心力衰竭中的硒蛋白p
阅读说明：本技术 心力衰竭中的硒蛋白p (Selenoprotein P in heart failure ) 是由 安德烈亚斯·贝格曼 奥勒·米兰德 马丁·芒努松 于 2019-12-20 设计创作，主要内容包括：本发明的主题是一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法,所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险、特别是心血管病死亡风险,和/或(iv)评估因患有心力衰竭而导致住院或再次住院的风险,所述方法包括a)确定所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量,b)将所确定的患有心力衰竭的受试者中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量与以下风险相关联：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险、特别是心血管病死亡风险,和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险。本发明的主题包括患者的分层和处于以下高风险的心力衰竭患者的治疗方法：(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化和/或(iii)死亡、特别是心血管病死亡,和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院。(Subject of the present invention is a method for assessing the risk in a subject suffering from heart failure, said risk being (i) the risk of developing a cardiovascular event and/or (ii) the risk of worsening the heart failure condition and/or (iii) the risk of mortality, in particular cardiovascular mortality, and/or (iv) the risk of hospitalization or of re-hospitalization due to suffering from heart failure, said method comprising a) determining the level and/or amount of selenoprotein P and/or fragments thereof in a sample of said subject, b) correlating the determined level and/or amount of selenoprotein P and/or fragments thereof in a subject suffering from heart failure with the following risks: (i) a risk of developing a cardiovascular event and/or (ii) a risk of worsening heart failure condition and/or (iii) a risk of mortality, in particular cardiovascular mortality, and/or (iv) a risk of hospitalization or re-hospitalization due to heart failure. The subject of the invention includes stratification of patients and treatment of heart failure patients at high risk of: (i) a cardiovascular event occurs and/or (ii) a worsening heart failure condition and/or (iii) death, in particular cardiovascular death, and/or (iv) hospitalization or re-hospitalization due to heart failure.)
技术领域
本发明的主题是一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险、特别是心血管病死亡风险，和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，所述方法包括
a)确定所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量，
b)将所确定的患有心力衰竭的受试者中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量与以下风险相关联：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险、特别是心血管病死亡风险，和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险。
本发明的主题包括患者的分层和处于以下高风险的心力衰竭患者的治疗方法：(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化和/或(iii)死亡、特别是心血管病死亡和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院。
背景技术
硒蛋白P(缩写Sepp1、SeP、SELP、SePP)是一种血浆硒蛋白，其用作硒营养标志物，并且其血浆水平随着硒缺乏症严重程度的增加而下降(Yang,Hill等人,1989；Renko,Werner等人,2008)。
因为硒通过硒蛋白起作用，所以有人提出，如果提供足够的微量元素以防止硒成为硒蛋白合成的限制因素，则会获得最佳健康状态。硒蛋白优化的确定已成为用于评估硒营养需求的主要技术(Burk和Hill2009)。
迄今为止，已经鉴定出超过25种硒蛋白在细胞氧化还原过程的调节中起着不同的作用(Liu,Xu等人,2017)。它们在多种组织和细胞中表达，并表现出多种功能，例如谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)对细胞内过氧化氢解毒，从而保护细胞免受脂蛋白和/或DNA损伤，而硫氧还蛋白还原酶(TrxR)再生硫氧还蛋白，从而平衡细胞的氧化还原状态(Reeves和Hoffmann 2009)。
硒在硒蛋白诱导的防御系统中起着至关重要的作用。因此，硒血液水平已被广泛用作氧化应激相关疾病的生物标志物。各种观察性研究已经调查了血清硒水平对心血管疾病发展的意义，但结果却有争议。在健康的老年受试者中进行的硒饮食补充试验表明，心血管病死亡率显著降低并且心脏功能显著改善(Alehagen,Johansson等人,2013)，并且在干预后的10年随访期间仍观察到这一点(Alehagen,Aaseth等人,2015)。此外，在急性冠状动脉综合征患者中低硒水平与未来心血管病死亡相关，但在稳定型心绞痛患者中并非如此(Lubos,Sinning等人,2010)。相反，若干硒补充试验的荟萃分析报道，补充硒对心血管病死亡率以及所有致命和非致命的心血管疾病事件均无统计学意义的影响(Flores-Mateo,Navas-Acien等人,2006；Rees,Hartley等人,2013)。总之，迄今为止，随机试验的结果尚不一致，并且补充硒在预防心血管疾病中的作用尚无定论。
所研究群体的基线硒状态和硒补充剂量的差异可能部分解释了试验研究缺乏一致性的原因。补充硒可能会使基线硒状态低的人受益，但对处于适当至高状态的人的心血管系统没有影响或甚至有不良影响。例如，在已经摄入足够的硒的人中补充额外的硒可能会增加其患2型糖尿病的风险(Rayman和Stranges 2013)。因此，硒状态与心血管疾病风险之间呈U形关联可能是合理的(Bleys,Navas-Acien等人,2008)。
硒缺乏可以诱发心力衰竭(Saliba,El Fakih等人,2010)。心力衰竭与硒水平较低相关(Kosar,Sahin等人,2006)，并且患有充血性心力衰竭的非洲裔美国患者中血清硒降低(Arroyo,Laguardia等人,2006)。相反，Ghaemian等人表明，充血性心力衰竭患者中的血清硒水平与对照的相似，并且硒水平与左心室功能障碍的程度无关(Ghaemian,Salehifar等人,2012)。根据荟萃分析，在普通群体和高心血管疾病风险群体中补充硒不会改变全因死亡率、心血管病死亡率或心血管事件(Rees,Hartley等人,2013)。
硒补充研究(Xia,Hill等人,2005；Burk,Norsworthy等人,2006；Meplan,Crosley等人,2007)表明，硒蛋白P血浆水平是最容易获得的人类硒营养状态标志物。发现血清硒与硒蛋白P水平之间存在高度显著的相关性(Andoh,Hirashima等人,2005)。然而，一旦满足营养要求，硒蛋白P水平浓度就不能反映硒摄入量的额外增加。
硒蛋白P是一种分泌的糖蛋白，含有在血浆中的大部分硒(Read,Bellew等人,1990；Hill,Xia等人,1996)。就其硒含量而言，硒蛋白P可分为两个结构域。N末端结构域(约占氨基酸序列的三分之二)在U-x-x-C氧化还原基序中含有1个硒代半胱氨酸(U)。较短的C末端结构域含有多个硒代半胱氨酸，例如在大鼠、小鼠和人类中为9个。
全长硒蛋白P存在于血浆中，但也存在硒含量降低的缩短形式。从大鼠血浆纯化的硒蛋白P以四种同工型形式存在。除了含有10个硒代半胱氨酸残基的全长同工型外，还存在较短的同工型，它们终止于第二、第三和第七个硒代半胱氨酸位置。这些同工型分别含有一个、两个和六个硒代半胱氨酸残基(Himeno,Chittum等人,1996；Ma,Hill等人,2002)。有证据表明，在小鼠(Hill,Zhou等人,2007)和人类(Akesson,Bellew等人,1994)中分别存在硒蛋白P同工型。从结构上讲，人硒蛋白P是一种含有381个氨基酸残基(SEQ ID NO.1)的蛋白质，其中在59、300、318、330、345、352、367、367、369、376和378位的十个氨基酸残基被预测为硒代半胱氨酸残基。
硒蛋白P的分泌形式(在信号序列切割后)由362个氨基酸残基(SEQ ID NO.2)组成，并且可能含有翻译后修饰，所述翻译后修饰可包括磷酸化和多个位点的糖基化。此外，已经鉴定出若干片段，包括含有硒蛋白P的N末端或C末端部分的片段(Hirashima,Naruse等人,2003；Ballihaut,Kilpatrick等人,2012)。
肝脏产生在血浆中的大部分硒蛋白P，其在血浆中周转迅速。
硒蛋白P也在其他组织中表达，并推测被这些组织分泌(Hill,Lloyd等人,1993；Yang,Hill等人,2000)。肝脏从若干来源获取硒，并将其分配在硒蛋白的合成和从生物体的排泄之间。
具体而言，肝脏合成其固有的硒蛋白以及分泌的硒分子硒蛋白P和排泄代谢物。因此，通过代谢可用的硒在硒蛋白合成途径和硒排泄代谢产物合成途径之间的分布，全身硒似乎在肝脏中得以调节。
据报道，2型糖尿病和糖尿病前期患者中的循环硒蛋白P水平升高，并且显示与动脉粥样硬化有关(Yang,Hwang等人,2011)。此外，超重和肥胖患者中的硒蛋白P水平浓度升高(Chen,Liu等人,2017)。相比之下，败血症中硒蛋白P水平浓度降低并且据推测是硒水平下降的原因(Hollenbach,Morgenthaler等人,2008)或由肝脏释放的微量元素减少的原因(Renko,Hofmann等人,2009)。在已证实有心血管疾病的患者中，还发现与代谢综合征状态相关的循环硒蛋白P水平显著降低(Gharipour,Sadeghi等人,2017)。
心力衰竭中关于硒蛋白P的数据非常有限。Strauss等人确定了包括心力衰竭在内的心血管疾病患者的硒蛋白P水平，并发现与没有心力衰竭的患者相比，心力衰竭患者的硒蛋白P水平升高(Strauss,Tomczak等人,2018)。尚未在这些患者中研究硒蛋白P与结果度量之间的关联。
已知几种通过基于抗体的测定法进行的硒蛋白P定量方法：放射免疫测定法(Hill,Xia等人,1996)，酶联免疫吸附测定法(Andoh,Hirashima等人,2005)，非常灵敏的化学发光免疫测定法(Hollenbach,Morgenthaler等人,2008)以及最新的针对标准参考材料校准的夹心SELENOP-ELISA(Hybsier,Schulz等人,2017)。
在WO 2015/185672中已经描述了主要表现出血浆硒蛋白P值降低的糖尿病患者的全因死亡的风险增加。
此外，已表明硒蛋白P的检测可以用于评估健康受试者发生首次心血管事件的风险或评估心血管病死亡的风险(PCT/EP2018/079030)。
发明内容
本发明的主题是一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险、特别是心血管病死亡风险，和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，所述方法包括
a)确定所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量，以及
b)将所确定的患有心力衰竭的受试者样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量与以下风险相关联：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)患有心力衰竭的受试者的死亡风险(优选在一年内死亡的风险)，特别是心血管病死亡风险，和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院(优选在30天内)的风险。
如果患有心力衰竭的受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量降低，则所述受试者发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险、特别是心血管病死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险分别增强。在一个特定的实施方案中，如果所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于相应的阈值，则上述风险增强。
死亡风险可能是指心血管病死亡风险。心血管病死亡是指与中风、心肌梗塞或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
心力衰竭恶化可能导致住院，并且定义为(Clark,Cherif等人,2018)：
(i)临床恶化，即突然出现心力衰竭的症状和征象，例如肺水肿的发展，并且需要额外的静脉内或机械疗法，和/或
(ii)尽管进行了治疗，但急性心力衰竭仍逐渐恶化，和/或
(iii)对标准治疗没有反应。
在一个实施方案中，所述心血管事件可以选自急性失代偿性心力衰竭、动脉粥样硬化、高血压、心肌病和心肌梗塞，并且所述心血管病死亡选自与心肌梗塞或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
在本发明的一个具体实施方案中，所述患者患有慢性心力衰竭，并且所述心血管事件是急性失代偿性心力衰竭。
在一个实施方案中，所述心血管事件可以选自急性失代偿性心力衰竭、动脉粥样硬化、高血压、心肌病和心肌梗塞，但是所述心血管事件不是中风，并且所述心血管病死亡选自与心肌梗塞或急性心力衰竭有关的心血管病死亡，但是所述心血管病死亡与中风无关。
在本发明的一个具体实施方案中，所述心血管事件是选自以下事件的急性心血管事件：心肌梗塞，急性失代偿性心力衰竭，中风，冠状动脉血运重建以及与心肌梗塞、中风或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
在本发明的一个具体实施方案中，所述心血管事件是选自以下事件的急性心血管事件：心肌梗塞，急性失代偿性心力衰竭，冠状动脉血运重建以及与心肌梗塞或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
在本发明的一个具体实施方案中，所述心血管事件是选自以下事件的急性心血管事件：心肌梗塞，急性心力衰竭，冠状动脉血运重建，但不是中风，以及与心肌梗塞或急性心力衰竭有关但与中风无关的心血管病死亡。
发生心血管事件和/或心血管病死亡的风险是指在一定时间段内由于心血管原因而发生事件的风险或由于心血管原因而死亡的风险。在一个具体的实施方案中，所述时间段是在10年内，或在8年内，或在5年内或在2.5年内，或在1年内，或在6个月内，或在3个月内，或在30天内，或在28天内。
心血管事件或心血管病死亡的风险是指在一定时间段内由于心血管原因而发生事件的风险或由于心血管原因而死亡的风险，但是其中心血管事件或心血管病死亡不是中风或与中风有关。在一个具体的实施方案中，所述时间段是在10年内，或在8年内，或在5年内或在2.5年内，或在1年内，或在6个月内，或在3个月内，或在30天内，或在28天内。
心血管事件或心血管病死亡的风险是指在一定时间段内由于心血管原因而发生事件的风险或由于心血管原因而死亡的风险，但是其中心血管事件或心血管病死亡不是中风或与中风有关。在一个具体的实施方案中，所述时间段是在10年内，或在8年内，或在5年内或在2.5年内，或在1年内，或在6个月内，或在3个月内，或在30天内，或在28天内。
已经表明，通过使用特定阈值(例如中值)，硒蛋白P的检测可以用于评估健康受试者发生首次心血管事件的风险或评估心血管病死亡的风险(PCT/EP2018/079030；Schomburg等人,2018.JAMA Cardiology,已提交)。健康群体中硒蛋白P的频率分布范围为0.4至20.0mg/L，中值浓度为5.5mg/L(图5A)。评估健康受试者发生首次心血管事件或心血管病死亡的风险的硒蛋白P的阈值范围在4.0至5.5mg/L之间。
当与健康群体相比时，心力衰竭群体的硒蛋白P浓度(例如HARVEST研究)是低得多的浓度，范围在0.8至6.9mg/L之间并且中值为3.0mg/L，其中大多数值远低于健康受试者的阈值(例如，97.3％的心力衰竭患者低于5.5mg/L，并且79.7％的心力衰竭患者低于4.0mg/L)(图5B)。心力衰竭患者的硒蛋白P浓度与具有发生心血管事件风险的健康患者可相提并论，因为这些心力衰竭患者已经遭受心血管事件(即心力衰竭)。令人惊讶地，并且根据本发明，心力衰竭患者中的低硒蛋白P浓度可进一步分为亚组，而根据本发明，在心力衰竭患者中处于分布较低端的硒蛋白P浓度具有更高的例如心力衰竭恶化或因心力衰竭而导致再次住院或死亡的风险。
本发明的主题是一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险，特别是心血管病死亡风险，和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，所述方法包括
a)确定所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量，以及
b)将所确定的所述受试者样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量与参考水平的硒蛋白P和/或其片段的参考水平进行比较。
术语“参考水平”是本领域众所周知的。优选的参考水平可以由技术人员立即确定。优选地，术语“参考水平”在本文中是指各个生物标志物的预定值。在本文中，“水平”涵盖绝对量、相对量或浓度以及与其相关或可以从其得出的任何值或参数。优选地，参考水平是允许将受试者分配到处于例如发生心血管事件的风险的受试者组中或分配到未处于例如发生心血管事件的风险的受试者组的水平。因此，参考水平应允许区分处于例如发生心血管事件的风险或未处于所述风险中的受试者。本领域技术人员将理解，参考水平是预定的并且设置为满足例如特异性和/或灵敏度方面的常规要求。这些要求可能会有所不同，例如在不同监管机构之间。例如，可能必须分别将测定灵敏度或特异性分别设置为特定限值，例如80％、90％、95％或98％。这些要求也可以根据正或负的预测值来定义。然而，基于本发明给出的教导，本领域技术人员始终有可能得到满足那些要求的参考水平。在一个实施方案中，参考水平是在一个或多个来自处于风险中的患者(或患者组)的参考样品中确定的。在另一个实施方案中，参考水平是在一个或多个来自不处于例如发生心血管事件的患者(或患者组)的参考样品中确定的。在一个实施方案中，参考水平已经在来自患者所属疾病实体的参考样品中预先确定。在某些实施方案中，参考水平可以例如设置为所调查疾病实体中的值的总体分布的25％至75％之间的任何百分比。
在其他实施方案中，参考水平可以例如设置为根据所调查的疾病实体的参考样品中的值的总体分布所确定的中值、三分位数或四分位数。在一个实施方案中，参考水平设置为根据所调查的疾病实体中的值的总体分布所确定的中值。参考水平可以根据各种生理参数如年龄、性别或亚群以及用于确定本文所指的硒蛋白P或其片段的手段而变化。
参考水平可以通过测量参考群体中的硒蛋白P或其片段来确定。参考群体可以是例如不具有心力衰竭的征象和症状的健康群体。在本发明的另一方面，参考群体可以是患有疾病或病症的受试者的群体，特别是心力衰竭患者。参考群体可能由超过一个参考受试者组成。Schomburg等人给出了具有相应硒蛋白P浓度的健康参考群体的实例(Schomburg等人,2018.JAMA Cardiology，已提交)。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致再次住院的风险，其中当所确定的所述受试者样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，优选在2.3至3.8mg/L之间，更优选在2.6至3.4mg/L之间，更优选在3.0至3.3mg/L之间，最优选所述阈值为3.3mg/L。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致再次住院的风险增强，其中所述阈值已通过计算接受者工作特征曲线(ROC曲线)而确定，所述ROC曲线在各种阈值设置下相对于假阳性率(1-特异性，“正常”群体，例如未显现病状的受试者)绘制真阳性率(灵敏度，“疾病”群体，例如确实显现病状的受试者)。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致再次住院的风险增强，其中所述阈值低于4.4mg/L，优选低于3.8mg/L，甚至更优选低于3.4mg/L，最优选等于或低于3.3mg/L。
因此，阈值范围在2.2至4.4mg/L之间是有用的。这些阈值与实施例中提到的校准方法有关。
所有阈值和值都必须视为与根据实施例使用的测试和校准有关。本领域技术人员可以知道阈值的绝对值可能会受到所使用的校准的影响。这意味着本文给出的所有值和阈值都应在所用校准的背景下进行理解。
阈值水平可以通过测量确实显现某种病状(例如心血管事件)的受试者的样品和未显现所述病状的受试者的样品来确定。确定阈值的一种可能性是计算接受者工作特征曲线(ROC曲线)，所述ROC曲线在各种阈值设置下相对于假阳性率(1-特异性，“正常”群体，例如未显现病状的受试者)绘制真阳性率(灵敏度，“疾病”群体，例如确实显现病状的受试者)。显现或未显现某种病状的受试者的标志物水平的分布可能会重叠。在这些情况下，测试不能以100％的准确度绝对区分“正常”与“疾病”，并且重叠区域指示其中测试无法区分正常与“疾病”。选择一个阈值，高于所述阈值(或低于所述阈值，取决于标志物随“疾病”的变化方式)，所述测试被认为是异常的，而低于所述阈值，所述测试被认为是正常的。ROC曲线下面积(AUC)是感知的测量将允许正确识别病状的概率的度量。即使测试结果不一定提供准确的数字，也可以使用ROC曲线。只要可以对结果进行排序，就可以创建ROC曲线。例如，可以根据程度对“疾病”样本的测试结果进行排序(例如1＝低，2＝正常和3＝高)。可以将这种排序与“正常”群体中的结果相关联，并创建ROC曲线。这些方法是本领域众所周知的(Hanley等人,1982.Radiology 143:29-36)。优选地，选择阈值以提供大于约0.5，更优选大于约0.7，还更优选大于约0.8，甚至更优选大于约0.85，并且最优选大于约0.9的AUC。在上下文中，术语“约”是指给定测量结果的+/-5％。ROC曲线的水平轴代表(1-特异性)，其随着假阳性率而增加。曲线的垂直轴表示灵敏度，其随着真阳性率而增加。因此，对于所选择的特定截止值，可以确定(1-特异性)的值，并且可以获得相应的灵敏度。AUC是对测量的标志物水平将允许正确识别疾病或病状的概率的度量。因此，AUC可用于确定测试的有效性。优势比(OR)是效应大小的度量，描述了两个二进制数据值之间关联或非独立的强度(例如，在测试阴性组中事件发生的几率与在测试阳性组中该事件发生的几率之比)。
阈值水平可以例如从Kaplan-Meier分析获得，其中疾病的发生或严重病状和/或死亡的概率与例如群体中各个标志物的四分位数相关联。根据该分析，标志物水平高于第75百分位数的受试者患本发明疾病的风险显著增加。对经典风险因素进行调整的Cox回归分析进一步支持了这一结果。根据本发明，与所有其他受试者相比，最高四分位数(或最低四分位数，取决于标志物随“疾病”的变化方式)与患病风险增加或出现严重病状和/或死亡的概率增加高度显著相关。
其他优选的阈值例如是参考群体的第10百分位数、第5百分位数或第1百分位数。通过使用比第25百分位数高的百分位数，可以减少识别出的假阳性受试者的数量，但是可能会错过识别处于中等风险但风险仍会增加的受试者。因此，可能会根据是以识别出“假阳性”为代价来识别大多数处于风险中的受试者更合适，还是以错过若干处于中等风险的受试者为代价来主要识别出处于高风险的受试者更合适，来调整阈值。
本领域技术人员知道如何确定这种统计上显著的水平。
在本发明的一个实施方案中，受试者是男性。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述心血管事件选自心肌梗塞、中风、冠状动脉血运重建，并且所述死亡是心血管病死亡。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的患者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述心血管病死亡选自与心肌梗塞、中风或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量已通过使用至少一种与SEQ ID No.2结合的结合剂的免疫测定法确定。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述至少一种结合剂是抗体或其片段。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量已通过质谱法确定。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中评估在长达一年的时间段内发生包括死亡在内的心血管事件的所述风险。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中评估在长达一年的时间段内所述受试者中所述(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中评估在30天的时间段内所述因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险。
本发明的主题是如上文所概述的一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述样品是体液。
体液可以选自全血、血清、血浆、尿液、脑脊髓液(CSF)和唾液。
在一个优选的实施方案中，样品是选自全血、血浆和血清的体液。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中所确定的硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值，并且其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，优选在2.3至3.8mg/L之间，更优选在2.6至3.4mg/L之间，更优选在3.0至3.3mg/L之间，最优选为3.3mg/L。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险是根据如本文所概述的根据本发明的方法来确定，其中所确定的硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值，并且其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，优选在2.3至3.8mg/L之间，更优选在2.6至3.4mg/L之间，更优选在3.0至3.3mg/L，最优选为3.3mg/L，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者，并且其中所确定的硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值，并且其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，并且其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者以降低所述风险。
本发明的主题是用于治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的硒，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中这种增强的风险根据如本文所概述的本发明的方法来确定，其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者，并且其中所确定的硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值，并且其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，并且其中硒以药学上可接受的量施用于所述受试者以降低所述风险，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中根据本发明的用于评估所述风险的方法被执行至少两次。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中根据本发明的用于评估所述风险的方法被执行至少两次，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据本发明的用于评估所述风险的方法作为对所述治疗的监测。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据本发明的用于评估所述风险的方法作为对所述治疗的监测，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据本发明的用于评估所述风险的方法并用于治疗指导。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据本发明的用于评估所述风险的方法并用于治疗指导，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据任何上述实施方案的用于评估所述风险的方法并且用作伴随诊断。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中执行了根据任何上述实施方案的用于评估所述风险的方法并且用作伴随诊断，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所施用的硒选自亚硒酸盐、硒酸盐或硒代蛋氨酸(L-硒代蛋氨酸)。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所施用的硒选自亚硒酸盐、硒酸盐或硒代蛋氨酸(L-硒代蛋氨酸)，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中与作为必需辅酶的抗氧化剂辅酶Q10组合施用的硒选自亚硒酸盐、硒酸盐或硒代蛋氨酸(L-硒代蛋氨酸)。
本发明的主题是根据任何上述实施方案的一种治疗患有心力衰竭并且具有增强风险的受试者的方法，所述风险是(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中与作为必需辅酶的抗氧化剂辅酶Q10组合施用的硒选自亚硒酸盐、硒酸盐或硒代蛋氨酸(L-硒代蛋氨酸)，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
在所述治疗方法中，使用了用于评估所述风险的上述方法，包括如上所述的阈值范围。一个阈值可能是硒水平等于或<100μg/L。
如本文所用，术语“受试者”是指活的人类或非人类生物。优选地，本文的受试者是人类受试者。所述受试者患有心力衰竭。
术语“降低的水平”是指低于特定阈值水平的水平。术语“增加的水平”是指高于特定阈值水平的水平。
术语“确定硒蛋白P的水平”是指通常确定针对前述分子内区域的免疫反应性。这意味着没有必要选择性地测量某个片段。应当理解，用于确定硒蛋白P和/或其片段的水平的结合剂与包含所述结合剂的结合区域的任何片段结合。所述结合剂可以是抗体或抗体片段或非IgG支架。
在一个具体的实施方案中，通过免疫测定法测量硒蛋白P的水平，并且所述结合剂是与硒蛋白P和/或其片段结合的抗体或抗体片段。
多种免疫测定法是已知的并且可用于本发明的测定法和方法，这些包括：放射免疫测定法(“RIA”)、均相酶多重免疫测定法(“EMIT”)、酶联免疫吸附测定法(“ELISA”)、脱辅基酶再激活免疫测定法(“ARIS”)、化学发光和荧光免疫测定法、基于Luminex的珠粒阵列、蛋白质微阵列测定法以及快速测试形式例如免疫色谱试纸测试(“试纸条免疫测定法”)和免疫色谱测定法。
在本发明的一个实施方案中，这种测定法是使用任何种类的检测技术的夹心免疫测定法，包括但不限于酶标记、化学发光标记、电化学发光标记，优选全自动测定法。在本发明的一个实施方案中，这种测定法是酶标记的夹心测定法。自动化或全自动测定法的实例包括可用于以下系统之一的测定法：RocheAbbottSiemensBrahmsBiomerieuxAlere
在本发明的一个实施方案中，它可以是所谓的POC测试(床旁检测)，它是允许在离患者不到一小时内进行测试而无需全自动测定系统的测试技术。这项技术的一个实例是免疫色谱测试技术。
在本发明的一个实施方案中，所述两种结合剂中的至少一种被标记以便被检测到。
在一个优选的实施方案中，所述标记选自化学发光标记、酶标记、荧光标记、放射性碘标记。
所述测定法可以是均相或异相测定法，竞争性和非竞争性测定法。在一个实施方案中，所述测定法采取夹心测定法的形式，其为非竞争性免疫测定法，其中待检测和/或待定量的分子与第一抗体和第二抗体结合。所述第一抗体可以结合至固相，例如珠粒，孔或其他容器的表面，芯片或条带，并且所述第二抗体是例如用染料、用放射性同位素或者反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过合适的方法测量与分析物结合的标记抗体的量。“夹心测定法”涉及的一般组成和程序是众所周知的，并且是技术人员已知的(《免疫测定手册》 (The Immunoassay Handbook),David Wild编,Elsevier LTD,Oxford；第3版(2005年5月), ISBN-13:978-0080445267；Hultschig C等人,Curr Opin Chem Biol.2006年2月；10(1):4- 10.PMID:16376134)。
在另一个实施方案中，所述测定法包含两个捕获分子，优选抗体，它们均以分散体的形式存在于液体反应混合物中，其中第一标记组分连接至所述第一捕获分子，其中所述第一标记组分是基于荧光或化学发光猝灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二标记组分连接至第二捕获分子，以便在两个捕获分子都与分析物结合后即刻产生可测量的信号，从而允许检测包含样品的溶液中所形成的夹心复合物。
在另一个实施方案中，所述标记系统包含与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型的染料组合的穴状稀土化合物或稀土螯合物。
在本发明的上下文中，基于荧光的测定法包括使用染料，所述染料可以例如选自FAM(5-或6-羧基荧光素)，VIC，NED，荧光素，异硫氰酸荧光素(FITC)，IRD-700/800，花青染料如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7，黄原，6-羧基-2',4',7',4,7-六氯荧光素(HEX)，TET，6-羧基-4',5'-二氯-2',7'-二甲氧基荧光素(JOE)，N,N,N',N'-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)，6-羧基-X-罗丹明(ROX)，5-羧基罗丹明-6G(R6G5)，6-羧基罗丹明-6G(RG6)，罗丹明，罗丹明绿，罗丹明红，罗丹明110，BODIPY染料如BODIPY TMR，俄勒冈绿，香豆素如伞形酮，苯甲酰亚胺如Hoechst 33258；菲啶类如得克萨斯红，Yakima Yellow，Alexa Fluor，PET，溴化乙锭，吖啶染料，咔唑染料，吩嗪染料，卟啉染料，聚甲炔染料等。
在本发明的上下文中，基于化学发光的测定法包括基于(Kirk-Othmer,《化工技术 百科全书》(Encyclopedia of chemical technology),第4版,执行编辑,J.I.Kroschwitz； 编辑,M.Howe-Grant,John Wiley&Sons,1993,第15卷,第518-562页,通过引用并入本文,包 括第551-562页的引文)中关于化学发光材料描述的物理原理使用染料。化学发光标记可以是吖啶酯标记，涉及异鲁米诺标记的类固醇标记等。优选的化学发光染料是吖啶酯。
酶标记可以是乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CPK)、碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等。
在根据本发明的用于确定样品中的硒蛋白P和/或其片段的测定法的一个实施方案中，所述测定法的测定灵敏度为<0.100mg/L，优选<0.05mg/L并且更优选<0.01mg/L。
根据本发明，针对硒蛋白P和/或其片段的诊断结合剂选自抗体，例如IgG，典型的全长免疫球蛋白，或至少含有重链和/或轻链的F可变结构域的抗体片段，例如化学偶联的抗体(抗原结合片段)，包括但不限于Fab片段，包括Fab微型抗体，单链Fab抗体，具有表位标签的单价Fab抗体，例如Fab-V5Sx2；与CH3结构域二聚的二价Fab(微型抗体)；二价Fab或多价Fab，例如经由借助于异源结构域的多聚，例如经由dHLX结构域的二聚而形成，例如Fab-dHLX-FSx2；F(ab')2片段，scFv片段，多聚的多价或/和多特异性scFv片段，二价和/或双特异性双抗体，(双特异性T细胞衔接子)，三功能抗体，多价抗体，例如与G不同的类别；单结构域抗体，例如源自骆驼科动物或鱼类免疫球蛋白的纳米抗体。
在一个具体的实施方案中，硒蛋白P和/或其片段的水平是通过使用选自如下文更详细描述的与硒蛋白P和/或其片段结合的抗体、抗体片段、适体、非Ig支架的结合剂的测定法来测量的。
如本文所述，“测定法”或“诊断测定法”可以是在诊断领域中应用的任何类型。这样的测定法可以基于待检测的分析物以特定亲和力与一种或多种捕获探针的结合。关于捕获分子与目标分子或所关注分子之间的相互作用，亲和常数大于107M-1，优选108M-1，更优选大于109M-1，最优选大于1010M-1。可以使用例如在德国卡塞尔(Kassel,Germany)的Biaffin(http://www.biaffin.com/de/)作为服务分析提供的Biacore方法来确定结合亲和力。
在本发明的上下文中，“结合剂分子”是可用于结合样品中的目标分子或所关注分子即分析物(即，在本发明的上下文中为硒蛋白P及其片段)的分子。因此，结合剂分子必须在空间上和在表面特征(例如表面电荷，疏水性，亲水性，存在或不存在路易斯供体和/或受体)方面适当地成形，以特异性结合目标分子或所关注分子。因此，结合可以例如通过捕获分子与目标分子或所关注分子之间的离子、范德华、π-π、σ-π、疏水或氢键相互作用或上述相互作用中的两种或更多种的组合来介导。在本发明的上下文中，结合剂分子可以例如选自核酸分子、碳水化合物分子、PNA分子、蛋白质、抗体、肽或糖蛋白。优选地，结合剂分子是抗体，包括其与所关注的靶标或分子具有足够亲和力的片段，并且包括重组抗体或重组抗体片段，以及所述抗体的化学和/或生物化学修饰的衍生物或衍生自具有至少12个氨基酸的长度的其变体链的片段。
除了抗体以外，本领域中众所周知其他生物聚合物支架可复合目标分子并已用于产生高靶标特异性的生物聚合物。实例是适体、spiegelmer、anticalin和芋螺毒素。非Ig支架可以是蛋白质支架，并且可以用作抗体模拟物，因为它们能够结合配体或抗原。非Ig支架可以选自基于四连接素的非Ig支架(例如在US 2010/0028995中描述)，纤连蛋白支架(例如在EP 1266 025中描述)；基于脂质运载蛋白的支架(例如在WO 2011/154420中描述)；泛素支架(例如在WO 2011/073214中描述)，转移支架(例如在US 2004/0023334中描述)，蛋白A支架(例如在EP 2231860中描述)，基于锚蛋白重复序列的支架(例如在WO 2010/060748)中描述)，微蛋白(优选为形成胱氨酸结的微蛋白)支架(例如在EP 2314308中描述)，基于FynSH3结构域的支架(例如在WO 2011/023685中描述)，基于EGFR-A结构域的支架(例如在WO 2005/040229中描述)和基于Kunitz结构域的支架(例如在EP 1941867中描述)。
在本发明的一个实施方案中，所述两种结合剂中的至少一种结合至作为磁性粒子和聚苯乙烯表面的固相。
或者，可以通过其他分析方法例如质谱法来确定任何上述分析物的水平。
在本发明方法的一个具体实施方案中，在患有心力衰竭的受试者的体液中确定另外至少一种其他生物标志物，并且将其与如上文所概述的以下风险相关联：(i)所述发生心血管事件的风险和/或(ii)所述心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)所述死亡风险和/或(iv)所述因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述另外的生物标志物选自：神经降压素原1-117(PNT 1-117)，C反应蛋白(CRP)，脑利钠肽原1-108(proBNP 1-108，NT-proBNP)，proBNP，BNP，心利钠肽原1-98(proANP-N末端片段)，pro-ANP及其长度为至少五个氨基酸的片段(例如MR-proANP)，肾上腺髓质素，肾上腺髓质素原(proADM)及其长度为至少五个氨基酸的片段(例如MR-proADM)，ST-2，GDF15，半乳凝素-3，肽素，人类生长激素(hGH)，空腹血液或血浆葡萄糖，甘油三酸酯，HDL胆固醇或其亚级分，LDL胆固醇或其亚级分，胰岛素，胱抑素C，硒，丙氨酸转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)，胆红素，碱性磷酸酶(ALP)。
在本发明方法的一个具体实施方案中，在患有心力衰竭的受试者的体液中确定另外至少一种其他生物标志物，并且将其与如上文所概述的以下风险相关联：(i)所述发生心血管事件的风险和/或(ii)所述心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)所述死亡风险和/或(iv)所述因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述额外生物标志物选自：神经降压素原1-117(PNT 1-117)，C反应蛋白(CRP)，脑利钠肽原1-108(proBNP 1-108，NT-proBNP)，proBNP，BNP，心利钠肽原1-98(proANP-N末端片段)，pro-ANP及其长度为至少五个氨基酸的片段(例如MR-proANP)，肾上腺髓质素，肾上腺髓质素原(proADM)及其长度为至少五个氨基酸的片段(例如MR-proADM)，ST-2，GDF15，半乳凝素-3，肽素，人类生长激素(hGH)，空腹血液或血浆葡萄糖，甘油三酸酯，HDL胆固醇或其亚级分，LDL胆固醇或其亚级分，胰岛素，胱抑素C，硒，丙氨酸转氨酶(ALT)，天冬氨酸转氨酶(AST)，胆红素，碱性磷酸酶(ALP)，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
本发明的主题还是一种用于确定患有心力衰竭的受试者中的如前述段落中任一者所定义的风险的方法：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因患有心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中执行所述方法以将所述受试者分层为下文进一步定义的风险组。
本发明的主题还是一种用于确定患有心力衰竭的受试者中的如前述段落中任一者所定义的风险的方法：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因患有心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中执行所述方法以将所述受试者分层为下文进一步定义的风险组，其中心血管事件不是中风并且其中心血管病死亡与中风无关。
在本发明的具体实施方案中，使用所述方法以将受试者分层为各风险组，例如，具有低风险、中等风险或高风险的组。低风险意味着，相比于(i)未发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况未发生恶化和/或(iii)在特定时间段内没有死亡和/或(iv)没有因心力衰竭而导致住院或再次住院的受试者中的预定值，硒蛋白P和/或其片段的值基本上没有降低。当相比于(i)未发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况未发生恶化和/或(iii)在特定时间段内没有死亡和/或(iv)没有因心力衰竭而导致住院或再次住院的受试者中的预定值，硒蛋白P和/或其片段的水平有所升高时，存在中等风险，并且当相比于(i)未发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况未发生恶化和/或(iii)在特定时间段内没有死亡和/或(iv)没有因心力衰竭而导致住院或再次住院的受试者中的预定值，硒蛋白P和/或其片段的水平在基线测量时显著降低并在后续分析中持续降低时，存在高风险。
硒蛋白P的片段可以选自SEQ ID No.3至15。
预防性治疗或干预是补充硒。硒可以亚硒酸盐、硒酸盐或硒代蛋氨酸(L-硒代蛋氨酸)的形式应用。
补充硒可以与维生素(例如维生素E、维生素C、维生素A)和/或矿物质营养素(例如碘、氟化物、锌)和/或辅因子(例如辅酶Q10)组合应用。
心肌梗塞，通常称为心脏病发作，发生在流向心脏一部分的血液减少或停止，从而损害心肌时。最常见的症状是胸痛或不适，可能会蔓延到肩膀、手臂、背部、颈部或下巴。心肌梗塞可以分为ST段抬高型心肌梗塞(STEMI)或非ST段抬高型心肌梗塞(NSTEMI)。
心力衰竭是一种心脏病状，其发生在心脏结构或功能的问题削弱其提供足够血流来满足身体需求的能力时。它会引起多种症状，特别是在休息时或运动期间呼吸急促，体液潴留征象如肺充血或踝肿胀，以及客观证据表明在休息时心脏的结构或功能异常。急性心力衰竭定义为心力衰竭的征象和症状迅速发作，导致需要紧急治疗或住院。急性心力衰竭可以表现为急性新发心力衰竭(无先前心功能障碍的患者中的急性心力衰竭的新发作)或慢性心力衰竭的急性代偿失调。
中风被定义为由脑血管疾病引起的急性局灶性神经功能缺损。中风的两种主要类型是缺血性和出血性，分别占约85％和15％。
如上所述，在一些具体的实施方案中，本文公开的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法并不是其中中风是心血管事件或者其中心血管病死亡与中风有关的那些方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险，特别是心血管病死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险。
冠状动脉血运重建包括经皮冠状动脉介入术(PCI)和冠状动脉搭桥术(CABG)。经皮冠状动脉介入术是一种用于治疗在冠状动脉疾病中发现的心脏冠状动脉变窄(狭窄)的非手术程序。通过股动脉或桡动脉进入血流后，所述程序使用冠状动脉导管插入术以在X射线成像上使血管可视化。此后，介入心脏病专家可以使用球囊导管进行冠状动脉血管成形术，在该球囊导管中，放气的球囊会进入阻塞的动脉并充气以缓解变窄；可以部署例如支架的某些装置以保持血管开放。还可以执行各种其他程序。冠状动脉搭桥术，也称为CABG手术，以及通俗地说心脏搭桥或搭桥手术，是一种用于恢复阻塞冠状动脉的正常血流的手术程序。当冠状动脉阻塞率为50％至99％时，通常需要进行此手术。
本发明的主题还在于在鉴定处于高风险的受试者中补充硒。
硒的固体剂量制剂为例如片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、小袋剂、可重构粉剂、干粉吸入剂和咀嚼剂。
本发明的其他实施方案：
根据上述情形，以下连续编号的实施方案提供了本发明的其他具体方面：
1.一种用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，所述方法包括
a)确定所述受试者的样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量，
b)将所确定的患有心力衰竭的受试者中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量与以下风险相关联：(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险，和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险。
2.根据条目1所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中当所确定的所述受试者样品中硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，所述受试者中(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强。
3.根据条目1或2所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，患有心力衰竭的受试者中(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间，优选在2.3至3.8mg/L之间，更优选在2.6至3.4mg/L之间，更优选在3.0至3.3mg/L之间，最优选所述阈值为3.3mg/L。
4.根据条目1-3中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，患有心力衰竭的受试者中(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所述阈值已通过计算接受者工作特征曲线(ROC曲线)而确定，所述ROC曲线在各种阈值设置下相对于假阳性率(1-特异性，“正常”群体，例如未显现病状的受试者)绘制真阳性率(灵敏度，“疾病”群体，例如确实显现病状的受试者)。
5.根据条目1-4中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中当所述样品中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值时，患有心力衰竭的受试者中(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，其中所述阈值是心力衰竭群体的较低范围，例如低于4.4mg/L，更优选低于3.8mg/L，甚至更优选低于3.4mg/L，最优选等于或低于3.3mg/L。
6.根据条目1-5中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述心血管事件选自心肌梗塞、中风、冠状动脉血运重建和心力衰竭并且所述死亡是心血管病死亡。
7.根据条目1-6中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述死亡是与心肌梗塞、中风或急性心力衰竭有关的心血管病死亡。
8.根据条目1-7中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量已经通过使用至少一种与SEQ ID No.2结合的结合剂的免疫测定法确定。
9.根据条目8所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述至少一种结合剂是抗体或其片段。
10.根据条目1-7中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量已经通过质谱法确定。
11.根据条目1-10中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中评估在一段时间内所述(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)所述死亡风险。
12.根据条目1-11中的任一项所述的用于评估(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估患有心力衰竭的受试者中的死亡风险和/或(iv)评估患有心力衰竭的住院受试者中的再次住院风险的方法，其中评估在长达1年的时间段内患有心力衰竭的受试者中的所述(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)死亡风险。
13.根据条目1-12中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述因心力衰竭导致的住院或再次住院的风险被评估长达30天的时段。
14.根据条目1-13中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述样品是体液。
15.根据条目1-14中的任一项所述的用于在患有心力衰竭的受试者中评估风险的方法，所述风险是(i)发生心血管事件的风险和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险和/或(iii)评估死亡风险和/或(iv)评估因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险，其中所述样品是选自全血、血浆和血清的体液。
16.一种用于治疗患有心力衰竭并且具有增强的以下风险的受试者的硒：(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强。
17.一种用于治疗患有心力衰竭并且具有增强的以下风险的受试者的硒：(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致住院或再次住院的风险增强，所述风险根据条目1-15中的任一项所述的方法确定。
18.一种用于治疗患有心力衰竭并且具有增强的以下风险的受试者的硒：(i)发生心血管事件和/或(ii)心力衰竭状况恶化的风险增强和/或(iii)死亡风险增强和/或(iv)因心力衰竭而导致再次住院的风险增强，所述风险根据条目1-15中的任一项所述的方法确定，其中所确定的硒蛋白P和/或其片段的水平和/或量低于阈值并且其中所述阈值在2.0至4.4mg/L之间。
19.在以上条目1至18的具体实施方案中，所述心血管事件不是中风，和/或所述心血管病死亡与中风无关。
附图说明
图1.基于后果的各组中SePP的分布(mg/L)。A)没有再次住院/幸存者；B)再次住院/幸存者；C)没有再次住院/死亡，以及D)再次住院并死亡。
图2.SePP四分位数内的一年存活率。Q1＝最低水平的四分位数；Q4＝最高水平的四分位数。四分位数内的SePP水平：Q1＝1.8±0.4；Q2＝2.6±0.2；Q3＝3.4±0.2，Q4＝4.7±0.8。
图3.SePP四分位数内的30天再次住院。Q1＝最低水平的四分位数；Q4＝最高水平的四分位数。四分位数内的SePP水平：Q1＝1.8±0.4；Q2＝2.6±0.2；Q3＝3.4±0.2，Q4＝4.7±0.8。
图4.SePP四分位数内的由30天内死亡或再次住院(以先到者为准)组成的复合终点。Q1＝最低水平的四分位数；Q4＝最高水平的四分位数。四分位数内的SePP水平：Q1＝1.8±0.4；Q2＝2.6±0.2；Q3＝3.4±0.2，Q4＝4.7±0.8。
图5.(A)健康参考群体(MPP研究)和(B)心力衰竭患者(Harvest研究)中硒蛋白P分布的比较。粗实线显示相应群体的中值，虚线显示健康参考群体的第一个四分位数。
具体实施方式
实施例
实施例1：测定法说明
使用了Selenotest ELISA(Hybsier等人,2017.Redox Biology 11:403-414； Hybsier等人,2015.Perspectives in Science 3:23-24)，一种生色酶联免疫吸附测定法，用于定量测定血清样品中的人硒蛋白硒蛋白P。Selenotest ELISA是一种以96孔板形式进行的夹心酶免疫测定，并使用两种不同的硒蛋白硒蛋白P特异性单克隆抗体进行抗原捕获和检测步骤。通过针对NIST SRM 1950标准参考物质的系列稀释液进行测量，确定了校准物和对照的硒蛋白P水平。通过用纯化的重组硒蛋白P的乳液免疫接种小鼠，产生单克隆抗体(Ab)。将特异性单克隆抗体Ab5固定为捕获抗体，并将特异性mAb2用作检测抗体。定量下限确定为硒蛋白P水平浓度为11.6μg/L，并且定量上限为538.4μg/L，从而确定了硒蛋白P水平浓度在11.6和538.4μg/L之间的工作范围。20％CV时的交点限定了检出限，并且在硒蛋白P水平浓度为6.7μg/L，即比正常供应硒的受试者的平均血清硒蛋白P水平浓度低约500倍时达到。在测定法的工作范围内，稀释时信号呈线性，并且硒蛋白P在室温下在血清中稳定24h。有关测定法的更多细节，参见Hybsier等人,2017.Redox Biology 11:403-414。
实施例2：HARVEST-研究
瑞典心脑衰竭调查研究(HARVEST-)是一项在瑞典对因急性心力衰竭而住院的连续患者(新诊断或加重的慢性心力衰竭)进行的前瞻性、持续的研究。唯一的排除标准是无法表达同意。在2014年3月至2018年9月之间收集了324名受试者的基线数据，包括血样捐献和临床检查。295名患者有可用的完整数据。通过国家和地区注册机构检索了一年死亡率(54个事件)、一年心血管相关死亡率(44个事件)和30天再次住院(61个事件)的数据。入院时测量硒蛋白P，以及进行临床检查。
临床检查
住院后，抽取空腹血样，测量血压，并以千克/平方米为单位计算体重指数(BMI)。使用堪萨斯城心肌病问卷(Kansas City Cardiomyopathy Questionnaire，KCCQ)对受试者的健康状况(症状、功能和生活质量)进行了评估，这是射血分数降低的心力衰竭和射血分数保持的心力衰竭两者的有效且可靠的健康状态度量(Joseph,Novak等人,2013)，该工具已在瑞典人中得到验证(Patel,Ekman等人,2008)。普遍的糖尿病被定义为医师先前诊断的1型或2型糖尿病，或者使用抗糖尿病药物。心房颤动(AF)被定义为先前诊断的HF。先前的充血性心力衰竭被定义为先前因充血性心力衰竭而住院，或者在纳入研究之前被医师诊断为心力衰竭。
实验室测定法
在的斯科讷大学医院临床化学系(Department of Clinical Chemistry,University Hospital)对空腹N末端脑利钠肽(NT-proBNP)进行了分析，其参与了一项使用基于电化学发光免疫测定法的夹心测定法的国家标准化和质量控制体系(Cobas,Roche Diagnostic,巴塞尔,瑞士)。至于硒蛋白P的分析，入院时将空腹血液样品收集在4.5ml EDTA管中并以1950g离心10分钟。然后将血浆以200μl级分等分到条形码试管(REMP,Brooks,Life Sciences,美国)中，并储存在-80℃直至分析。如实施例1所述，使用单克隆抗体利用经过验证的ELISA免疫测定法分析硒蛋白P。
后果
使用KCCQ来量化身体局限性、症状、自我功效、社交干扰和生活质量。综合汇总评分<50被认为是与健康相关的生活质量低的指征，而综合汇总评分≥50是与健康相关的生活质量较好的指征(Soto,Jones等人,2004)。一年总死亡率定义为纳入研究后一年内的全因死亡率，并从瑞典统计局瑞典总人口登记中获得。再次住院定义为纳入研究后30天内因心力衰竭恶化而进行的任何计划外再次入院中的第一次。创建了在纳入研究后30天内死亡或再次住院(以先到者为准)的复合终点。
统计学
在分析之前，将硒蛋白P归一化(z标准化)。NT-proBNP是唯一具有偏斜分布的变量，因此在分析之前先进行对数转换。使用逻辑回归模型探索了硒蛋白P与KCCQ之间的横断面关联，其中因变量KCCQ在<50总评分上被二分，在粗略模型、模型1(针对年龄和性别进行调整)和模型2(针对BMI、收缩压(SBP)、吸烟、普遍的AF、普遍的糖尿病、先前的HF和经过对数转换的NT-proBNP进行进一步调整)中作为低生活质量(更高的分数＝更好的与健康相关的生活质量)的度量。对于一年死亡率、30天再次住院和由纳入研究后30天内死亡或再次住院(以先到者为准)组成的复合终点，在模型1(针对年龄和性别进行调整)中粗略进行Cox回归模型，并在模型2中针对相关风险因素(BMI、SBP、吸烟、普遍的AF、普遍的糖尿病、先前的HF和经过对数转换的NT-proBNP)进行进一步调整。使用未经调整的Kaplan-Meier模型计算存活率曲线。使用粗略线性回归模型分析了住院时间长度，所述模型针对年龄和性别进行了调整(模型1)并根据模型2进一步调整。所有分析均使用IBM SPSS统计第25版(SPSS,芝加哥,伊利诺伊州)进行，除了Harrell's C-使用R 3.4.3执行的统计分析。
双侧p值<0.05被认为具有统计学意义。进行接受者工作曲线(ROC)分析，以确定具有相应灵敏度和特异性的阈值。
结果
表1呈现了硒蛋白P水平四分位数内研究群体的基线特征。硒蛋白P在群体中正态分布(中值3.4mg/L)。
硒蛋白P与生活质量
根据KCCQ综合评分对生活质量进行的横断面分析揭示，硒蛋白P的每增加1SD与健康相关的低生活质量风险降低相关(n＝47)，所述低生活质量定义为粗略模型(OR 0.70；95％CI 0.50-0.99，p＝0.044)中、模型1(OR 0.70；CI95％0.50-0.99，p＝0.043)中以及完全调整的模型2(OR 0.68；CI95％0.47-0.97；p＝0.035)中的综合汇总评分<50。
由于硒蛋白P的最低和最高四分位数之间存在性别差异，因此进行了相互作用分析。性别之间存在显著的相互作用，因此分别对每种性别进行了额外的分析。那些分析揭示，整个群组中硒蛋白P水平与健康相关的低生活质量之间的关联主要是由男性驱动的(n＝205，32个事件，粗略HR 0.67；CI 95％0.45-0.99；p＝0.048)，而对于女性则未见显著关联(n＝89，15个事件，粗略OR 0.82；CI 95％0.40-1.67；p＝0.581)。
硒蛋白P与一年死亡率
与硒蛋白P水平最高的患者(8.8％)相比，硒蛋白P的最低四分位数内患者的一年死亡率更高(29.9％)。硒蛋白P水平与一年死亡率的关系示于图1中。
表2呈现了对一年死亡率的Cox回归分析，并且揭示，在粗略分析(HR 0.64；95％CI0.47-0.86；p＝0.003)中、模型1(HR 0.60；95％CI 0.45-0.81，p＝0.001)以及根据模型2(HR 0.65；95％CI 0.48-0.88；p＝0.005)针对BMI、SBP、吸烟、普遍的AF、普遍的糖尿病、经过对数转换的NT-proBNP和先前的HF的进一步调整中，硒蛋白P浓度每增加1SD与较低的一年死亡率风险相关联。硒蛋白P的C指数经计算为0.628(CI95％0.553-0.703)。将硒蛋白P添加到模型2的变量会将(经引导校正的)C指数从0.736增加到0.751(增加值的p为0.004)。
为了更好地说明，将硒蛋白P水平分为四分位数，并与一年死亡率相关联(表3)。四分位数分析揭示，在经过完全调整的模型2中，与Q4的受试者相比(四分位数之间差异的p为0.001)，硒蛋白P水平最低的四分位数(Q1)中的受试者的一年内死亡风险显著更高(HR4.13；CI95％1.64-10.4)。呈现硒蛋白P四分位数内的存活率的Kaplan Meier曲线呈现于图2中。
由于硒蛋白P的最低和最高四分位数之间存在性别差异，因此进行了相互作用分析。性别之间存在显著的相互作用，因此分别对每种性别进行了额外的分析。这些分析揭示，在整个群组中观察到的硒蛋白P水平与死亡率之间的关联主要是由男性驱动的(n＝208，45个事件，粗略HR 0.60；CI 95％0.44-0.82；p＝0.001)，而对于女性则未见显著关联(n＝92，11个事件，粗略HR 0.72；CI 95％0.35-1.52；p＝0.391)。
表4示出了用于确定一年死亡风险的具有相应灵敏度和特异性的示例性阈值。
硒蛋白P与30天再次住院风险
与硒蛋白P水平最高的患者(7.4％)相比，硒蛋白P的最低四分位数内患者的30天再次住院率更高(28.6％)。硒蛋白P水平与30天再次住院的关系示于图1中。
表2呈现了30天再次住院的Cox回归分析(n＝61)，并且揭示，在粗略分析(HR0.66；95％CI 0.50-0.87；p＝0.003)中、模型1(HR 0.67；95％CI 0.51-0.88，p＝0.004)以及根据模型2(HR 0.67；95％CI 0.51-0.89；p＝0.005)的进一步调整中，硒蛋白P浓度每增加1SD与较低的纳入研究后30天内再次住院风险相关联。硒蛋白P的C指数经计算为0.617(CI95％0.552-0.682)。将硒蛋白P添加到模型2中的变量会将C指数从0.567增加到0.627(增加值的p为0.004)。模型2的引导校正的C指数为0.48(由于其他变量均无助于预测，因此罚分较大并且使C指数低于0.5)。添加硒蛋白P可将引导校正的C指数提高至0.547(仍小于单独硒蛋白P，这是由于添加了9个没有预测能力的变量的罚分)。
此外，将硒蛋白P水平分为四分位数，并与30天再次住院相关联(表3)。四分位数分析揭示，在经过完全调整的模型2中，与Q4的受试者相比(四分位数之间差异的p为0.004)，硒蛋白P水平最低的四分位数(Q1)中的受试者在纳入研究后30天内再次住院风险显著更高(HR4.29；CI95％1.59-11.6)。呈现硒蛋白P四分位数内再次住院的Kaplan Meier曲线呈现于图3中。
由于硒蛋白P的最低和最高四分位数之间存在性别差异，因此进行了相互作用分析。性别之间存在显著的相互作用，因此分别对每种性别进行了额外的分析。这些分析揭示，在整个群组中观察到的硒蛋白P水平与30天再次住院之间的关联主要是由男性驱动的(n＝205，39个事件，粗略HR 0.68；CI 95％0.49-0.93；p＝0.017)，而对于女性则未见显著关联(n＝90，22个事件，粗略HR 0.65；CI 95％0.38-1.11；p＝0.116)。
表5示出了用于确定30天再次住院风险的具有相应灵敏度和特异性的示例性阈值。
硒蛋白P与复合终点(30天内再次住院或死亡)
与硒蛋白P水平最高的患者(7.4％)相比，硒蛋白P最低四分位数内的患者在纳入研究后30天内死亡或再次住院的频率更高(32.4％)。硒蛋白P水平与死亡或再次住院的复合终点的关系示于图1中。
表2呈现了硒蛋白P与复合终点(68个事件)之间的关联的Cox回归分析，并且揭示，在粗略分析(HR 0.64CI95％0.49-0.83，p＝0.001)中、模型1(HR 0.65；CI95％0.50-0.85；p＝0.001)以及根据模型2(HR 0.66；0.51-0.86；p＝0.002)针对BMI、SBP、吸烟、普遍的AF、普遍的糖尿病、经过对数转换的NT-proBNP和先前的HF的进一步调整中，硒蛋白P浓度每增加1SD与较低的30天内死亡或再次住院风险相关联。硒蛋白P的C指数经计算为0.622(CI95％0.562-0.681)。将硒蛋白P添加到模型2中的变量会将C指数从0.584增加到0.632(增加值的p为0.002)。模型2的引导校正的C指数为0.507(因为所有变量均无助于预测)。添加硒蛋白P可将引导校正的C指数提高到0.561(由于添加9个没有预测能力的变量的罚分，因此仍小于单独的硒蛋白P)。
此外，将硒蛋白P水平分为四分位数，并与30天内的死亡或再次住院相关联(表3)。四分位数分析揭示，在经过完全调整的模型2中，与Q4的受试者相比(四分位数之间差异的p<0.002)，硒蛋白P水平最低的四分位数(Q1)中的受试者的30天内死亡或再次住院风险显著更高(HR 4.80；CI95％1.80-12.8)。呈现硒蛋白P的四分位数内的存活率的Kaplan Meier曲线呈现于图4中。
基于后果的各组中硒蛋白P的分布[A)没有再次住院/幸存者；B)再次住院/幸存者；C)没有再次住院/死亡，以及D)再次住院和死亡]呈现于图1中。
住院时间
对硒蛋白P和住院时间长度进行了进一步分析，其中在粗略分析(β-0.95、p<0.001)中、模型1(β-1.04，p<0.001)和模型2(β-0.96，p<0.001)中，硒蛋白P水平每增加1SD与较短的住院时间相关。
讨论
这项前瞻性研究表明，低的血浆硒蛋白P水平与较低的健康相关的生活质量、较高的一年死亡风险、较高的30天再次入院风险以及较长的因新诊断或恶化的急性心力衰竭而入院后的住院时间相关。充血性心力衰竭(大多数心脏疾病的常见后果)的发病率在全世界范围内稳步增加，这可能是由于充血性心力衰竭存活率提高和人口老龄化所致(Savarese和Lund 2017)。
由于计划外的因充血性心力衰竭恶化而再次住院的预后不良(Ponikowski,Voors等人,2016)、生活质量低下(Hobbs,Kenkre等人,2002)以及给社会带来的经济负担(Writing Group,Mozaffarian等人,2016)，使心力衰竭的治疗优化成为当务之急。迄今为止，尚未提出研究来检查心力衰竭群体中硒缺乏(以低循环水平的硒蛋白P衡量)与例如死亡率和再次住院的后果之间的关联。
在25种硒蛋白中，硒蛋白P被认为充当硒转运蛋白并且在硒的代谢和储存中是必不可少的(Saito和Takahashi 2002；Labunskyy,Lee等人,2011)。在人类中，硒蛋白P的水平与血清硒水平相关(Andoh,Hirashima等人,2005)，并且可用作硒营养状态的指标(Burk和Hill 2009)。硒是一种必需的微量元素，它参与细胞还原-氧化状态和免疫系统的控制(McKenzie,Rafferty等人,1998；Arthur,McKenzie等人,2003；Huang,Rose等人,2012)，以及被认为对身体的抗氧化防御机制至关重要(Ahrens,Ellwanger等人,2008)。已经提出增加的氧化应激导致充血性心力衰竭的发病机理(Givertz和Colucci 1998；Keith,Geranmayegan等人,1998；Mallat,Philip等人,1998；Singal,Khaper等人,1998；Munzel和Harrison 1999；de Lorgeril和Salen 2006)，并且表明硒参与了心血管系统的氧化损伤保护(Blankenberg,Rupprecht等人,2003；Akbaraly,Arnaud等人,2005；Ray,Semba等人,2006；Joseph和Loscalzo 2013)。早在1982年，就观察到低血清硒水平与心肌梗塞和心血管病死亡之间的关联(Salonen,Alfthan等人,1982)。但是，血清硒很可能无法衡量人体中的硒状态，而硒蛋白P已被证明是硒状态的有效生物标志物(Ashton,Hooper等人,2009)。在人类中，已证明硒蛋白P在2型糖尿病或糖尿病前期以及超重和肥胖受试者中升高(Yang,Hwang等人,2011)，并且表明硒蛋白P表达水平在具有2型糖尿病的受试者中剧烈上调(Misu,Takamura等人,2010)。考虑到糖尿病和胰岛素抵抗是轻度炎症和氧化应激的状态，因此尚无任何研究能够得出结论：糖尿病和糖尿病前期中硒蛋白P升高是风险因素还是补偿机制。我们的所有分析均针对糖尿病进行了调整，这暗示着硒蛋白P与低的生活质量、一年死亡率和再次住院的关联与糖尿病状态无关。
在心血管疾病中，硒缺乏导致大鼠心肌缺血再灌注后更大的心肌损伤(Venardos,Harrison等人,2004)，数据与其他研究的结果一致(Pucheu,Coudray等人,1995；Toufektsian,Boucher等人,2000；Tanguy,Toufektsian等人,2003)。此外，摄入大量硒的大鼠表现出梗塞面积缩小，心脏功能恢复改善和室性心律不齐的发生率降低(Tanguy,Boucher等人,1998；Tanguy,Morel等人,2004；Rakotovao,Tanguy等人,2005；Tanguy,Rakotovao等人,2011)。这些发现可能充当对我们研究结果的合理解释，这是由于所有心力衰竭病例中的大多数(在美国>50％)(Gheorghiade和Bonow 1998)是由潜在的冠状动脉疾病引起的(主要在男性中)。在我们的群组中，我们缺乏关于受试者心力衰竭病因的完整数据，因此不能分析硒缺乏与不同诱发病因的关联。
在分析硒蛋白P与一年死亡率以及30天再次住院的风险和通过KCCQ测量的生活质量的关联时，观察到与性别的相互作用。然后分别对每种性别进行灵敏度分析，揭示观察到的关联主要是由男性受试者驱动的。然而，鉴于女性中事件的发生率较低，需要非常谨慎地解释这些数据。
尽管研究已经确定了人体中广泛的硒依赖性功能，但硒补充在心血管疾病中的作用仍然不确定(Flores-Mateo,Navas-Acien等人,2006；Rees,Hartley等人,2013)。迄今为止，尚无关于急性心力衰竭群体中硒补充对后果影响的研究，唯一的例外是Keshans病(McKeag,McKinley等人,2012)。我们的发现促使进行研究来探索硒补充对心力衰竭后果的影响。
这项研究既有优势又有局限性。由于我们连续纳入了因新发或恶化的心力衰竭而入院的患者，其中无法表达同意接受研究的患者作为唯一排除标准，因此我们很可能模拟了代表性的心力衰竭群体。
所有分析均针对临床相关风险因素进行了调整，因此我们认为数据表明，硒缺乏可预示在充血性心力衰竭情形中后果不良。我们的数据是在单个区域中心收集的，这限制了对其他群体的适用性。此外，样本量相对较小并且需要在更大的群组中将结果复制。另外，在HARVEST-中包括的受试者主要来自瑞典后裔，并且得出的结论可能无法推广到所有血统。
结论
这项研究将硒蛋白P鉴定为AHF中后果不良的新型标志物，并鼓励未来的研究检查补充硒是否可以改善CAHF患者中的预后。
表1：硒蛋白P的四分位数内的研究群体的特征
值是在整个群体中以及在硒蛋白P的四分位数内的平均值±标准差(SD)或中值(四分位数间范围(25-75))。BMI＝体重指数；KCCQ＝堪萨斯城心肌病问卷；NT-proBNP＝脑利钠肽的N末端激素原；SBP＝收缩压；AF＝心房颤动；CHF＝充血性心力衰竭；SePP＝硒蛋白P；Q1＝最低SePP水平的四分位数；Q4＝最高SePP水平的四分位数。
表2：硒蛋白P与一年死亡率、30天再次住院和重大不良后果的风险之间的关联
值为危险比(HR)和95％置信区间。BMI＝体重指数；SBP＝收缩压；AF＝心房颤动；CHF＝充血性心力衰竭，SePP＝硒蛋白P。复合终点定义为纳入研究后30天内死亡或再次住院，以先到者为准。模型1已针对年龄和性别进行调整。模型2已针对年龄、性别、体重指数、收缩压、经过对数转换的NT-proBNP、吸烟、普遍的心房颤动、普遍的糖尿病和先前的CHF进行调整。
表3：硒蛋白P与一年死亡率和30天再次住院相关的四分位数分析
值为与一年内死亡率相关的硒蛋白P四分位数的危险比(HR)和95％置信区间(95％CI)。Q1＝硒蛋白P的最低水平的四分位数；Q4＝硒蛋白P的最高水平的四分位数。模型1已针对年龄和性别进行调整。模型2已针对年龄、性别、体重指数、收缩压、经过对数转换的NT-proBNP、吸烟、普遍的心房颤动、普遍的糖尿病和先前的CHF进行调整。四分位数内的硒蛋白P水平：Q1(1.8±0.4)；Q2(2.6±0.2)；Q3(3.4±0.2)Q4(4.7±0.8)。
表4：具有相应灵敏度和特异性的一年死亡率的硒蛋白P阈值的接受者工作曲线(ROC)特征
SePP(mg/L)
特异性(％)
灵敏度(％)
2.0
87.6
27.8
2.3
77.6
42.6
2.6
62.7
50.0
3.0
53.1
64.8
3.3
43.2
79.6
3.8
25.7
88.9
4.4
14.5
90.7
表5：具有相应灵敏度和特异性的30天再次住院的硒蛋白P阈值的接受者工作曲线(ROC)特征
SePP(mg/L)
特异性(％)
灵敏度(％)
2.0
87.2
24.6
2.3
76.5
36.1
2.6
63.2
50.8
3.0
53.8
65.6
3.3
43.2
77.0
3.8
26.9
91.8
4.4
12.4
95.1
实施例3：MPP研究
研究说明
基于群体的预防项目(MPP)是基于瑞典单中心前瞻性群体的研究。在1974年至1992年之间，总共招募了来自市地区的33,346名具有相同种族背景的男性和女性，并筛选了全因死亡率和心血管疾病(CVD)的传统风险因素。有关基线程序的详细说明可见于其他地方(Fedorowski等人,2010.Eur Heart J 31:85-91；Berglund等人,1996.J Intern Med 239:489-97)。在2002年至2006年间，原始MPP群组的所有幸存者都应邀接受了重新检查。其中，有18,240名参与者(n＝6,682名女性)回应了邀请，并进行了重新检查，包括血液采样和立即-80℃储存EDTA血浆等分试样。2002-2006年的重新检查代表了当前研究的基线时间点。
18240名接受硒蛋白P检验的受试者中的5060名是随机样本(平均年龄69岁)。4366名受试者没有先前的CVD(心肌梗塞、中风和冠状动脉血运重建)。患者的平均随访时间为9.3年，其中死亡(n＝1111)、CVD死亡(n＝351)和首次CVD事件(n＝745)。如实施例1中所述，使用单克隆抗体通过已验证的ELISA免疫测定法测量硒蛋白P。所述群组的基线特征示于表6中。
表6：MPP研究群体的基线特征
变量
n＝4366
年龄
69.4(6.2)
性别男性
3008(68.9％)
目前吸烟
835(19.1％)
AHT
1476(33.8％)
HDL
1.4(0.4)
LDL
3.7(1.0)
BMI
27.1(6.2)
SBP
146.6(20.3)
普遍的糖尿病
466(10.7％)
死亡
1111(25.4％)
CVD死亡
351(8％)
首次CVD事件
745(17.1％)
SePP(mg/L)
5.5(范围0.4-20.0)
在9.3(8.3-11)年的中值(四分位数间范围)随访时间内，总共发生了1111例死亡。观察到硒蛋白P五分位数1中死亡数目最大(n＝314；3.7mg/L，范围在0.4至4.3mg/L之间)。在心血管病死亡(351个事件)和首次心血管事件(745个事件)风险的终点分析中观察到了相似的模式，硒蛋白P五分位数1的风险显著更高。
该健康群体中硒蛋白P的频率分布范围为0.4至20.0mg/L，中值浓度为5.5mg/L(图5A)。评估健康受试者发生首次心血管事件或心血管病死亡风险的硒蛋白P的阈值范围是4.0至5.5mg/L。当与来自MPP的健康群体相比时，心力衰竭群体的硒蛋白P浓度(HARVEST研究)是低得多的浓度，范围为0.8至6.9mg/L并且中值为3.0mg/L，其中大多数值远低于健康受试者的阈值(例如，97.3％的心力衰竭患者低于5.5mg/L，并且79.7％的心力衰竭患者低于4.0mg/L)(图5B)。心力衰竭患者的硒蛋白P浓度与具有发生心血管事件风险的健康患者可相提并论，因为这些心力衰竭患者已经遭受心血管事件(即心力衰竭)。令人惊讶地，并且根据本发明，心力衰竭患者中的低硒蛋白P浓度可进一步分为亚组，而根据本发明，心力衰竭患者中处于分布较低端的硒蛋白P浓度具有更高的例如心力衰竭恶化或因心力衰竭而导致再次住院或死亡的风险(参见实施例2)。
序列表
SEQ ID NO.1：包括信号序列的硒蛋白P(氨基酸1至381)
SEQ ID NO.2：分泌的硒蛋白P(氨基酸20至381)
SEQ ID NO.3：硒蛋白P(氨基酸20至346)
SEQ ID NO.4：硒蛋白P(氨基酸20至298)
SEQ ID NO.5：硒蛋白P(氨基酸20至299)
SEQ ID NO.6：硒蛋白P(氨基酸20至300)
SEQ ID NO.7：硒蛋白P(氨基酸20至301)
SEQ ID NO.8：硒蛋白P(氨基酸20至302)
SEQ ID NO.9：硒蛋白P(氨基酸20至303)
SEQ ID NO.10：硒蛋白P(氨基酸20至304)
SEQ ID NO.11：硒蛋白P(氨基酸20至305)
SEQ ID NO.12：硒蛋白P(氨基酸20至306)
SEQ ID NO.13：硒蛋白P(氨基酸1至235)
SEQ ID NO.14：硒蛋白P(氨基酸279至381)
SEQ ID NO.15：硒蛋白P(氨基酸312至381)
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序列表
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<130> S75273WO
<160> 15
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 381
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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<221> UNSURE
<222> (1)..(381)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
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<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
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Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa
275 280
<210> 7
<211> 282
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(282)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 7
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser Arg Leu Lys
65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
85 90 95
Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys
275 280
<210> 8
<211> 283
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(283)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 8
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser Arg Leu Lys
65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
85 90 95
Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys
275 280
<210> 9
<211> 284
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(284)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 9
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser Arg Leu Lys
65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
85 90 95
Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His
275 280
<210> 10
<211> 285
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(285)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 10
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
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65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
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Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys
275 280 285
<210> 11
<211> 286
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(286)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 11
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser Arg Leu Lys
65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
85 90 95
Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg
275 280 285
<210> 12
<211> 287
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(287)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 12
Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro Ala Trp Ser
1 5 10 15
Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser Val Thr Val
20 25 30
Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu Gln Ala Ser
35 40 45
Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly Tyr Ser Asn
50 55 60
Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser Arg Leu Lys
65 70 75 80
Tyr Thr His Leu Lys Asn Lys Val Ser Glu His Ile Pro Val Tyr Gln
85 90 95
Gln Glu Glu Asn Gln Thr Asp Val Trp Thr Leu Leu Asn Gly Ser Lys
100 105 110
Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val Tyr His Leu
115 120 125
Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu Glu Ala Ile
130 135 140
Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser Leu Thr Thr
145 150 155 160
Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala Thr Val Asp
165 170 175
Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu His His His
180 185 190
Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser Glu Asn Gln
195 200 205
Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro Thr His Pro Ala Pro Pro Gly Leu
210 215 220
His His His His Lys His Lys Gly Gln His Arg Gln Gly His Pro Glu
225 230 235 240
Asn Arg Asp Met Pro Ala Ser Glu Asp Leu Gln Asp Leu Gln Lys Lys
245 250 255
Leu Cys Arg Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr
260 265 270
Asp Ser Glu Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg His
275 280 285
<210> 13
<211> 235
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(235)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 13
Met Trp Arg Ser Leu Gly Leu Ala Leu Ala Leu Cys Leu Leu Pro Ser
1 5 10 15
Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Gln Ser Ser Leu Cys Lys Gln Pro Pro
20 25 30
Ala Trp Ser Ile Arg Asp Gln Asp Pro Met Leu Asn Ser Asn Gly Ser
35 40 45
Val Thr Val Val Ala Leu Leu Gln Ala Ser Xaa Tyr Leu Cys Ile Leu
50 55 60
Gln Ala Ser Lys Leu Glu Asp Leu Arg Val Lys Leu Lys Lys Glu Gly
65 70 75 80
Tyr Ser Asn Ile Ser Tyr Ile Val Val Asn His Gln Gly Ile Ser Ser
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Gly Ser Lys Asp Asp Phe Leu Ile Tyr Asp Arg Cys Gly Arg Leu Val
130 135 140
Tyr His Leu Gly Leu Pro Phe Ser Phe Leu Thr Phe Pro Tyr Val Glu
145 150 155 160
Glu Ala Ile Lys Ile Ala Tyr Cys Glu Lys Lys Cys Gly Asn Cys Ser
165 170 175
Leu Thr Thr Leu Lys Asp Glu Asp Phe Cys Lys Arg Val Ser Leu Ala
180 185 190
Thr Val Asp Lys Thr Val Glu Thr Pro Ser Pro His Tyr His His Glu
195 200 205
His His His Asn His Gly His Gln His Leu Gly Ser Ser Glu Leu Ser
210 215 220
Glu Asn Gln Gln Pro Gly Ala Pro Asn Ala Pro
225 230 235
<210> 14
<211> 103
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(103)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 14
Lys Arg Cys Ile Asn Gln Leu Leu Cys Lys Leu Pro Thr Asp Ser Glu
1 5 10 15
Leu Ala Pro Arg Ser Xaa Cys Cys His Cys Arg His Leu Ile Phe Glu
20 25 30
Lys Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser
35 40 45
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50 55 60
Cys Gln Xaa Arg Leu Pro Pro Ala Ala Xaa Gln Ile Ser Gln Gln Leu
65 70 75 80
Ile Pro Thr Glu Ala Ser Ala Ser Xaa Arg Xaa Lys Asn Gln Ala Lys
85 90 95
Lys Xaa Glu Xaa Pro Ser Asn
100
<210> 15
<211> 70
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> UNSURE
<222> (1)..(70)
<223> 在原始公开的序列中Xaa或单字母X表示硒代半胱氨酸(U)
<400> 15
Thr Gly Ser Ala Ile Thr Xaa Gln Cys Lys Glu Asn Leu Pro Ser Leu
1 5 10 15
Cys Ser Xaa Gln Gly Leu Arg Ala Glu Glu Asn Ile Thr Glu Ser Cys
20 25 30
Gln Xaa Arg Leu Pro Pro Ala Ala Xaa Gln Ile Ser Gln Gln Leu Ile
35 40 45
Pro Thr Glu Ala Ser Ala Ser Xaa Arg Xaa Lys Asn Gln Ala Lys Lys
50 55 60
Xaa Glu Xaa Pro Ser Asn
65 70