黄体酮共晶体的制备及其应用
阅读说明：本技术 黄体酮共晶体的制备及其应用 (Preparation and application of progesterone eutectic ) 是由 徐娟 宁丽峰 陈晓锋 于 2021-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明涉及黄体酮共晶体的制备及其应用。本发明公开了一种共晶,所述的共晶的活性成分为黄体酮,所述的共晶的共晶形成物为苯甲酸衍生物,所述的苯甲酸衍生物包括对氨基苯甲酸、邻甲基苯甲酸、对甲基苯甲酸、间甲氧基苯甲酸或邻苯二甲酸。本发明提供了所述共晶的制备方法。(The invention relates to the preparation of progesterone cocrystals and uses thereof. The invention discloses a eutectic crystal, wherein the active ingredient of the eutectic crystal is progesterone, the eutectic crystal formation of the eutectic crystal is a benzoic acid derivative, and the benzoic acid derivative comprises p-aminobenzoic acid, o-methylbenzoic acid, p-methylbenzoic acid, m-methoxybenzoic acid or phthalic acid. The invention provides a preparation method of the eutectic.)
技术领域
本发明属于生物医药领域，具体涉及黄体酮共晶体的制备及其应用。
背景技术
黄体酮(Progesterone，C21H30O2)是卵巢分泌的具有生物活性的主要孕激素。黄体酮不仅能够诱导子宫内膜向分泌期转变，增加内膜容受性以利于受精卵着床，同时还作用于子宫局部，为妊娠的维持提供良好的内环境。因为黄体酮溶解性差，在临床上经常采用黄体酮油性注射液注射给药。其优点主要为疗效确切，价格低廉，缺点主要是：注射部位疼痛和刺激，易形成局部硬结，局部硬结、无菌脓肿的吸收恢复需较长时间，这些都属于肌注黄体酮的正常现象，没有特殊有效的治疗方法。此外，肌肉注射黄体酮需要每日注射。
药物共晶是将药物分子与共晶试剂通过氢键等分子间作用力形成具有固定组成和单一熔点的“超分子”。已有的研究结果表明，利用水溶性较好的共晶试剂与难溶性药物形成药物共晶，可在不改变药物分子结构的情况下显著提高难溶性药物的水溶性和生物利用度，是改善药物水溶性、渗透性和稳定性等理化性质的最新关键技术。通过对黄体酮的共晶形成物的筛选，本发明发现了苯甲酸衍生物共晶可以增加黄体酮溶解度以达到降低黄体酮的刺激性和不良反应的目的。
发明内容
本发明的目的是提供一种新型的黄体酮共晶，所述的共晶应具有一种或多种改进的特性，例如稳定性好、生物利用度高等。本发明涉及所述共晶的制备方法、其药物组合物和用途。药物共晶作为一种新型的药物固体形态，其发展刚刚起步，共晶的制备方法目前仍主要停留在反复实验阶段，不同物系之间能否形成共晶、形成的共晶能否具有改进的物化性质都是不可预知的。本发明人经过大量的实验，通过变换不同的物系和反应条件，惊喜地获得了具有改进特性的黄体酮共晶。
根据本发明的目的，本发明第一方面提供了一种共晶，所述的共晶的活性成分为黄体酮，所述的共晶的共晶形成物为苯甲酸衍生物，所述的苯甲酸衍生物包括对氨基苯甲酸、邻甲基苯甲酸、对甲基苯甲酸、间甲氧基苯甲酸或邻苯二甲酸。
当所述的苯甲酸衍生物为对氨基苯甲酸时，所得黄体酮-对氨基苯甲酸共晶的实验式为C28H37NO4。
作为一个优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述黄体酮-对氨基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图在13.519°、13.878°、17.86°、20.56°、27.142°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。
作为一个更为优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述黄体酮-对氨基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图还在7.001°、8.521°、9.719°、14.44°、16.04°、16.995°、18.242°、18.596°、19.175°、19.913°、22.12°、23.42°、23.699°、24.016°、25.12°、25.816°、26.577°、27.396°、30.518°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。非限制性的，所述的黄体酮-对氨基苯甲酸共晶具有如图1所示的X-射线粉末衍射图。
当所述的苯甲酸衍生物为邻甲基苯甲酸时，所得黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶的实验室为C29H38O4。
早作为一个优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图在9.38°、10.818°、12.421°、12.962°、13.22°、14.02°、14.941°、15.741°、17.041°、18.38°、21.08°、21.561°、26.76°、28.001°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。
作为一个更为优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图还在7.142°、11.597°、16.441°、18.799°、19.36°、20.378°、22.42°、22.74°、23.04°、23.725°、24.742°、25.96°、27.164°、28.561°、29.939°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。非限制性的，所述的黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶具有如图10所示的X-射线粉末衍射图。
当所述的苯甲酸衍生物为对甲基苯甲酸时，所得黄体酮-对甲基苯甲酸共晶的实验式为C50H68O6。
作为一个优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-对甲基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图在12.958°、13.922°、14.256°、18.103°、18.501°、20.261°、20.942°、24.158°、26.921°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。
作为一个更为优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-对甲基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图还在6.967°、8.343°、9.256°、12.3°、14.723°、16.2°、16.964°、17.324°、17.895°、19.283°、19.818°、24.423°、24.782°、25.062°、26.081°、26.662°、27.303°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。非限制性的，所述的黄体酮-对甲基苯甲酸共晶具有如图19所示的X-射线粉末衍射图。
当所述的苯甲酸衍生物为间甲氧基苯甲酸时，所得黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶的实验式为C29H38O5。
作为一个优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图在10.635°、12.358°、12.739°、13.34°、14.583°、15.415°、16.116°、16.844°、17.017°、17.941°、18.176°、20.695°、21.16°、21.361°、26.814°、27.519°、33.122°、39.736°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。
作为一个更为优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图还在10.422°、11.22°、13.702°、22.237°、23.525°、23.701°、24.021°、24.171°、25.466°、25.696°、26.339°、37.575°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。非限制性的，所述的黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶具有如图28所示的X-射线粉末衍射图。
当所述的苯甲酸衍生物为邻苯二甲酸时，所得黄体酮-邻苯二甲酸共晶的实验式为C29H36O6。
作为一个优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图在10.853°、12.883°、13.254°、14.175°、15.559°、16.319°、16.956°、17.159°、17.519°、18.523°、19.86°、20.363°、21.063°、23.774°、25.363°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。
作为一个更为优选的实施方案，使用Cu-Kα辐射，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶以2θ角度表示的X-射线粉末衍射图还在9.998°、10.557°、12.275°、13.598°、13.781°、14.744°、15.017°、18.024°、19.281°、21.583°、21.973°、23.461°、24.961°、26.378°、26.8°、27.042°、28.117°、37.761°处具有特征峰，其中，每个特征峰2θ的误差范围为±0.2°。非限制性的，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶具有如图37所示的X-射线粉末衍射图。
本发明所述共晶是纯的、单一的，基本没有混合任何其他晶体、晶型或非晶态。“基本没有”是指其中含有的其他晶体、晶型或非晶态少于20％(重量)，更指少于10％(重量)，尤其指少于5％(重量)，特别是指少于1％(重量)。
本发明中，“共晶”的晶型是被所示X射线粉末衍射图表征所证实的。“共晶”的结构是被所示X射线单晶衍射得到的结构图所证实的。本领域技术人员公知，X射线粉末衍射图的实验误差取决于仪器条件、样品准备和样品纯度。X射线粉末衍射图图谱通常会随着仪器条件而有所改变；峰的相对强度可能随实验条件而变化，所以峰强度的顺序不能作为唯一或决定性因素；峰角度的实验误差也应该被考虑进去，通常允许±0.2°的误差；样品高度等实验因素的影响会造成峰角度整体偏移，通常允许一定的偏移。因而，本领域技术人员可以理解的是，任何黄体酮和本发明第一方面所述的共晶形成物的加成物如具有与本发明X射线粉末衍射图谱相同或相似特征峰的晶型均属于本发明的范畴。
在本发明的一个实施方案中，所述的黄体酮-对氨基苯甲酸共晶的红外光谱在3425.84cm-1、3346.40cm-1、3235.75cm-1、2940.83cm-1、2870.37cm-1、1693.62cm-1、1596.26cm-1、1569.84cm-1、1447.10cm-1、1414.77cm-1、1351.21cm-1、1316.64cm-1、1248.65cm-1、954.82cm-1、852.33cm-1、778.88cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1；
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-对氨基苯甲酸共晶为正交晶系，P212121空间群，晶胞参数为α＝90°、β＝90°、γ＝90°、Z＝8，晶胞体积为
在本发明的一个实施方案中，所述的黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶的红外光谱在2937.7cm-1、2558.2cm-1、2145.2cm-1、2014.3cm-1、1671.9cm-1、1446.8cm-1、1353.5cm-1、1272.5cm-1、1223.0cm-1、1085.1cm-1、939.8cm-1、874.1cm-1、749.1cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1；
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶为三斜晶系，P1空间群，晶胞参数为α＝79.362(4)°、β＝81.464(4)°、γ＝75.860(5)°、Z＝2，晶胞体积为
在本发明的一个实施方案中，所述的黄体酮-对甲基苯甲酸共晶的红外光谱在2934.08cm-1、2882.59cm-1、2862.62cm-1、1705.61cm-1、1693.01cm-1、1643.71cm-1、1606.91cm-1、1413.16cm-1、1272.60cm-1、1176.18cm-1、1069.73cm-1、946.52cm-1、924.88cm-1、893.11cm-1、828.59cm-1、809.64cm-1、759.40cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1；
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-对甲基苯甲酸共晶为三斜晶系，P1空间群，晶胞参数为α＝104.300(5)°、β＝94.717(5)°、γ＝103.307(5)°、Z＝1，晶胞体积为
在本发明的一个实施方案中，所述的黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶的红外光谱在2932.3cm-1、2579.1cm-1、2164.8cm-1、2031.5cm-1、1724.4cm-1、1693.5cm-1、1639.9cm-1、1588.7cm-1、1488.5cm-1、1464.7cm-1、1429.7cm-1、1355.9cm-1、1315.8cm-1、1292.3cm-1、1239.0cm-1、1210.4cm-1、1178.4cm-1、1161.2cm-1、1042.0cm-1、939.3cm-1、887.6cm-1、870.7cm-1、818.3cm-1、759.9cm-1、736.9cm-1、682.3cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1；
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶为正交晶系，P212121空间群，晶胞参数为α＝90.00°、β＝90.00°、γ＝90.00°、Z＝4，晶胞体积为
在本发明的一个实施方案中，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶的红外光谱在1730.0cm-1、1472.9cm-1、1439.2cm-1、1384.9cm-1、1329.3cm-1、1278.0cm-1、1162.5cm-1、1145.1cm-1、1119.3cm-1、1070.1cm-1、948.5cm-1、870.6cm-1、778.9cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1。
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶的红外光谱还在2969.2cm-1、2940.7cm-1、2925.1cm-1、2851.9cm-1、1699.9cm-1、1666.4cm-1、1615.8cm-1、1356.9cm-1、1228.4cm-1、1205.2cm-1波长处有吸收峰，其中，每个吸收峰处的误差范围为±2cm-1。
作为一个优选的实施方案，所述的黄体酮-邻苯二甲酸共晶为单斜晶系，P21空间群，晶胞参数为α＝90.00°、β＝92.380(2)°、γ＝90.00°、Z＝4，晶胞体积为
根据本发明的目的，本发明第二方面提供了一种药物组合物，所述的药物组合物包括本发明第一方面所述的共晶。作为一种优选的实施方式，所述的药物组合物还包括药学上可接受的载体或助剂。所述药物组合物通常包含，按重量计约1％～99％的本发明所述的共晶，以及按重量计约99％～1％的至少一种药学上可接受的适当的载体或助剂。此外，所述药物组合物还可以包含黄体酮其它可药用的盐、溶剂化物、水合物的晶体或非晶态，或共晶。任选地，所述药物组合物还可以包含一种或多种其他的药物活性成分。
所述药物组合物可制备为固态、半固态或液态的剂型，固体口服剂型，例如包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和散剂；液体口服剂型，例如包括溶液剂、糖浆剂、混悬剂、分散剂和乳剂；可注射制剂，例如包括溶液剂、分散剂和复配成溶液的冻干粉。配方可适于药物活性成分的速释、缓释或控释，可以是常规的、可分散的、可咀嚼的、口腔溶解的或快速熔化的制剂。给药途径包括口服、静脉注射、皮下注射、透皮给药、直肠给药、滴鼻给药等。为了制备时保持本发明的共晶，本发明的药物组合物优选为固体口服剂型，其包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂和散剂。
在固体剂型的情况下，本发明所述药学上可接受的载体或助剂包括但不限于：稀释剂，例如淀粉、预胶化淀粉、乳糖、粉状纤维素、微晶纤维素、磷酸氢钙、磷酸三钙、甘露醇、山梨醇、糖等；粘合剂，例如阿拉伯胶、瓜尔胶、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙二醇等；崩解剂，例如淀粉、羟基乙酸淀粉钠、预胶化淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、胶体二氧化硅等；润滑剂，例如硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸锌、苯甲酸钠、乙酸钠等；助流剂，例如胶体二氧化硅等；复合物形成剂，例如各种级别的环糊精和树脂；释放速度控制剂，例如羟丙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、甲基纤维素、甲基丙烯酸甲酯、蜡等。可用的其他药学上可接受的载体或助剂包括但不限于成膜剂、增塑剂、着色剂、调味剂、粘度调节剂、防腐剂、抗氧化剂等。
所述药物组合物可以使用现有技术中本领域技术人员公知的方法来制备。制备时将本发明的黄体酮和苯甲酸衍生物的共晶与一种或多种药学上可接受的载体或助剂，任选的一种或多种的其他活性成分相混合。固体制剂可以通过直接混合、制粒等工艺来制备。
根据本发明的目的，本发明第三方面提供了如下任一项所述的应用：
(1)本发明第二方面所述的药物组合物在制备用于维持妊娠的药物中的应用；
(2)本发明第二方面所述的药物组合物在制备治疗妇科疾病的药物中的应用。
所述妇科疾病包括但不限于自发性早产、黄体功能不全、继发性闭经、经前期综合征。
根据本发明的目的，本发明第四方面提供了一种制备本发明第一方面所述的共晶的方法，所述的方法包括以下步骤：
1)将黄体酮与苯甲酸衍生物粉碎，得到白色粉末样品，
2)将白色粉末样品加入有机溶剂溶解，挥发得到无色块状晶体；
所述的苯甲酸衍生物选自对氨基苯甲酸、邻甲基苯甲酸、对甲基苯甲酸、间甲氧基苯甲酸或邻苯二甲酸，
优选的，黄体酮与所述的苯甲酸衍生物的摩尔比为1:1。
优选的，所述的有机溶剂包括C1～C4醇、乙酸乙酯或丙酮，更为优选的，所述的有机溶剂为C1～C4醇，优选的，所述的C1～C4醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、仲丁醇或异丁醇，更为优选的，所述的C1～C4醇为甲醇。
优选的，黄体酮与所述的苯甲酸衍生物使用球磨机粉碎。
根据本发明的目的，本发明提供一种维持妊娠或治疗妇科疾病的方法，所述的方法包括给予需要的患者治疗有效量的本发明第一方面所述的共晶或本发明第二方面所述的药物组合物；所述的患者是指包括人类在内的哺乳动物。在一些实施方案中，剂量范围可以是每日每千克体重约0.01毫克到约100毫克，可使用方便的每日剂量方式。剂量可视病症的类型和程度、患者的总体健康状况、配方的特性以及给药途径等而调节。
所述妇科疾病包括但不限于自发性早产、黄体功能不全、继发性闭经、经前期综合征。
附图说明
图1是黄体酮-对氨基苯甲酸的X-射线粉末衍射谱图；
图2是黄体酮-对氨基苯甲酸的TGA/DSC图；
图3是黄体酮-对氨基苯甲酸的红外吸收光谱图；
图4是黄体酮-对氨基苯甲酸不同放大倍数的扫描电镜图，其中，图A的放大倍数为500，图B放大倍数为5000；
图5是黄体酮-对氨基苯甲酸的1H-NMR核磁共振谱图；
图6是黄体酮-对氨基苯甲酸的X-射线单晶衍射图；
图7是黄体酮-对氨基苯甲酸的稳定性实验图；
图8是黄体酮-对氨基苯甲酸的溶解度实验图；
图9是黄体酮-对氨基苯甲酸的生物利用度图；
图10是黄体酮-邻甲基苯甲酸的X-射线粉末衍射谱图；
图11是黄体酮-邻甲基苯甲酸的TGA/DSC图；
图12是黄体酮-邻甲基苯甲酸的红外吸收光谱图；
图13是是黄体酮-邻甲基苯甲酸不同放大倍数的扫描电镜图，其中，图A的放大倍数为500，图B的放大倍数为5000；
图14是黄体酮-邻甲基苯甲酸的1H-NMR核磁共振谱图；
图15是黄体酮-邻甲基苯甲酸的X-射线单晶衍射图；
图16是黄体酮-邻甲基苯甲酸的稳定性实验图；
图17是黄体酮-邻甲基苯甲酸的溶解度实验图；
图18是黄体酮-邻甲基苯甲酸的生物利用度图；
图19是黄体酮-对甲基苯甲酸的X-射线粉末衍射谱图；
图20是黄体酮-对甲基苯甲酸的TGA/DSC图；
图21是黄体酮-对甲基苯甲酸的红外吸收光谱图；
图22是黄体酮-对甲基苯甲酸不同放大倍数的扫描电镜图，其中，图A的放大倍数为500，图B放大倍数为5000；
图23是黄体酮-对甲基苯甲酸的1H-NMR核磁共振谱图；
图24是黄体酮-对甲基苯甲酸的X-射线单晶衍射图；
图25是黄体酮-对甲基苯甲酸的稳定性实验图；
图26是黄体酮-对甲基苯甲酸的溶解度实验图；
图27是黄体酮-对甲基苯甲酸的生物利用度图；
图28是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的X-射线粉末衍射谱图；
图29是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的TGA/DSC图；
图30是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的红外吸收光谱图；
图31是黄体酮-间甲氧基苯甲酸不同放大倍数的扫描电镜图，其中，图A的放大倍数为500，图B放大倍数为5000；
图32是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的1H-NMR核磁共振谱图；
图33是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的X-射线单晶衍射图；
图34是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的稳定性实验图；
图35是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的溶解度实验图；
图36是黄体酮-间甲氧基苯甲酸的生物利用度图；
图37是黄体酮-邻苯二甲酸的X-射线粉末衍射谱图；
图38是黄体酮-邻苯二甲酸的TGA/DSC图；
图39是黄体酮-邻苯二甲酸的红外吸收光谱图；
图40是黄体酮-邻苯二甲酸不同放大倍数的扫描电镜图，其中，图A的放大倍数为500，图B放大倍数为5000；
图41是黄体酮-邻苯二甲酸的1H-NMR核磁共振谱图；
图42是黄体酮-邻苯二甲酸的X-射线单晶衍射图；
图43是黄体酮-邻苯二甲酸的稳定性实验图；
图44是黄体酮-邻苯二甲酸的溶解度实验图；
图45是黄体酮-邻苯二甲酸的生物利用度图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例1黄体酮共晶体的制备
一、实验材料
黄体酮：浙江仙琚制药股份有限公司(纯度>99％)
对氨基苯甲酸、邻甲基苯甲酸、对甲基苯甲酸、间甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸：上海毕得医药科技有限公司(纯度>99％)
乙酸乙酯：北京化工厂(分析纯)
二、实验方法
1、样品制备方法：称取943.4mg(3.0mmol)黄体酮分别与411.4mg(3.0mmol)对氨基苯甲酸、408.5mg(3.0mmol)邻甲基苯甲酸、408.5mg(3.0mmol)对甲基苯甲酸、456.5mg(3.0mmol)间甲氧基苯甲酸、798.4mg(3.0mmol)邻苯二甲酸加入球磨机(行星式球磨机，南京驰顺科技发展有限公司)中，无溶剂，28Hz球磨40min，即得白色粉末样品。
2、单晶培养方法：取上述粉末样品100mg，加入15mL甲醇溶解，溶剂缓慢挥发，1周左右即得无色块状晶体。
实施例2黄体酮共晶体的结构表征
一、实验条件
1、热分析(TG-DSC)
仪器型号：TGA/DSC 3+；升温速率：10℃/min；温度范围：40-400℃；气体氛围：氮气。
2、红外吸收光谱(IR)
仪器型号：Bruker EQUINOX 55FT-IR；实验方法：取适量样品置于探头中间测试。
3、1H-NMR核磁共振谱
仪器型号：AVANCE III HD 400/500MHz型核磁共振波谱仪；溶剂：d6-DMSO(TMS内标)。
4、X-射线单晶衍射(SXRD)
仪器型号：Rigaku AFC-10；实验方法：选取0.31mm0.22mm0.18mm大小的无色晶体，采用石墨单色化Mo-K射线，辐射波长测定温度：173.00(15)K。结构解析和精修采用SHELXT-14以及Olex2程序完成。利用直接法确定原子位置，然后用差值函数法和最小二乘法求出全部非氢原子坐标，用最小二乘法对结构进行修正。
5、粉末X射线衍射谱(PXRD)
仪器型号：德国Bruker公司D8ADVANCE型X射线粉末仪。测定条件：铜靶，40KV/40mA，起始角5°，终止角40°/60°，步宽0.02，扫描速度17.7秒/步。波长 石墨单色器。
6、扫描电镜图谱
仪器型号：Jeol JSM-6100
7、稳定性试验
仪器型号：综合药品稳定性试验箱(上海一恒科学仪器有限公司)
实验方法：稳定性实验考察样品在高温、高湿、光照条件下的稳定性和转变规律。取100mg测试样品粉末装入称量瓶中，将样品开口放置分别在高温(60±2℃)、高湿(90％±5％)、光照(4500±500lx)条件下放置10天，于第0天、5天、10天分别取样进行粉末X射线衍射分析。
8、溶解性试验
仪器型号：天大天发RC806D溶出试验仪
实验方法：样品过100目筛，称取供试品各2g，分别加入1000mL去离子水中，浆法，于37℃、100rpm条件下搅拌，分别在5min、15min、30min、45min、60min、90min、120min、180min、240min、300min和360min取样2mL，过滤膜，取滤液作为供试品，进样2针，HPLC检测。
液相条件：高效液相色谱仪：Waters；色谱柱:Waters XBridge C184.6*150mm，3.5μm色谱柱；流动相：乙腈:水＝45:55；检测波长:280nm；流速：0.8mL/min；柱温：40℃；进样量：20μL；运行时间：15min。
二、实验结果
1、黄体酮-对氨基苯甲酸共晶
(1)PXRD
实验结果如图1、表1所示，黄体酮-对氨基苯甲酸的X-射线粉末衍射图谱在2θ值的相应位置对应有特征衍射峰。
表1黄体酮-对氨基苯甲酸共晶X-粉末衍射谱吸收峰
序号
2θ/°
相对强度/％
序号
2θ/°
相对强度/％
1
7.001
9.2
13
19.913
3.3
2
8.521
3.9
14
20.56
100
3
9.719
4.5
15
22.12
11.5
4
13.519
53.7
16
23.42
7.9
5
13.878
25.7
17
23.699
5.4
6
14.44
10.3
18
24.016
3.1
7
16.04
8.1
19
25.12
8.2
8
16.995
7.2
20
25.816
3.9
9
17.86
31.7
21
26.577
4.1
10
18.242
5
22
27.142
25.4
11
18.596
5.5
23
27.396
12.3
12
19.175
5.6
24
30.518
5.3
(2)TG-DSC
结果如图2所示，差示扫描热量仪(DSC)显示：共晶熔点为158.3℃。
热重分析(TGA)显示：在测试温度范围内观察到对氨基苯甲酸的分解与黄体酮的分解。
(3)红外吸收光谱(IR)
如图3和表2所示，黄体酮-对氨基苯甲酸共晶在表2所示的位置处存在红外吸收峰。
表2黄体酮-对氨基苯甲酸共晶的主要红外吸收峰
(4)扫描电镜图谱
测试结果如图4所示，从扫描电镜图可以看出，共晶颗粒尺寸小，利于提高水溶性；共晶颗粒均匀，说明制备工艺好，非常利于工业生产和制剂。
(5)1H-NMR核磁共振谱
结果如图5所示，核磁共振氢谱的位移如下：
1H-NMR(500MHz,d6-DMSO)δ＝11.94(s,1H),7.62(d,2H),6.53(d,2H),5.86(s,2H),5.63(s,1H),2.57-2.55(t,1H),2.42-2.33(m,2H),2.25(m,1H),2.23(m,1H),2.18-2.14(m,6H),1.77-1.64(d,1H),1.61-1.52(m,5H),1.43-1.38(m,2H),1.18-1.14(m,5H),0.96-0.93(m,2H),0.57(S,3H)。
(6)X-射线单晶衍射(SXRD)
如图6和表3所示，从单晶结构解析结果可知，黄体酮-对氨基苯甲酸共晶分子比例为1:2，二者通过氢键相连。
表3黄体酮-对氨基苯甲酸共晶结构
(7)稳定性试验
实验结果如图7所示，黄体酮-对氨基苯甲酸共晶在高温、高湿、光照条件下是稳定的。
(8)溶解性试验
实验结果如图8所示，形成共晶显著增加了黄体酮的水溶性。
2、黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶
(1)PXRD
如图10、表4所示，黄体酮-邻甲基苯甲酸的X-射线粉末衍射图谱在2θ值的相应位置对应有特征衍射峰。
表4黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶X-粉末衍射谱吸收峰
序号
2θ/°
相对强度/％
序号
2θ/°
相对强度/％
1
7.142
7.7
16
20.378
8.2
2
9.38
27.6
17
21.08
62.4
3
10.818
22.2
18
21.561
82.1
4
11.597
14.2
19
22.42
15.5
5
12.421
26.8
20
22.74
8.3
6
12.962
40.5
21
23.04
15.6
7
13.22
100
22
23.725
7.8
8
14.02
36.6
23
24.742
13.8
9
14.941
25.7
24
25.96
8.5
10
15.741
48.7
25
26.76
38.1
11
16.441
14.7
26
27.164
8.9
12
17.041
51.2
27
28.001
32.1
13
18.38
34.7
28
28.561
14.5
14
18.799
19.5
29
29.939
8.1
15
19.36
10.9
(2)TG-DSC
结果如图11所示，差示扫描热量仪(DSC)显示：共晶熔点为88.68℃。
热重分析(TGA)显示：在测试温度范围内观察到邻甲基苯甲酸的分解与黄体酮的分解。
(3)红外吸收光谱(IR)
如图12和表5所示，黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶在表5所示的位置处存在红外吸收峰。
表5黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶的主要红外吸收峰
波数ν/cm<sup>-1</sup>
透过率/％
2937.7
94.7
2558.2
98.1
2145.2
98.6
2014.3
98.7
1671.9
92.5
1446.8
97.8
1353.5
97.6
1272.5
96.2
1223
97.2
1085.1
98.6
939.8
97.6
874.1
98.4
749.1
98.4
(4)扫描电镜图谱
测试结果如图13所示，从扫描电镜图可以看出，共晶颗粒尺寸小，利于提高水溶性；共晶颗粒均匀，说明制备工艺好，非常利于工业生产和制剂。
(5)1H-NMR核磁共振谱
结果如图14所示，核磁共振氢谱的位移如下：
1H-NMR(400MHz,d6-DMSO)δ＝12.80(s,1H),7.82(d,1H),7.42(t,1H),7.30(d,2H),5.63(s,1H),2.58-2.56(t,1H),2.44-2.37(m,2H),2.36(s,3H),2.25-2.23(m,2H),2.18-2.14(m,6H),1.77-1.64(d,1H),1.61-1.52(m,5H),1.43-1.38(m,2H),1.18-1.14(m,5H),0.96-0.93(m,2H),0.57(S,3H)。
(6)X-射线单晶衍射(SXRD)
如图15和表6所示，从单晶结构解析结果可知，黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶分子比例为1:1，二者通过氢键相连。
表6黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶结构
(7)稳定性试验
实验结果如图16所示，黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶在高温、高湿、光照条件下是稳定的。
(8)溶解性试验
实验结果如图17所示，形成共晶显著增加了黄体酮的水溶性。
3、黄体酮-对甲基苯甲酸共晶
(1)PXRD
实验结果如图19、表7所示，黄体酮-对甲基苯甲酸的X-射线粉末衍射图谱在2θ值的相应位置对应有特征衍射峰。
表7黄体酮-对甲基苯甲酸共晶X-粉末衍射谱吸收峰
(2)TG-DSC
结果如图20所示，差示扫描热量仪(DSC)显示：共晶熔点为114.5℃。
热重分析(TGA)显示：在测试温度范围内观察到对甲基苯甲酸的分解与黄体酮的分解。
(3)红外吸收光谱(IR)
如图21和表8所示，黄体酮-对甲基苯甲酸共晶在表8所示的位置处存在红外吸收峰。
表8黄体酮-对甲基苯甲酸共晶的主要红外吸收峰
波数ν/cm<sup>-1</sup>
透过率/％
2934.08
92.5
2882.59
95.9
2862.62
96.4
1705.61
88.3
1693.01
76.6
1643.71
91.1
1606.91
89.9
1413.16
95.5
1272.60
96.4
1176.18
88.5
1069.73
98.2
946.52
94.3
924.88
96.3
893.11
92.4
828.59
94.9
809.64
96.9
759.40
87.3
(4)扫描电镜图谱
测试结果如图22所示，从扫描电镜图可以看出，共晶颗粒尺寸小，利于提高水溶性；共晶颗粒均匀，说明制备工艺好，非常利于工业生产和制剂。
(5)1H-NMR核磁共振谱
结果如图23所示，核磁共振氢谱的位移如下：
1H-NMR(400MHz,d6-DMSO)δ＝12.81(s,1H),7.84(d,2H),7.31(d,2H),5.63(s,1H),2.57-2.55(t,1H),2.42-2.33(m,4H),2.25-2.23(m,2H),2.18-2.14(m,6H),1.77-1.64(d,1H),1.61-1.52(m,5H),1.43-1.38(m,2H),1.18-1.14(m,5H),0.96-0.93(m,2H),0.57(S,3H)。
(6)X-射线单晶衍射(SXRD)
如图24和表9所示，从单晶结构解析结果可知，黄体酮-对甲基苯甲酸共晶分子比例为2:1，二者通过氢键相连。
表9黄体酮-对甲基苯甲酸共晶结构
(7)稳定性试验
实验结果如图25所示，黄体酮-对甲基苯甲酸共晶在高温、高湿、光照条件下是稳定的。
(8)溶解性试验
实验结果如图26所示，形成共晶显著增加了黄体酮的水溶性。
4、黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶
(1)PXRD
实验结果如图28、表10所示，黄体酮-间甲氧基苯甲酸的X-射线粉末衍射图谱在2θ值的相应位置对应有特征衍射峰。
表10黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶X-粉末衍射谱吸收峰
序号
2θ/°
相对强度/％
序号
2θ/°
相对强度/％
1
10.422
8.5
16
21.16
87.6
2
10.635
25.5
17
21.361
35.4
3
11.22
11.4
18
22.237
15.8
4
12.358
20.4
19
23.525
5.4
5
12.739
41.4
20
23.701
12.4
6
13.34
64.1
21
24.021
11.9
7
13.702
5.4
22
24.171
13.6
8
14.583
27.3
23
25.466
9.5
9
15.415
100
24
25.696
8.3
10
16.116
49.7
25
26.339
17.3
11
16.844
64.3
26
26.814
22.3
12
17.017
78.6
27
27.519
46.5
13
17.941
24.7
28
33.122
30.8
14
18.176
71
29
37.575
19.5
15
20.695
31.6
30
39.736
31.9
(2)TG-DSC
结果如图29所示，差示扫描热量仪(DSC)显示：共晶熔点为77.19℃。
热重分析(TGA)显示：在测试温度范围内观察到间甲氧基苯甲酸的分解与黄体酮的分解。
(3)红外吸收光谱(IR)
如图30和表11所示，黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶在表11所示的位置处存在红外吸收峰。
表11黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶的主要红外吸收峰
波数ν/cm<sup>-1</sup>
透过率/％
2932.3
96.2
2579.1
97.8
2164.8
98.2
2031.5
98.4
1724.4
97.3
1693.5
94.6
1639.9
97.1
1588.7
97.4
1488.5
98.4
1464.7
97.2
1429.7
97.7
1355.9
98.2
1315.8
96.7
1292.3
96.5
1239
97.5
1210.4
96.5
1178.4
97.6
1161.2
98.1
1042
98.2
939.3
98.2
887.6
98
870.7
97.6
818.3
98.4
759.9
95.4
736.9
96.3
682.3
96.9
(4)扫描电镜图谱
测试结果如图31所示，从扫描电镜图可以看出，共晶颗粒尺寸小，利于提高水溶性；共晶颗粒均匀，说明制备工艺好，非常利于工业生产和制剂。
(5)1H-NMR核磁共振谱
结果如图32所示，核磁共振氢谱的位移如下：
1H-NMR(500MHz,d6-DMSO)δ＝12.95(s,1H),7.54(d,1H),7.44(t,2H),7.20(d,1H),5.63(s,1H),3.80(s,3H),2.57-2.55(t,1H),2.42-2.33(m,2H),2.25-2.23(m,2H),2.18-2.14(m,6H),1.77-1.64(d,1H),1.61-1.52(m,5H),1.43-1.38(m,2H),1.18-1.14(m,5H),0.96-0.93(m,2H),0.57(S,3H).
(6)X-射线单晶衍射(SXRD)
如图33和表12所示，从单晶结构解析结果可知，黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶分子比例为1:1，二者通过氢键相连。
表12黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶结构
(7)稳定性试验
实验结果如图34所示，黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶在高温、高湿、光照条件下是稳定的。
(8)溶解性试验
实验结果如图35所示，形成共晶显著增加了黄体酮的水溶性。
5、黄体酮-邻苯二甲酸共晶
(1)PXRD
实验结果如图37、表13所示，黄体酮-邻苯二甲酸的X-射线粉末衍射图谱在2θ值的相应位置对应有特征衍射峰。
表13黄体酮-邻苯二甲酸共晶X-粉末衍射谱吸收峰
(2)TG-DSC
结果如图38所示，差示扫描热量仪(DSC)显示：共晶熔点为126.04℃。
热重分析(TGA)显示：在测试温度范围内观察到邻苯二甲酸的分解与黄体酮的分解。
(3)红外吸收光谱(IR)
如图39和表14所示，黄体酮-邻苯二甲酸共晶在表14所示的位置处存在红外吸收峰。
表14黄体酮-邻苯二甲酸共晶的主要红外吸收峰
波数ν/cm<sup>-1</sup>
透过率/％
2969.2
47.2
2940.7
44.1
2925.1
44.1
2851.9
53.6
1730
67.6
1699.9
52.4
1666.4
43.4
1615.8
55.9
1472.9
75.7
1439.2
66.2
1384.9
71.4
1356.9
52.5
1329.3
70.3
1278
67.5
1228.4
54.2
1205.2
57.8
1162.5
72.1
1145.1
76.9
1119.3
80
1070.1
83.6
948.5
71.5
870.6
74.7
778.9
83.9
(4)扫描电镜图谱
测试结果如图40所示，从扫描电镜图可以看出，共晶颗粒尺寸小，利于提高水溶性；共晶颗粒均匀，说明制备工艺好，非常利于工业生产和制剂。
(5)1H-NMR核磁共振谱
结果如图41所示，核磁共振氢谱的位移如下：
1H-NMR(500MHz,d6-DMSO)δ＝13.15(s,2H),7.68(d,2H),7.59(d,2H),5.63(s,1H),2.57-2.55(t,1H),2.42-2.33(m,2H),2.25-2.23(m,2H),2.18-2.14(m,6H),1.77-1.64(d,1H),1.61-1.52(m,5H),1.43-1.38(m,2H),1.18-1.14(m,5H),0.96-0.93(m,2H),0.57(S,3H)。
(6)X-射线单晶衍射(SXRD)
如图42和表15所示，从单晶结构解析结果可知，黄体酮-邻苯二甲酸共晶分子比例为1:1，二者通过氢键相连。
表15黄体酮-邻苯二甲酸共晶结构
(7)稳定性试验
实验结果如图43所示，黄体酮-邻苯二甲酸共晶在高温、高湿、光照条件下是稳定的。
(8)溶解性试验
实验结果如图44所示，形成共晶显著增加了黄体酮的水溶性。
实施例3黄体酮共晶体的生物利用度试验
一、试验步骤：
1、动物
健康雌性SD大鼠(7-9周龄，体重220±30g，每组5只)购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
2、动物给药方法
所有动物在12小时/12小时的光照/黑暗循环下饲养，每笼5只，自由饮食。黄体酮及其共晶与PBS(phosphate buffered solution，磷酸盐缓冲液，含0.1％的DMSO)配成溶液，剂量为相当于黄体酮5.0mg/kg，肌肉注射给药。
3、生物样品制备方法
于规定时间(15、30min和1、1.5、2、3、5、7、12、24、48h)分批取50μL颈静脉血液样本收集到肝素化管。血液随即离心15min。血浆样本于-20℃保存。将50μL大鼠血浆、5μL甲醇和200μL内标物溶液(丁螺环酮，5ng/mL)加至1mL甲醇：乙腈(1:1，v/v)中。将上述血浆标本涡旋1min，4000rpm离心15min，用甲醇：水(1:1，v/v，0.1％三氟乙酸)稀释上清20倍进样。
4、生物样品分析方法
LC-MS/MS仪器型号：AB Sciex 5500；LC-MS/MS定量分析软件：1.6.3；电离方式：电喷射正离子；扫描方式：多反应监测(MRM)；分析物MRM：EE-DNS，530.4/171.0；内标MRM：丁螺环酮，386.2/122.2；
液相条件：Shimadzu LC-30AD，ACE Excel 5C4(50mm*2.1mm)，进样量10μL；流动相：A:5mM醋酸铵(0.05％三氟乙酸)，B:乙腈(0.1％三氟乙酸)，流速0.8mL/min，流动相A与B的梯度如下表所示。
表16流动相A与B的梯度
时间(min)
A(％)
B(％)
0.4-1.8
80.0
20.0
1.8-2.7
5.00
95.0
2.7-3.5
80.0
20.0
二、试验结果
1、黄体酮-对氨基苯甲酸共晶
如图9所示，黄体酮达峰时间为1h，共晶达峰时间为1.5h，共晶Cmax为黄体酮的1.9倍。
2、黄体酮-邻甲基苯甲酸共晶
如图18所示，黄体酮达峰时间为1h，共晶达峰时间为1.5h，共晶Cmax为黄体酮的2.4倍。
3、黄体酮-对甲基苯甲酸共晶
如图27所示，黄体酮达峰时间为1h，共晶达峰时间为1.5h，共晶Cmax为黄体酮的2.2倍。
4、黄体酮-间甲氧基苯甲酸共晶
如图36所示，黄体酮达峰时间为1h，共晶达峰时间为1.5h，共晶Cmax为黄体酮的2.0倍。
5、黄体酮-邻苯二甲酸共晶
如图45所示，黄体酮达峰时间为1h，共晶达峰时间为1.5h，共晶Cmax为黄体酮的1.7倍。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
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