具体实施方式

需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。

根据本发明一种典型的实施方式，提供一种复合微生物菌剂。该复合微生物菌剂由微生物和辅料制成，其中，微生物由芽孢杆菌(Bacillus)、肠杆菌(Enterobacteria)、乳酸菌(lactobacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)混合制成。

本发明的复合微生物菌剂包含特定的四种菌种，能够避免因单功能菌种不耐受环境冲击的缺陷，并且四种菌株之间的功能表达没有受到抑制，且制备方法简单、成本低。根据不同的微生物菌种代谢特性不同，产生的代谢产物不同，形成的驱油采油机理不同，由此也形成了不同的微生物采油工艺，四种微生物相互协同，产生了很好的技术效果。

优选的，芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌和假单胞菌的数量比为(1-6):(1-6):(1-6):(1-6)。在此例范围内能够更好的体现四种微生物间的协同作用。

根据本发明一种典型的实施方式，辅料为微生物液体培养基，即通过培养后的微生物菌液可以直接混合作为复合微生物菌剂，制备方法简单、成本低。

优选的，液体培养基由以下重量百分比的原料制成：0.5～2.5％的玉米糖浆、0.5～2.5％的维生素、0.5～5％的植物油、0.1～0.5％的KH₂PO₄、0.01～0.1％的NaNO₃、0.1～0.2％酵母粉、0.01～0.1％的苯、0.1～0.2％的黄原胶、余量为水。在上述组分的液体培养基中，上述四种菌都能够较好的繁殖，且上述原料来源广泛、易得，制备成本低，易于工业化生产。更优选的，液体培养基的pH为7-8，在此pH值范围内菌株增值能力较强。

根据本发明一种典型的实施方式，提供一种上述复合微生物菌剂的制备方法。该制备方法包括以下步骤：将芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌分别接种于液体培养基中进行培养，然后将含有上述菌种的培养基按照菌种数量比例为芽孢杆菌：肠杆菌：乳酸菌、假单胞菌＝(1-6):(1-6):(1-6):(1-6)的比例混合，制得复合微生物菌剂。

本发明的复合微生物菌剂包含特定的四种菌种，能够避免因单功能菌种不耐受环境冲击的缺陷，并且四种菌株之间的功能表达没有受到抑制，且制备方法简单、成本低。根据不同的微生物菌种代谢特性不同，产生的代谢产物不同，形成的驱油采油机理不同，由此也形成了不同的微生物采油工艺，四种微生物相互协同，产生了很好的技术效果。

优选的，液体培养基由以下重量百分比的原料制成：0.5～2.5％的玉米糖浆、0.5～2.5％的维生素、0.5～5％的植物油、0.1～0.5％的KH₂PO₄、0.01～0.1％的NaNO₃、0.1～0.2％酵母粉、0.01～0.1％的苯、0.1～0.2％的黄原胶、余量为水。在上述组分的液体培养基中，上述四种菌都能够较好的繁殖，且上述原料来源广泛、易得，制备成本低，易于工业化生产。更优选的，液体培养基的pH为7-8，在此pH值范围内菌株增值能力较强。

优选的，芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的培养的条件均为于30～40℃培养36～50h，培养温度条件不苛刻，易于大规模培养。更优选的，芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的0.1～10％、0.1～10％、0.2～10％、0.1～10％，便于菌种的活化增值，进一步优选的，芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的1％、1％、3％、4％。

根据本发明一种典型的实施方式，提供一种复合微生物菌剂在采油中的应用；优选的，将复合微生物菌剂一次性或分批次注入油井中。

下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。

实施例1

一种复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备液体培养基，其中该培养基中由以下重量百分比的原料制成：0.5％的玉米糖浆、0.5％的维生素、2％的植物油、0.1％的KH₂PO₄、0.01％的NaNO₃、0.1％酵母粉、0.01％的苯、0.1％的黄原胶、余量为水；调节该培养基的pH值为7，进行灭菌；其中苯既可以作为碳源也可以作为增溶剂；

(2)按照芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的1.456％的比例分别进行接种培养，培养时间为36h，培养温度为30℃；

(3)将培养好的菌株按照1:1:1:1进行混合，得到复合微生物菌剂。

实施例2

一种复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备液体培养基，其中该培养基中由以下重量百分比的原料制成：2.5％的玉米糖浆、2.5％的维生素、5％的植物油、0.5％的KH₂PO₄、0.1％的NaNO₃、0.2％酵母粉、0.1％的苯、0.2％的黄原胶、余量为水；调节该培养基的pH值为7，进行灭菌；其中苯既可以作为碳源也可以作为增溶剂；

(2)按照芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的10％的比例分别进行接种培养，培养时间为36h，培养温度为30℃；

(3)将培养好的菌株按照1:1:1:1进行混合，得到复合微生物菌剂。

实施例3

一种复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备液体培养基，其中该培养基中由以下重量百分比的原料制成：1.5％的玉米糖浆、1.5％的维生素、2％的豆油、0.2％的KH₂PO₄、0.05％的NaNO₃、0.15％酵母粉、0.05％的苯、0.15％的黄原胶、余量为水；调节该培养基的pH值为7.5，进行灭菌；其中苯既可以作为碳源也可以作为增溶剂；

(2)按照芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的2％的比例分别进行接种培养，培养时间为45h，培养温度为35℃；

(3)将培养好的菌株按照2:1:1:4进行混合，得到复合微生物菌剂。

实施例4

一种复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备液体培养基，其中该培养基中由以下重量百分比的原料制成：0.5％的玉米糖浆、0.5％的维生素、0.5％的植物油、0.1％的KH₂PO₄、0.01％的NaNO₃、0.1％酵母粉、0.01％的苯、0.1％的黄原胶、余量为水；调节该培养基的pH值为7.5，进行灭菌；其中苯既可以作为碳源也可以作为增溶剂；

(2)按照芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的5％的比例分别进行接种培养，培养时间为45h，培养温度为35℃；

(3)将培养好的菌株按照4:1:1:2进行混合，得到复合微生物菌剂。

实施例5

一种复合微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备液体培养基，其中该培养基中由以下重量百分比的原料制成：1.0％的玉米糖浆、2.13％的维生素、0.45％的KH₂PO₄、4％的菜籽油、0.1％的NaNO₃、0.4％酵母粉、0.11％的苯、0.12％的黄原胶、余量为水；调节该培养基的pH值为8，进行灭菌；其中苯既可以作为碳源也可以作为增溶剂；

(2)按照芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌的接种量分别为液体培养基重量分数的5％的比例分别进行接种培养，培养时间为50h，培养温度为40℃；

(3)将培养好的菌株按照1:1:3:6进行混合，得到复合微生物菌剂。

实验结果：将复合微生物菌剂一次性或分批次注入低产稠油井中，根据试验区块油水性质、地质油藏特征来确定注入量，适用于地下粘度为5000厘泊以下的稠油，注入菌浓度为1-10％，若分批注入时，注入次数为一年4-12次；在大港和新疆油田选取了低产稠油井进行了微生物单井吞吐试验，采用油管加入法，加入复合微生物菌剂200方(浓度10⁸cfu/ml)，关井20天后开井恢复生产，日产油从0.2-1.5t/天上升到1.6-2.69t/天，增油效果明显。

表1为含有芽孢杆菌、肠杆菌、乳酸菌、假单胞菌培养基在不同比例下的实验结果：

表1复合菌剂不同比例下实验效果

表2单一菌种和复合微生物菌剂的实验对比

现场应用方法：

将复合微生物菌剂一次性或分批次注入稠油井中，根据试验区块油水性质、地质油藏特征来确定注入量，适用于地下粘度为20000厘泊以下的稠油，注入菌浓度为1-10％，若分批注入时，注入次数为一年4-12次。

实施例6

四个菌种间的协同作用，提高复合菌剂的采油功能。

四个菌单独及混合菌进行原油乳化分散实验(图1中上方的图)以及对应的四个菌单独及混合菌乳化原油的粒径分析(图1中下方的图)，从直观上看，单菌的效果差异较大，四种微生物菌剂混合后形成了良好的协调效果，乳化粒径均匀，分散细腻，混合菌株对原油乳化效果最好；从乳化等级来看(表3和表4)，混合菌的乳化等级在不同培养基中都要优于单菌。

其中，乳化实验步骤：将30ml菌液接入到摇瓶中，1000ml摇瓶中装有300ml培养基和60克原油，置于36℃摇床中培养7天。

表3

注：培养基①和培养基②为以原油碳源的常规无机盐培养基，①和②的差异在于②中添加了0.1％的葡萄糖；混合菌的比例1:1:1:1配制；原油乳化等级评定按照行业常规的直观观察法。

表4

另外，等级5为静置48小时以上不分层。

从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：

1)采用本发明制备的复合微生物菌剂可以提高采油采收率；

2)避免因单功能菌种不耐受环境冲击的缺陷，四种菌株之间的功能表达没有受到抑制；

3)本发明制备方法简单、成本低，简化了具有采油功能的复合微生物菌剂的制备工艺，有效的提高了采油效果。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。