一种抗真菌的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物
阅读说明：本技术 一种抗真菌的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物 (Antifungal herba Artemisiae Annuae essential oil, white tea essential oil and their composition ) 是由 汤凯 于 2021-09-30 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种抗真菌的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物。所述青蒿精油采用以下方法制备：采集新鲜青蒿嫩苗,取叶子,干燥,切成碎段,浸泡后开始蒸馏,料液比为1:(0.5-2),蒸馏时间为60-90min。所述白茶精油采用以下方法制备：采集新鲜白茶嫩芽,于背光的室内在温度30-35℃,湿度50％-60％的条件下萎凋至减重率为40％-60％,干燥,超临界CO-(2)流体萃取。本发明进一步通过GC-MS分析了所得精油的组分。还检测了青蒿精油、白茶精油及它们的组合物对白色念珠菌和红色毛癣菌的抑制作用,发现二者对两种皮肤真菌抑制效果突出,且联合使用具有协同作用。(The invention relates to an antifungal sweet wormwood essential oil, white tea essential oil and a composition thereof. The sweet wormwood essential oil is prepared by the following method: collecting fresh herba Artemisiae Annuae tender seedling, collecting leaves, drying, cutting into pieces, soaking, and distilling at a material-liquid ratio of 1 (0.5-2) for 60-90 min. The white tea essential oil is prepared by the following method: collecting freshnessWithering white tea tender shoot in a backlight room at 30-35 deg.C and 50-60% humidity until weight loss is 40-60%, drying, and supercritical CO 2 And (4) fluid extraction. The invention further analyzes the components of the obtained essential oil by GC-MS. The inhibition effect of the sweet wormwood herb essential oil, the white tea essential oil and the composition thereof on candida albicans and trichophyton rubrum is also detected, and the two have remarkable inhibition effects on two skin fungi and have synergistic effect when used together.)
技术领域
本发明涉及植物的精油提取，具体地说，涉及一种抗真菌的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物。
背景技术
青蒿精油是从黄花蒿(Artemisia annua L.)中提取得到的挥发油。现代研究已证明青蒿挥发油具有抗菌，抗癌，抗病毒，抗炎，驱蚊，杀虫，抗氧化等活性。主要用途有治疗痤疮，抑制流感病毒，消炎、抗溃疡，局部刺激和强心，解热、止咳、祛痰、平喘和镇痛，并能作为保健食品，还可用于驱蚊虫。
白茶是中国茶类中的特殊珍品，属微发酵茶，其通过特殊工艺，将茶(Camelliasinensis(L.)O.Ktze.)中白茶树的叶和芽萎凋、烘焙(或阴干)、拣剔、复火，制作而成。白茶精油是从白茶茶叶和芽中提取得到的挥发油。目前关于白茶精油的功效的研究较少。
期刊论文(李玲玲.青蒿精油的提取及抑菌性能研究[J].贵州师范大学学报:自然科学版,2020(5):9-13.)公开了采用水蒸气蒸馏法提取青蒿叶和花蕾中的精油，通过单因素试验和正交试验优化青蒿精油的提取工艺，以5种代表性的微生物：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CICC 10384、大肠埃希菌(Escherichia coli)CICC 23657、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)CICC 10275、黑曲霉(Aspergillus niger)CICC 2487、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CICC 33032作为指示菌，利用滤纸片法检测青蒿精油的抑菌活性，采用液体培养基倍比稀释法进一步测定青蒿精油对这5种指示菌的最低抑菌浓度。结果表明：水蒸气蒸馏法提取青蒿叶和花蕾中精油的最佳工艺条件为：浸泡时间1.5h，蒸馏时间3h，料液比1∶8；此条件下提取出的青蒿精油对5种指示菌均有一定的抑菌活性。期刊论文(张丽勇,林秀梅,战月,等.不同方法提取青蒿挥发油成分分析及抗菌活性比较[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(22):60-63.)公开了采用索氏提取法和直接蒸馏法提取青蒿挥发油，分别进行抗菌实验研究，索氏提取法所得青蒿挥发油为青蒿油-1，直接蒸馏法所得青蒿挥发油为青蒿油-2，青蒿油-1对黑曲霉的最低抑制浓度(MIC)为1.25％，菌刺孢属的最低抑制浓度(MIC)为1.25％，青霉的最低抑制浓度(MIC)为5.0％，马青霉的最低抑制浓度(MIC)为1.25％，青蒿油-2对4种细菌最低抑制浓度分别为北京棒状杆菌0.023 5％，枯草芽孢杆菌0.0235％，四联球菌0.0059％，普通变形杆菌3.75％。得出结论：青蒿油-1抗真菌作用好于抗细菌作用，可能与青蒿油-1中酮类、醚类、有机酸类具有较强的抗真菌作用有关；烯类是挥发油中重要的抗菌成分，青蒿油-2的抗菌作用好于青蒿油-1，可能与青蒿油-2的烯类含量(烯类65.42％)远远高于青蒿油-1(26.49％)有关。专利文献CN112842942A公开了利用青蒿精油制备宠物皮肤清洁剂的方法，由以下质量份数配方成分组成：包括阴离子表面活性剂1-3份、两性表面活性剂2-3份、护毛剂2-3份、天然源除螨剂3-5份、盐湖水浓缩物6-9份、二甲苯磺酸钠3-5份、生物质碳3-5份、抗真菌剂2-5份、调理剂3-6份、青蒿精油6-9份。并指出通过增加了青蒿精油，利用青蒿精油来增加皮肤清洁剂的抗真菌的能力。专利文献CN108042661B公开了一种白茶提取物，其中包含二氢杨梅素，且其量量占该提取物总重量的60～90％。并指出二氢杨梅素是显齿蛇葡萄和大叶蛇葡萄等蛇葡萄属植物的叶(俗称为白茶)提取物中的典型黄酮类化合物，具有优异的生理学功能，如具有抗菌作用，蛇葡萄属植物叶提取物对金黄葡萄球菌、枯草杆菌、黑曲霉、黄曲霉、青霉及交链霉均有不同程度的抑制效果，对黑曲霉、黄曲霉最低抑菌浓度分别是0.7％、1.1％，对金黄葡萄球菌，枯草杆菌最低抑菌浓度均小于0.07％。
而目前未见如本申请抗真菌效果显著的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗真菌的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物，制备方法，以及用途。
第一方面，本发明提供了一种青蒿精油在制备抗真菌的产品中的应用，所述青蒿精油是采用以下方法制备的：采集新鲜青蒿嫩苗，取叶子，干燥，切成碎段，放入蒸馏设备，加入蒸馏水，料液比为1:(0.5-2)，浸泡后开始蒸馏，蒸馏时间为60-90min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
优选地，所述干燥的方式为60℃以下干燥2-5小时，所述碎段的大小为4-6mm，所述浸泡的时间为1-2h。
优选地，所述蒸馏的参数为：萃取温度90-96℃，冷凝管温度15-25℃。
优选地，所述青蒿其产地为河南。
优选地，所述真菌为白色念珠菌或红色毛癣菌。
优选地，所述产品为化妆品、药物或具有抗菌作用的日用品或衣物。
第二方面，本发明提供了一种白茶精油在制备抗真菌的产品中的应用，所述白茶精油是采用以下方法制备的：采集新鲜白茶的嫩芽，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在30-35℃，湿度为50％-60％，萎凋至减重率为50％-60％，之后置入烘干机100-120℃烘干20-40min；将白茶干燥叶片粉碎，超临界CO2流体萃取，得白茶精油。
优选地，所述超临界CO2流体萃取的参数为：CO2流体流速0.5-2L/min，萃取温度42～50℃，萃取压力20～25MPa，分离温度50～60℃，分离压力4.5～5.5MPa，萃取时间1.5～2.5h。
优选地，所述超临界CO2流体萃取在开始时预浸润5-20min。
优选地，所述白茶干燥叶片被粉碎成10～20目粗粉。
优选地，所述真菌为白色念珠菌或红色毛癣菌。
优选地，所述产品为化妆品、药物或具有抗菌作用的日用品或衣物。
第三方面，本发明提供了一种植物精油组合物在制备抗真菌产品中的应用，所述植物精油组合物含有如上任一所述的青蒿精油和如上任一所述的白茶精油。
优选地，所述青蒿精油和白茶精油的比例为1:(0.01-20)。
优选地，所述真菌为白色念珠菌或红色毛癣菌。
优选地，所述产品为化妆品、药物或具有抗菌作用的日用品或衣物。
本文中所述的青蒿精油是从菊科植物黄花蒿Artemisia annua L.中提取得到。所述的白茶精油是从山茶科植物毛白茶Camellia sinensis(L.)O.Ktze.提取得到。
本发明优点在于：
1、本发明对青蒿精油的提取方法进行了研究，并考察了对两种皮肤真菌(白色念珠菌，红色毛癣菌)的抑制作用，证实青蒿精油对两种真菌具有显著的抑制作用，而且本发明方法制备的青蒿精油抑制作用更加突出。
2、本发明对白茶精油的提取方法进行了研究，并考察了对两种皮肤真菌(白色念珠菌，红色毛癣菌)的抑制作用，证实白茶精油对两种真菌具有显著的抑制作用，而且本发明方法制备的白茶精油抑制作用更加突出。
3、本发明考察了青蒿精油与白茶精油组合物的抗真菌效果，结果表明二者联合使用表现出协同作用，能显著提升抗真菌效果，在临床上具有较好的应用前景。
附图说明
图1：青蒿精油的GC-MS分析的总离子流图。
图2：白茶精油的GC-MS分析的总离子流图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1本发明青蒿精油及其制备(一)
以河南地区的青蒿嫩苗为材料。
仪器：水封口式蒸馏釜，其设备构成是：
蒸馏釜：整体外观为圆柱形，球冠式釜底，上部开口为加料口；
鹅颈管：带有蒸馏釜上口的圆锥形盖子，连接冷凝器；
冷凝器：为铝质列管冷凝器，使蒸汽冷凝和冷却馏出液；
油水分离器：用铝材做成，既是接受馏出液的容器，又是精油与水的分离器。
提取精油工艺流程为：投料→加水→蒸馏→冷却→油水分离→精油→包装。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例2本发明青蒿精油及其制备(二)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入0.8倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例3本发明青蒿精油及其制备(三)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入2倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例4本发明青蒿精油及其制备(四)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间60min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例5本发明青蒿精油及其制备(五)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间90min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例6本发明青蒿精油及其制备(六)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为5h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡2h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例7本发明青蒿精油及其制备(七)
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为2h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1h后进行蒸馏。萃取温度96℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
实施例8本发明白茶精油及其制备(一)
以云南普洱地区大叶种白茶为材料。
仪器：主要设备是萃取器，由不锈钢管制成，增压缓冲并为双层结构，内筒为不锈钢，外筒为黄铜，互相紧密配合。其设备构成包括：CO2钢瓶，干燥器，冷凝冰水浴，柱塞泵，增压缓冲瓶，恒温槽，预热管，.萃取器，冰水烧杯，沉积分离器，缓冲器，湿式流量计。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例9本发明白茶精油及其制备(二)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为55％-60％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例10本发明白茶精油及其制备(三)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在30℃，湿度为50％-55％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机120℃干燥20min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润5min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速2L/min，萃取温度42℃，萃取压力20MPa，分离温度60℃，分离压力5.5MPa，萃取时间1.5h，得白茶精油。
实施例11本发明白茶精油及其制备(四)
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在32℃，湿度为50％-55％，萎凋至减重率为50％-55％，之后置入烘干机110℃干燥40min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润20min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1.5L/min，萃取温度42℃，萃取压力20MPa，分离温度60℃，分离压力5.5MPa，萃取时间1.5h，得白茶精油。
对比例1青蒿精油对照一及其制备
以河南地区的花蕾期青蒿植株为材料。
仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区7月份的花蕾期的新鲜青蒿全草，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
对比例2青蒿精油对照二及其制备
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入3倍体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间75min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
对比例3青蒿精油对照三及其制备
材料和仪器同实施例1。
具体步骤如下：
采集河南地区5月份的新鲜青蒿嫩苗，除去茎及无用部位，将叶子洗净，滤干水分，置于电热恒温干燥箱中进行干燥，温度控制在60度以下，干燥时间为3h。用切割机将干燥青蒿切成4-6mm碎段，便于精油分子的挥发。将粉粹的青蒿叶置于蒸馏内槽中，加入等体积的屈臣氏蒸馏水，注于外蒸馏槽中，并将蒸馏槽置放于水槽之上，密封外蒸馏槽，浸泡1.5h后进行蒸馏。萃取温度90℃，冷凝管温度15-25℃，蒸馏时间120min，得精油纯露混合液，用分离器分离，得青蒿精油。
对比例4白茶精油对照一及其制备
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在当地白天在日光下晾晒，夜晚在室内阴凉处晾干，连续3天，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
对比例5白茶精油对照二及其制备
材料和仪器同实施例8。
具体步骤如下：
在清晨6点到9点，手工采摘大小相当的一心二嫩叶，在背光的室内整齐摊开至厚度为3-5cm，温度控制在35℃，湿度为55％-60％，萎凋至减重率为65％-70％，之后置入烘干机110℃干燥30min。后将白茶叶片粉碎过10目筛得粗粉，用砂布袋装好已秤量好的茶叶粗粉，并装入萃取器中，封好顶盖。开启恒温槽电源。打开二氧化碳钢瓶阀门，使气体沿管线经过干燥器，冷却冷凝器(浸在冰水浴中)，柱塞泵，进入增压缓冲瓶。待增压缓冲瓶的压力大大超过实验压力后，打开阀门V1，使萃取器升压到实验压力，关阀门V1，让茶叶预浸润10min，超临界CO2流体萃取。CO2流体流速1L/min，萃取温度50℃，萃取压力25MPa，分离温度50℃，分离压力5.0MPa，萃取时间2h，得白茶精油。
实施例12青蒿精油的GC-MS分析
一、试剂与材料
实施例1制备的青蒿精油。
乙醚，分析纯。
二、实验仪器
Agilent 7000B三重四级杆气相质谱仪(美国安捷伦公司)。
三、成分分析
1 GC-MS分析条件
(1)色谱条件色谱柱：HP-5ms(30m*0.25mm*0.25μm)；载气：高纯He；流速：1ml·min-1；进样口温度：250℃；分流比：10:1；升温程序：起始温度60℃，保持3min，然后以5℃/min的速度升温至300℃，保持20min。
(2)质谱条件模式：全扫描；转接口温度：250℃；离子源温度：230℃；电子能量：-70ev；扫描范围：30-400m/e；溶剂延迟：4min。
2供试品溶液的制备
精密吸取1μl精油样品，加乙醚定容至1ml制成供试品溶液，即得。
3测定法
精密吸取供试品溶液1μl，注入气相质谱仪，测定，即得。
4数据分析
将得到的样品GC/MS原始文件通过MassHunter Workstation Software(VersionB.04.00)进行分析得到各成分相应的保留时间及峰面积百分比，并通过数据库(NIST11.0)比对得到定性鉴别结果。
5测定结果
总离子流图如图1所示。主要成分分析结果表1所示。
表1青蒿精油化学成分GC-MS分析结果
实施例13白茶精油的GC-MS分析
一、试剂与材料
实施例8制备的白茶精油。
乙醚(分析纯)。
二、实验仪器
Agilent 7000B三重四级杆气相质谱仪(美国安捷伦公司)。
三、成分分析
1 GC-MS分析条件
(1)色谱条件色谱柱：HP-5ms(30m*0.25mm*0.25μm)；载气：高纯He；流速：1ml·min-1；进样口温度：250℃；分流比：10:1；升温程序：起始温度60℃，保持3min，然后以5℃/min的速度升温至300℃，保持20min。
(2)质谱条件模式：全扫描；转接口温度：250℃；离子源温度：230℃；电子能量：-70ev；扫描范围：30-400m/e；溶剂延迟：4min。
2供试品溶液的制备
精密吸取1μl精油样品，加乙醚定容至1ml制成供试品溶液，即得。
3测定法
精密吸取供试品溶液1μl，注入气相质谱仪，测定，即得。
4数据分析
将得到的样品GC/MS原始文件通过MassHunter Workstation Software(VersionB.04.00)进行分析得到各成分相应的保留时间及峰面积百分比，并通过数据库(NIST11.0)比对得到定性鉴别结果。
5测定结果
总离子流图如图2所示。主要成分分析结果表2所示。
表2白茶精油化学成分GC-MS分析结果
实施例14青蒿精油、白茶精油及组合物对皮肤真菌的抑制作用研究
1实验材料
1.1实验菌株
白色念珠菌(Canidia Albicans)SC5314；红色毛癣菌(Trichophyton rubrum)。
1.2试药与试剂
实施例1-5、对比例1-3制备的青蒿精油、实施例8-9、对比例4-5制备的白茶精油、实施例1的青蒿精油和实施例8的白茶精油的组合物。
两性霉素B(Amphotericin B，购于Sigma公司)。
自制沙氏琼脂培养基(SDA)，配方：每1000ml含葡萄糖40g、蛋白胨10g、琼脂20g(固体培养基添加)，pH6.0。
1.3仪器与设备
超净工作台、恒温生化培养箱、培养皿、灭菌滤纸片、1000μl、200μl、10μl等不同规格的枪及枪头、直尺。
2实验方法
2.1菌悬液的配制
将上述真菌经SDA液体培养基25℃培养5天，两次活化，涂布平板计数，调节浓度至1×105cfu/mL。
2.2药物配制
单方精油：青蒿精油、白茶精油均分别用DMSO作2倍稀释。
组方精油：青蒿精油+白茶精油，250μg/mL青蒿精油400μL与250μg/mL白茶精油100μL混合，再用DMSO作2倍稀释。
两性霉素B：用DMSO溶解，并用SDA液体培养基稀释至工作浓度。
2.3抑菌圈实验
用1000μl枪头吸取配制好的菌悬液涂布于SDA固体培养基，放入直径7mm圆形无菌滤纸片，贴敷于培养基表面，在滤纸片上滴加5μl单方精油或组方精油的2倍稀释液。每个培养皿内均设置仅滴加DMSO的阴性对照和滴加了5μl 0.1mg/ml两性霉素B的阳性对照。于25℃条件下培养8天。培养结束后测定抑菌圈大小。每个处理做10个培养皿。
2.4统计学分析
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计学分析，数据以平均数±标准差表示，多组比较采用One-way ANOVA检验结合Bonferroni校正两两比较分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。
3实验结果
对各处理组白色念珠菌培养板中抑菌圈直径进行测量，统计结果表明，青蒿精油处理组和阳性对照组的抑菌圈直径均大于滤纸片直径，可见各制备方法提取的青蒿精油对于白色念珠菌均具有一定的抑制作用。与阳性药物两性霉素B比较，实施例1-5精油处理组的抑菌圈直径更大，差异具有显著性(P<0.01)，对比例1-3精油处理组的抑菌圈直径略大于两性霉素B处理组，但是差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对比例1-3处理组分别比较，实施例1-5处理组的抑菌圈直径均显著大于各对比例处理组，差异具有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。所有处理组中，实施例1青蒿精油组的抑菌圈直径最大，表明按照实施例1方法提取的青蒿精油对于白色念珠菌抑制作用最强。
对各处理组红色毛癣菌培养板中抑菌圈直径进行测量，统计结果表明，青蒿精油处理组和阳性对照组的抑菌圈直径均大于滤纸片直径，可见各制备方法提取的青蒿精油对于红色毛癣菌均具有一定的抑制作用。与阳性药物两性霉素B比较，实施例1-5精油处理的抑菌圈直径更大，差异具有显著性(P<0.01)，对比例1-3精油处理的抑菌圈直径略大于两性霉素B处理组，但是差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对比例1-3处理组分别比较，实施例1-5处理组的抑菌圈直径均显著大于各对比例处理组，差异具有统计学意义(P<0.01，P<0.05)。所有处理组中，实施例1青蒿精油组的抑菌圈直径最大，表明按照实施例1方法提取的青蒿精油对于红色毛癣菌抑制作用最强。
表3青蒿精油对皮肤真菌的抑制作用
注：与两性霉素B比较，*P<0.05，**P<0.01；与对比例1青蒿精油组比较，##P<0.01；与对比例2青蒿精油组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与对比例3青蒿精油组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。
对各处理组白色念珠菌培养板中抑菌圈直径进行测量，统计结果表明，白茶精油处理组和阳性对照组的抑菌圈直径均大于滤纸片直径，可见各制备方法提取的白茶精油对于白色念珠菌均具有一定的抑制作用。与阳性药物两性霉素B比较，实施例8-9和对比例5白茶精油处理组的抑菌圈直径更大，差异具有显著性(P<0.01)，对比例4精油处理组的抑菌圈直径与两性霉素B处理组比较差异无显著性(P>0.05)。与对比例4-5处理组分别比较，实施例8-9白茶精油处理组的抑菌圈直径均显著大于各对比例的白茶精油处理组，差异具有统计学意义(P<0.01)。所有处理组中，实施例8白茶精油组的抑菌圈直径最大，表明按照实施例8方法提取的白茶精油对于白色念珠菌抑制作用最强。
对各处理组红色毛癣菌培养板中抑菌圈直径进行测量，统计结果表明，白茶精油处理组和阳性对照组的抑菌圈直径均大于滤纸片直径，可见各制备方法提取的白茶精油对于红色毛癣菌均具有一定的抑制作用。与阳性药物两性霉素B比较，实施例8-9精油处理的抑菌圈直径更大，差异具有显著性(P<0.01)，对比例4-5精油处理的抑菌圈直径与两性霉素B处理组比较差异不具有统计学意义(P>0.05)。与对比例4-5处理组分别比较，实施例8-9处理组的抑菌圈直径均显著大于各对比例处理组，差异具有统计学意义(P<0.01)。所有处理组中，实施例8白茶精油组的抑菌圈直径最大，表明按照实施例8方法提取的白茶精油对于红色毛癣菌抑制作用最强。
表4白茶精油对皮肤真菌的抑制作用
注：与两性霉素B比较，**P<0.01；与对比例4白茶精油组比较，##P<0.01；与对比例5白茶精油组比较，△△P<0.01。
比较抑菌效果最好的青蒿精油、白茶精油及它们的组合物的抑菌作用，结果表明，两种精油的混合物对白色念珠菌和红色毛癣菌的抑制作用相比于单独使用有所显著提升(P<0.01)。
表5单方精油和组方精油对皮肤真菌的抑制作用比较
注：与两性霉素B比较，**P<0.01；与组方精油组比较，##P<0.01。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。