一种脐带血造血干细胞多室冻存方法
阅读说明：本技术 一种脐带血造血干细胞多室冻存方法 (Multi-chamber cryopreservation method for umbilical cord blood hematopoietic stem cells ) 是由 雒猛 楚中华 高峰 刘庆凯 李涛 王�忠 赵清刚 朱娜 刘锋 于 2021-08-19 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种脐带血造血干细胞多室冻存方法,其冻存方法包括如下步骤：一次转移、抽取、预冷、混匀留样、排气、二次转移和留样装存：步骤A.一次转移：将离心得到的脐带血造血干细胞转移到混匀袋结构中,混匀后留样并称重；步骤B.抽取：用注射器按信息终端数字抽取冷冻保护剂,冷冻保护剂是由右旋糖酐和二甲基亚砜1：1配制；然后与混匀袋结构相连；步骤C.预冷：把混匀袋结构与多室冷冻袋通过接口相连,并将其放入4℃预冷装置,整个流程一气呵成,采用多室冻存技术结合脐血造血干细胞扩增技术,使脐血多次利用成为可能。(The invention discloses a multi-chamber cryopreservation method for umbilical cord blood hematopoietic stem cells, which comprises the following steps: primary transfer, extraction, precooling, mixing uniformly and reserving samples, exhausting, secondary transfer and reserving samples for storage: step A, primary transfer: transferring the cord blood hematopoietic stem cells obtained by centrifugation into a mixing bag structure, mixing uniformly, reserving a sample and weighing; and B, extraction: and (3) extracting the cryoprotectant according to the number of the information terminal by using an injector, wherein the cryoprotectant is prepared from dextran and dimethyl sulfoxide 1: 1, preparation; then connecting with a mixing bag structure; step C, precooling: the structure of the mixing bag is connected with the multi-chamber freezing bag through the interface, and the mixing bag is placed in a pre-cooling device at 4 ℃, the whole process is completed at one step, and the multi-chamber freezing storage technology is combined with the cord blood hematopoietic stem cell amplification technology, so that the cord blood can be utilized for multiple times.)
技术领域
本发明涉及医疗领域，具体为一种脐带血造血干细胞多室冻存方法。
背景技术
最近几年，国外在脐带血扩增领域的研究突飞猛进；2012年以前主要是添加细胞因子、基质细胞或HOXB4(促进造血干细胞自我复制的一个基因)来支持扩增；从2013年开始，从改造HOXB4到发现各种新的小分子，各种新思路、新学说和新产品不断涌现；在2013-2017这五年中，平均每年有20项研究脐带血细胞扩增的临床试验。
而国内脐血库多采用单室冻存富集后的脐带血造血干细胞，造成一份脐血只能应用一次；鉴于此，针对上述问题深入研究，遂有本案产生。
发明内容
本发明为了弥补市场空白，提供了一种脐带血造血干细胞多室冻存方法。
本发明的目的在于提供一种脐带血造血干细胞多室冻存方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种脐带血造血干细胞多室冻存方法，其冻存方法包括如下步骤：一次转移、抽取、预冷、混匀留样、排气、二次转移和留样装存：
步骤A.一次转移：将离心得到的脐带血造血干细胞转移到混匀袋结构中，混匀后留样并称重；
步骤B.抽取：用螺口注射器抽取冷冻保护剂，冷冻保护剂是由右旋糖酐和二甲基亚砜1：1配制；然后与混匀袋结构相连；
步骤C.预冷：把混匀袋结构与多室冷冻袋通过接口相连，并将其放入4℃预冷装置；
步骤D.混匀留样：预冷完成后，使用注射泵将上述冻存保护剂注入混匀袋结构，边输注边摇匀，并冲洗管路；利用混匀袋结构相连螺口注射器抽出混匀袋内气体和少量血液，并在螺口注射器内留样进行终产品细菌检测；
步骤E.排气：使用多室冷冻袋相连的自带注射器将冰冻袋内气体抽出,使多室冷冻袋保持负压；
步骤F.二次转移：利用多室冷冻袋内负压将混匀袋内脐血转移至冰冻袋，并利用与多室冷冻袋相连的自带注射器调节使管路充盈；
步骤G.留样装存：热合多室冷冻袋管路留样，并装入铝盒中。
进一步的，步骤A中的一次转移阶段，旋开混匀袋第二接口处的旋帽，用注射器将转移袋内制备好的脐带血造血干细胞吸出，经混匀袋第二接口打入到混匀袋结构中，摇晃均匀后留样，并旋死旋帽，羟乙基淀粉添加量是：脐血体积：羟乙基淀粉的比值为5:1，离心工作分为三次进行，第一次离心温度设定为10℃，离心力为50g，离心时间为7min；第二次离心温度设定为10℃，离心力为420g，离心时间为7min；第三次离心温度设定为10℃，离心力为420g，离心时间为7min。
进一步的，步骤B中的抽取阶段，用螺口注射器按信息系统显示数字，抽取冷冻保护剂，旋开混匀袋第一接口插入上述的螺口注射器，旋开混匀袋第二接口与冷冻袋第一接口，然后把两者相连，冷冻袋第二接口有自带自带注射器，随之将整个系统放入预冷装置内，预冷至4℃。
进一步的，步骤D中的混匀留样阶段，在4℃环境下，把装有DMSO的螺口注射器安装在注射泵上，将混匀袋结构放置在摇床上，边注射边摇匀，冻存保护剂按1ml/min注入混匀袋，然后以43.11ml/min抽取/注入反复混匀4次，每次抽取注入量为15ml，DMSO注入完成后，用此螺口注射器将混匀袋结构中的空气和少量血液抽出，把螺口注射器正置，将管路内血液打回混匀袋结构，并在螺口注射器留样作细菌检测用，冻存保护剂DMSO终浓度为9.8％。
进一步的，步骤E中的排气阶段，关闭第一管夹、第二管夹，使用与多室冷冻袋相连的自带注射器将多室冷冻袋中空气抽出，关闭第三管夹，使多室冻存袋保持负压。
进一步的，所述步骤F中的二次转移阶段，打开第二管夹，将混匀袋结构中脐血转移至多室冷冻袋内部，然后用多室冷冻袋自带的自带注射器将多室冻存袋的气泡和混匀袋结构内残留血液抽出，将自带注射器倒置，把血液打回，并在多室冷冻袋和管路充盈后停止。
进一步的，所述步骤G中的留样装存阶段，将多室冷冻袋的管路热合并粘贴条码，多室冷冻袋与管路保持连接状态，整体装入铝盒中。
进一步的，所述多室冷冻袋端部通过接头与冷冻袋连通管连通设置，且冷冻袋连通管上安装有第一支管，冷冻袋连通管的端部通过混匀袋第二接口、冷冻袋第一接口与混匀袋连通管连通，混匀袋连通管的下端与混匀袋结构连通设置，同时混匀袋连通管的下方安装有第二支管，第二支管上安装有第一管夹，第一支管上安装有第三管夹，冷冻袋连通管的尾部安装有第二管夹，第一管夹、第二管夹和第三管夹均为输液软管用的流量调节器。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：用注射器将转移袋内制备好的脐带血造血干细胞吸出，经混匀袋第二接口打入到混匀袋结构中，摇晃均匀后留样，并旋死旋帽，羟乙基淀粉添加量是：脐血体积：羟乙基淀粉的比值为5:1，离心工作分为三次进行；冷冻保护剂添加过程利用混匀袋，避免了脐带血和冻存保护剂混匀时，局部保护剂浓度过高对细胞的杀伤；采用多室冻存技术结合脐血造血干细胞扩增技术，使脐血多次利用成为可能。
附图说明
图1为本发明结构的造血干细胞多室冻存装置示意图。
图中：1、混匀袋第一接口；2、混匀袋第二接口；3、冷冻袋第一接口；4、冷冻袋第二接口；5、第一管夹；6、第二管夹；7、第三管夹；8、多室冷冻袋；9、混匀袋结构；10、冷冻袋连通管；11、第一支管；12-1、螺口注射器；12-2、自带注射器；13、第二支管；14、混匀袋连通管。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
具体实施方式一：请参阅图1，本发明提供一种技术方案：一种脐带血造血干细胞多室冻存方法，其冻存方法包括如下步骤：一次转移、抽取、预冷、混匀留样、排气、二次转移和留样装存：
步骤A.一次转移：将离心得到的脐带血造血干细胞转移到混匀袋结构9中，混匀后留样并称重；
步骤B.抽取：用螺口注射器12-1抽取冷冻保护剂，冷冻保护剂是由右旋糖酐和二甲基亚砜1：1配制；然后与混匀袋结构9相连；
步骤C.预冷：把混匀袋结构9与多室冷冻袋8通过接口相连，并将其放入4℃预冷装置；
步骤D.混匀留样：预冷完成后，使用注射泵将上述冻存保护剂注入混匀袋结构9，边输注边摇匀，并冲洗管路；利用混匀袋结构9相连螺口注射器12-1抽出混匀袋内气体和少量血液，并在螺口注射器12-1内留样进行终产品细菌检测；
步骤E.排气：使用多室冷冻袋8相连的自带注射器12-2将冰冻袋8内气体抽出,使多室冷冻袋8保持负压；
步骤F.二次转移：利用多室冷冻袋8内负压将混匀袋9内脐血转移至冰冻袋8，并利用与多室冷冻袋8相连的自带注射器12-2调节使管路充盈；
步骤G.留样装存：热合多室冷冻袋8管路留样，并装入铝盒中。
具体实施方式二：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤A中的一次转移阶段，旋开混匀袋第二接口2处的旋帽，用注射器将转移袋内制备好的脐带血造血干细胞吸出，经混匀袋第二接口2打入到混匀袋结构9中，摇晃均匀后留样，并旋死旋帽，羟乙基淀粉添加量是：脐血体积：羟乙基淀粉的比值为5:1，离心工作分为三次进行，第一次离心温度设定为10℃，离心力为50g，离心时间为7mi n；第二次离心温度设定为10℃，离心力为420g，离心时间为7min；第三次离心温度设定为10℃，离心力为420g，离心时间为7min。
具体实施方式三：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤B中的抽取阶段，用螺口注射器12-1按信息系统显示数字，抽取冷冻保护剂，旋开混匀袋第一接口1插入上述的螺口注射器12-1，旋开混匀袋第二接口2与冷冻袋第一接口3，然后把两者相连，冷冻袋第二接口4有自带自带注射器12-2，随之将整个系统放入预冷装置内，预冷至4℃。
具体实施方式四：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤D中的混匀留样阶段，在4℃环境下，把装有DMSO的螺口注射器12-1安装在注射泵上，将混匀袋结构9放置在摇床上，边注射边摇匀，冻存保护剂按1ml/min注入混匀袋，然后以43.11ml/min抽取/注入反复混匀4次，每次抽取注入量为15ml，DMSO注入完成后，用此螺口注射器12-1将混匀袋结构9中的空气和少量血液抽出，把螺口注射器12-1正置，将管路内血液打回混匀袋结构9，并在螺口注射器12-1留样作细菌检测用，冻存保护剂DMSO终浓度为9.8％。
具体实施方式五：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤E中的排气阶段，关闭第一管夹5、第二管夹6，使用与多室冷冻袋8相连的自带注射器12-2将多室冷冻袋8中空气抽出，关闭第三管夹7，使多室冻存袋8保持负压。
具体实施方式六：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤F中的二次转移阶段，打开第二管夹6，将混匀袋结构9中脐血转移至多室冷冻袋8内部，然后用多室冷冻袋8自带的自带注射器12-2将多室冻存袋8的气泡和混匀袋结构9内残留血液抽出，将自带注射器12-2倒置，把血液打回，并在多室冷冻袋8和管路充盈后停止。
具体实施方式七：本实施方式为具体实施方式一的进一步限定，步骤G中的留样装存阶段，将多室冷冻袋8的管路热合并粘贴条码，多室冷冻袋8与管路保持连接状态，整体装入铝盒中。
具体实施方式八：本实施方式为具体实施方式七的进一步限定，多室冷冻袋8端部通过接头与冷冻袋连通管10连通设置，且冷冻袋连通管10上安装有第一支管11，冷冻袋连通管10的端部通过混匀袋第二接口2、冷冻袋第一接口3与混匀袋连通管14连通，混匀袋连通管14的下端与混匀袋结构9连通设置，同时混匀袋连通管14的下方安装有第二支管13，第二支管13上安装有第一管夹5，第一支管11上安装有第三管夹7，冷冻袋连通管10的尾部安装有第二管夹6，第一管夹5、第二管夹6和第三管夹7均为输液软管用的流量调节器。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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