一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法及应用
阅读说明：本技术 一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法及应用 (Construction method and application of Drosophila model of Alzheimer's disease ) 是由 孙艺昊 邱宇 徐清波 雒晶晶 薛雷 于 2021-07-23 设计创作，主要内容包括：本发明属于动物模型构建技术领域,公开了一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法及应用。该阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法,包括以下步骤：以果蝇为模式动物,在翅神经元中过表达APP基因,并使用荧光蛋白对所述翅神经元进行标记,构建得到所述阿尔兹海默病果蝇模型。经所述构建方法得到的阿尔兹海默病果蝇模型可被应用于AD发病机理研究和药物筛选,能够方便地进行活体观察,操作简单,且不会影响动物的存活情况。(The invention belongs to the technical field of animal model construction, and discloses a construction method and application of an Alzheimer disease drosophila model. The construction method of the Alzheimer disease drosophila model comprises the following steps: and (3) overexpressing an APP gene in a wing neuron by taking the drosophila as a model animal, and marking the wing neuron by using fluorescent protein to construct and obtain the model of the drosophila of the Alzheimer disease. The Drosophila model of Alzheimer's disease obtained by the construction method can be applied to research on pathogenesis of AD and drug screening, living body observation can be conveniently carried out, operation is simple, and survival conditions of animals cannot be influenced.)
技术领域
本发明属于动物模型构建技术领域，尤其涉及一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法及应用。
背景技术
阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease，AD)是一种临床常见的中枢神经系统变性疾病，患者的典型特征是记忆和其他认知功能的渐进性丢失，会对老年人的身心健康造成严重危害，该疾病已成为仅次于心脏病、恶性肿瘤和中风的第4位导致老年人死亡的病因。且阿尔兹海默病目前还缺乏有效治疗手段，因而该疾病已成为老年医学中最麻烦和亟待解决的问题之一。
目前AD的发病机制学说众多，如淀粉样蛋白(Aβ)假说，tau蛋白假说，线粒体级联假说，神经炎症假说，自由基损伤学说、胆碱能学说、钙平衡失调学说、兴奋性氨基酸毒性学说等，但其根本病因和发病机制还尚未明确。其中最倍受关注的是Aβ假说：Aβ(淀粉样蛋白)是由蛋白酶水解APP(淀粉样前体蛋白)产生的含有37-44 个氨基酸的短肽，当APP剪切形成大量的非可溶性Aβ42时，聚集态的Aβ42会干扰神经元的功能，最终引发阿尔兹海默病。APP的异常表达和代谢可能与AD病人的发病有着密切的关系。
但目前所构建的阿尔兹海默病动物模型通常为毒性模型，随着年龄的增长会严重影响到动物的存活情况，同时不利于活体观察病理过程。因此，缺少更合适的阿尔兹海默病动物模型，已成为制约抗AD药物筛选和发病机制研究的瓶颈。
基于此，本发明希望提供一种更有效的阿尔兹海默病动物模型的构建方法，为进一步开展AD发病机理、药物筛选等方面的研究奠定基础。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法，经所述构建方法得到的阿尔兹海默病果蝇模型可被应用于AD发病机理研究和药物筛选，能够进行活体观察，且不会影响动物的存活情况。
本发明提供一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：
以果蝇为模式动物，在翅神经元中过表达APP基因，并使用荧光蛋白对所述翅神经元进行标记，构建得到所述阿尔兹海默病果蝇模型。
有研究表明，神经轴突退化是急性神经损伤和许多人类神经退行性疾病的显著病理特征之一，神经退行性疾病的部分临床症状是神经轴突的退化变性导致。因此，研究轴突退化与神经退行性疾病之间的联系，有助于我们更好地了解神经退行性疾病的发病机理，并为这些疾病的治疗提供新的参考依据。本发明通过在翅神经元中过表达 APP基因(阿尔兹海默病的致病基因)，发现其能够造成翅膀神经元的轴突退化，形成轴突退化模型。
此外，由于果蝇翅膀边缘的神经元组成简单，由机械感觉神经元和化学感觉神经元组成，这些神经元感知外界信息后，可通过轴突将神经信号传入中枢神经-胸腔神经节(ganglion)中，这些神经元的轴突经延伸在翅膀的arch区域汇聚成一束神经束，由于arch区域无胞体结构，因此可作为观察轴突变化的理想区域；其次，果蝇翅膀通透性强，便于观察其翅膀边缘的亚显微结构；同时果蝇的翅膀方便进行摘取，可直接制片观察。因而，本发明通过在果蝇的翅神经中过表达APP基因的基础上还进行荧光蛋白的标记，使其更便于进行活体观察，且果蝇翅膀的轴突退化不影响果蝇的存活，可以连续记录不同年龄段果蝇翅轴突的变化情况。
试验表明，经所述构建方法构建得到的果蝇模型随着年龄的增长，其翅神经元的轴突退化表型加剧，轴突碎片化程度加重，说明轴突退化表型与果蝇年龄表现出相关性，这一表型既符合阿尔兹海默病(AD)发病与年龄密切相关的特点，又在果蝇神经系统中模拟了阿尔兹海默病的病理特征。同时，对构建得到的果蝇模型采用对阿尔兹海默病有治疗和改善作用的药物成分进行处理，结果显示该果蝇模型的轴突退化表型得到缓解。以上结果表明，本发明所构建的阿尔兹海默病果蝇模型可充分模拟阿尔兹海默病的病理特征，可被应用于进行抗AD药物筛选和致病机理的研究。
优选的，编码所述荧光蛋白的基因位于Ⅱ号染色体上，所述APP基因位于Ⅲ号染色体上。
优选的，所述荧光蛋白选自红色荧光蛋白、绿色荧光蛋白、黄色荧光蛋白或青色荧光蛋白中的其中一种。相较于其他标记手段，荧光蛋白标记的操作性更好，且标记效果良好。
更优选的，所述荧光蛋白为红色荧光蛋白mCD8-mCherry。为了实现更好的标记效果，可使用细胞膜定位的红色荧光蛋白(mCD8-mCherry)标记果蝇翅膀边缘的神经元。
进一步优选的，所述构建方法包括以下步骤：
(1)构建基因型为dpr-Gal4，UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb的果蝇品系A；和，构建基因型为Sp/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的果蝇品系B；
(2)将所述果蝇品系A与所述果蝇品系B进行杂交，构建得到基因型为dpr-Ga l4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的果蝇品系，即为所述阿尔兹海默病果蝇模型。
采用上述构建方法，可构建得到能够稳定遗传的阿尔兹海默病果蝇模型品系
所述果蝇品系A的构建方法，包括以下步骤：
(A1)将dpr-Gal4品系果蝇与UAS-mCD8-mCherry品系果蝇进行杂交，从子代中挑选基因型为dpr-Gal4/UAS-mCD8-mCherry；+/+的处女蝇；
(A2)将所述基因型为dpr-Gal4/UAS-mCD8-mCherry；+/+的处女蝇与Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系雄果蝇进行杂交，从子代中挑选基因型为dpr-Gal4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；TM6b-Tb/+的雄果蝇；
(A3)将所述基因型为dpr-Gal4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；TM6b-Tb/+的雄果蝇与Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系处女蝇进行杂交，从子代中挑选基因型为dpr- Gal4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb的果蝇构建成为果蝇品系。
进一步优选的，所述dpr-Gal4品系果蝇选用处女蝇。
进一步优选的，所述UAS-mCD8-mCherry品系果蝇选用雄果蝇。
进一步优选的，步骤(A2)中采用体视荧光显微镜进行所述挑选。
所述果蝇品系B的构建方法，包括以下步骤：
(B1)将Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系的处女蝇与UAS-APP品系的雄果蝇品系进行杂交，从子代中挑选基因型为+/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的雄果蝇；
(B2)将所述基因型为+/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的雄果蝇与Sp/SM6a-Cy o；sb/TM6b-Tb品系的处女蝇进行杂交，得到基因型为Sp/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b- Tb的果蝇品系。
本发明还提供了所述阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法在药物筛选或致病机理研究中的应用。由于本发明所构建的阿尔兹海默病果蝇模型可充分模拟阿尔兹海默病的病理特征，能够进行活体观察，且不会影响动物的存活情况，因而可被应用于进行抗AD药物筛选和致病机理的研究。
相对于现有技术，本发明的有益效果如下：
本发明通过果蝇在翅神经元中过表达致病基因APP，使用荧光蛋白对所述翅神经元进行标记，并最终构建得到可稳定遗传的阿尔兹海默病果蝇模型。该阿尔兹海默病果蝇模型可方便直接进行活体成像观察，且果蝇翅神经处的轴突退化不会影响果蝇的存活，因而可连续记录不同年龄段果蝇翅轴突的变化情况，十分有利开展AD致病机理的研究以及对抗AD药物的筛选。
附图说明
图1表示红色荧光蛋白标记的翅膀边缘神经元的显微观察图；其中A为翅膀边缘神经元分布情况的示意图，方框内为主要观察区域；B为A中方框放大后显示的图片；
图2表示不同年龄段各基因型果蝇中轴突退化情况；其中A-C为3天龄果蝇轴突退化情况，D-F为15天龄果蝇轴突退化情况，G-I为30天龄果蝇轴突退化情况，J 为对各基因型果蝇中轴突退化等级数据的统计分析结果；ns代表P>0.05；*表示 P<0.05；****表示P<0.0001，各基因型拍摄翅膀数不少于15只；
图3表示果蝇轴突退化变性评估系统；其中A表示远端神经元轴突呈现完整、光滑和连续的纤维状结构，等级为“0”；B表示远端神经轴突出现珠状(beading)，等级为“1”；C表示神经轴突大量片段化，等级为“2”；D表示神经轴突出现聚集性斑块，轴突不连续，等级为“3”；E表示神经轴突结构彻底被破坏，mCD8-mCherry荧光信号大量丢失，等级为“4”；
图4表示下调β-分泌酶和γ-分泌酶对APP引起的轴突退化的影响；其中A-D为 3天龄各基因型果蝇轴突退化情况，E-H为15天龄各基因型果蝇轴突退化情况，I-L 为30天龄各基因型果蝇轴突退化情况，M为图A-L中各基因型果蝇的轴突退化等级情况统计图；ns代表P>0.05；**表示P<0.01；****表示P<0.0001，各基因型拍摄翅膀数不少于15只；
图5表示细胞凋亡对APP诱导轴突退化的影响；A-E为3天龄不同基因型果蝇轴突情况，F-J为30天龄不同基因型果蝇轴突情况，K为对不同基因型果蝇轴突退化等级数据的统计分析结果；ns代表P>0.05，****表示P<0.0001，各基因型拍摄翅膀数不少于15只；
图6表示细胞自噬作用对APP诱导轴突退化的影响；A-E为3天龄不同基因型果蝇轴突变化情况，F-J为30天龄不同基因型果蝇轴突变化情况，K为对不同基因型果蝇轴突退化等级数据的统计分析结果；ns代表P>0.05，****表示P<0.0001，各基因型拍摄翅膀数不少于15只；
图7表示中药粗提液对APP导致的果蝇翅脉轴突退化的作用；其中A-D为3天龄各组果蝇轴突变化情况，E-H为30天龄各组果蝇轴突变化情况，I为各组果蝇轴突退化等级数据的统计分析图；ns表示P>0.05；**表示P<0.01；***表示P<0.001。Control 代表对照组，R.S.代表加入的人参粗提液，R.C.R.代表加入的肉苁蓉粗提液，H.S.W. 代表加入的何首乌粗提液。
具体实施方式
为了让本领域技术人员更加清楚明白本发明所述技术方案，现列举以下实施例进行说明。需要指出的是，以下实施例仅为本发明的优选实施例，对本发明要求的保护范围不构成限制作用，任何未违背本发明的精神实质和原理下所做出的修改、替代、组合，均包含在本发明的保护范围内。
以下实施例中所用的原料、试剂或装置如无特殊说明，均可从常规商业途径得到，或者可以通过现有已知方法得到。
实施例1：阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法
本实施例提供一种阿尔兹海默病果蝇模型的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)构建基因型为dpr-Gal4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb的果蝇品系A；和，构建基因型为Sp/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的果蝇品系B；
(2)将上述果蝇品系A与果蝇品系B进行杂交，构建得到基因型为dpr-Gal4,U AS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的果蝇品系，即为阿尔兹海默病果蝇模型。
其中果蝇品系A的构建方法，包括以下步骤：
(A1)将dpr-Gal4品系(购自美国布卢明顿果蝇品系中心，编号：25083)的处女蝇与UAS-mCD8-mCherry品系(获取自中科院生物化学交叉研究中心)的雄果蝇进行杂交，从子代中挑选基因型为dpr-Gal4/UAS-mCD8-mCherry；+/+的处女蝇；
(A2)将基因型为dpr-Gal4/UAS-mCD8-mCherry；+/+的处女蝇与Sp/SM6a-Cyo；s b/TM6b-Tb品系雄果蝇进行杂交，采用体视荧光显微镜从子代中挑选基因型为dpr-Ga l4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；TM6b-Tb/+的雄果蝇；
(A3)将基因型为dpr-Gal4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；TM6b-Tb/+的雄果蝇与Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系处女蝇进行杂交，从子代中挑选基因型为dpr-Ga l4,UAS-mCD8-mCherry/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb的果蝇构建成为果蝇品系。
其中果蝇品系B的构建方法，包括以下步骤：
(B1)将Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系(获取自同济大学生命科学与技术学院) 的处女蝇与UAS-APP品系(获取自德国海德堡大学分子生物学中心)的雄果蝇品系进行杂交，从子代中挑选基因型为+/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的雄果蝇；
(B2)将基因型为+/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的雄果蝇与Sp/SM6a-Cyo；sb/TM6b-Tb品系的处女蝇进行杂交，得到基因型为Sp/SM6a-Cyo；UAS-APP/TM6b-Tb的果蝇品系。
实施例2：对阿尔兹海默病果蝇模型的翅神经进行观察
针对实施例1所构建得到的阿尔兹海默病果蝇模型进行观察，步骤如下：
1.在CO2气板上麻醉待观察的果蝇(实施例1中构建得到的阿尔兹海默病果蝇模型)，用左手的解剖镊固定果蝇身体，右手的解剖镊迅速准确地摘下果蝇翅膀，将取下的翅膀立即置于Wing wash buffer(WWB)溶液中；
WWB溶液的配制：将1×PBS溶液，甲醛试剂及Triton X-100溶液混合，使甲醛终浓度为4％，Triton X-100终浓度为0.2％；即900mL PBS溶液+100mL甲醛试剂+2mL Triton X-100试剂。WWB溶液可于-20℃保存一个月，但随时间增加其固定效率会有所降低；
2.取一张洁净的载玻片，在玻片中央滴入一滴适量的乙醇甘油混合液(甘油：乙醇＝3：1，现配现用)；
3.用解剖镊轻轻夹住翅膀无神经元的一侧，用吸水纸轻轻吸去翅膀及镊子上的液体，再将翅膀置于乙醇甘油缓冲液中，注意使翅膀腹面朝上摆放。
4.缓慢盖上盖玻片，即可拍摄成像进行观察(观察翅膀边缘的神经元需使用40×以上的高倍镜拍摄，每张载玻片上最多放置6个翅膀)。
图1所示为红色荧光蛋白标记的翅膀边缘神经元的显微观察图，其中A为翅膀边缘神经元分布情况的示意图，方框内为主要观察区域；B为A中方框放大后显示的图片。
为探究随时间的推移，阿尔兹海默病果蝇模型翅膀arch区域轴突的变化。将阿尔兹海默病果蝇模型设为实验组(APP组)，将w1118(野生型果蝇，获取自同济大学生命科学与技术学院)组作为空白对照组，将过表达Dcr2(Dcr2蛋白是双链RNA 特异性核酸内切酶RNase III家族的成员，常作为对照蛋白表达，购自美国布卢明顿果蝇品系中心，编号：24651)组作为阴性对照组(实验组、对照组均使用dpr-Gal4 系统在果蝇翅神经元标记红色荧光蛋白mCD8-mCherry)，观察不同年龄段各组果蝇的轴突变化情况。
结果如图2所示：3天龄时，无论是对照组果蝇(图2中A-B)，还是过表达APP 组果蝇(图2中C)，其轴突均是光滑平整的纤维状；15天时，对照组果蝇(图2 中D-E)轴突依旧光滑平整，而APP组果蝇(图2中F)轴突出现很多串珠状的点和轴突碎片，说明轴突已经发生退化；到30天时，对照组果蝇(图2中G-H)轴突结构完整，轴突上有极少的碎片；而APP组果蝇(图2中I)轴突完整性则被破坏，出现不连续的大斑块，荧光信号丢失变弱，轴突退化加重。以上结果表明，过表达APP 基因会在果蝇翅神经轴突上引起轴突退化，且轴突退化的表型与果蝇年龄表现出相关性，这一表型既符合AD发病与年龄密切相关的特点，又在果蝇神经系统中模拟了 AD的病理特征。图2中J为对不同基因型果蝇轴突退化等级数据的统计分析，对于轴突退化的等级评估，如图3所示，将轴突退化分为5个等级，用0到4依次表示不同等级，其中A表示远端神经元轴突呈现完整、光滑和连续的纤维状结构，等级为“0”； B表示远端神经轴突出现珠状(beading)，等级为“1”；C表示神经轴突大量片段化，等级为“2”；D表示神经轴突出现聚集性斑块，轴突不连续，等级为“3”；E表示神经轴突结构彻底被破坏，mCD8-mCherry荧光信号大量丢失，等级为“4”。以上结果表明，过表达APP基因会在果蝇翅神经轴突引起轴突退化，且轴突退化的表型与果蝇年龄表现出相关性，这一表型既符合AD发病与年龄密切相关的特点，又在果蝇神经系统中模拟了AD的病理特征。
实施例3：阿尔兹海默病果蝇模型的验证实验
以实施例1所构建的阿尔兹海默病果蝇模型为实验对象，验证其对于APP基因的专一依赖性。由于在APP淀粉样剪切途径产生致病的Aβ过程中，需要经历关键剪切酶——β-分泌酶和γ-分泌酶。已有结论证实，通过RNAi干扰这两个酶，可干扰Aβ的产生量，从而缓解APP导致的老年痴呆。本实施例在过表达APP的同时分别下调β-分泌酶(下调Bace基因)和γ-分泌酶(下调Psn基因)的表达。实验结果如图4 所示：3天龄的各基因型果蝇在轴突处均未观察到轴突退化的表型(图4中A-D)；在第15天和30天时，与APP组(图4中E和I)和APP；Dcr2组(图4中F和J) 相比，下调Bace(图4中G和K)和Psn(图4中H和L)均能显著抑制轴突变性。以上结果表明，下调β-分泌酶和γ-分泌酶均能有效抑制APP造成的轴突退化表型，证明本发明所构建的是专一依赖于APP的阿尔兹海默病果蝇模型。
实施例4：阿尔兹海默病果蝇模型在致病机理研究中的应用
1.探究细胞凋亡对APP诱导轴突退化的影响
轴突退化是轴突主动进行自我摧毁的过程，是什么机制介导了APP引起的轴突退化还有待进一步的研究。现有研究发现，在轴突的发育过程中，细胞凋亡信号通路参与了轴突修剪过程，并且在AD患者的脑中也发现细胞凋亡信号通路中多种调控成分的上调，为了探究过表达APP所引起的轴突退化是否依赖于细胞凋亡，本实施例以实施例1所构建的阿尔兹海默病果蝇模型为实验对象，分别采取过表达P35、DIAP1 或敲降Dcp1等可抑制细胞凋亡的措施。实验结果如图5所示：A-E为3天龄不同基因型果蝇轴突情况，F-J为30天龄不同基因型果蝇轴突情况，K为对不同基因型果蝇轴突退化等级数据的统计分析。结果表明，过表达P35、DIAP1或下调Dcp1抑制细胞凋亡，不能使由APP引起的轴突退化表型得到减轻，说明细胞凋亡不参与APP引起的轴突退化。
2.探究细胞自噬作用对APP诱导轴突退化的影响
一些常见神经退行性疾病的发病机制与细胞自噬密切相关。机体可以通过自噬作用清除受损、变性、衰老和失去功能的细胞。已有报道在AD患者脑切片中观察到自噬溶酶体的堆积，这表明AD患者脑中的自噬过程出现了异常，这可能是自噬起始增加或者溶酶体的清除减少导致的。在AD小鼠模型中同样也观察到了自噬异常的现象。但目前对于自噬在AD中到底发挥着何种作用并没有定论，有研究发现在AD早期，自噬是减少的；而自噬激活因子在AD患者的脑中又是上调的。还有研究表明，在果蝇幼虫大脑和眼成虫盘中过表达APP均导致自噬小泡的明显增多，且阻断自噬可抑制过表达APP引起的学习能力缺陷。
为了探究APP引起的轴突退化是否与自噬作用相关，本实施例以实施例1所构建的阿尔兹海默病果蝇模型为实验对象，分别下调了自噬过程中的关键基因Atg7和 Atg12，以抑制细胞自噬。实验结果如图6所示：图6中A-E为3天龄不同基因型果蝇轴突变化情况，图6中F-J为30天龄不同基因型果蝇轴突变化情况，图6中K为对不同基因型果蝇轴突退化等级数据的统计分析结果。结果表明，下调自噬能够很好地抑制APP引起的轴突退化表型，表明自噬参与了APP引起的轴突退化。
实施例5：阿尔兹海默病果蝇模型在抗AD药物筛选中的应用
为了证明实施例1所构建的阿尔兹海默病果蝇模型确实有抗AD药物筛选的作用，本实施例筛选了3种已报道的对治疗老年期痴呆有一定疗效的中药粗提液：人参、肉苁蓉和何首乌；并将上述粗提液(药液)按照下列表1的配比制得相应培养基，再进行阿尔兹海默病果蝇模型的培养。
表1果蝇培养基的配比
1.人参：为五加科人参属多年生草本植物的干燥根，具有安神益智的功效。研究发现人参可以有效的调节中枢神经系统的兴奋性，促进脑内乙酰胆碱的合成和释放，促进脑内多巴胺和肾上腺素的含量。从人参中提取的人参皂苷可以有效改善Aβ大鼠在新异环境中的自发活动和探究行为，增强学习记忆能力。
2.肉苁蓉：肉苁蓉是一种寄生在沙漠中梭梭树根部的寄生植物，从寄主中吸取养分及水分。素有“沙漠人参”的美誉，具有很高的药用价值，是传统名贵中药。研究发现从肉苁蓉中提取的肉苁蓉总苷对AD模型小鼠的学习和记忆能力有一定的改善作用，同时可以使小鼠脑组织中SOD的活性提高，减少了脂质过氧化物的产生，最终达到抗衰老的作用。
3.何首乌：是蓼科蓼族何首乌属多年生缠绕藤本植物，块根肥厚，呈黑褐色。何首乌具补肾益血，乌发强筋的功效。何首乌不仅可以抑制AD大鼠海马细胞的凋亡，还能抑制AD小鼠脑组织内单胺氧化酶-B的活性，从而消除自由基对机体的损伤，进而缓解了衰老。何首乌中发现的二苯乙烯甙，还对阿尔兹海默病等神经退行性疾病的防治有一定的作用。
对实施例1所构建的阿尔兹海默病果蝇模型采用上述培养基进行处理后，实验结果如图7所示：在各组3天龄果蝇中，翅膀轴突(图7中A-D)均呈平滑纤维状；第 30天时，过表达APP(图7中E)引发轴突退化，而人参粗提液(图7中F)、肉苁蓉粗提液(图7中G)以及何首乌粗提液(图7中H)在第30天时均良好地挽救了因过表达APP引发的轴突变性表型。以上结果表明，对阿尔兹海默病果蝇模型进行用药后，的确能够改善轴突退化的症状，证明本模型的构建成功且有效。
上面结合附图对本申请实施例作了详细说明，但是本申请不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本申请宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本申请的实施例及实施例中的特征可以相互组合。