一种真姬菇菌株
阅读说明：本技术 一种真姬菇菌株 (Hypsizigus marmoreus strain ) 是由 黄清华 陈长青 许喜佳 江萍 蒋小庆 尹军 王志学 严会 李挺 丁祥 于 2020-04-27 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种真姬菇菌株,所述真姬菇菌株为真姬菇XCXH-2,保藏编号为CCTCC M 2020068,保藏日期为2020年4月17日,保藏地址为湖北省武汉市武昌珞珈山,保藏单位为中国典型培养物保藏中心。本发明提供的真姬菇XCXH-2,发菌速度快于亲本菌株,单产高于亲本,品质优良,菇帽不易开伞、花纹清晰,菇柄白且粗壮保质期长、外形美观、味道鲜美,可集中栽培和重复栽培,稳定性强,生长整齐,可作为真姬菇工厂化生产企业的生产种源和科研单位的育种的优势种源。(The invention discloses a hypsizigus marmoreus strain, wherein the hypsizigus marmoreus strain is hypsizigus marmoreus XCXH-2, the preservation number is CCTCC M2020068, the preservation date is 2020, 4, 17 days, the preservation address is Wuchang Lojia mountain in Wuhan city, Hubei province, and the preservation unit is China center for type culture preservation. The hypsizigus marmoreus XCXH-2 provided by the invention has the advantages of higher spawning speed than that of parent strains, higher yield per unit than that of the parent strains, excellent quality, difficult umbrella opening of mushroom caps, clear patterns, white mushroom stems, sturdiness, long shelf life, attractive appearance, delicious taste, capability of centralized cultivation and repeated cultivation, strong stability and regular growth, and can be used as a production provenance of hypsizigus marmoreus industrial production enterprises and a breeding advantage of scientific research units.)
技术领域
本发明属于食用真菌株技术领域，尤其涉及一种真姬菇菌株。
背景技术
真姬菇是从日本引进的一种珍稀食用菌，又名:蟹味菇、海鲜菇、鸿喜菇、玉蕈，隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、白蘑科、离褶菌族、玉蕈属。据杨祝良报道,云南省也有野生的真姬菇,但目前各地栽培的真姬菇均为源自日本。
1972年，日本宝酒造株式会社人工栽培真姬菇首先成功，并取得专利权。自1973年开始在长野县投入生产，我国于80年代引种真姬菇，主要在山西、河北、河南、山东、福建进行小规模栽培，2001年开始上海、广东等地引进日本先进的成套自动化机械设备，进行工厂化真姬菇周年生产。
近20年来，国内各个真姬菇厂家的生产能力和技术水平都有了较大的提升，但是所使用的菌种，基本仍都来自于日本。因此，选育出一株具有显著特性且优质高产的真姬菇新菌株，提升真姬菇菌种研发的能力对目前各个厂家是至关重要的。
目前国内真姬菇厂家所使用的菌种，基本上都来自于日本，现使用的真姬菇优势菌种编号为wz-29、wz-65、wz-77；菌种wz-29出菇表现为品质佳，单产相对低；wz-65、wz-77出菇表现为单产相对高，菇帽有瘤盖且保质期短，品质相对差；因此，需要选育具有自主知识产权的优质高产的新的真姬菇菌株。
发明内容
本发明目的是提供了一种真姬菇菌株，通过杂交育种方法，得到品质优良、外形美观、味道鲜美、稳定性强、生长整齐的真姬菇菌株，该真姬菇菌株遗传稳定性好，可集中栽培和重复栽培。
为了达到上述技术目的，本发明提供的技术方案为：
本发明提供一种真姬菇菌株，所述真姬菇菌株为真姬菇XCXH-2(Hypsizygusmarmoreus XCXH-2)，保藏编号为CCTCC M2020068，保藏日期为2020年4月17日，保藏地址为湖北省武汉市武昌珞珈山，保藏单位为中国典型培养物保藏中心。
所述真姬菇XCXH-2的菌盖呈半圆形，菌盖中间区域为灰褐色斑纹，菌盖外围颜色为灰黄色；菇帽斑纹清晰，菇柄色泽白，菇柄直径范围为1.5-2.7厘米。
所述真姬菇XCXH-2的平均单产不低于300g/株。
所述真姬菇XCXH-2的菌丝生长速度平均为0.6厘米/天。
所述真姬菇XCXH-2在冷藏条件下保鲜期长达60天。
真姬菇XCXH-2有较好的形态学性状：具有饱满的菌柄和菇盖，好看的斑纹和优良的品质，贮存时间长，菇柄颜色纯正，明显优于亲本菌株。
真姬菇XHXC-2栽培特性如下：菌盖呈半圆形，菌盖中间区域为茶褐色斑纹，菌盖外围颜色为灰黄色；除了菌盖边缘处，斑纹布满菌盖分布，菌褶生长标准，颜色为白色；菌柄白色、中生、无被毛、中粗。
本发明通过杂交育种的方法，人工选育出了一株具有多种优良性状的真姬菇XCXH-2，比亲本高产，品质优良保质期长、外形美观、味道鲜美，可集中栽培和重复栽培，稳定性强，生长整齐，可作为真姬菇工厂化生产企业的生产种源和科研单位的育种的优势种源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为引物ISSR10的扩增电泳图谱，M为2000bp DNA ladder，1为WB-86，2为WB-96，3为XCXH-2；
图2为引物ISSR23的扩增电泳图谱，M为2000bp DNA ladder，1为WB-86，2为WB-96，3为XCXH-2；
图3为引物S42的扩增电泳图谱，M为2000bp DNA ladder，1为WB-86，2为WB-96，3为XCXH-2；
图4为引物S338的扩增电泳图谱，M为2000bp DNA ladder，1为WB-86，2为WB-96，3为XCXH-2；
图5为供试菌株拮抗实验结果；
图6为真姬菇XCXH-2采收期照片。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明的各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和生物材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实施例1
(1)单孢杂交
本发明选用六种国内的真姬菇品种(wz-29、wz-65、wz-77、WB-19、WB-86、XCHW-1，以上真姬菇菌种均可通过商业渠道购买)进行孢子收集，通过稀释涂布进行单孢挑取，通过镜检观察无锁状联合确定为单孢。以单孢wz-29作为父本，单孢wz-65、wz-77、WB-19、WB-86、XCHW-1作为母本进行杂交育种，最后通过对选育成功的各杂合子出菇结果，选出wz-29与WB-86杂交的既无瘤盖且单产高的新的真姬菇菌株，编号为真姬菇XCXH-2。
(2)真姬菇XCXH-2的特性研究
ISSR与RAPD鉴定
实验培养基配制方法如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，加水定容至1L；CYM培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，硫酸镁1.5g，磷酸二氢钾3g，维生素B10.1g，加水定容至1L。
菌丝培养：将供试菌株(如表1所示)从试管转接于平板活化，放置20℃恒温培养箱培养13-15d，活化菌丝后，挑取菌丝，挑取过程中应尽量避免挑取到培养基，以免造成实验误差，提取的菌丝放置于1.5mL离心管中以备用。
表1供试菌株
菌株DNA提取：参考Magen公司的HiPure Fungal DNA Kit(100mg)真菌DNA提取试剂盒(广州美基生物科技有限公司，编号D3171-02)说明书。
ISSR与RAPD标记扩增：所用引物如表2所示，反应体系如表3所示，ISSR-PCR扩增反应程序：95℃预变性5min；94℃变性30s，42℃～45℃退火1min，72℃延伸1.5min，45个循环；最后72℃补平10min，停止温度22℃。RAPD-PCR扩增反应程序：95℃预变性5min；94℃变性30s，35℃～38℃退火1min，72℃延伸1.5min，45个循环；最后72℃补平10min，停止温度22℃。
表2 ISSR-PCR和RAPD-PCR引物序列
表3 ISSR和RAPD的PCR反应体系
扩增产物检测：取5μL扩增产物点样于1.2％琼脂凝胶上，用DL2000 Marker做为指示条带，电泳缓冲液为1×TAE，设置电泳仪电压120～150V，电流100A，电泳20～40min，凝胶成像系统上拍照并保存。
ISSR与RAPD结果分析:利用亲本菌株WZ-29和WB-86杂交得到菌株XCXH-2，利用ISSR和RAPD分子标记法对菌株XCXH-2进行鉴定，筛选两种分子标记所用到的引物，扩增得到具稳定性和多态性的引物和电泳图，如图1-4所示；从图1可以看出，菌株WB-86和WZ-29在引物ISSR10的特有条带分别为A-1和A-2；在菌株XCXH-2中，并无出现A-1及A-2。在图2中，菌株WB-86和WZ-29在引物ISSR23的特有条带分别为B-1和B-2；而在菌株XCXH-2中，出现条带和B-2一样的条带B-3，但并无出现和B-1相同的条带。图3中，菌株WB-86和WZ-29在引物S42的特有条带分别为C-1，C-2；在菌株XCXH-2并无出现C-1，C-2，出现另一条带C-3，证明杂交菌株XCXH-2区别于菌株WB-86和WZ-29。在图4中，菌株WB-86和WZ-29在引物S388的特有条带分别为D-1，D-2；在菌株XCXH-2具有D-2相同的条带D-3，但不具有WZ-29的特异条带。
ISSR与RAPD检测分析结论：筛选到的4个引物ISSR10、ISSR23、S42和S388，根据扩增图谱综合分析，表明杂交菌株XCXH-2与亲本菌株WB-86和WZ-29存在遗传差异性，杂交菌株XCXH-2与亲本菌株WB-86和WZ-29相比，属于不同的菌株。
实施例2
(1)菌丝生长情况
在酒精灯形成的无菌区范围内，用灼烧冷却后的接种针刮去试管前端1厘米处的薄弱菌丝及趴壁菌丝，选用前端及后端偏上的部分切割成3*3mm大小均匀的小块，放入平皿，两菌块相距4cm，接种完成后，在转接的平皿上标好批次，用保鲜袋包好放入筐中，用报纸遮好后放入生化培箱培养，培养温度为21℃。在培养过程中，每天测量并记录菌落直径，观察菌丝形态、色泽及长势；待菌丝长满平皿时，结束培养。计算菌丝生长速度，计算公式为：菌丝生长速度(cm/d)＝菌落直径(cm)/生长天数(d)；
菌丝生长情况如表4所示：
表4不同菌株菌丝生长情况
备注：平均(cm)为菌丝生长速度。
由表4可以看出，XCXH-2菌株，与亲本WB-86和亲本WZ-29相比，菌丝生长速度明显优于亲本。
(2)拮抗实验
在酒精灯形成的无菌区范围内，用灼烧冷却后的接种针刮去试管前端1厘米处的薄弱菌丝及趴壁菌丝，选用前端及后端偏上一段的部分切割成3*3mm大小均匀的小块，两菌块相距4cm，放在平皿，接种完成后，在转接的平皿上标好批次，用保鲜袋包好放入筐中，用报纸遮好后放入生化培箱培养，温度为21℃，观察拮抗情况，结果如图5所示。
由图5可以看出：XCXH-2与亲本菌株之间均有拮抗反应，说明XCXH-2菌株为新品种，与亲本相比，XCXH-2菌丝长势及活力相对于亲本菌株均具有明显优势。
(3)瓶栽培养特征
培养基为混合木屑培养基，瓶子容积为1170cc。培养基选用阔叶树木屑、玉米芯、棉籽壳、米糠和麸皮，各组分配比为4:1:1:1:1，含水量为65％。配制好的培养基在121℃下灭菌120分钟，之后冷却至20℃，进行接种，于20-25℃下培养70-90天后进行搔菌，在温度为15-18℃，湿度为90-98％的环境下进行催蕾，现蕾后在温度为15-17℃，湿度为90-95％，光强为100Lx的条件下进行培养，菇盖即将开伞时进行采收。
XHXC-2菌株的栽培特性如下：菌盖成半圆形，中间为茶褐色斑纹，外围颜色为灰黄色；斑纹除了菌盖边缘均有分布，菌褶生长标准，颜色为白色；菌柄白色、中生、无被毛、中粗；平均采收单产为323.1g。
XHXC-2菌株外观特征如图6所示，亲本与杂合子的品种特征对比如表5所示：
表5 XCXH-2菌株、WZ-29和WB-86的子实体外观特性
从图6和表5中可以看出，与亲本相比，XCXH-2菌株有较好的形态学性状，具有饱满的菌柄和菇盖，更加漂亮的斑纹和优良的品质。
实施例3
保鲜测试
XCXH-2菌株生育第23天采收24朵，包装车间切根装盒，电子称称重，控制盒装重量在150g-160g，盒装机器过塑包装，包装车间温度在14-16℃，包装时间1小时。
包装完成的盒装菇泡沫箱装好，透明胶带封箱后放置在冷库留样架，库房温度设置为2-4℃。每隔一周拆袋记录菇帽与菇柄的色泽、新鲜度、气味、菇质情况，结果如表6所示。
表6不同保鲜天数的XCXH-2的保鲜情况
实施例4
感官测试
取采收期的XCXH-2、WZ-29和WB-86各200g，沸水处理去生菇味，捞出控水，用葱花和植物油清炒，放盐进行调味，得到清炒菌菇。请40个人进行盲吃(在不告知食用对象的情况下进行食用)，对清炒菌菇的美味、库位和坚硬度进行感官评价并打分，结果见表7。
表7不同菌株的感官测试
由表7可知，相比亲本WZ-29和WB-86，XCXH-2菌株清炒后具有更好的口感，美味清脆，无苦味。
综上所述，XCXH-2菌株与其亲本有明显区别，是一个新的真姬菇菌株，并且具有独特的形态学特性(菇帽颜色斑纹具有美感，较白的菇柄)，菌株性状稳定，可进行重复栽培，单产高，品质好。
以上结合实验数据对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
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