一种利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法
阅读说明：本技术 一种利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法 (Preparation method of anti-aging traditional Chinese medicine formula by utilizing probiotic fermentation ) 是由 徐晓英 段礼新 吴杨 于 2021-08-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法,所述方法包括原料预处理、酶解步骤、均质处理、发酵处理,所述酶解处理获得的均质物料和其它原料,加入乳酸杆菌进行发酵处理；所述乳酸杆菌选自干酪乳酸杆菌(L.casei)、保加利亚乳酸杆菌(L.bulgaricus)、嗜酸乳酸杆菌(L.acidophilus)或嗜热乳酸杆菌(L.thermophilus)。本发明是采用乳酸菌对人参根提取物和原料黄芪、石斛、菟丝子、五味子和麦冬进行中药发酵,以前没有报道过此种发酵方法；结合人参补气和其它原料的功效,达到气血双补的作用；本实施方案对人参提取物进一步酶解,有利于大分子的降解、吸收；本方法相较于人参提取液,不需要用到有机溶剂,如乙醇等,对环境友好,同时不会刺激皮肤。(The invention relates to a preparation method of an anti-aging traditional Chinese medicine formula by utilizing probiotic fermentation, which comprises the steps of raw material pretreatment, enzymolysis, homogenization and fermentation, wherein lactobacillus is added into a homogenized material obtained by the enzymolysis and other raw materials for fermentation; the lactobacillus is selected from lactobacillus casei (l.casei), lactobacillus bulgaricus (l.bulgaricus), lactobacillus acidophilus (l.acidophilus) or lactobacillus thermophilus (l.thermophilus). The invention adopts lactic acid bacteria to carry out traditional Chinese medicine fermentation on ginseng root extract and raw materials of astragalus, dendrobium, semen cuscutae, schisandra chinensis and radix ophiopogonis, and no fermentation method is reported before; the effects of tonifying qi and other raw materials of the ginseng are combined to achieve the effect of tonifying qi and blood; the embodiment further performs enzymolysis on the ginseng extract, thereby being beneficial to the degradation and absorption of macromolecules; compared with the ginseng extract, the method does not need organic solvents such as ethanol and the like, is environment-friendly, and does not irritate the skin.)
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，具体地说涉及一种利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法。
背景技术
衰老(ageing)指在正常状况下生物体发育成熟后，随年龄的增加，自身组织结构逐步发生退行性变化，机体器官的机能减退，内环境自稳能力减弱、对内外环境损伤因素的抵抗力降低，趋向死亡的自然现象。由于年龄引起的衰老，是不可避免的现象。引起其他衰老的因素还有健康因素、环境因素、精神因素、营养因素、生活习惯、内分泌的紊乱、用药不当等环境或者个体因素。利用植物的有效成分，是人类抗拒衰老的一种手段。
由于植物细胞具有结构致密的细胞壁，阻隔了位于细胞胞浆中的有效成分的释放；二是中药有效成分的分子量一般比较大，不易突破皮肤屏障被人体吸收。而中药材通过微生物发酵处理，可以大大提高有效成分的利用率，这是由于微生物在代谢过程中会产生纤维素酶、果胶酶等多种胞外酶，它们可以分解植物细胞的细胞壁，使中药材细胞破裂，让有效成分得以暴露出来。此外，微生物代谢产生的各种酶能降低有效成分的分子量，同时去除多种大分子杂质，使其更好地被人体吸收利用。
益生菌是指对机体健康有益的微生物，截至2019年，我国先后在《可用于保健食品的益生菌菌种名单》(卫法监发〔2001〕84号)、《可用于保健食品的真菌菌种名单》(卫法监发〔2001〕84号)、《可用于食品的菌种名单》(卫办监督发〔2010〕65号)以及《可用于婴幼儿食品的菌种名单》(卫生部公告〔2011〕25号)上发布了食品领域可用的益生菌种类，包括了35个种或亚种。
公开号CN106943313A发明名称为一种具有抗衰老功效的中药复方精油及其制备方法,公开了所述的具有抗衰老功效的中药复方精油，其活性成分由以下重量份的原料制备而成：侧柏叶1-10份、茜草1-10份、川芎1-10份、当归1-10份、藏红花1-10份。诸药合用可滋润营养肌肤、减少自由基损伤、促进新陈代谢，具有良好的抗衰老功效。该技术方案，利用冷冻、膨化和超临界萃取等手段，以获取植物材料中的有效精油。
公开号CN108743486A发明名称为一种具有抗衰老功能的复合物及其应用的发明专利申请，公开的内容包括所述复合物包括幌伞枫总三萜，所述幌伞枫总三萜由幌伞枫三萜皂甙和幌伞枫三萜酸组成，所述幌伞枫三萜皂甙和幌伞枫三萜酸的质量比为(1-5):(1-8)。本发明提供的具有抗衰老功能的复合物，对从幌伞枫的根茎和枝叶中已经分离得到幌伞枫三萜皂甙和幌伞枫三萜酸进行协同复配，相比单独使用三萜皂甙或三萜酸时，可以更有效提高其促进胶原蛋白的合成，进而使胶原纤维增加。该技术方案采用的是来自植物幌伞枫的有效活性物质幌伞枫三萜皂甙和幌伞枫三萜酸复配方案，该组合物被使用于抗衰老面霜等化妆品中。
公告号CN1033365C发明名称为以水合片状脂相或脂质体为主要成分的组合物,其中含黄芩萃取物或至少含其中的一种组分，以及化妆品或药剂的，尤其是对皮肤具有抗过敏，消炎或抗衰老作用的组合物的发明专利申请，发明涉及一种以水合片状脂相或脂质体为主要成分的组合物。该组合物的特征在于，所述的水合片状脂相或所述脂质体至少部分地含有黄芩属萃取物或至少含有一种从该萃取物中离析出来或用化学合成得到的活性物质，该活性物质主要有：汉黄芩黄素，2′—羟基—汉黄芩黄素、5、6、7—三羟黄酮(贝加因)，新5、6、7、—三羟黄酮，木蝴喋甙(oroxidine)和黄芩甙。该组合物用于制取化妆品或药剂的组合物，特别是制备对皮肤具有抗过敏、消炎或抗衰老作用的组合物。
人参具有得天独厚的滋补美容效果，作为中国传统的美容护肤佳品，其美白抗皱延缓衰老功效得到一致认可，并从20世纪80年代开始应用于化妆品中，如人参润肤霜、人参美白霜、人参面膜等多种人参化妆品，成为目前使用最为广泛的植物化妆品原料。人参美白霜中含有人参皂苷Rb2、Rc、Rd、Re、Rg1、Rg2、Rh1和三七皂苷R2(金贵歆，中医药现代化，2009)。人参皂苷Rg1的剂量浓度为10～80μg/mL时，能抑制黑色素细胞增殖，减少黑色素合成(赵保胜，人参研究，2011)。人参皂苷Rb及人参皂苷Rd可抑制基质金属蛋白酶MMP-1和MMP-3表达(邓茂，皮肤性病诊疗学杂志,2010)。研究发现，在UVB诱导的成纤维细胞光老化模型中，人参提取物可同时调节MAPKs及NF-kB信号通路，抑制MMP-l与MMP-13的异常分泌，达到抗光老化作用(Yong，NutrRes,2012)。
由于植物细胞具有结构致密的细胞壁，阻隔了位于细胞胞浆中的有效成分的释放；而且有效成分的分子量一般比较大，不易突破皮肤屏障被人体吸收。中药材通过微生物发酵处理，可以大大提高有效成分的利用率，这是由于微生物在代谢过程中会产生纤维素酶、果胶酶等多种胞外酶，它们可以分解植物细胞的细胞壁，使中药材细胞破裂，让有效成分得以暴露出来。因此，探索有效的发酵手段，可以有效提高植物中抗衰老有效成分的方法和产品，是现实中有价值的探索工作。
发明内容
根据现有技术的需要，本发明的一个目的是提供一种利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法。
本发明所述的利用益生菌发酵抗衰老中药组方的制备方法，是通过如下技术方案实现。
本发明所述技术方案中，使用的植物原材料包括黄芪、人参、石斛、菟丝子、五味子和麦冬；其中，以重量份计，黄芪18-22份、人参4-6份、石斛4-6份、菟丝子18-22份、五味子18-22份和麦冬14-16份。
优选，所述植物原材料以重量份计，黄芪19-21份、人参4.5-5.5份、石斛4.5-5.5份、菟丝子19-21份、五味子19-21份和麦冬14.5-15.5份。
更优选，所述植物原材料以重量份计，黄芪20份、人参5份、石斛5份、菟丝子20份、五味子20份和麦冬15份。
本发明的技术方案中所述方法包括将干人参或鲜人参预处理后，先通过酶解消化；然后通过微射流设备进行高压均质处理，同时用冷却水对均质机进行降温处理，使得在低温条件下充分释放人参细胞内的活性成分；经均质化处理的原料进行纯化处理；接着，加入其它原料；通过加入乳酸杆菌进行发酵处理，得到含目标的发酵液。
进一步，本发明所述的乳酸杆菌选自干酪乳酸杆菌(L.casei)、保加利亚乳酸杆菌(L.bulgaricus)、嗜酸乳酸杆菌(L.acidophilus)或嗜热乳酸杆菌(L.thermophilus)，其中优选嗜酸乳酸杆菌或嗜热乳酸杆菌。
具体而言，本发明技术方案所述的方法，包括以下步骤：
步骤(1).原料预处理：包括将干人参或鲜人参材料处理成适当的大小，达到适合进样粒径。将粉碎的人参材料浸泡入一定的提取溶剂中，所述提取溶剂为水，优选所述提取溶剂为纯净水或去离子水。
进一步，人参与水的重量比例为1：6-10倍纯净水，优选6倍量；调节pH至7-7.5。
步骤(2).酶解步骤：在上述人参物料加入内切蛋白酶和纤维素酶，酶解3-4h，在酶解过程中定时搅拌，酶解结束后将得到的酶解液灭酶活。
进一步，所述酶解步骤中，加入的内切蛋白酶为人参原料重量0.5％-0.7％，和加入的纤维素酶为人参原料重量0.1％-0.2％，进行酶解。在酶解过程中，每隔1小时搅拌5-10分钟，使酶解均匀充分的进行。通过纤维素酶和内切蛋白酶的作用，进一步破坏人参细胞壁。
步骤(3).均质处理：采用微射流高压均质机，通过增压泵或均质机柱塞泵抽吸进料；
进一步，物料增压：物料在柱塞增压泵内，增压到设定压力值30Mpa至40Mpa，优选35Mpa-38Mpa，更优选35.8Mpa；经过均质处理的人参均质物料，被收集到出料容器。
进一步，上述过程中，经过高压微射流处理的物料会出现温度瞬间升高现象，需要通过换热器进行冷却处理，在本发明的技术方案中，设定实时控温温度范围为38℃-42℃，优选38.8-40℃；
步骤(4).发酵处理
上述步骤获得的均质物料，加入经粉碎处理的其它原料和水，加入乳酸杆菌进行发酵处理。所述其它原料包括黄芪、石斛、菟丝子、五味子和麦冬，所述原料经粉碎至80-120目；所述均质物料和其它原料与水的体积比为1:10-20；乳酸杆菌的加入量为所有原料干物质重量的5-8％；
其中，所述乳酸杆菌的培养，包括如下步骤：
(1)将乳酸杆菌接种至液态发酵培养基进行培养，得到菌种的种子液。
(2)将上述菌种的种子液接入培养基进行发酵培养。
(3)将步骤(2)所得的发酵物料烘干。
进一步，乳酸杆菌经种子培养后，再经扩大培养；其中，所述的扩大培养，先在30℃下发酵培养36h，再在32℃下继续发酵培养36h；
步骤(1)中，所述的乳酸杆菌经种子培养和扩大培养后，菌体密度为30g湿菌体/L以上。
步骤(1)中，乳酸杆菌的种子培养，其种子培养基和种子培养方法为乳酸杆菌的常规种子培养基和常规种子培养方法，例如种子培养基优选配方如下：葡萄糖60g/L，尿素2.0g/L，KH2PO40.6g/L，氯化铵30g/L，MgSO47H2O0.5g/L，酵母膏0.5g/L，液体石蜡20g/L，溶剂为水；种子培养方法优选为：将乳酸杆菌种子接种于种子培养基中，在30℃、200r/min条件下，培养24h。
步骤(1)中，乳酸杆菌的扩大培养，其培养基为乳酸杆菌的常规发酵扩大培养基，例如扩大培养基优选配方如下：葡萄糖60g/L，尿素2.0g/L，KH2PO40.6g/L，氯化铵30g/L，MgSO47H2O0.5g/L，酵母膏0.5g/L，液体石蜡20g/L，溶剂为水。扩大培养方法采用变温培养的方式，优选为：以体积百分数10％将种子液接入发酵扩大培养基中，在33℃、200r/min条件下，发酵培养48h，而后温度提高至35℃，继续培养48h，此时菌体密度大于等于30g湿菌体/L。扩大培养后，过滤回收菌体，4℃低温保藏备用。使用时，以10mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH8.0)配置乳酸杆菌悬浊液。
进一步，步骤(2)中，乳酸杆菌的扩大培养，使用超声波生物刺激生长仪进行刺激培养，超声波生物刺激生长仪处理参数为超声频率30kHz，功率10W，超声时间10s，间隔时间20s，共进行30分钟超声波刺激。
本发明相对于现有技术具有如下的显著优点及效果：1.本发明是采用乳酸菌对人参根提取物和原料黄芪、石斛、菟丝子、五味子和麦冬进行中药发酵，以前没有报道过此种发酵方法。2.结合人参补气和其它原料的功效，达到气血双补的作用。3.本实施方案对人参提取物进一步酶解，有利于大分子的降解、吸收。4.本方法相较于人参提取液，不需要用到有机溶剂，如乙醇等，对环境友好，同时不会刺激皮肤。
为使本发明
具体实施方式
的目的和技术方案更加清楚，下面将结合本发明的具体实施方式的实施实例，对本发明具体实施方式的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的具体实施方式是本发明的一部分具体实施方式，而不是全部的具体实施方式。基于所描述的本发明的具体实施方式，本领域普通技术人员在无需创造性劳动的前提下所制备的所有其它具体实施方式，都属于本发明保护的范围。
附图说明
图1为本发明方法流程示意图；
图2为本发明发酵液人参皂苷与对照品溶液的总皂苷吸收光谱图。
具体实施方案
以下通过具体的实施例，进一步说明本发明的技术方案。在以下具体实施例中，所述原料除特别说明外，皆是市售商品，采购于相关生产企业或商业部门。所述微射流高压均质机或微射流高压均质机可获得20Mpa至210Mpa均质压力。
实施例1：待接种的菌种的制备
乳酸杆菌的培养，包括如下步骤：
(1)将乳酸杆菌接种至液态发酵培养基进行培养，得到菌种的种子液。
(2)将上述菌种的种子液接入培养基进行发酵培养。
(3)将步骤(2)所得的发酵物料烘干。
乳酸杆菌经种子培养后，再经扩大培养；其中，所述的扩大培养，先在30℃下发酵培养36h，再在32℃下继续发酵培养36h；
步骤(1)中，乳酸杆菌的种子培养，其种子培养基和种子培养方法中种子培养基配方如下：葡萄糖60g/L，尿素2.0g/L，KH2PO40.6g/L，氯化铵30g/L，MgSO47H2O0.5g/L，酵母膏0.5g/L，液体石蜡20g/L，溶剂为水；种子培养方法为：将乳酸杆菌种子接种于种子培养基中，在30℃、200r/min条件下，培养24h。
步骤(1)中，乳酸杆菌的扩大培养，其培养基为乳酸杆菌的扩大培养基配方如下：葡萄糖60g/L，尿素2.0g/L，KH2PO40.6g/L，氯化铵30g/L，MgSO47H2O0.5g/L，酵母膏0.5g/L，液体石蜡20g/L，溶剂为水。扩大培养方法采用变温培养的方式，以体积百分数10％将种子液接入发酵扩大培养基中，在33℃、200r/min条件下，发酵培养48h，而后温度提高至35℃，继续培养48h，此时菌体密度大于等于30g湿菌体/L。扩大培养后，过滤回收菌体，4℃低温保藏备用。使用时，以10mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH8.0)配置乳酸杆菌悬浊液。
步骤(2)中，乳酸杆菌的扩大培养，使用超声波生物刺激生长仪进行刺激培养，超声波生物刺激生长仪处理参数为超声频率30kHz，功率10W，超声时间10s，间隔时间20s，共进行30分钟超声波刺激。
实施例2：干人参原料
本实施例2具体包括以下步骤：
(1)原料预处理：挑选干燥的种植5年以上的干燥人参根茎0.1公斤，含水量小于5％，粉碎至200目至300目。加6倍的纯净水浸泡，调节pH至7.0。
(2)酶解步骤：加入人参原料重量0.5％的内切蛋白酶和人参原料重量0.1％的纤维素酶酶解3小时，在酶解过程中每隔1小时搅拌5分钟，使酶解均匀充分的进行。
(3)均质处理：采用微射流高压均质机，通过增压泵或均质机柱塞泵抽吸进料；物料增压：物料在柱塞增压泵内，增压到设定压力值38Mpa；被增压的物料，在微射流高压均质机内达到超微化均质状态，经过均质处理的人参均质物料，被收集到出料容器。在此过程中，经高压微射流处理的物料通过换热器进行冷却处理，在本实施例中，设定实时控温温度40℃；
4)发酵处理：
上述步骤获得的均质物料，加入经粉碎处理的其它原料和水，加入乳酸杆菌进行发酵处理。所述其它原料包括黄芪0.4公斤、石斛0.1、菟丝子0.4公斤、五味子0.4公斤和麦冬0.3公斤，所述原料经粉碎至80-120目；所述均质物料和其它原料与水的体积比为1:10-20；乳酸杆菌的加入量为90克；所述乳酸杆菌为嗜酸乳酸杆菌；
发酵培养：所述培养过程中需要10L发酵罐，采用液种进罐的接种方式。在发酵全程可用0.5N-1NHCl和0.5N-1NNaOH或10％-20％氨水调节pH值为6.5-8.0。在接种后使用较大通气量。
实施例3：鲜人参原料
本实施例3具体包括以下步骤：
(1)原料预处理：挑选新鲜的种植5年以上的鲜人参根茎0.3公斤，加入5倍纯净水，调节pH至7.5；匀浆粉碎，过200目至300目筛。
(2)酶解步骤：加入人参原料重量0.5％的内切蛋白酶和人参原料重量0.1％的纤维素酶酶解3小时，在酶解过程中每隔1小时搅拌5分钟，使酶解均匀充分的进行。
(3)均质处理：采用微射流高压均质机，通过增压泵或均质机柱塞泵抽吸进料；人物料增压：物料在柱塞增压泵内，增压到设定压力值35.8Mpa；被增压的物料，在微射流高压均质机内达到超微化均质状态，经过均质处理的人参均质物料，被收集到出料容器。在此过程中，经高压微射流处理的物料通过换热器进行冷却处理，在本实施例中，设定实时控温温度40℃；
4)发酵处理：
上述步骤获得的均质物料，加入经粉碎处理的其它原料和水，加入乳酸杆菌进行发酵处理。所述其它原料包括黄芪0.2公斤、石斛0.05、菟丝子0.2公斤、五味子0.2公斤和麦冬0.15公斤，所述原料经粉碎至80-120目；所述均质物料和其它原料与水的体积比为1:10-20；乳酸杆菌的加入量为80克；所述乳酸杆菌为嗜热乳酸杆菌；
发酵培养：所述培养过程中需要10L发酵罐，采用液种进罐的接种方式。在发酵全程可用0.5N-1NHCl和0.5N-1NNaOH或10％-20％氨水调节pH值为6.5-8.0。在接种后使用较大通气量。
参照图1-2，图1为本发明方法流程示意图；图2为本发明发酵液人参皂苷与对照品溶液的总皂苷吸收光谱图。对照品按照实施例2方式制备，没有进行发酵步骤处理。
以上结合具体实施例，对本发明技术方案的具体实施方式进行了进一步描述，此具体实施方案是为了对本技术方案的详细描述，而不是为了限制本技术方案。以上所述的具体实施方案，仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的技术构思和保护范围进行限定，在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域普通技术人员对本技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围。
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