一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用

文档序号:183717 发布日期:2021-11-02 浏览:23次 >En<

阅读说明:本技术 一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用 (Culture medium for rapidly detecting bacteria in cell product and preparation method and application thereof ) 是由 申长远 孙振娜 于 2021-07-30 设计创作,主要内容包括:本申请公开了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用,所述培养基的原料按重量份包括:平衡盐水50-54份、葡萄糖10-13份、维生素4-6份、抗生素3-5份、氨基酸15-20份、Ficoll-Paque缓冲液60-80份、细胞消化液4-8份、PH调整液5-9份以及超纯水30-40份。所述制备方法包括如下步骤:混合得到混合物A、加入抗生素、细胞消化液进行混合、PH调整、混合得到混合物B以及加入Ficoll-Paque缓冲液。所述应用包括如下步骤:细胞培养、离心分离以及过滤。本申请的有益之处在于可便于进行其中细菌的集中过滤处理,便于细菌的集中,从而便于进行快速检测,适用于集中检测,便于进行统计以及研究,使用效果较好。(The application discloses a culture medium for rapidly detecting bacteria in cell products, a preparation method and an application thereof, wherein the culture medium comprises the following raw materials in parts by weight: 50-54 parts of balanced saline, 10-13 parts of glucose, 4-6 parts of vitamin, 3-5 parts of antibiotic, 15-20 parts of amino acid, 60-80 parts of Ficoll-Paque buffer solution, 4-8 parts of cell digestive juice, 5-9 parts of pH adjusting solution and 30-40 parts of ultrapure water. The preparation method comprises the following steps: mixing to obtain mixture A, adding antibiotics and cell digestive juice, mixing, adjusting pH, mixing to obtain mixture B, and adding Ficoll-Paque buffer solution. The application comprises the following steps: cell culture, centrifugation and filtration. The beneficial effects of this application lie in can be convenient for carry on wherein the concentrated filtration of bacterium and handle, the concentration of the bacterium of being convenient for to be convenient for carry out short-term test, be applicable to the concentrated detection, be convenient for make statistics of and research, the result of use is better.)

一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和 应用

技术领域

本申请涉及细胞培养技术领域,尤其是一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用。

背景技术

培养基,是指供给微生物、植物或动物(或组织)生长繁殖的,由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐(包括微量元素)、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质,也是细胞生长和繁殖的生存环境。

现有技术中的培养基在进行细胞的培养时,不易进行细胞培养后。其中细菌的分离;从而不易进行其中细菌的快速检测,检测效果可能不佳,不易进行使用。因此,针对上述问题提出一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用。

发明内容

在本实施例中提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用用于解决现有技术中不易进行细胞分离集中检测的问题。

根据本申请的一个方面,提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基,所述培养基的原料按重量份包括:平衡盐水50-54份、葡萄糖10-13 份、维生素4-6份、抗生素3-5份、氨基酸15-20份、Ficoll-Paque缓冲液 60-80份、细胞消化液4-8份、PH调整液5-9份以及超纯水30-40份。

进一步地,所述平衡盐水选用Hanks液和Earle液中一种或两种的混合。

进一步地,所述细胞消化液选用胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液中的一种。

进一步地,所述氨基酸采用缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、组氨酸、酪氨酸、精氨酸、胱氨酸(L型) 以及谷氨酰胺混合而成。

作为本申请的第二个方面,提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:

(1)在容器中加入平衡盐水;

(2)在20℃-30℃之间的超纯水中加入干粉培养基,进一步进行搅拌,进行混合,得到混合物A;

(3)将步骤(2)中的混合物A倒入步骤(1)中的容器中,使混合物A 与平衡盐水进行混合;

(4)在步骤(3)的基础上在容器中加入抗生素、细胞消化液,进行混合搅拌;

(5)进一步在容器中加入PH调整液;

(6)然后在容器中加入超纯水,进行稀释,稀释到需要的体积,通过搅拌设备进行搅拌,进行混合,得到混合物B;

(7)最后在混合物B中加入Ficoll-Paque缓冲液,不进行混合,完成培养基的制备。

进一步地,所述步骤(2)中干粉培养基由葡萄糖、维生素以及氨基酸均匀混合而成,为干粉状。

进一步地,所述步骤(2)中在进行干粉培养基分散到超纯水中时,需要进行水洗包装袋,进行冲洗,避免干粉痕迹在包装袋上残留。

进一步地,所述步骤(6)中混合物B在进行制备后需要进行过滤;所述步骤(7)中混合物B加入Ficoll-Paque缓冲液后,在进行存储时,需要进行密封,同时存储环境保持无菌,存储温度为4℃。

进一步地,所述步骤(1)至步骤(7)中在进行配比时,所有器皿均需要进行严格消毒杀菌。

作为本申请的第三个方面,提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的应用,所述应用包括如下步骤:

(1)将培养基倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中,同时使培养基温度提升至20℃-30℃;

(2)然后将需要培养的细胞倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中,进行培养;

(3)将培养容器放置于培养箱中,进行培养,培养的过程中,通过外部的供气设备用于培养箱内部的供气,同时供气时,需要进行气源的消毒处理,避免杂菌的进入;

(4)在进行培养的同时,需要进行定时间隔加入补充培养基,提供养分;

(5)培养一定时间后,进行细胞的检测,通过将培养皿、培养试管或者培养容器中的液体倒入到离心设备中,进一步在离心设备的离心作用下,进行离心处理,使得培养细胞后的液体进行分层,使得细胞沉淀在Ficoll-Paque 缓冲液之下,细菌悬浮在Ficoll-Paque缓冲液中;

(6)离心后的Ficoll-Paque缓冲液通过过滤膜进行过滤,使得细菌过滤下来,从而可进行细菌的集中,可进行快速检测细菌。

通过本申请上述实施例,本申请的有益之处在于:本申请提供的培养基及其制备方法和应用可进行细胞制品的培养,与传统技术相比较,其在进行培养使用后,可便于进行其中细菌的集中过滤处理,便于细菌的集中,从而便于进行快速检测,适用于集中检测,便于进行统计以及研究,使用效果较好。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。

图1为一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的制备方法流程图;

图2为一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的应用流程图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案,下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本申请保护的范围。

需要说明的是,本申请的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象,而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换,以便这里描述的本申请的实施例。此外,术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形,意图在于覆盖不排他的包含,例如,包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元,而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。

在本申请中,术语“上”、“下”、“左”、“右”、“前”、“后”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“中”、“竖直”、“水平”、“横向”、“纵向”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系。这些术语主要是为了更好地描述本申请及其实施例,并非用于限定所指示的装置、元件或组成部分必须具有特定方位,或以特定方位进行构造和操作。

并且,上述部分术语除了可以用于表示方位或位置关系以外,还可能用于表示其他含义,例如术语“上”在某些情况下也可能用于表示某种依附关系或连接关系。对于本领域普通技术人员而言,可以根据具体情况理解这些术语在本申请中的具体含义。

此外,术语“安装”、“设置”、“设有”、“连接”、“相连”、“套接”应做广义理解。例如,可以是固定连接,可拆卸连接,或整体式构造;可以是机械连接,或电连接;可以是直接相连,或者是通过中间媒介间接相连,又或者是两个装置、元件或组成部分之间内部的连通。对于本领域普通技术人员而言,可以根据具体情况理解上述术语在本申请中的具体含义。

需要说明的是,在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。

本实施例中的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用可以配合各种培养皿、培养容器进行使用,例如,在本实施例提供了如下培养皿,本实施例中的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用可以配合如下培养皿进行使用。

一种培养皿,包括:皿体,皿体具有凹槽,用于放置培养基;第一盖体,第一盖体包括第一遮盖面和连接面,连接面设置在第一遮盖面的边缘位置,用于可拆卸连接皿体,第一遮盖面上具有滑道,滑道贯穿所第一遮盖面;第二盖体,第二盖体设置在第一盖体的上部,并且可拆卸连接于第一盖体;接种部件,接种部件可拆卸连接于第一盖体,接种部件的一端能够穿过滑道并与培养基相互接触。本发明实施例提供的技术方案中,皿体具有凹槽,用于放置培养基;第一盖体包括第一遮盖面和连接面,连接面设置在第一遮盖面的边缘位置,用于可拆卸连接皿体,第一遮盖面上具有滑道,滑道贯穿所第一遮盖面;第二盖体设置在第一盖体的上部,并且可拆卸连接于第一盖体;接种部件可拆卸连接于第一盖体,接种部件的一端能够穿过滑道并与培养基相互接触,相对于现有技术,需要打开培养皿的一条缝,此时培养基会接触空气中的细菌,并且,使用接种环划线法接种微生物时,需要左手打开培养皿的一条缝,右手划线接种。该操作初学者不易掌握,极易造成培养基与空气的大面积接触,从而导致污染,并且,由于平板划线法需要熟练的操作,对于初学者而言,手动划线容易划破琼脂层,导致培养基破坏,本发明实施例中,通过在第一盖体上设置滑道,并且滑道贯穿第一盖体,接种部件的一端能够穿过滑道并与培养基相互接触,从而方便人员通过接种部件对培养基进行划线接种,第一盖体只有滑道位置暴露在空气中,减小了培养基与空气的接触面积,并且,第二盖体可拆卸连接于司仪盖体,使得第二盖体的滑道能够通过第二盖体进行遮盖,从而达到保护培养基的技术效果。上述皿体的作用是支撑第一盖体和第二盖体,皿体具有凹槽,用于放置培养基,皿体通常采用透明的玻璃材料或者是塑料材料制成,凹槽的底部为平面,方便放置培养基;第一盖体包括第一遮盖面和连接面,连接面设置在第一遮盖面的边缘位置,用于可拆卸连接皿体,第一遮盖面上具有滑道,滑道贯穿所第一遮盖面,第一盖体通常也采用透明的玻璃材料或者是塑料材料制成,方便对皿体内的培养基进行观察,连接面能够与皿体相互接触,例如,在连接面上设置内螺纹,在皿体上设置外螺纹,使得第一盖体能够与皿体相连接,当然,也可以通过其他的方式将皿体和第一盖体进行可拆卸连接,例如卡接,或者是将第一盖体扣在皿体上即可,因此,连接面只要能够与皿体进行连接即可,第一遮盖面与连接面之间的角度通常为度,第一遮盖面水平设置,连接面垂直于第一遮盖面,滑道贯穿第一遮盖面的两端,并且,滑道在第一遮盖面上呈现多种形状,例如长条形或者弧线形,主要目的是方便进行划线接种;第二盖体设置在第一盖体的上部,并且可拆卸连接于第一盖体;接种部件可拆卸连接于第一盖体,接种部件的一端能够穿过滑道并与培养基相互接触,第二盖体的作用是遮盖滑道,从而防止灰尘通过滑道进入皿体内,因此,第二盖体的表面上没有孔或者其他通道,第二盖体可以可拆卸连接于第一盖体,也可以可拆卸连接于皿体,使得第一盖体位于第二盖体和皿体之间,使得第二盖体能够遮盖滑道即可;本发明实施例中,通过在第一盖体上设置滑道,并且滑道贯穿第一盖体,接种部件的一端能够穿过滑道并与培养基相互接触,从而方便人员通过接种部件对培养基进行划线接种,第一盖体只有滑道位置暴露在空气中,减小了培养基与空气的接触面积,并且,第二盖体可拆卸连接于司仪盖体,使得第二盖体的滑道能够通过第二盖体进行遮盖,从而达到保护培养基的技术效果。进一步的,滑道包括穿孔和滑轨,穿孔贯穿第一遮盖面,滑轨设置在穿孔的边缘位置。本实施例中,进一步限定了滑道,穿孔贯穿第一遮盖面的两侧,使得接种部件的一端能够穿过穿孔并与培养基相互接触,同时,接种部件能够沿着滑轨的方向进行移动,使得接种部件的一端在接触培养基后,接种部件插入培养基的深度固定,从而方便人员进行划线接种,滑轨通常设置在穿孔的两侧,穿孔的形状可以是“S”形,也可以是“O”形,还可以是“L”形,也可以是其他的形状,只要方便进行划线接种即可。进一步的,接种部件包括笔杆和旋转体,笔杆上具有螺纹,旋转体转动连接于笔杆。本实施例中,进一步限定了接种部件,笔杆通常采用塑料或者玻璃材料,旋转体通常采用塑料材料,笔杆的外侧设置外螺纹,旋转体的中部具有通孔,通孔的边缘设置内螺纹,使旋转体转动连接于笔杆,当笔杆的一端穿过穿孔后,通过转动旋转体来调节笔杆与培养基之间的距离,然后将旋转体的底部放置在滑轨上,使得笔杆的一端与培养基相互接触,并且,笔杆插入培养基的深度始终不变,从而达到方便划线接种的技术效果。进一步的,接种部件还包括接种环,接种环可拆卸连接于笔杆。本实施例中,进一步限定了接种部件,接种环是细菌培养时常用的一种接种工具,广泛应用在微生物检测、细胞微生物、分子生物学等众多学科领域,在划线法中,通常用于粘取含菌材料,在固体培养基的表面划线,接种环通常采用塑料或者金属材料制成,接种环可拆卸连接于笔杆,例如插接或者螺纹连接,从而方便接种环的安装和拆卸。进一步的,增加卡接部件,卡接部件包括卡扣和卡槽,卡扣设置在第二盖体的边缘位置,卡槽设置在第一盖体的边缘位置,卡扣能够插入卡槽内。本实施例中,增加了卡接部件,卡接部件的作用是连接第一盖体和第二盖体,在第二盖体的边缘位置设置卡扣,在第一盖体的边缘位置设置卡槽,使卡扣能够卡入卡槽内,从而达到使第一盖体和第二盖体相连接的技术效果;此时,可接部件的形状为“L”形或者是半圆弧形,当然,还可以在卡扣靠近卡槽的位置设置突起,使突起卡入卡槽内,从而达到方便连接和固定第一盖体和第二盖体的技术效果。进一步的,卡槽包括第一卡槽和第二卡槽,第一卡槽设置在第一盖体的边缘位置,第二卡槽设置在第一盖体的边缘位置,卡扣的两端能够分别插入第一卡槽和第二卡槽内。本实施例中,进一步限定了卡槽,卡槽为两个,分别是第一卡槽和第二卡槽,第一卡槽设置在第一盖体的边缘位置,第二卡槽设置在第一盖体的边缘位置,此时,卡扣不与任何一个部件进行连接,而是单独设置的,然后将卡扣的两端同时卡入第一卡槽和第二卡槽,从而达到固定第一盖体和第二盖体的作用,此时,卡扣的形状为“U”形结构。进一步的,第二盖体可拆卸连接于皿体。本实施例中,进一步限定了第二盖体,第二盖体可拆卸连接于皿体,从而达到对凹槽密封的技术效果;可选的,在第二盖体上设置内螺纹,在皿体的侧壁上设置外螺纹,使第二盖体与皿体之间进行螺纹连接,此时,第一盖体扣在皿体上,并且位于第二盖体和皿体之间。

当然本实施例也可以用于其他结构的培养皿、培养容器。在此不再一一赘述,下面对本申请实施例的一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基及其制备方法和应用进行介绍。

请参阅图1-2所示,提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基,所述培养基的原料按重量份包括:平衡盐水50-54份、葡萄糖10-13份、维生素4-6份、抗生素3-5份、氨基酸15-20份、Ficoll-Paque缓冲液60-80 份、细胞消化液4-8份、PH调整液5-9份以及超纯水30-40份。

进一步地,所述平衡盐水选用Hanks液和Earle液中一种或两种的混合。

进一步地,所述细胞消化液选用胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、胶原酶溶液中的一种。

进一步地,所述氨基酸采用缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、组氨酸、酪氨酸、精氨酸、胱氨酸(L型) 以及谷氨酰胺混合而成。

进一步提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的制备方法,所述制备方法包括如下步骤:

(1)在容器中加入平衡盐水;

(2)在20℃-30℃之间的超纯水中加入干粉培养基,进一步进行搅拌,进行混合,得到混合物A;

(3)将步骤(2)中的混合物A倒入步骤(1)中的容器中,使混合物A 与平衡盐水进行混合;

(4)在步骤(3)的基础上在容器中加入抗生素、细胞消化液,进行混合搅拌;

(5)进一步在容器中加入PH调整液;

(6)然后在容器中加入超纯水,进行稀释,稀释到需要的体积,通过搅拌设备进行搅拌,进行混合,得到混合物B;

(7)最后在混合物B中加入Ficoll-Paque缓冲液,不进行混合,完成培养基的制备。

进一步地,所述步骤(2)中干粉培养基由葡萄糖、维生素以及氨基酸均匀混合而成,为干粉状。

进一步地,所述步骤(2)中在进行干粉培养基分散到超纯水中时,需要进行水洗包装袋,进行冲洗,避免干粉痕迹在包装袋上残留。

进一步地,所述步骤(6)中混合物B在进行制备后需要进行过滤;所述步骤(7)中混合物B加入Ficoll-Paque缓冲液后,在进行存储时,需要进行密封,同时存储环境保持无菌,存储温度为4℃。

进一步地,所述步骤(1)至步骤(7)中在进行配比时,所有器皿均需要进行严格消毒杀菌。

又进一步提供了一种用于快速检测细胞制品中细菌的培养基的应用,所述应用包括如下步骤:

(1)将培养基倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中,同时使培养基温度提升至20℃-30℃;

(2)然后将需要培养的细胞倒入到培养皿、培养试管或者培养容器中,进行培养;

(3)将培养容器放置于培养箱中,进行培养,培养的过程中,通过外部的供气设备用于培养箱内部的供气,同时供气时,需要进行气源的消毒处理,避免杂菌的进入;

(4)在进行培养的同时,需要进行定时间隔加入补充培养基,提供养分;

(5)培养一定时间后,进行细胞的检测,通过将培养皿、培养试管或者培养容器中的液体倒入到离心设备中,进一步在离心设备的离心作用下,进行离心处理,使得培养细胞后的液体进行分层,使得细胞沉淀在Ficoll-Paque 缓冲液之下,细菌悬浮在Ficoll-Paque缓冲液中;

(6)离心后的Ficoll-Paque缓冲液通过过滤膜进行过滤,使得细菌过滤下来,从而可进行细菌的集中,可进行快速检测细菌。

本申请的有益之处在于:

本申请提供的培养基及其制备方法和应用可进行细胞制品的培养,与传统技术相比较,其在进行培养使用后,可便于进行其中细菌的集中过滤处理,便于细菌的集中,从而便于进行快速检测,适用于集中检测,便于进行统计以及研究,使用效果较好。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已,并不用于限制本申请,对于本领域的技术人员来说,本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本申请的保护范围之内。

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