阅读说明：本技术 一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定 (Infection identification of pig trophoblast system for porcine pseudorabies virus replication ) 是由 宋长绪 刘献辉 洪林君 张歆明 徐舸 熊谋康 张乐宜 刘艳玲 徐铮 于 2021-07-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定,采用永生化猪胚胎滋养层细胞作为一种新颖的细胞器来研究猪伪狂犬病毒和繁殖障碍疾病的联系,永生化的滋养层细胞系可高效/稳定的传代,且培养体系成熟。本发明的细胞系能支持PRV的复制,确定了PRV对永生化猪胚胎滋养层细胞能较好的感染,引起细胞病变,且与PRV感染传代细胞PK15的TCID50相差不到一个滴度,可以用于PRV的传代及受体方面,PRV引起繁殖障碍疾病等方面的机制等研究。且本发明中传代滋养层细胞系的建立对于猪相关病毒的垂直传播研究及猪育种方面的相关研究有重要意义。(The invention discloses infection identification of a porcine trophoblast system for porcine pseudorabies virus replication, which adopts an immortalized porcine embryo trophoblast cell as a novel organelle to research the relation between the porcine pseudorabies virus and propagation disorder diseases, the immortalized trophoblast cell system can be efficiently/stably passed, and a culture system is mature. The cell line can support the replication of PRV, determines that PRV can better infect immortalized porcine embryonic trophoblast cells and cause cytopathy, has a titer which is less than that of TCID50 of PRV infected subculture cell PK15, and can be used for the research of mechanisms and the like in the aspects of PRV passage and receptor, PRV induced reproductive disorder diseases and the like. And the establishment of the subculture trophoblast cell line has important significance for vertical transmission research of porcine related viruses and related research in the aspect of pig breeding.)

一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定。

背景技术

猪伪狂犬(Pseudorabies，PR)是世界范围内广泛发生的一种猪的急性、高度接触性传染病。该病传染性强，易继发细菌和其他病毒的混合感染或继发感染，主要以新生仔猪的急性死亡及四周龄以上仔猪出现神经症状，妊娠母猪以繁殖障碍、流产、死胎及呼吸道症状为特征。PR病原为伪狂犬病毒(Pseudorabiesvirus，PRV)，属于疱疹病毒科α疱疹病毒亚科水痘病毒属的猪疱疹病毒I型，基因组全长为150kbp。现有技术中，关于PRV在猪滋养层细胞上面的研究尚未开展，后期需要加快研究。

发明内容

针对现有技术中的不足之处，本发明提供一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系、建立及应用。

为了达到上述目的，本发明技术方案如下：

一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定，采用永生化猪胚胎滋养层细胞作为一种新颖的细胞器来研究猪伪狂犬病毒和繁殖障碍疾病的联系，永生化的滋养层细胞系可高效稳定的传代，且培养体系成熟。

进一步的，所述胚胎滋养层细胞具有无限传代的功能，且能维持猪滋养层细胞的特性，在传代过程中能保持核型正常，不纯正染色体结构和数目的变化。

进一步的，所述感染鉴定包括病变切片变化、IFA免疫荧光分离分布、TCID50对比。

有益效果：本发明的细胞系能支持PRV的复制，确定了PRV对永生化猪胚胎滋养层细胞能较好的感染，引起细胞病变，且与PRV感染传代细胞PK15的TCID50相差不到一个滴度，可以用于PRV的传代及受体方面，PRV引起繁殖障碍疾病等方面的机制等研究。且本发明中传代滋养层细胞系的建立对于猪相关病毒的垂直传播研究及猪育种方面的相关研究有重要意义。

附图说明

图1为实施例中PRV感染滋养层细胞后引起的细胞病变图；

图2为实施例中PRV感染滋养层细胞后，IFA免疫荧光病毒粒子鉴定图；

图3为实施例中PRV感染猪滋养层细胞与PK15细胞的感染后的TCID50对比折线图。

具体实施方式

以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。

一种可用于猪伪狂犬病毒复制的猪滋养层系的感染鉴定，采用永生化猪胚胎滋养层细胞作为一种新颖的细胞器来研究猪伪狂犬病毒和繁殖障碍疾病的联系，永生化的滋养层细胞系可高效/稳定的传代，且培养体系成熟。

为了观测PRV感染滋养层细胞后引起得细胞病变，对本实施例获得的滋养层细胞进行PRV感染对比实验，分成感染组（MOI=1组）和未感染病毒对照组（Mock组）。结果如图1所示，可见细胞感染图有病变，细胞状态有变化：用PRV感染滋养层细胞，感染剂量为MOI=1，可发现感染48 h后（48 hpi），与未感染病毒对照组（Mock组）细胞相比状态有差异，到感染后72h后，病毒感染组细胞出现了较明显的细胞病变。

为了观测PRV感染滋养层细胞后，IFA免疫荧光病毒粒子感染细胞情况，对本实施例获得的滋养层细胞进行PRV感染对比实验，分成低感染组（MOI=0.1组）、中感染组（MOI=1组）、高感染组（MOI=10组）以及未感染病毒对照组（Mock组）。用PRV感染滋养层细胞，感染剂量分别为MOI=0.1、1、10、0，待感染48h后，进行IFA检测。结果如图2所示，可见IFA可看到病毒粒子发绿光：可发现感染48 h后（48 hpi），与对照未感染病毒组细胞相比，伪狂犬病毒PRV能有效复制，同时发现随着感染剂量增加，伪狂犬病毒PRV明显增强。

为了PRV感染滋养层细胞（PTR2）与感染PK15细胞的TCID50对比情况，对本实施例获得的滋养层细胞进行PRV感染对比实验，分别用伪狂犬病毒PRV感染滋养层细胞和PK15细胞，收取不同感染时间点的病毒液。结果如图3所示，在观测时间12-72小时内，PRV感染滋养层细胞（PTR2）的TCID50显著低于PK15细胞上面的TCID50。