一种促进粘性卵孵化同步发育的方法
阅读说明：本技术 一种促进粘性卵孵化同步发育的方法 (Method for promoting synchronous development of adhesive eggs during incubation ) 是由 陈春娜 黄颖颖 龙治海 陈先均 李正一 徐飞 张俊林 苏旭涛 肖宇 于 2021-09-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种促进粘性卵孵化同步发育的方法,包括以下步骤：繁殖前准备、人工催产、人工授精、布卵、晾卵、出膜,其中晾卵为当受精卵中发育到囊胚末期的卵占50％以上时,将粘有受精卵的粘连物从孵化容器内拿出,置于通风、干燥、自然光照且无阳光直射的地方,晾干粘连物表面水分即可。本发明可使得受精卵分裂与发育间的时间间隙缩短,从而促使后期发育和出膜的同步；技术操作简单、安全、规范；适用范围广,可广泛应用于粘性卵的同步孵化。(The invention discloses a method for promoting synchronous development of adhesive egg incubation, which comprises the following steps: preparing before propagation, artificially hastening parturition, artificially inseminating, distributing eggs, airing eggs and taking out membranes, wherein the egg airing is realized by taking out the adhesion substance adhered with the fertilized eggs from an incubation container when more than 50 percent of eggs growing to the last stage of blastocyst in the fertilized eggs are put in a place which is ventilated, dried, naturally illuminated and has no direct sunlight, and airing the water on the surface of the adhesion substance. The invention can shorten the time gap between division and development of the fertilized eggs, thereby promoting the synchronization of later development and membrane emergence; the technical operation is simple, safe and standard; the application range is wide, and the method can be widely applied to synchronous hatching of the viscous eggs.)
技术领域
本发明属于鱼类养殖技术领域，具体涉及一种促进粘性卵孵化同步发育的方法。
背景技术
在人工繁育过程中，产粘性卵鱼类常常发生排卵时间不一致或者多次产卵的情况，导致出现不同批次的粘性卵间隔时间过长，使得鱼苗出膜有先有后，继而造成开口以及转食的不同步，为后面的生产带来诸如“大吃小”、“生长离散”、“养殖成本增加”等一系列的问题。
因此，为了促进卵的同步发育，尽可能的缩短鱼苗出膜间隔时间，在实际生产中，从业人员常常通过调节催产药物剂量来控制鱼类排卵时间，但在这样还是存在以下缺点：
(1)从业人员通过对亲鱼的发育程度的判断来确定注射剂量，其经验性较强，且效果也不尽如人意。
(2)药物注射剂量的不同，增加了实际操作过程的难度。
(3)为人工催产工作带来较大的不确定性。
发明内容
针对上述现有技术，本发明提供一种促进粘性卵孵化同步发育的方法，可有效缩短鱼苗出膜间隔时间，且方法简单，操作流程统一、规范、可靠。
为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：提供一种促进粘性卵孵化同步发育的方法，该方法包括如下步骤：
(1)繁殖前准备：选取产粘性卵的适龄亲鱼放入催产池内培养；
(2)人工催产：分别对雌雄亲鱼注射催产药物，放入催产池内，静待药物效应时间；
(3)人工授精：将雌鱼和雄鱼按照1：1～5：1比例混养，并进行人工授精，获得受精卵；
(4)布卵：将产生粘性的受精卵均匀的粘在粘连物质上，并在水中静置3～5分钟，随后放孵化容器内进行孵化；
(5)晾卵：当受精卵中发育到囊胚末期的卵占50％以上时，将粘有受精卵的粘连物从孵化容器内拿出，置于通风、干燥、自然光照且无阳光直射的地方，晾干粘连物表面水分；
(6)出膜：将同一时间晾的卵放入相同网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
进一步，步骤(1)中催产池内保持流水或循环水状态。
进一步，催产药物为PG、HCG、LRH-A和DOM中的至少一种。
进一步，步骤(3)中人工授精方法为：通过人工挤压的方法得到精液和卵子，再将精液和卵子放入容器中，加入清水，晃动容器使其混合均匀即可。
进一步，步骤(4)中受精卵在粘连物质上的密度为5～10粒/cm2。
进一步，粘连物质为粘卵板或棕榈片。
进一步，步骤(5)中晾卵时，粘连物处于悬挂状态。
进一步，步骤(5)中晾卵时间为20～30分钟。
本发明的有益效果是：因为不同的卵孵化速度不尽相同，为了使处于不同状态的卵趋于统一，本发明采用了晾卵的方式，将受精卵短时间移出水体，改变其孵化环境，在一定阶段，缩短受精卵之间的速度差异，延缓处于发育时相的卵孵化速度，同时不影响处于分裂时相的卵，从而使处于不同时相的卵趋于统一。晾卵充分利用了粘性卵的特性和胚胎前期发育特点，粘性卵有粘性，能很好附着在粘连物质上，卵膜表面的粘液可大大减少水分的流失，同时也对卵膜起到保护作用，使其能适应短时间的离水晾卵；胚胎前期发育时，处于细胞分裂期，此时期的卵由于分裂的自发性，不会受到太大环境影响而延缓发育。因此，通过晾卵可有效缩短不同受精卵分裂与发育间的时间间隙。
本发明的特点是技术操作简单、安全、规范；充分利用粘性卵的特性和胚胎前期发育特点，在受精卵分裂和发育过渡期，利用孵化环境的变化，延缓发育的同时不影响分裂的进行，使得受精卵分裂与发育间的时间间隙缩短，从而促使后期发育和出膜的同步；适用范围广，可广泛应用于粘性卵的同步孵化。
具体实施方式
本发明中促进粘性卵孵化同步发育的方法：
(1)繁殖前准备：提前选取成熟度高、无伤的产粘性卵的适龄亲鱼放入准备好的催产池，池内保持流水或循环水状态。
(2)人工催产：参照催产技术标准，按鱼体重、种类分别对雌雄亲鱼注射相应剂量的催产药物后，放入催产池内，静待药物效应时间。
(3)人工授精：根据实际水温，待达到效应时间后，即可对雌鱼进行检查，看是否有游离卵排出，若有，则将雌鱼和雄鱼按照1：1～5：1的比例混养，并准备进行人工授精。人工授精方法为：通过人工挤压的方法得到精液和卵子，再将精液和卵子放入容器中，加入清水，晃动容器使其混合均匀即可。
(4)布卵：待受精卵产生粘性时，将其均匀的粘在粘连物质上，其密度控制在5～10粒/cm2，并在水中静置3～5分钟，随后放孵化容器内进行孵化，同时记下相应的水质信息。
(5)晾卵：①待卵吸水膨胀后，每隔1～2小时从每个孵化池或孵化容器内随机挑选5～10粒卵进行镜检。
②当镜检观察受精卵发育到囊胚末期的卵占50％以上时，即可进行晾卵操作：
I.分别测量水温和室温，确保晾卵处环境温度为水温±3～5℃，若温差过大，可用空调等设备调节。
II.选择一个通风、干燥，自然光照下且无阳光直射的地方，在上方设置一根铁丝，将整个粘有受精卵的粘卵板或棕榈片等粘连物从孵化容器内拿出，将其一端用细线悬挂于铁丝，以免压迫受精卵。
III.在晾卵过程中，为避免受精卵离水时间过长对卵造成不利影响，当粘卵板或棕榈片等粘连物表面水分刚好干后(一般20～30分钟)即可。
IV.在规模化生产中，每次繁殖的亲鱼数量过多或亲鱼属于多次产卵鱼类，产卵时间间隔过长，受精卵发育时相差距较大，可按照上述步骤，分批次进行晾卵。
(6)出膜
提前将同一时间晾的卵放入相同网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
下面结合实施例对本发明中的技术方案进行具体说明。
实施例1
以岩原鲤为例。
1.繁殖前准备
提前选取4龄以上成熟度高、无伤的岩原鲤亲鱼，放入准备好的催产池，池内保持流水或循环水状态。
2.人工催产
4～5月，寒潮过后，气温逐渐回升，水温稳定在19℃以上一周，即可开始催产，每千克雌鱼按照5mg PG+1000IU HCG+10ug LRH-A，雄鱼注射剂量减半，采用2针法注射，第一针注射总剂量的10％，12h后注射余下剂量。注射后，放入催产池内，静待药物效应时间。
3.人工授精
水温22℃左右时，药物效应时间15h左右，在此期间，每隔1h检查1次雌鱼，看是否有游离卵排出，若有，则将雌鱼和雄鱼按照3：1的比例准备进行人工授精。通过人工挤压的方法得到精液和卵子后，采用干法授精，将精、卵在容器内混合均匀后，加入少量清水，并迅速轻轻的晃动容器，使其混合均匀。
4.布卵
将产生粘性的受精卵均匀的粘在棕榈片上，其密度控制在7粒/cm2，并在水中静置4分钟，待卵粘上后即可放入孵化池内进行孵化，同时记下相应的水质信息。
5.晾卵
①待卵吸水膨胀开始发育后，每隔1小时从每个孵化池或孵化容器内随机挑选5粒卵进行镜检。
②当镜检观察受精卵发育到囊胚末期的卵占50％以上时，即可进行晾卵操作：
I.分别测量水温和室温，确保晾卵处环境温度为水温±4℃，若温差过大，可用空调等设备调节。
II.选择一个通风、干燥，自然光照下且无阳光直射的地方，在上方设置一根铁丝，将整个粘有受精卵的棕榈片从孵化容器内拿出，将其一端用细线悬挂于铁丝，半悬挂于空中，以免压迫受精卵。
III.在晾卵过程中，为避免受精卵离水时间过长对卵造成不利影响，当棕榈片表面水分刚好干后(一般25分钟左右)即可。
IV.在规模化生产中，每次繁殖的亲鱼数量过多或亲鱼属于多次产卵鱼类，产卵时间间隔过长，受精卵发育时相差距较大，可按照上述步骤，分批次进行晾卵。
6.出膜
鱼苗出膜前，提前将同一时间晾的卵放入相同网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
实施例2
以岩原鲤为例。
1.繁殖前准备
提前选取4龄以上成熟度高、无伤的岩原鲤亲鱼，放入准备好的催产池，池内保持流水或循环水状态。
2.人工催产
4～5月，寒潮过后，气温逐渐回升，水温稳定在19℃以上一周，即可开始催产，每千克雌鱼按照5mg PG+1000IU HCG+10ug LRH-A，雄鱼注射剂量减半，采用2针法注射，第一针注射总剂量的10％，12h后注射余下剂量。注射后，放入催产池内，静待药物效应时间。
3.人工授精
水温22℃左右时，药物效应时间15h左右，在此期间，每隔1h检查1次雌鱼，看是否有游离卵排出，若有，则将雌鱼和雄鱼按照1：1的比例准备进行人工授精。通过人工挤压的方法得到精液和卵子后，采用干法授精，将精、卵在容器内混合均匀后，加入少量清水，并迅速轻轻的晃动容器，使其混合均匀。
4.布卵
将产生粘性的受精卵均匀的粘在棕榈片上，其密度控制在5粒/cm2，并在水中静置3分钟，待卵粘上后即可放入孵化池内进行孵化，同时记下相应的水质信息。
5.晾卵
①待卵吸水膨胀开始发育后，每隔2小时从每个孵化池或孵化容器内随机挑选7粒卵进行镜检。
②当镜检观察受精卵发育到囊胚末期的卵占50％以上时，即可进行晾卵操作：
I.分别测量水温和室温，确保晾卵处环境温度为水温±4℃，若温差过大，可用空调等设备调节。
II.选择一个通风、干燥，自然光照下且无阳光直射的地方，在上方设置一根铁丝，将整个粘有受精卵的棕榈片从孵化容器内拿出，将其一端用细线悬挂于铁丝，半悬挂于空中，以免压迫受精卵。
III.在晾卵过程中，为避免受精卵离水时间过长对卵造成不利影响，当棕榈片表面水分刚好干后(一般20分钟左右)即可。
IV.在规模化生产中，每次繁殖的亲鱼数量过多或亲鱼属于多次产卵鱼类，产卵时间间隔过长，受精卵发育时相差距较大，可按照上述步骤，分批次进行晾卵。
6.出膜
鱼苗出膜前，提前将同一时间晾的卵放入相同网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
实施例3
以岩原鲤为例
1.繁殖前准备
提前选取4龄以上成熟度高、无伤的岩原鲤亲鱼，放入准备好的催产池，池内保持流水或循环水状态。
2.人工催产
4～5月，寒潮过后，气温逐渐回升，水温稳定在19℃以上一周，即可开始催产，每千克雌鱼按照5mg PG+1000IU HCG+10ug LRH-A，雄鱼注射剂量减半，采用2针法注射，第一针注射总剂量的10％，12h后注射余下剂量。注射后，放入催产池内，静待药物效应时间。
3.人工授精
水温22℃左右时，药物效应时间15h左右，在此期间，每隔1h检查1次雌鱼，看是否有游离卵排出，若有，则将雌鱼和雄鱼按照5：1的比例准备进行人工授精。通过人工挤压的方法得到精液和卵子后，采用干法授精，将精、卵在容器内混合均匀后，加入少量清水，并迅速轻轻的晃动容器，使其混合均匀。
4.布卵
将产生粘性的受精卵均匀的将其粘在棕榈片上，其密度控制在10粒/cm2，并在水中静置5分钟，待卵粘上后即可放入孵化池内进行孵化，同时记下相应的水质信息。
5.晾卵
①待卵吸水膨胀开始发育后，每隔1小时从每个孵化池或孵化容器内随机挑选10粒卵进行镜检。
②当镜检观察受精卵发育到囊胚末期的卵占50％以上时，即可进行晾卵操作：
I.分别测量水温和室温，确保晾卵处环境温度为水温±5℃，若温差过大，可用空调等设备调节。
II.选择一个通风、干燥，自然光照下且无阳光直射的地方，在上方设置一根铁丝，将整个粘有受精卵的棕榈片从孵化容器内拿出，将其一端用细线悬挂于铁丝，半悬挂于空中，以免压迫受精卵。
III.在晾卵过程中，为避免受精卵离水时间过长对卵造成不利影响，当棕榈片表面水分刚好干后(一般30分钟左右)即可。
IV.在规模化生产中，每次繁殖的亲鱼数量过多或亲鱼属于多次产卵鱼类，产卵时间间隔过长，受精卵发育时相差距较大，可按照上述步骤，分批次进行晾卵。
6.出膜
鱼苗出膜前，提前将同一时间晾的卵放入相同网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
对比例1
以岩原鲤为例。
1.繁殖前准备
提前选取4龄以上成熟度高、无伤的岩原鲤亲鱼，放入准备好的催产池，池内保持流水或循环水状态。
2.人工催产
4～5月，寒潮过后，气温逐渐回升，水温稳定在19℃以上一周，即可开始催产，每千克雌鱼按照5mg PG+1000IU HCG+10ug LRH-A，雄鱼注射剂量减半,采用2针法注射，第一针注射总剂量的10％，12h后注射余下剂量。注射后，放入催产池内，静待药物效应时间。
3.人工授精
水温22℃左右时，药物效应时间15h，在此期间，每隔1h检查1次雌鱼，看是否有游离卵排出，若有，则将雌鱼和雄鱼按照3：1的比例准备进行人工授精。通过人工挤压的方法得到精液和卵子后，采用干法授精，将精、卵在容器内混合均匀后，加入少量清水，并迅速轻轻的晃动容器，使其混合均匀。
4.布卵
将产生粘性的受精卵均匀的粘在棕榈片上，其密度控制在7粒/cm2，并在水中静置4分钟，待卵粘上后即可放入孵化池内进行孵化，同时记下相应的水质信息。
5.出膜
鱼苗出膜前，提前将卵放入网箱，待鱼苗出膜后，将鱼苗带水移入新网箱内进行鱼苗培育。
对按实施例和对比例养殖后的鱼类进行如下检测分析：
对鱼类受精率、孵化率和4小时出膜率的统计，结果见表1。从出膜率来看，采用本发明的粘性卵孵化方法，4小时出膜率高达83％，由表1可知本发明的孵化方法可有效缩短受精卵分裂与发育间的时间间隙，促使受精卵同步发育，使鱼苗出膜时间相近。
表1鱼类增重率、成活率、死亡率
实施方式
受精率(％)
孵化率(％)
4小时出膜率(％)
实施例1
73.7
63.5
83.2
实施例2
74.1
63.9
83.7
实施例3
73.2
63.1
82.6
对比例1
69.4
60.7
37.8
虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了详细地描述，但不应理解为对本专利的保护范围的限定。在权利要求书所描述的范围内，本领域技术人员不经创造性劳动即可作出的各种修改和变形仍属本专利的保护范围。
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