷0.03％，二十四烷0.04％，十七(碳)烷0.02％，2-溴十二烷0.02％，1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)苯0.04％，双(1-亚甲基乙基)环丁烯0.03％，2，3，4，6-四甲基苯酚0.01％，1-碘十三烷0.06％，十五烷0.02％，5-丁基-壬烷0.01％，3-(3，5-二叔丁基-4-羟基苯基)丙酸甲酯0.03％，邻苯二甲酸-1-丁酯-2-异丁酯0.01％，8-甲基十七烷0.02％，二十六烷0.01％)中共鉴定出48个成分，其中与挥发油(2-甲基-5-(1-甲基乙基)-双环[3.1.0]-2-己烯0.47％，莰烯0.03％，β-蒎烯2.42％，α-水芹烯0.07％，α-萜品烯0.21％，D-柠檬烯66.05％，γ-松油烯15.79％，异松油烯1.02％，顺式氧化芳樟醇0.17％，芳樟醇2.17％，(-)-4-萜品醇0.62％，α-松油醇0.88％，(1R，5S)-rel-香芹醇0.13％，(1R，5R)-rel-香芹醇0.17％，4-乙烯基-4-甲基-1-丙-2-基-3-丙-1-烯-2-基-环己烯0.02％，右旋香芹酮0.08％，反式石竹烯0.15％，反式-β-金合欢烯0.25％，A-可巴烯0.04％，毕澄茄烯1.42％，(1S，8aR)-1-异丙基-4，7-二甲基-1，2，3，5，6，8a-六氢萘0.14％，1，2，3，5，6，8a-六氢-4，7-二甲基-1-(1-甲基乙基)萘0.01％，榄香烯0.07％，桉油烯醇0.16％，斯巴醇0.08％，Α-毕橙茄醇0.06％，植酮0.01％，棕榈酸0.27％，(1S)-(-)-α蒎烯2.07％，(1S)-(-)-β-蒎烯2.06％，顺-Α，Α-5-三甲基-5-乙烯基四氢化呋喃-2-甲醇0.41％，2-甲基-1-苯基丙烯0.02％，3-甲基环己醇0.02％，1，3，8-P-孟三烯0.03％，3-蒈烯0.01％，3-甲基-反式-3a，4，7，7a-四氢茚0.03％，1-乙基-4-甲基-2(1H)-吡啶酮0.02％，1，4-二甲基-4-乙烯基环己烯0.04％，乙酸异龙脑酯0.01％，柠檬醛0.03％，癸醛0.02％，2-(4-甲基苯基)丙-2-醇0.04％，橙花醇0.03％，优葛缕酮0.02％，邻-异丙基苯3.35％，L-柠檬烯0.24％，5-甲基-2-(1-甲基乙烯基)-4-己烯-1-醇乙酸酯0.02％，新异长叶烯0.01％，1，6-二烯-3-醇葎草烯0.01％，香树烯0.03％，(S)-6-乙烯基-6-甲基-1-(1-甲基乙基)-3-(1-甲基亚乙基)-环己烯0.1％，环氧异香树烯0.02％，肉豆蔻酸0.02％，14-甲基十五烷酸甲酯0.01％，2-辛基环丙烷辛醛0.01％，乙氧呋草黄-2-酮0.01％，(Z，Z)-9，15-十八碳二烯酸甲酯0.02％，亚油酸0.03％，正二十烷0.01％，橙花叔醇0.04％)相同成分有17个；产地趁鲜糠烘枳壳芳香水中共鉴定出20个成分，其中与挥发油相同成分5个；糠炒枳壳芳香水(2-甲基-5-(1-甲基乙基)-双环[3.1.0]-2-己烯0.09％，(1R)-(+)-α蒎烯0.39％，β-月桂烯1.82％，α-水芹烯0.07％，D-柠檬烯70.58％，γ-松油烯14.59％，松油烯0.66％，3-蒈烯0.04％，邻-异丙基苯1.87％，(+)-4-蒈烯0.55％，对薄荷-1(7)，3-二烯0.71％，四十四烷0.05％，三十一烷0.05％，二十二烷0.05％)中共鉴定出14个成分，其中与挥发油(2-甲基-5-(1-甲基乙基)-双环[3.1.0]-2-己烯0.52％，β-月桂烯2.35％，α-水芹烯0.08％，α-萜品烯0.5％，D-柠檬烯64.04％，γ-松油烯14.69％，松油烯0.88％，顺式氧化芳樟醇0.14％，芳樟醇1.92％，反式-薄菏基-2，8-二烯-1-醇0.06％，(-)-4-萜品醇0.88％，α-松油醇0.86％，(1R，5R)-rel-香芹醇0.23％，4-乙烯基-4-甲基-1-丙-2-基-3-丙-1-烯-2-基-环己烯0.02％，右旋香芹酮0.12％，(Z)-3，7-二甲基-2，6-辛二烯-1-醇乙酸酯0.23％，反式石竹烯0.12％，反式-β-金合欢烯0.24％，朱栾倍半萜0.01％，1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢-7-甲基-4-亚甲基-1-(1-甲基乙基)萘0.05％，毕澄茄烯1.75％，7，11-二甲基-3-亚甲基-1，6，10-十二烷三烯0.01％，(1S，8aR)-1-异丙基-4，7-二甲基-1，2，3，5，6，8a-六氢萘0.18％，桉油烯醇0.18％，3-甲基-4-(2，6，6-三甲基-2-环己烯-1-基)-3-丁烯-2-醇0.08％，Α-毕橙茄醇0.01％，棕榈酸0.01％，9-氧-新戊酰基-N-乙酰基秋水仙醇0.36％，(1S)-(-)-α蒎烯2.01％，(1S)-(-)-β-蒎烯2.5％，1，3，8-P-孟三烯0.04％，柠檬醛0.04％，反-Z，α，α-双红没药烯环氧化物，接叶烯化合物0.01％，橙花叔醇0.03％，1-甲基-4-丙-1-烯-2-基-环己-2-烯-1-醇0.05％，1-乙烯基-1-甲基-4-丙-2-亚基-2-丙-1-烯-2-基环己烷0.11％，2，2-二甲基-3-亚甲基二环[2.2.1]庚烷0.02％，邻薄荷-1(7)，8二烯-3-醇0.01％，对伞花烃1.75％，氧化芳樟醇0.31％，二氢芳樟醇0.01％，(2R，5R)-2-甲基-5-丙烷-2-基双环[3.1.0]己烷-2-醇0.02％，1-甲基-4-(1-甲基乙烯基)环己醇0.03％，1-羟甲基-2-甲基-1-环己烯0.01％，3-甲基-2-丁烯醛0.06％，顺式-柠檬醛0.02％，香芹醇20.13％，3-甲基-6-(1-甲基乙亚基)环己-2-烯-1-酮0.03％，乙酸香叶酯0.02％，2-异丙基-5-甲基-9-亚甲基双环癸烷-1-烯0.01％，ALPHA-律草烯0.02％，花柏烯0.02％，愈创木烯0.06％，2-(1-羟基环庚基)呋喃0.03％，1，7，7-三甲基-2-乙烯基双环[2，2，1]嘧啶-2-烯0.06％，8-羟基内环异长叶烯0.02％，石竹素0.01％，1，2，3，4，4a，5，6，8a-八氢-4a，8-二甲基-2-(2-丙烯基)-1-萘酚0.01％，2-已烯醛0.01％，4-(4-乙基环己基)-1-戊基-环己烯0.01％)相同成分5个。

由表9和表10可知，挥发性成分种类主要包括醇类、酮类、酯类、酸类、烯类、醛类、酚类、碳氢化合物和其他类化合物，其中挥发油与芳香水中均以烯类化合物为其主要成分。挥发油组分中烯类化合物的种类最多，相对含量最高，其含量为90.12～93.09％；其次是醇类和碳氢类化合物化合物，其相对含量分别为2.98～5.56％和1.87～4.01％；酯类、酮类和酸类的种类较少，相对含量较低含量分别为0.01％～0.31％、0.04％～0.17％和0.00％～0.32％；而酚类、醛类、其他类化合物的种类少，相对含量低为0.00％～0.13％、0.00％～0.13％和0.00％～0.03％。与挥发油相比，芳香水组分中烯类化合物种类有所减少，但其相对含量仍为最高，其相对含量为81.85％～98.03％；碳氢化合物种类虽有明显增加，但其相对含量仍未见显著差异；酸类、醛类种类单一，相对含量少，仅在蜜糠枳壳中含有，其相对含量为0.26％、0.06％。

表9枳壳不同炮制品中挥发性成分各类化合物数量

表10枳壳不同炮制品中挥发性成分各类化合物相对含量

在挥发油组中，麸炒枳壳中鉴定出63个成分，与生品比较新增成分34个；产地趁鲜糠烘枳壳鉴定出48个成分，与生品饮片比较新增成分24个；糠炒枳壳鉴定出61个成分，与生品比较新增成分33个。在芳香水组中，麸炒枳壳鉴定出48个成分，与生品比较新增成分24个；产地趁鲜糠烘枳壳鉴定出20个成分，与生品比较新增成分10个；糠炒枳壳鉴定出14个成分，与生品比较新增成分7个。经过炮制之后挥发油中化合物种类变化较大，但各类化合物成分相对含量差异较小，仅醇类化合物有较明显的减少，其他类别成分无明显变化；而在芳香水组中，化合物种类及各类成分相对含量均发生明显变化，如主要成分醇类、烯类碳氢化合物种类及相对含量在炮制品中发生显著升高或降低，且未见规律性变化。

实验4：枳壳不同炮制品促胃肠动力作用比较

4.1实验材料

4.1.1实验仪器

RE52CS旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，FA1004B电子天平(上海精密科学仪器有限公司)，HH-4数显恒温水浴锅(国华电器有限公司)、代谢笼。，ZNHW型智能恒温电热套(巩义市予华仪器责任有限公司)，FW135型中药粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)，Raytek Raynger ST20红外测温仪(美国雷泰公司)，双档调温电炒锅(广东省湛江市家用电器工业公司)。

4.1.2实验药材

实验药材同实验1中饮片制备方法；多潘立酮片(西安杨森制药有限公司，国药准字H10910003)。

4.1.3实验动物

SD大鼠，雌雄各半，体重(200±20)g，由南昌大学动物实验中心提供，饲养于江西中医药大学实验动物实验中心屏障环境内，合格证号SCXK(赣)2016-0007。

4.1.4药物提取液：称取枳壳各炮制品适量，分别加入10倍量水，煎煮30min，重复两次，合并滤液，浓缩成浓度为2g·mL^-1的药液；多潘立酮片粉碎后加蒸馏水溶解，制成0.2g·L^-1的溶液。

4.1.5营养性半糊剂：取羧甲基纤维素钠20g，置于500mL水中，加热超声至完全溶解，加入奶粉16g，淀粉8g，蔗糖8g以及活性炭粉末2g，搅拌均匀后即得。

4.2方法与结果

4.2.1分组与造模

取SD大鼠70只，平均分成7组，分别为空白组(A)、生品枳壳组(B)、麸炒枳壳组(C)、产地趁鲜糠烘枳壳组(D)、糠炒枳壳组(E)、FD模型组(F)、多潘立酮阳性组(G)，每组10只。除空白组外,其余各组采用夹尾激怒+饮食失节+饮用盐酸水溶液的方法复制FD大鼠模型，连续14天。

4.2.2给药方法

造模成功后自从第15天起，各给药组每天上午给予各组大鼠灌服相应药物。枳壳生品、麸炒枳壳、产地趁鲜糠烘枳壳、糠炒枳壳组大鼠按照5g·kg^－1的剂量灌服枳壳生制品提取液，阳性对照组按10mL·kg^－1给予多潘立酮溶液，空白组、模型组大鼠按照10mL·kg^－1的剂量灌服生理盐水，共14天。

4.2.3对FD大鼠胃残留肠推进的影响

实验第28天，末次给药后禁食12h，所有实验动物均灌胃给予营养性半糊剂2mL，麻醉后取胃囊及小肠，并计算胃排空率和小肠推进率，结果见表11。

小肠推进率(％)＝炭末推进距离/小肠全长×100％胃残留率(％)＝(胃全重-胃净重)/半固体糊重量×100％

表11各组大鼠胃残留率和肠推进率(n＝10)

注:与空白组比较¹⁾P＜0.05，²⁾P＜0.01；与模型组比较³⁾P＜0.05，⁴⁾P＜0.01

由表11可知，与空白组相比，FD模型组大鼠胃残留率与肠推进率均具有极显著性差异，表明造模成功。在同等给药剂量时，产地趁鲜糠烘枳壳与空白组相比差异性最小，且无显著性差异。提示枳壳经产地鲜切后烘制处理后，对FD大鼠的治疗作用优于传统枳壳饮片，上述药理学研究结果与前期化学成分研究相一致，均证实本发明所述枳壳经产地趁鲜切制后以谷糠烘制的方法，可提高枳壳饮片有效成分含量，并增强其“宽中除胀”的疗效。

实验5：产地趁鲜糠烘枳壳的炮制方法参数对比

设置米糠加入量、烘制温度、烘制时间、切片厚度为参数进行对比，以柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷质量分数及血浆MTL质量浓度为综合评价指标进行对比，采集数据如表12所示。

表12产地趁鲜糠烘枳壳炮制工艺参数对比

按本发明所述方法进行炮制，该炮制工艺合理，制备的产地趁鲜糠烘枳壳饮片质量稳定。

综上可知，本发明提供了一种产地趁鲜糠烘枳壳及其炮制方法和应用，产地趁鲜糠烘枳壳亦为最佳炮制品种，其“宽中除胀”功效优于其他炮制品种；通过前期研究，可知橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、辛弗林可作为枳壳Q-Marker，是枳壳中最主要的药效物质；通过UPLC-Q-TOF/MS结合PCA分析可知，可知橙皮素等14种成分可作为枳壳质量标记物；通过检测枳壳挥发性成分种类，可知D-柠檬烯与γ-松油烯为挥发油及芳香水中含量最高的2种成分，且为枳壳挥发性成分中最主要的药效物质。通过比较不同炮制品中上述成分含量，均发现产地趁鲜糠烘枳壳中含量最高。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。