一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂及其制备方法
阅读说明：本技术 一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂及其制备方法 (Disease-preventing growth-promoting microbial agent special for Lanzhou lily and preparation method thereof ) 是由 张鹏 孙守德 于 2021-09-09 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂配方及其制备方法,属于农业微生物技术领域,所述微生物菌剂包括A组分和B组分；所述A组分为粉剂,其原料按重量计包括：80～90份哈茨木霉孢子粉,3～8份紫外保护剂糊精,3～8份湿润分散剂木质素磺酸钙；所述B组分为液剂,其原料按重量计包括：15～30份枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BHQ14发酵液、15-30份假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21发酵液、15～30份贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9发酵液,8～20份助剂。本发明公开的兰州百合专用防病促生微生物菌剂具有提高土壤氮素以及有效磷的含量,抵抗病原真菌,降低病害发生率的作用,从而可以促进兰州百合生长,防治百合病害,提高兰州百合的产量和质量,成本低廉,效益突出。(The invention discloses a formula of a disease-preventing growth-promoting microbial agent special for Lanzhou lily and a preparation method thereof, belonging to the technical field of agricultural microorganisms, wherein the microbial agent comprises a component A and a component B; the component A is powder, and the raw materials comprise the following components in parts by weight: 80-90 parts of trichoderma harzianum spore powder, 3-8 parts of ultraviolet protective agent dextrin and 3-8 parts of wetting dispersant calcium lignosulfonate; the component B is a liquid agent, and the raw materials comprise, by weight: 15-30 parts of Bacillus subtilis BHQ14 fermentation liquor, 15-30 parts of Pseudomonas spp.BHL21 fermentation liquor, 15-30 parts of Bacillus velezensis BHY9 fermentation liquor and 8-20 parts of auxiliary agent. The disease-preventing growth-promoting microbial agent special for Lanzhou lily disclosed by the invention has the effects of improving the content of nitrogen and available phosphorus in soil, resisting pathogenic fungi and reducing the disease incidence rate, so that the growth of Lanzhou lily can be promoted, the lily disease can be prevented and treated, the yield and the quality of Lanzhou lily can be improved, the cost is low, and the benefit is remarkable.)
技术领域
本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂配方及其制备方法。
背景技术
兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)是我国栽培面积最大、最有代表性的甜百合，具有极高的食用价值和药用保健价值，是甘肃地区最具地方特色的名优蔬菜，也是兰州市的“名片”之一。兰州百合仅适宜于在甘肃省中部地区兰州市周边的二阴山地种植，由于其适栽区域狭窄，而需求量连年增加，因此重茬连作的现象普遍，加之兰州百合为无性繁殖，且生长期较长，一般播种后2-4年才能采收，多方面的因素加重了其连作障碍，严重影响了兰州百合的生产，造成产量下降和品质降低。近年来学者们的研究表明兰州百合连作障碍的主要原因是土壤微生物区系的失衡和由此引起的土壤质量劣化。因此，必须从土壤微生物区系调控的角度出发进行治理才能从根本上预防百合根部病害，解决连作障碍难题，提高百合种植的效率和质量。
由于学术界和生产者的重视，近些年来开发出了多款用于土传病害生物防治及土壤微生态调控的菌剂产品。菌剂发挥效果的必要前提是必须保证功能菌株在使用环境中存活并稳定繁殖，但是，由于兰州百合种植区气候及土壤条件的特殊性，引进的土传病害生防菌剂和土壤微生态调控菌剂中的活性菌株很难在该地区土壤中存活和定殖，因此引进的菌剂在该地区并不适用，主要表现为活性菌株存活率差，菌剂效果差。活菌来源的本土化是解决菌剂产品环境适应性的最佳途径，而基于“本土化”功能微生物资源的微生物菌剂技术具有安全环保、使用简单、成本低廉、持续性好的优点，是兰州百合种植中土传病害生物防治和土壤微生物区系调控的首选方案。
综上，兰州百合专用的基于“本土化”功能微生物资源的微生物菌剂是对国民经济有重要价值的一类农业科技新产品，但是目前我国尚缺乏此类产品，这不利于兰州百合的高效种植和病害的绿色防控。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术中的缺陷，提供了一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂，以达到有效防控兰州百合土传病害，改善提高兰州百合种植地土壤活性、提高土壤质量、提高兰州百合的产量和品质的目的。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂，所述微生物菌剂包括A组分和B组分；
所述A组分为粉剂，其原料按重量份计包括：80～90份哈茨木霉孢子粉，3～8份紫外保护剂糊精，3～8份湿润分散剂木质素磺酸钙；
所述B组分为液剂，其原料按重量份计包括：15～30份枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis BHQ14发酵液、15-30份假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21发酵液、15～30份贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9发酵液，8～20份助剂。
所述哈慈木霉菌株分离自临洮县太石镇百合种植地土壤，具有高效拮抗植物病原菌的能力，且抗菌谱较广；所述的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BHQ14分离自兰州市七里河区西果园乡百合根际，具有固氮、溶磷作用；所述的假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21分离自兰州市榆中县百合根际，具有固氮、生防、分泌植物激素的作用；所述贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9分离自临洮县红旗乡百合根际，具有固氮、溶磷作用。
所述助剂包括紫外保护剂、表面活性剂、分散剂和防腐剂；所述紫外保护剂为糊精，纯度为工业纯及以上，添加量为B组分总质量的2～5％；所述表面活性剂为吐温-80，纯度为工业纯及以上，添加量为B组分总质量的2～5％；所述分散剂为木质素磺酸钙，纯度为工业纯及以上，添加量为B组分总质量的2～5％；所述防腐剂为尼泊金甲酯，纯度为工业纯及以上，添加量为B组分总质量的2～5％。
所述微生物菌剂的制备方法包括以下步骤：
S1：A组分制备
S101：配制哈茨木霉固态发酵培养基，在121℃、0.1MPa的条件下灭菌180分钟备用；
S102：向步骤S101中配置的培养基中接种哈茨木霉菌株，接种量为5～10％；
S103：将接种后的培养基置于25℃，微弱散射光条件下培养7～15天，待其菌丝完全长满培养基，且大量产孢时停止发酵；
S104：将发酵好培养物粉碎，按照重量份数，添加紫外保护剂糊精5％，湿润分散剂木质素磺酸钙5％，充分混匀后无菌分装，得到A组分；
S2：B组分的制备
S201：配制发酵用营养液，在121℃、0.1MPa的条件下灭菌40分钟备用；
S202：分别向步骤S201中配置的营养液中接种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisBHQ14、假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21和贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9菌株，接种量为5～10％；
S203：将接种后的营养液置于30℃、200转/分钟、饱和溶氧条件下培养48小时，结束发酵；
S204：将发酵完成的三种菌株发酵液按比例混匀，并按比例添加糊精、吐温-80、木质素磺酸钙和尼泊金甲酯，搅拌均匀后无菌分装，得到B组分；
S3：微生物菌剂制备
S301：将制备的A组分按照1:50～80的比例溶解于水中，搅拌均匀；
S302：将溶解后的A组分与制备的B组分按照体积比为1：1的比例混匀，即制的兰州百合专用防病促生微生物菌剂，所述A组分和B组分混合后，应在48小时内使用。
进一步地，所述微生物菌剂适于兰州百合栽植时拌种球使用，使用量及使用方法为：
①准备干净的容器，添加菌剂，添加量为3～5L/亩；
②按照1:1～1:3的比例适量的无菌水或凉开水稀释菌剂，稀释后将菌剂均匀喷洒在兰州百合种球表面，边喷洒边翻动，确保种球表面均匀沾上菌剂为止；
③将拌好的种球在阴凉避光条件下晾至表面无明显液滴；
④按常规方法栽植，用菌剂拌种球时可以和低毒性的生根剂等配合使用。
进一步地，所述微生物菌剂也适用于生长期的兰州百合根部病害防治和追肥，可用喷施法施用，使用量及使用方法为：
①准备好菌剂，置于干净的容器中，菌剂使用量2～5L/亩；
②添加适量的无菌水或凉开水，菌剂:水为1:3～1:5较为适宜，充分混匀；
③按常规方法喷施，喷施时应在喷头处安装限制器，确保喷到百合茎基部；
④用喷施法应在喷施前注意天气情况，避免喷施后长时间暴晒，选择临近下雨前喷施效果最佳。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1)本发明公开的兰州百合专用防病促生微生物菌剂具有提高土壤氮素以及有效磷的含量，抵抗病原真菌，降低病害发生率的作用，从而可以促进兰州百合生长，防治百合病害，提高兰州百合的产量和质量；
2)本发明公开的兰州百合专用防病促生微生物菌剂，其活性菌株分离自兰州百合原生环境，能对百合种植区干旱、盐碱环境有很好的耐受能力，因而更容易在兰州百合根际定殖和存活，效果稳定可靠，具有“源于自然、用于自然”的优点，不会造成环境生物安全风险，不会影响生态环境，更加安全、环保；
3)本发明公开的兰州百合专用防病促生微生物菌剂的工艺路线简单，材料来源广泛，成本低廉、效益突出，具有改良土壤质地、增加土壤养分、分解有害物质、防止土壤板结的重要作用。
具体实施方式
下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例以及说明来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。
实施例1
本发明公开了一种兰州百合专用防病促生微生物菌剂，所述微生物菌剂包括A组分和B组分；所述A组分为粉剂，其原料按重量份计包括：90份哈茨木霉孢子粉，5份紫外保护剂糊精，5份湿润分散剂木质素磺酸钙；所述B组分为液剂，其原料按重量份计包括：30份枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis BHQ14发酵液、25份假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21发酵液、25份贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9发酵液，5份紫外保护剂糊精，5份表面活性剂吐温-80，5份分散剂木质素磺酸钙，5份防腐剂尼泊金甲酯。
所述紫外保护剂糊精、表面活性剂吐温-80、分散剂木质素磺酸钙和防腐剂尼泊金甲酯的纯度均为工业纯及以上。
所述微生物菌剂的制备方法包括以下步骤：
S1：A组分制备
S101：配制哈茨木霉固态发酵培养基，在121℃、0.1MPa的条件下灭菌180分钟备用；
S102：向步骤S101中配置的培养基中接种哈茨木霉菌株，接种量为5～10％；
S103：将接种后的培养基置于25℃，微弱散射光条件下培养7～15天，待其菌丝完全长满培养基，且大量产孢时停止发酵；
S104：将发酵好培养物粉碎，按照重量份数，添加紫外保护剂糊精5％，湿润分散剂木质素磺酸钙5％，充分混匀后无菌分装，得到A组分；
S2：B组分的制备
S201：配制发酵用营养液，在121℃、0.1MPa的条件下灭菌40分钟备用；
S202：分别向步骤S201中配置的营养液中接种枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisBHQ14、假单胞菌Pseudomonas spp.BHL21和贝莱斯芽孢杆菌Bacillus velezensis BHY9菌株，接种量为5～10％；
S203：将接种后的营养液置于30℃、200转/分钟、饱和溶氧条件下培养48小时，结束发酵；
S204：将发酵完成的三种菌株发酵液按比例混匀，并按比例添加糊精、吐温-80、木质素磺酸钙和尼泊金甲酯，搅拌均匀后无菌分装，得到B组分；
S3：微生物菌剂制备
S301：将制备的A组分按照1:50～80的比例溶解于水中，搅拌均匀；
S302：将溶解后的A组分与制备的B组分按照体积比为1：1的比例混匀即可使用，A组分和B组分混合后，应在48小时内使用。
将实施例1制备的兰州百合专用防病促生微生物菌剂储存于室温下，6个月后检测其活菌数，达9.24×108cfu/g，符合《中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1113-2006)》的相关规定。
实验例1
将实施例1制得的微生物菌剂采用菌剂喷施法在田间进行实验，实验步骤和结果如下：
1)实验材料：实验用菌剂为根据上述配方及方法配制的菌剂，对照为不做任何处理。
2)实验地点：实验地点位于甘肃省定西市临洮县太石镇。
3)实验时间：2020年6月中旬，根据天气预报，选择下雨前进行。
4)实验方法：
①准备好菌剂，置于干净的容器中，菌剂使用量2～5L/亩；
②添加适量的无菌水或凉开水，菌剂:水为1:3～1:5较为适宜，充分混匀；
③按常规方法喷施，喷施时应在喷头处安装限制器，确保喷到百合茎基部。
5)指标的测定
9月下旬统计实验组与对照组百合根部病害发病率，采挖后统计百合的平均单株母鳞茎鲜重、小鳞茎鲜重和小鳞茎数量等指标，统计结果见表1。
表1兰州百合专用防病促生微生物菌剂采用菌剂喷施法时的使用效果
由表1可以看出，采用喷施法施用实施例1制备的兰州百合专用防病促生微生物菌剂，可以明显降低百合根部病害发病率，促进兰州百合的生长，使得兰州百合的根部病害平均发病率降低56.05％，平均单株母鳞茎鲜重提高32.78％，平均单株小鳞茎鲜重提高29.17％，平均单株小鳞茎数量提高50％，经济效益明显。
实验例2
将实施例1制得的微生物菌剂采用栽植时菌剂拌种法在田间进行实验，实验步骤和结果如下：
1)实验材料：实验用菌剂为根据上述配方及方法配制的菌剂，百合种球为精选的合格种球。
2)实验地点：实验地点位于甘肃省七里河区西果园。
3)实验时间：2019年4月中旬。
4)实验方法：在兰州百合栽植时拌种球进行使用，使用量及使用方法为：
①准备干净的容器，添加菌剂，添加量为3～5L/亩；
②按照1:1～1:3的比例适量的无菌水或凉开水稀释菌剂，稀释后将菌剂均匀喷洒在兰州百合种球表面，边喷洒边翻动，确保种球表面均匀沾上菌剂为止；
③将拌好的种球在阴凉避光条件下晾至表面无明显液滴；
④按常规方法栽植。
5)指标的测定
9月下旬统计实验组与对照组百合根部病害发病率，采挖后统计百合的平均单株母鳞茎鲜重、小鳞茎鲜重和小鳞茎数量等指标，统计结果见表2。
表2兰州百合专用防病促生微生物菌剂采用菌剂拌种法时的使用效果
由表2可以看出，在兰州百合栽植时采用实施例1制备的兰州百合专用防病促生微生物菌剂进行拌种，可以获得良好的防病和促生效果，能明显降低百合根部病害的发病率(降低77.36％)，促生效果突出，同时采用专用菌剂拌种后，兰州百合的平均单株母鳞茎鲜重提高2.5倍，平均单株小鳞茎鲜重提高3.7倍，平均单株小鳞茎数量提高2倍，经济价值明显。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理。