具体实施方式

本发明提供了一种牙根管冲洗液用中药组合物，包括如下原料：苦参、蛇床子、海金沙、车前子、黄连、黄柏、甘草。

本发明对于中药组合物各原料的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。在本发明中，所述中药组合物中，苦参、蛇床子、海金沙、车前子、黄连、黄柏、甘草的用量比优选为3-4：1-2：1-2：1-2：2-3：1-2：1-2。

本发明所述中药组合物，苦参、黄连共用为君，杀菌消炎，车前子和海金沙为臣药，镇痛杀菌，黄柏和蛇床子为佐药，清热燥湿，甘草调和诸药药性，为使药。本发明中药组合物，配伍合理，共奏杀菌、消炎、镇痛、舒缓之效。有助于牙根管冲洗液具有更好的广谱抗菌性，能够有效清除根管内生物膜。

在本发明中，所述中药组合物的制备方法优选的包括如下步骤：将苦参、蛇床子和海金沙与水混合，80-100℃煎煮2-4h，减压浓缩至相对密度为1.3-1.5，得物料1；将车前子和黄连与体积浓度为75％-85％的乙醇溶液混合，回流提取1-2h，减压浓缩至相对密度为1.3-1.5，得物料2；将黄柏和甘草武火炒制30-50min，粉碎后过200-270目筛，得物料3，将物料1、物料2和物料3混合即得中药组合物。

本发明对于水和乙醇溶液的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。在本发明中，苦参、蛇床子和海金沙与水的重量比优选为1：3-4，更优选为1：3.5。在本发明中，所述煎煮的温度优选为85-95℃，更优选为90℃，煎煮的时间优选为2.5-3.5h，更优选为3h。在本发明中，车前子和黄连与乙醇溶液的重量比优选为1：2-4，更优选为1：3。在本发明中，所述乙醇溶液的体积浓度优选为78％-82％，更优选为80％，所述回流提取的时间优选为1.2-1.8h，更优选为1.4-1.6h。本发明物料1和物料2的相对密度优选为1.4。在本发明中，将黄柏和甘草进行炒制的时间优选为35-45min，所述武火的温度优选为150-220℃，更优选为180-190℃，粉碎后过筛的目数优选为230目。

本发明还提供了一种牙根管冲洗液，所述牙根管冲洗液包括上述中药组合物。

在本发明中，所述牙根管冲洗液优选的还包括次氯酸钠、MTAD(复方苯扎氯铵抗菌液)和蒸馏水，所述牙根管冲洗液中，各组分的重量份数优选的为：中药组合物150-300份、次氯酸钠5-50份、MTAD 10-100份、蒸馏水1000-2000份，更优选的为中药组合物180-260份、次氯酸钠25-40份、MTAD 30-80份、蒸馏水1200-1800份。在本发明中，中药组合物不仅提高了牙根管冲洗液的抑菌、抗菌性能，而且还中和了次氯酸钠溶液对口腔黏膜组织的刺激性、腐蚀性和过敏性，使整个牙根管冲洗液更易被消费者接受。本发明牙根管冲洗液，各组分配伍合理，既能有效抑菌、抗菌、清除菌体生物膜，还能去除牙本质碎屑和玷污层，功效显著且全面。

本发明还提供了一种上述牙根管冲洗液的制备方法，优选的包括如下步骤：依次将配方量的中药组合物、次氯酸钠和MTAD加入蒸馏水中，搅拌10-30min，加入pH调节剂调节pH至8-12，即得。

在本发明所述牙根管冲洗液的制备方法中，所述中药组合物的制备方法同上，在此不再一一赘述。在本发明中，所述搅拌的时间优选为15-25min，更优选为18-22min，所述pH优选的为9-11，更优选的为10。在本发明中，所述pH调节剂优选的为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠，或其溶液中的至少一种。

下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

准确称取45g苦参、15g蛇床子、15g海金沙与225g水混合，80℃煎煮2h，减压浓缩至相对密度为1.3，得物料1；准确称取15g车前子和30g黄连与90g体积浓度为75％的乙醇溶液混合，回流提取1h，减压浓缩至相对密度为1.3，得物料2；准确称取15g黄柏和15g甘草武火炒制30min，粉碎后过200目筛，得物料3，将物料1、物料2和物料3混合即得中药组合物。

依次将中药组合物、5g次氯酸钠和10g MTAD加入1000g蒸馏水中，搅拌10min，加入氢氧化钠溶液调节pH至8，即得牙根管冲洗液。

实施例2

准确称取90g苦参、30g蛇床子、30g海金沙与600g水混合，100℃煎煮4h，减压浓缩至相对密度为1.5，得物料1；准确称取30g车前子和60g黄连与360g体积浓度为85％的乙醇溶液混合，回流提取2h，减压浓缩至相对密度为1.5，得物料2；准确称取30g黄柏和30g甘草武火炒制30min，粉碎后过270目筛，得物料3，将物料1、物料2和物料3混合即得中药组合物。

依次将中药组合物、50g次氯酸钠和100gMTAD加入2000g蒸馏水中，搅拌30min，加入氢氧化钠溶液调节pH至12，即得牙根管冲洗液。

实施例3

准确称取40g苦参、20g蛇床子、20g海金沙与240g水混合，90℃煎煮3h，减压浓缩至相对密度为1.4，得物料1；准确称取20g车前子和30g黄连与120g体积浓度为80％的乙醇溶液混合，回流提取1.5h，减压浓缩至相对密度为1.4，得物料2；准确称取10g黄柏和10g甘草武火炒制40min，粉碎后过230目筛，得物料3，将物料1、物料2和物料3混合即得中药组合物。

依次将中药组合物、5g次氯酸钠和10g MTAD加入1000g蒸馏水中，搅拌10min，加入氢氧化钾溶液调节pH至9，即得牙根管冲洗液。

实施例4

准确称取54g苦参、18g蛇床子、18g海金沙与270g水混合，90℃煎煮3h，减压浓缩至相对密度为1.4，得物料1；准确称取18g车前子和36g黄连与162g体积浓度为80％的乙醇溶液混合，回流提取1.5h，减压浓缩至相对密度为1.4，得物料2；准确称取18g黄柏和18g甘草武火炒制40min，粉碎后过200目筛，得物料3，将物料1、物料2和物料3混合即得中药组合物。

依次将中药组合物、25g次氯酸钠和30gMTAD加入1200g蒸馏水中，搅拌20min，加入氢氧化钾溶液调节pH至10，即得牙根管冲洗液。

对比例1

与实施例1的区别在于不含有苦参，其余均同实施例1。

对比例2

与实施例1的区别在于不含有黄连，其余均同实施例1。

对比例3

与实施例1的区别在于不含有车前子，其余均同实施例1。

对比例4

与实施例1的区别在于不含有黄柏，其余均同实施例1。

对比例5

与实施例1的区别在于不含有中药组合物，其余均同实施例1。

对比例6

与实施例1的区别在于不含有次氯酸钠，其余均同实施例1。

对比例7

与实施例1的区别在于不含有MTAD，其余均同实施例1。

实施例5

口腔黏膜刺激性试验

取实施例1-4和对比例1-7中样品，分别将2×2cm吸水纸浸湿，将湿润的吸水纸贴在口腔黏膜上，1min后取下吸水纸，用清水洗净后观察。实验结果如表1所示。

表1实施例1-4和对比例1-7的根管冲洗液口腔黏膜刺激性试验

由表1可以看出，本发明中药组合物能够中和次氯酸钠溶液对口腔黏膜组织的刺激性、腐蚀性和漂白粉味道，本发明牙根管冲洗液对口腔黏膜无刺激性和腐蚀性。

实施例6

由于粪肠球菌是与牙髓感染密切相关的革兰阳性、兼性厌氧球菌。在根管治疗术后再感染病例中，残留细菌中粪肠球菌检出率可达24％～77％，其能侵入牙本质小管，并以生物膜的形式在其内部存活。因此，粪肠球菌被认为是感染根管中最难去除的菌种之一。

本实施例以离体牙为研究对象，建立体外根管感染粪肠球菌模型，通过使用实施例1-4和对比例1-7的不同根管冲洗液进行冲洗，使用传统的活菌菌落计数方法对细菌生物膜进行定量分析，观察不同根管冲洗液处理感染根管后根管内细菌生物膜清除情况。

离体牙收集与制备

纳入标准：收集因正畸原因被拔除、未接受过牙体牙髓治疗的离体单根牙，其牙体完整、无隐裂、根尖孔发育完全、无龋坏或充填物，未行牙髓治疗。去除根周软组织及牙石，切除牙冠，去除牙髓组织。使用15#、20#K锉在根管建立通畅通道。然后将牙置于17％EDTA中30min，以去除污染层；2％NaOCl中30min，溶解有机物质；再使用去离子水彻底冲洗，清洗干净后，高温高压消毒(121℃，15MPa，15min)。将按照上述高温高压消毒后的离心管中加入30mL无菌BHI液体培养基，37℃下培养24h。若培养基保持透明，确认为灭菌效果可靠。

制备粪肠球菌感染根管模型

将粪肠球菌菌液接种至制备完成、确认无菌的离体牙根管中，50μL/根管，37℃、厌氧培养60d，每48h更换培养基1次。在最后1次更换培养基后，取1mL菌液，稀释后涂布于BHI平板，确定无污染。培养结束时，无菌条件下取出牙根。PBS冲洗，气枪干燥10s，将无菌纸尖分别插入根管中至工作长度，停留1min，吸出根管内液，记为S1。

分组处理

离体牙采用机用Protaper镍钛器械预备根管至F2，随机分为实施例1-4和对比例1-7共11组，每组5颗牙。每组冲洗后，再用10mL生理盐水冲洗根管并取样。气枪干燥10s后，将无菌纸尖分别插入根管中至工作长度，停留1min，吸出根管内液，立即放入盛有无菌生理盐水的EP管中，记为S2。振荡1min，10倍系列稀释，接种于BHI培养皿上。培养48h后，计数菌落数。然后分别计算各组细菌的减少量和减少百分数。采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析。

结果如表2所示，S1和S2分别为感染根管冲洗前、后根管内细菌菌落计数结果。

表2 11组感染根管冲洗前、后根管内细菌菌落计数结果(x±s，CFU/mL)

由表1可以看出，冲洗前，11组根管内细菌数量的差异不大(P>0.05)；预备至F2结合不同根管冲洗液进行冲洗，实施例1-4均不同程度地降低了根管内的细菌数量，较冲洗前CFU显著下降(P<0.05)，其中实施例3效果最佳。将各实施例与各对比例的细菌减少百分数进行比对可知，缺少本发明中药组合物中的任一药味，则抑菌效果将大幅下降。

实施例7

收集青岛市口腔医院拔除的新鲜离体前牙110颗作为研究对象，将离体牙放入700ml/L乙醇中1h，刮净牙石和牙周膜，储存于1g/L麝香草酚液中备用。纳入标准：①成人单根管前牙，牙根长度相差不大；②牙根发育完好，未做过牙髓治疗；③无根面龋，无根裂。

将110颗离体牙随机分为11组，分别对应实施例1-4和对比例1-7。统一将110颗离体牙在距离根尖15mm的位置截冠，采用手用不锈钢10号K型锉(ISO标准)疏通根管进行拔髓。先确定工作长度(WL)，为在K锉尖端刚从根尖孔露出时，记录止动片到器械尖端的距离再减去1mm。后采用机动ProTaper镍钛锉运用Crown-Down法和厂家使用说明书进行根管预备，均预备到F3。每颗离体牙在根管预备的时，根据冲洗方案组的要求，每更换一次根管锉器械时采用相应组别的冲洗液。11组离体牙冲洗完毕后用蒸馏水冲洗根管，用吸潮纸尖干燥根管。

扫描电镜观察

11组离体牙均用无菌小棉球堵塞根管口，将离体牙沿牙体长轴劈开，放入戊二醛中24h进行样本固定，再放入蒸馏水中浸泡24h，最后逐级脱水，完成样品制作后喷金。由1名未参与实验研究的检查者用电子显微镜观察玷污层的去除情况，以盲法分别在110例样本的距根尖3mm处(根尖1/3)、距根尖7mm(根中1/3)和距根尖11mm处(根冠1/3)随机选取3个视野区域进行放大1000倍观察并拍照，共计330张电镜照片。对330张电镜照片的玷污层去除情况的评分，让未参与本次实验研究的4名口腔内科医生进行检查。参考Hulsmann等的玷污层分级标准进行评分：无玷污层为1分；玷污层覆盖根管壁和牙本质小管＜25％为2分；玷污层覆盖根管壁和牙本质小管25％～50％为3分；玷污层覆盖根管壁和牙本质小管50％～75％为4分；玷污层覆盖根管壁和牙本质小管75％～100％为5分。实验数据采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料以“x±s”表示。结果如表3所示。

表3 11组牙根管冲洗液对根管玷污层清除情况(x±s，分)

由表3可以看出，本发明牙根管冲洗液能够有效清除根管玷污层，而且本发明牙根管冲洗液的各原料组分均发挥了不可或缺的作用，缺少任一原料组分，则相应去除根管玷污层的效果将明显降低。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。