具体实施方式

本发明，在其一些实施例中，涉及光保护，并且更具体地但非排他地，涉及可以从植物材料获得的UV阻挡组合物。

在详细解释本发明的至少一个实施例之前，应当理解，本发明的应用不一定限于以下描述中阐述的或由实施例举例说明的细节。本发明能够有其他实施例或能够以各种方式实践或实施。

本发明人发现了漆树中的天然UV吸收材料，它是一种特别有效的阻挡有害UV辐射的试剂(例如防晒剂)，并且令人惊讶地表现出对皮肤细胞的其他有益作用，例如抗衰老和伤口愈合作用。

在将本发明付诸实践的同时，发明人还揭示了一种用于分离特定UV吸收化合物例如五没食子酰葡萄糖的有效方法。

现在参考附图，图1示出了漆树的叶子和萌芽果实的乙醇提取物比植物的其他部分更大程度地阻挡有害的UV辐射。

图2示出了根据本发明的示例性实施例从漆树叶子中提取示例性UV吸收物质(SH-101)的方法。图4A至图4B示出了SH-401的纯度和UV吸收。图3示出了乙醇体积对UV吸收材料提取效率的影响。

图5示出了由大量光谱证据确定的SH-401(五没食子酰葡萄糖)的结构。图6示出了SH-401作为防晒剂的功效(由SPF值测量)优于商业防晒剂。图7示出了在暴露于UV辐射后SH-401是稳定的。

图8A示出了SH-401对人皮肤细胞无毒，并且图8B、图8C和图14A至图14D示出了SH-401保护人皮肤细胞免受UVB辐射。图9和图10示出了SH-401减少人皮肤中的ROS(活性氧)生成和脂质过氧化。图11示出了SH-401是抗氧化剂。图12和图13示出了SH-401减少皮肤细胞中UV诱导的DNA损伤。图15A至图15B示出了SH-401逆转皮肤中UV诱导的胶原蛋白降解。

组合物:

根据本发明的实施例的一个方面，提供了一种包括UV吸收材料和皮肤病学可接受的载体的组合物，其中UV吸收材料是从漆树叶子和/或萌芽果实中提取的。

在本文全文中，术语“UV吸收”是指在200nm到500nm范围内的波长的至少一部分中电磁辐射的吸收。400nm到500nm的子范围在本文中也被称为“蓝光”，并且为了简洁起见，将此类波长的吸收包括在术语“UV吸收”的范围内。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，术语“UV吸收”是指在280nm到500nm的范围内的波长的至少一部分的吸收。在一些这样的实施例中，术语“UV吸收”是指在280nm到400nm的范围内的波长的至少一部分的吸收，波长在本文中也被称为“紫外线B”(UVB)(280nm到320nm)和“紫外线A”(UVA)(320nm到400nm)。在一些这样的实施例中，术语“UV吸收”是指在280nm到320nm的范围内的波长的至少一部分(即，UVB)的吸收。在一些这样的实施例中，术语“UV吸收”是指在290nm到320nm的范围内的波长的至少一部分(即，UVB)的吸收。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，术语“UV吸收”是指在300nm到500nm的范围内的波长的至少一部分的吸收。在一些这样的实施例中，术语“UV吸收”是指在300nm到400nm的范围内的波长的至少一部分的吸收，该波长在本领域中也被称为“近紫外”。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，术语“UV吸收”是指蓝光的吸收，即在400nm到500nm的范围内的波长的至少一部分的吸收。吸收这种波长的材料可以具有清晰可见的颜色，例如黄色。

在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.005mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.01mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.02mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.05mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.1mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.2mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少0.5mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少1mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少2mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少5mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少10mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少20mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少50mg/ml。在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度为至少100mg/ml。

在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度不超过400mg/ml，可选地不超过200mg/ml，可选地不超过100mg/ml，可选地不超过50mg/ml，可选地不超过20mg/ml，并且可选地不超过10mg/ml。

在一些实施例中，组合物中UV吸收材料的浓度范围为从约0.05到约10mg/ml，或从约10mg/ml到约50mg/ml，或从约50到约200mg/ml，或从约100到约400mg/ml，包括任何中间值和其间的子范围。

在关于组合物的任何实施例中的一些中，该组合物是防晒组合物。

在本文中，短语“防晒组合物”是指这样的组合物，当作为薄层施用于皮肤上时，通过吸收UV辐射和/或反射UV辐射，至少部分地阻挡或屏蔽来自太阳的UV辐射(通常在290至320nm的范围内的辐射，并且可选地在更宽的波长范围内，例如在290nm到400nm的范围内的辐射)。可选地确定防晒组合物用于(例如，在包装防晒组合物的包装材料中或在其上)阻挡或屏蔽UV辐射或一般的阳光，和/或(例如，通过局部施用)最大限度地减少与阳光有关的伤害(例如，晒伤、癌症风险)。

在本文所述的任何实施例的一些中，组合物中UV吸收材料的浓度足以在1mm的路径长度上吸收至少90％的波长为300nm的辐射。在一些实施例中，该浓度足以在3mm的路径长度上吸收至少90％的波长为300nm的辐射。在一些实施例中，该浓度足以在0.1mm的路径长度上吸收至少90％的波长为300nm的辐射。在一些实施例中，该浓度足以在0.03mm的路径长度上吸收至少90％的波长为300nm的辐射。在一些实施例中，该浓度足以在0.01mm的路径长度上吸收至少90％的波长为300nm的辐射。

本领域技术人员将理解，(根据比尔-朗伯定律)至少90％的吸收对应于至少1的吸光度(并且至少99％的吸收对应于至少2的吸光度，并且至少99.9％的吸收对应于至少3的吸光度)，其中吸光度是衰减系数(材料的固有特性)、浓度和路径长度的乘积。因此，在1mm的路径长度上至少90％的吸收对应于衰减系数和浓度的乘积，为至少1mm^-1。因此，这种限制限定了具有给定吸收特性的化合物的浓度。在吸收300nm辐射的化合物的混合物的情况下(例如，在本文所述的UV吸收材料中)，每种化合物的衰减系数和浓度的乘积之和为至少1mm^-1。

由于给定的路径长度(例如，1mm)限定了衰减系数和浓度的乘积(例如，为至少1mm^-1)，因此可以理解，可以针对不同的路径长度测量材料的吸收，例如在较短的路径长度上以便最大程度地减少组合物中其他化合物的散射或吸收。因此，例如，对于1mm的路径长度的至少1的吸光度在实践中可以可选地被确定为对于10mm的路径长度的(本文和本领域中所定义的)至少10的吸光度，对于0.1mm的路径长度的(本文和本领域中所定义的)0.1的吸光度，等等。

在本文所述的任何实施例中的一些中，UV吸收材料包括至少一种化合物，其具有多个没食子酰基(即，3,4,5-三羟基苯甲酰基)取代基，例如，2至10个没食子酰基取代基，或4至6个(例如5个)没食子酰基取代基。在一些实施例中，至少一种化合物具有碳水化合物部分，例如葡萄糖部分，具有多个没食子酰基取代基。碳水化合物部分可以可选地是糖(例如，己糖)部分，如D-葡萄糖部分，或奎宁酸部分。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，没食子酰基取代基经由酯键连接至另一部分，即，没食子酰基连接至另一部分的氧原子。

没食子酰基取代基可以可选地各自连接至主链部分(例如，碳水化合物部分)，或者，一些没食子酰基取代基可以可选地直接连接至主链部分并且一些没食子酰基取代基可以连接至其他没食子酰基取代基。在一些这样的实施例中，主链部分(例如，葡萄糖部分)的每个没食子酰基取代基本身是没食子酰基的形式，或被没食子酰基取代的没食子酰基(例如，3,4-二羟基-5-[(3,4,5-三羟基苯甲酰基)氧基]苯甲酰基)。在一些这样的实施例中，主链部分(例如，葡萄糖部分)的每个没食子酰基取代基本身是没食子酰基的形式。

如本文所举例说明的，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(包括直接连接至葡萄糖的不同氧原子的5个没食子酰基部分)可以从漆树中高效提取。

在任何相应实施例中的一些中，UV吸收材料中1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少80重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少90重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少95重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少98重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少99重量百分比。

在本文所述的任何实施例中的一些中，根据本文所述的任何相应实施例的UV吸收材料是从漆树叶子和/或萌芽果实中分离的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(例如，根据本文所述的关于从漆树中分离1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的任何实施例)。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的浓度为至少0.005mg/ml(根据本文所述的任何相应实施例)。

在本文全文中，术语“漆树”是指Rhus spp.，即属于漆树(Rhus)属的任何植物。漆树的例子包括但不限于，Rhus chinensis(又名中国漆树)、Rhus delavayi、Rhushypoleuca、Rhus punjabensis(又名旁遮普漆树)、Rhus taitensis、Rhus sanwicensis、Rhus coriaria(又名鞣革的漆树、西西里漆树或榆树叶的漆树)、Rhus aromatica(又名芳香漆树)、Rhus copallinum(又名有翅漆树或闪亮漆树)、Rhus glabra(又名光滑漆树)、Rhus lanceolata(又名草原漆树)、Rhus michauxii(又名米乔克斯的漆树)、Rhus typhina(又名鹿角漆树)、Rhus choriophylla(又名梅恩的漆树)、Rhus integrifolia(又名柠檬水漆树)、Rhus kearneyi(又名科尔尼漆树)、Rhus microphylla(又名沙漠漆树或小叶漆树)、Rhus ovata(又名糖漆树)、Rhus trilobata(又名三裂漆树)、Rhus virens(又名常绿漆树)和Rus muelleri(又名穆勒的漆树)。在示例性实施例中，漆树是Rhus coriaria(西西里漆树)。

在本文所述的任何实施例中的一些中，根据任何相应实施例，UV吸收材料可通过本文所述的方法获得。

方法：

根据本发明的实施例的一个方面，提供了一种从漆树获得UV吸收材料(例如，根据本文所述的任何相应实施例的UV吸收材料)的方法。该方法包括将漆树叶子和/或萌芽果实与水混溶性有机溶剂接触(例如，从而获得作为提取物的UV吸收材料)。在一些实施例中，该方法还包括例如通过溶剂的蒸发来去除水混溶性有机溶剂。

在与水混溶性有机溶剂接触之前，可选地对漆树叶子和/或萌芽果实进行干燥，例如通过暴露于空气(可选地干燥空气)和/或通过温和加热(例如，在低于100℃、或低于75℃、或低于50℃的温度下)。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，水混溶性有机溶剂包括醇(可选地两种或更多种醇)，包括一个-OH基团或多于一个-OH基团(例如，乙二醇、丙二醇、丁二醇、戊二醇和/或甘油)；和/或酮(例如丙酮)。在一些实施例中，水混溶性有机溶剂包括C1-4醇(例如，叔丁醇、1-丙醇、异丙醇、乙醇和/或甲醇)、丙酮和/或甘油。根据一些实施例，乙醇是示例性的水混溶性有机溶剂。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，将漆树叶子和/或萌芽果实与水混溶性有机溶剂接触包括提取。在一些这样的实施例中，提取是使用索氏提取器实现的。

在本文中，术语“索氏提取器”是指配置为回收用于提取的溶剂的设备，通过将溶剂与来源(例如漆树)接触以提取材料，蒸发用于提取材料的溶剂，并冷凝溶剂蒸气，使得蒸气返回接触来源，从而进一步提取材料。术语“索氏提取器”涵盖各种特定设计，包括在本领域中也被称为“熊川提取器(Kumagawa extractor)”的设计。

在关于索氏提取器的实施例中，挥发性的水混溶性有机溶剂是特别合适的，例如沸点(在大气压下)不超过100℃的溶剂。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，与漆树接触的水混溶性有机溶剂的量为每克(干重)漆树至少5ml溶剂，可选地为每克(干重)漆树至少10ml溶剂，并且可选地为每克(干重)漆树至少15ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括乙醇。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，与漆树接触的水混溶性有机溶剂的量为每克(干重)漆树不超过40ml溶剂，可选地为每克(干重)漆树不超过30ml溶剂，并且可选地为每克(干重)漆树不超过约20ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括乙醇。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，与漆树接触的水混溶性有机溶剂的量为每克(干重)漆树5至40ml溶剂，并且可选地为每克(干重)漆树10至30ml溶剂。如本文所举例说明的，每克(干重)漆树约20ml水混溶性有机溶剂可以提供有效的提取。在一些实施例中，溶剂包括乙醇。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，该方法还包括将UV吸收材料(例如，根据本文所述的任何相应实施例，以使用水混溶性有机溶剂获得的提取物的形式)分配在极性溶剂和非极性溶剂中，并收集分配到极性溶剂中的级分，例如，从而获得更纯(更有效地吸收)的UV吸收材料。

在本文中，术语“分配”是指将材料与两种不混溶的液体接触，例如基于在两种液体的每种中材料的不同组分的不同亲和力和/或溶解性，允许材料的不同部分传递(即“分配”)到不同的相。一相或两相可以可选地从另一相中分离，从而收集分配到该相中的部分。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，非极性溶剂包括一种或多种烃，并且可选地包括一种或多种脂肪烃。在一些实施例中，非极性溶剂包括一种或多种烷烃，例如一种或多种具有5至16个碳原子的烷烃。根据一些实施例，己烷是示例性的非极性溶剂。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，极性溶剂包括水，例如至少80重量百分比的水，或至少90重量百分比的水，或至少95重量百分比的水，或至少98重量百分比的水，或至少99重量百分比的水。在示例性实施例中，极性溶剂基本上由水组成。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，非极性溶剂是脂肪烃，并且极性溶剂基本上由水组成。

不受任何特定理论的束缚，认为非极性溶剂从分配到极性溶剂中的UV吸收材料中分离出相当大量的其他的植物来源物质，例如叶绿素。进一步认为(例如，本文所述的)极性和非极性溶剂的合适比例可以提高分离的植物来源物质的比例和/或最大限度地减少被浪费的UV吸收材料的比例。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的非极性溶剂与水的比率为每ml水至少0.05ml溶剂，可选地为每ml水至少0.1ml溶剂，可选地为每ml水至少0.15ml溶剂，并且可选地每ml水至少0.25ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括己烷。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的非极性溶剂与水的比率为每ml水不超过1ml溶剂，可选地为每ml水不超过0.6ml溶剂，可选地为每ml水不超过0.4ml溶剂，并且可选地为每ml水不超过0.25ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括己烷。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的非极性溶剂与水的比率在每ml水0.05至1ml溶剂的范围内，可选地在每ml水0.1至0.6ml溶剂的范围内，可选地在每ml水0.15至0.4ml溶剂的范围内，并且可选地每ml水约0.25ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括己烷。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，该方法还包括将UV吸收材料分配到水以及与水不混溶的极性有机溶剂中，并收集分配到与水不混溶的极性有机溶剂中的级分，例如，从而获得更纯净(更有效地吸收)的UV吸收材料。根据本文所述的任何相应实施例，UV吸收材料可选地为分配到极性溶剂(而不是非极性溶剂)中的级分的形式。

与水不混溶的极性有机溶剂的示例包括但不限于酯类，例如乙酸C1-4烷基酯(例如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和乙酸丁酯)和碳酸丙烯酯；醇类，例如1-丁醇、2-丁醇、异丁醇、戊醇、异戊醇、辛醇、环己醇；酮类，例如2-丁酮、甲基异丁基酮、苯乙酮、环己酮；醛类，例如糠醛；胺类，如苯胺；极性氯化溶剂，例如二氯甲烷和1,2-二氯乙烷；二硫化碳；以及硝基化合物，例如硝基甲烷、硝基丙烷和硝基苯。根据一些实施例，乙酸乙酯是示例性的与水不混溶的极性有机溶剂。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的与水不混溶的极性有机溶剂与水的比率为每ml水至少0.3ml溶剂，可选地为每ml水至少0.6ml溶剂，可选地为每ml水至少1ml溶剂，并且可选地为每ml水至少1.5ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括乙酸乙酯。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的与水不混溶的极性有机溶剂与水的比率为每ml水不超过7.5ml溶剂，可选地为每ml水不超过4ml溶剂，可选地为每ml水不超过2.5ml溶剂，并且可选地为每ml水不超过1.5ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括乙酸乙酯。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，用于分配的与水不混溶的极性有机溶剂与水的比率在每ml水0.3至7.5ml溶剂的范围内，可选地在每ml水0.6至4ml溶剂的范围内，可选地在每ml水1至2.5ml溶剂的范围内，并且可选地每ml水约1.5ml溶剂。在一些这样的实施例中，溶剂包括乙酸乙酯。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，该方法还包括实现UV吸收材料的结晶，例如从而获得更纯的UV吸收材料。可以可选地通过本领域已知的任何合适的技术来实现结晶。在一些实施例中，结晶是通过将UV吸收材料(例如，根据本文所述的任何相应实施例，以分配到与水不混溶的极性有机溶剂中的级分的形式)与包括水的溶剂接触来实现的。

包括水的溶剂可以可选地为例如水和一种或多种水混溶性有机溶剂的混合物(根据本文所述的任何相应实施例)。在任何相应实施例中的一些中，包括水的溶剂包括水和醇，例如，浓度在约20到约80重量百分比的范围内(例如，醇：水重量比为20：80到80：20的醇：水)，或在约30至约60重量百分比的范围内(例如，醇：水重量比为30：70到60：40)，或约40重量百分比(例如，醇：水重量比为40：60)。醇/水(重量比为40：60)是示例性的包括水的溶剂，用于实现结晶。

在结晶之后，可以可选地通过过滤和/或溶剂蒸发将UV吸收材料的晶体从溶剂中分离。因此可以获得纯度相对高的分离的UV吸收材料。

在本文所述的任何相应实施例中的一些中，根据本文所述的任何相应实施例(可选地包括结晶作为前一步骤)获得的UV吸收材料通过柱色谱法进一步纯化，例如通过用UV吸收鉴定离开柱的级分。在一些实施例中，固定相是疏水的。在示例性实施例中，碳链(十八烷基或C18)键合的二氧化硅用作固定相。梯度的水溶液(例如，0.1％三氟乙酸)和乙腈是示例性的流动相。

在本文所述的关于用于获得包括1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的UV吸收材料的方法的任何实施例中的一些中，在UV吸收材料中的1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖具有较高的纯度，例如，为UV吸收材料的至少95重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的纯度为至少98重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的纯度为至少99重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的纯度为至少99.5重量百分比。在一些实施例中，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的纯度为至少99.8重量百分比。

根据本发明的实施例的一个方面，提供了根据任何相应实施例，根据本文所述的方法获得的UV吸收材料。

制剂及用途：

如上所述，根据本文展示的任何实施例的UV吸收材料可用作包括皮肤病学可接受的载体的组合物的一部分。

这种组合物可以可选地是用于局部使用的任何组合物。

如上文进一步提到的，该组合物可选地是防晒组合物，即，旨在用于阻挡或屏蔽UV辐射(例如，在阳光下)。应当理解，防晒组合物(根据本文所述的任何相应实施例)可以可选地具有除作为防晒剂之外的主要预期用途(例如，化妆品和/或药物用途)，其中防晒剂活性是组合物的辅助活性。

或者或另外，组合物(根据本文所述的任何相应实施例)可选地为药物组合物和/或化妆品组合物(例如，包含在化妆品中的组合物)。在一些这样的实施例中，确定组合物用于治疗皮肤老化或伤口，例如用于促进伤口愈合的药物组合物。在一些实施例中，化妆品组合物是嫩肤组合物和/或去角质组合物，例如，确定用于嫩肤或皮肤去角质。

在本文中，术语“化妆品”和“化妆品组合物”和“化妆产品”是指用于美学目的的外用物质或产品(制品)。化妆品组合物可选地包括进一步表现出药物活性以促进提供所需美学效果的物质。

化妆品组合物或产品包括例如化妆品、凝胶、漆、眼影、唇彩、口红等，在这些化妆品组合物或产品中，可以有利地利用本文所述的活性成分。

在本文中，术语“药物的”和“药学上”是指旨在有益地改变身体的至少一部分(例如皮肤)的状况和/或状态的任何化合物和/或组合物，包括在美容上改变例如皮肤。应当理解，这样的定义可能比监管机构对这样的术语的使用更广泛，监管机构可以将例如美容效果排除在术语的范围之外。

药物或化妆品组合物的效果可以可选地与防止由UV辐射诱导的损伤相关，可选地但不一定至少部分地通过减少到达皮肤的UV辐射的量来介导该效果。

或者或另外，药物或化妆品组合物的有益效果可能与通过UV辐射减少以外的机制(例如，通过抗氧化作用)防止由UV辐射诱导的损伤相关，和/或与治疗与UV辐射无关的损伤，例如伤口(例如，通过促进与UV辐射无关的伤口愈合)相关。

根据本发明的实施例的另一方面，提供了来源自漆树的UV吸收材料或包括来源自漆树的UV吸收材料的组合物(根据本文所述的任何相应实施例)在制造药物，例如用于治疗皮肤老化或伤口的药物中的用途。

根据本发明实施例的另一方面，提供了一种在有需要的受试者中治疗皮肤老化和/或伤口的方法，该方法包括向受试者局部施用包括来源自漆树的UV吸收材料的组合物(根据本文所述的任何相应实施例)。

在本文中，术语“皮肤病学可接受的载体”是指当施用于生物体的皮肤时不会对生物体造成显著刺激并且不会消除所施用化合物的生物活性和特性的载体或稀释剂。

根据本发明的实施例使用的组合物因此可以使用一种或多种包括赋形剂和助剂的载体以常规方式来配制，这些载体有助于将上述化合物加工成化妆品上和/或药学上可使用的制剂。

在本文中，术语“赋形剂”是指添加到组合物中以进一步促进活性成分的施用的惰性物质，例如，根据本文所述的任何相应实施例的UV吸收材料。合适的固相或凝胶相载体或赋形剂的示例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚乙二醇等聚合物。

活性成分的配制和施用技术可以在“雷明顿药物科学(Remington’sPharmaceutical Sciences)”麦克出版公司，伊斯顿，宾夕法尼亚州，最新版中找到，其通过引用并入本文。

根据本发明的各种实施例，本文所述的组合物可以通过本领域公知的方法，例如通过常规混合、溶解、造粒、研磨、乳化、包封、截留或冻干方法来制造。

通过选择适当的载体和可选地能够包含在组合物中的其他成分，如本文所详述的，本文所述的组合物可以配制成适于局部施用的任何形式。因此，组合物可以为，例如乳霜、软膏、糊剂、凝胶、洗剂和/或皂的形式。

软膏是半固体制剂，通常基于植物油(例如，乳木果油和/或可可油)、凡士林或石油衍生物。与其他载体或赋形剂一样，软膏基质应该是惰性的、稳定的、无刺激性和不致敏的。

洗剂是可以无摩擦地施用到皮肤上的制剂。洗剂通常是水或醇基的液体或半液体制剂，例如水包油型乳液。由于易于施用更流动的组合物，洗剂通常优选用于处理(例如，防晒组合物通常需要的)大面积。

乳霜是粘性液体或半固体乳液，可以是水包油或油包水。乳霜基质通常包含油相、乳化剂和水相。油相，也称为“亲脂”相，可选地包括凡士林和/或脂肪醇，例如鲸蜡醇或硬脂醇。水相可选地包含湿润剂。乳霜制剂中的乳化剂可选地是非离子、阴离子、阳离子或两性表面活性剂。

在本文中，术语“乳液”是指包括处于两个或更多个不同相(例如，亲水相和亲脂相)中的液体的组合物。非液体物质(例如，分散的固体和/或气泡)也可以可选地存在。

如本文和本领域中所使用的，“油包水乳液”是以分散在亲脂相中的水相为特征的乳液。

如本文和本领域中所使用的，“水包油乳液”是以分散在水相中的亲脂相为特征的乳液。

糊剂是半固体剂型，根据基质的性质，可以是脂肪糊剂或由单相水性凝胶制成的糊剂。脂肪糊中的基质通常是凡士林、亲水性凡士林等。由单相水性凝胶制成的糊剂通常包含羧甲基纤维素等作为基质。

凝胶制剂是半固体、悬浮型系统。单相凝胶可选地包含大体上均匀分布在整个载液中的有机大分子，该载液通常是水性的；但也优选地包含非水性溶剂和可选地油。优选的有机大分子(例如胶凝剂)包括交联的丙烯酸聚合物，例如卡波姆聚合物的族，例如羧基聚烯烃(carboxypolyalkylenes)，其可以商标商购获得。在此上下文中其他类型的优选聚合物是亲水性聚合物，例如聚环氧乙烷、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物和聚乙烯醇；纤维素聚合物，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、甲基纤维素；胶，例如黄蓍胶和黄原胶；海藻酸钠；以及明胶。为了制备均匀的凝胶，可以加入醇或甘油等分散剂，或者可以通过研磨、机械混合或搅拌、或其组合来分散胶凝剂。

配制用于局部施用的组合物可以可选地存在于贴剂、拭子、纱布和/或垫中。

皮肤贴剂等可以包括以下组分中的一些或全部：(例如，本文所述的)待施用的组合物；用于在储存期间保护贴剂的衬垫，在使用前可选择地被去除；用于将不同成分粘合在一起和/或将贴剂粘合到皮肤上的粘合剂；保护贴剂免受外部环境影响的背衬；和/或控制药物向皮肤释放的膜。

根据可选的实施例，组合物在室温(例如，20℃)下稳定(例如，没有实质性的化学变化和/或相分离)至少2周、可选地至少1个月、可选地至少2个月、可选地至少6个月、可选地至少1年。

适于本发明实施例上下文中的药物组合物、化妆品组合物和防晒组合物包括其中包含有效量的为了实现各自预期目的的活性成分的组合物。

确定用于给定目的的有效量完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文提供的详细公开内容。

待施用的药物或化妆品组合物和/或在药物或化妆品组合物中活性成分的量可以取决于接受治疗的受试者、病痛的严重程度、施用方式、开具药物组合物处方的医生的判断等。

待施用的防晒组合物和/或活性成分(例如，根据本文所述的任何相应实施例的UV吸收材料)的量可以取决于要防护的阳光的程度、(例如，受皮肤色素沉着的影响)受试者对阳光的敏感度、以及是否需要全面保护(例如，可能需要适度的UV暴露以诱导晒黑)等因素。

防晒组合物提供的(例如，与活性成分浓度相关的)UV阻挡活性的程度可以可选地根据本领域已知的技术来表示，例如，定量地表示为防晒因子(SPF)值。

根据本文所述的任何相应实施例的组合物可以可选地还包括适于提供组合物的预期效果的例如本文所述的其他活性成分。这种其他活性成分可以是，例如防晒剂、UV吸收剂、抗氧化剂、护肤剂和/或用于治疗本文所述病症的药剂。

例如，适用于阻挡UV辐射(例如，用于防晒组合物)的其他活性成分包括但不限于二苯甲酮(例如二苯甲酮-1、二苯甲酮-2、二苯甲酮-3、二苯甲酮-4、二苯甲酮-5、二苯甲酮-6、二苯甲酮-7、二苯甲酮-8、二苯甲酮-9、二苯甲酮-10和二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯)、对氨基苯甲酸及其衍生物，例如N-烷基取代衍生物和/或其酯(例如，N-二甲基-对氨基苯甲酸异戊酯和N-二甲基-对氨基苯甲酸辛酯)、阿伏苯宗(avobenzone)、双-乙基乙氧苯酚甲氧苯基三嗪(bemotrizinol)、双辛酚三唑(bisoctrizole)、3-(4-甲基亚苄基)-莰酮、甲酚曲唑三硅氧烷、依莰舒(ecamsule)、乙基己基三嗪酮、邻氨基苯甲酸薄荷酯、氰双苯丙烯酸辛酯(octocrylene)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(iscotrizinol)、甲氧基肉桂酸酯或其衍生物(例如，酯)(例如，4-甲氧基肉桂酸异戊酯、4-甲氧基肉桂酸辛酯和西诺沙酯)、聚硅氧烷-15、水杨酸和其盐(例如，三乙醇胺水杨酸酯)或衍生物(例如，酯)(例如胡莫柳酯(homosalate)和水杨酸辛酯)，以及无机物质，例如TiO₂和/或ZnO。

在一些实施例中，其他活性(UV阻挡)成分是TiO₂和/或ZnO，例如，使得可以可选地避免合成的有机试剂。

适用于治疗伤口和/或促进伤口愈合的组合物中的其他活性成分包括但不限于皮肤舒缓和/或愈合剂，例如泛醇及其衍生物(例如乙基泛醇)、芦荟、泛酸及其衍生物、尿囊素、红没药醇和甘草酸二钾盐。

本文所述组合物中适合用作其他活性成分(例如，用于减少UV诱导或非UV诱导的皮肤损伤)的抗氧化剂包括但不限于抗坏血酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、胡萝卜素和类胡萝卜素(例如α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、角黄素、隐黄质、叶黄素、番茄红素、玉米黄质和维生素A)、姜黄素、丁香酚、黄酮类化合物(例如黄酮、异黄酮、黄烷醇、黄酮醇、芪类、花色素甙)、谷胱甘肽、没食子酸丙酯、叔丁基羟基醌、生育酚(例如维生素E)、尿酸和抗氧化酶(例如硫氧还蛋白、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶)。

本文所述的组合物还可以包括其他组分，添加这些组分，例如，为了用香味和营养因子(例如，皮肤或头发营养因子)来丰富组合物。

在合理的医学判断范围内，选择适合于人体局部使用而不会引起毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等的这些组分。此外，这种可选的组分是有用的，只要它们没有不可接受地改变本发明的活性成分的益处。

CTFA化妆品成分手册，第二版(1992)描述了护肤行业中常用的多种非限制性化妆品成分，它们适用于本发明的组合物。这些成分类别的示例包括：磨料；吸收剂；美学组分，例如香料、颜料、色素/着色剂、精油、皮肤感觉剂、收敛剂等(例如，丁香油、薄荷醇、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅馏出物)；抗粉刺剂；抗结块剂；消泡剂；抗菌剂；抗氧化剂(例如，用于保存组合物，而不是用作活性成分)；粘合剂；生物添加剂；缓冲剂；填充剂；螯合剂；化学添加剂；着色剂；化妆品收敛剂；化妆品杀菌剂；变性剂；药物收敛剂；外用镇痛药；成膜剂或材料，例如聚合物，用于帮助组合物(例如二十碳烯和乙烯基吡咯烷酮的共聚物)的成膜性能和直接性；乳浊剂；pH调节剂；推进剂；还原剂；多价螯合剂；皮肤调理剂(例如，保湿剂，包括不同种类的和闭塞的)；皮肤处理剂；增稠剂；以及维生素及其衍生物。

由于根据本文所述的一些实施例的组合物用于体内，组合物优选地具有高纯度并且大体上不含潜在有害的污染物，例如至少国家食品(NF)级，通常至少分析级，并且优选地至少医药级。如果给定化合物必须在使用前合成，则此类合成或随后的纯化应当优选地产生在合成或纯化过程中大体上不含任何可能已被使用的潜在污染有毒物质的产物。

本发明的组合物，如果需要，可以存在于包装或分配器装置中，如FDA(美国食品和药物管理局)批准的试剂盒，其可以含有一种或多种包含活性成分的单位剂量形式。包装可以，例如，包括金属或塑料箔，如泡罩包装。包装或分配器装置可以附有给药说明。包装或分配器装置也可以通过与容器相关的告示来容纳，该告示以规范化妆品和/或药品制造、使用或销售的政府机构规定的形式提供，该告示反映了机构对用于人或兽给药的组合物的形式的批准。这种告示，例如，可以是获美国食品药品管理局批准用于处方药的标签，或获批准的产品插页。还可以制备根据本发明的任何实施例的组合物，将其置于恰当的容器中，并贴上标签用于治疗和/或保护皮肤(例如，根据本文所述的任何实施例)。

因此，根据本发明的一些实施例，本文所述的药物组合物被包装在包装材料中并在包装材料中或包装材料上以印刷方式进行标识，用于在有需要的受试者中治疗本文所述的病症。

如本文所用，术语“约”是指±10％。

术语“包括”、“包括有”、“包含”、“含有”、“具有”及其变形词是指“包括但不限于”。

术语“由……组成”是指“包括并限于”。

术语“基本上由……组成”是指组合物、方法或结构可以包括其他成分、步骤和/或部分，但前提是其他成分、步骤和/或部分不会实质上改变所要求保护的组合物、方法或结构的基本的和新颖的特征。

如本文所用，单数形式的“一”、“一种”和“所述”包括复数引用，除非上下文另有明确规定。例如，术语“一种化合物”或“至少一种化合物”可以包括多种化合物，包括其混合物。

在本申请全文中，本发明的各种实施例可以以范围格式呈现。应当理解，范围格式的描述仅仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明范围的不灵活限制。因此，范围的描述应被认为已经明确公开了所有可能的子范围以及该范围内的各个数值。例如，对如从1到6的范围的描述应被认为已明确公开了子范围，例如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等，以及该范围内的单个数字，例如1、2、3、4、5和6。无论范围的广度如何，这都适用。

无论何时在本文中指示数字范围，都意在包括在所指示范围内的任何引用的数字(分数或整数)。短语第一指示数字和第二指示数字“之间的范围”和“范围从”第一指示数字“到”第二指示数字在本文中可互换使用，并且意在包括第一和第二指示数字以及在它们之间的所有分数和整数。

如本文所用，术语“方法”是指用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于已知的那些方式、手段、技术和方法，或化学、药学、生物、生化和医学领域的从业人员容易从已知的方式、手段、技术和方法中开发的那些方式、手段、技术和程序。

如本文所用，术语“治疗”包括消除、大体上抑制、减缓或逆转病症的进展，大体上改善病症的临床或美学症状或大体上防止病症的临床或美学症状的出现。

应当理解的是，为清楚起见，在单独的实施例的背景下描述的本发明的某些特征，也可以在单个实施例中以组合方式提供。相反地，为简洁起见，在单个实施例的背景下描述的本发明的各种特征，也可以单独地或以任何合适的子组合或在本发明的任何其他描述的实施例中合适地提供。在各个实施例的背景下描述的本发明的某些特征，不被认为是那些实施例的必要特征，除非该实施例在没有那些要素的情况下是不可操作的。

如上文所述且如以下权利要求书部分中所要求保护的本发明的各个实施例和各个方面，在以下示例中找到实验的支持。

示例

现在参考以下示例，这些示例与以上说明一起以非限制性方式阐明了本发明的一些实施例。

材料和方法

材料：

DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基，添加有100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素)购自生物产业(Biological Industries)(以色列)。

DPPH(二苯基苦基肼)购自西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich)。

乙醇购自水星科技工业产品有限公司(Mercury Scientific&IndustrialProducts Ltd)。

甲醇购自水星科技工业产品有限公司。

MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)购自西格玛奥德里奇。

防护系数计算：

根据Dutra等人[Braz J Pharma Sci 2004,40:381-385]描述的方法，应用OptLab^TMX软件(Ascanis)，使用曼苏尔方程，吸收光谱用于计算SPF(防晒系数)值。

高效液相色谱：

通过在双蒸水：甲醇的95：5混合物中将样品稀释至0.01mg/ml的浓度，将10μl加载到带有光电二极管阵列检测器的沃特世HPLC设备的RP-18柱上，并使用从三氟乙酸(0.1％)96％水溶液到100％乙腈的梯度，流速为1ml/分钟，来获得HPLC(高效液相色谱)色谱图。

人体皮肤外植体测试：

在签署知情同意书后，经许可从接受腹部美容手术的30到60岁健康女性处获得皮肤。根据Portugal-Cohen等人[Exp Dermatol 2011,20:749-755]描述的方法，使用机械压皮将皮肤切成0.8×0.8平方厘米的小片。根据Portugal-Cohen等人[Exp Dermatol 2011,20:749-755]和Cohen等人[Dead Sea and Arava Studies 2015,7:66-74]描述的方法，将皮肤外植体保持在空气/液体界面中，真皮侧浸没在培养基中。将人皮肤外植体放置在含有添加有100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)的6孔培养板中，在培养基中真皮侧朝下，表皮朝上。所有样品均在过夜回收后使用。

示例1

植物的UV阻挡能力筛选

为了研究各种植物的UVB阻挡特性，对生长在朱迪亚沙漠中的传统草药进行了大规模筛选。使用索氏系统，分别在乙醇、水、氯仿或丙二醇甲醚乙酸酯(PMA)中收集、干燥、研磨和提取每种受试植物的叶子、细枝、枝条、果实和根。真空中蒸发溶剂后，使用超声处理将0.1克粗提取物重新悬浮于等体积的溶剂中，并使用没有积分球的Cary^TM60双光束分光光度计(安捷伦)稀释至固定浓度以分析UV吸收光谱。

初步结果(数据未示出)表明，大多数受试植物物种中的乙醇叶子提取物表现出最高的UV吸收值。

表1总结了(如上文所述测定的)各种植物的乙醇叶提取物的SPF(防晒系数)值。

表1：来自朱迪亚沙漠的各种植物叶子的乙醇提取物(0.0833mg/ml)的防晒系数(SPF)值(平均值±SEM，n＝3)

如表1所示，迄今为止，在受试植物中，西西里漆树(Rhus coriaria)的乙醇提取物在体外表现出最高的SPF值(防护UVB辐射)。

因此，对鞣革的漆树的提取物进行了进一步测试。从不同栽培区的漆树制备漆树不同部分的提取物。

如图1所示，比漆树枝条、细枝、成熟果实或根的提取物，漆树叶子和萌芽果实的提取物在过滤UV光方面最有效。

示例2

从漆树叶子中分离UV阻挡物质

从上文示例1中描述的各种漆树叶子提取物中，通过对其进行多种分离技术来进一步纯化最有效的提取物(来自基尔亚特·阿尔巴(Kiryat Arba)地区的样本)。在每个步骤之后，基于其UV吸光度值评估获得的级分，以分离UV吸收组分，本文称为“SH-101”。根据上文所述的方法，通过HPLC确定其纯度。

经过艰苦的实验，设计了以下一般提取方法以最大限度地提高产率。

如图2所示，提取100包括，在第一步骤中，例如通过研磨获得西西里漆树叶子的干粉10。根据本领域已知的任何合适的技术可以可选地获得干粉。在去除西西里漆树叶子中的水和挥发性化合物之后，干粉10的重量可为未干燥叶子重量的约35±5重量百分比。

在下一步中，(例如，使用索氏提取器)将干粉10与乙醇(可选地温乙醇)接触，然后将乙醇蒸发，以获得西西里漆树叶子的乙醇提取物20。

干粉10与乙醇的(重量对体积)比率可选地为约1：20(1克干粉10比20ml乙醇)。在该比率下，获得了39.64±2.35％(乙醇提取物20的重量，相对于干粉10的重量)的产量。

如图3所示，在用不同体积的乙醇提取50克干漆树叶子粉末后，超过1000ml乙醇的使用与更低的SPF值和更高的产量(提取材料的重量)相关，而少于约1000ml(尤其是少于约400ml)的使用与相似的SPF值和较低的产量相关。

这些结果表明，每克干粉10超过约20ml乙醇的使用导致提取大量对UV防护没有帮助的材料，而每克干粉10少于约20ml(尤其是少于约8ml)乙醇的使用导致提取的UV吸收材料显著减少。

在下一步中，将乙醇提取物20悬浮于蒸馏水中22，用正己烷/水进行分配24，将步骤24得到的水提取物用乙酸乙酯进行分配26，以得到乙酸乙酯提取物30。在用正己烷/水进行分配24后，绿黑色固体可被提取到己烷相中。

悬浮于蒸馏水22和分配24可选地使用约1克乙醇提取物20比约20ml水比约5ml己烷(例如约50克乙醇提取物20、约1000ml水和约250ml己烷)的比例来实现。可选地使用1ml水与1.5ml乙酸乙酯(例如，约1000ml水和约1500ml乙酸乙酯)的比例来实现分配26。使用这些比例，获得了26.46±3.78％(乙酸乙酯提取物30的重量，相对于乙醇提取物20的重量)的产量。

然后将乙酸乙酯提取物30在乙醇和水的混合物中进行结晶32，可选地以40：60(乙醇：水)的比率，随后进行过滤和溶剂蒸发34，以获得合并的干燥结晶上清液40。

结晶32可选地以每ml溶剂约0.1mg提取物30的提取物30与溶剂(乙醇/水)的比率来实现。使用该比率，获得了34.8±4.2％(合并的干燥结晶上清液40的重量，相对于乙酸乙酯提取物30的重量)的最大产量。

对合并的干燥结晶上清液40可选地进行反相柱色谱42，可选地使用C18柱，用乙腈梯度为4％至25％的乙腈中的0.1％三氟乙酸(TFA)的水溶液洗脱，从而获得合并的纯SH-401 50。获得了30.15±2.34％(SH-401 50的重量，相对于合并的干燥结晶上清液40的重量)的色谱产量。

在使用上述一般方法的示例性提取中，获得了0.452±0.082％(SH-401的重量，相对于未干燥漆树叶子的重量)的总SH-401产量。

这种简单但优雅的方法导致化合物的高产量，其总成本与化学相关的市售化合物相当。例如，通过优化植物的环境农业参数(例如，使用以高产量SH-101为特征的菌株)，可以获得额外的产量增加，从而进一步降低材料的总成本。

示例3

漆树树叶中紫外线阻挡物质(SH-401)的表征

使用例如上文示例2中所述的方法从漆树叶子中分离SH-101。然后通过HPLC和各种光谱技术对纯化的SH-101进行表征。

如图4A和图4B所示，通过HPLC分析(～99.79％纯度，按峰面积％)确定获得了具有高纯度产物的级分(保留时间＝107.9分钟)。

如图4C所示，所得级分在相关UVB区域(290到320nm)中表现出强吸收，吸收峰位于217nm和279.5nm。

获得分离的化合物，为白色、大部分无定形的粉末，熔点在220到250℃的范围内。

SH-401在FeCl₃存在的情况下显示强烈的蓝色，在KIO₃存在的情况下显示淡红色。这些颜色反应类似于对没食子单宁的颜色反应的报道[Haddock et al.,J Chem SocPerkin Trans 1 1982,0:2535-2545]。

此外，红外(KBr)光谱(未示出)在3950cm^-1和1712cm^-1处表现出吸收，这分别与没食子酰基部分中的羟基和羰基一致。

综上所述，上述颜色反应以及紫外和红外光谱表明SH-401是一种没食子单宁。

使用Q-TOF 6545(高分辨率)LC-MS(ESI/APCI/ASAP)质谱仪(安捷伦)，利用液相色谱-质谱(LC-MS)和高分辨率质谱，对纯化后的级分用质谱进一步分析。

如下表2所示，LC-MS获得的质谱图包括在约939Da和约469Da处的峰，分别对应于(M-H)^-和(M-2H)^-2离子，表明SH-401具有分子式C₄₁H₃₂O₂₆。

表2：SH-101的液相色谱-质谱结果

重要的是，SH-101的分子量是传统商业UV吸收剂的三倍以上，这一因素可能会降低渗透到皮肤的潜力和潜在的全身性有害影响。

此外，Q-TOF质谱得到的质谱包括m/z 939.09处的离子峰(与上述LC-MS结果一致)，还包括m/z 168.46处的离子峰，对应于没食子酸盐阴离子(169Da)的质量；m/z 769.08处的离子峰，对应于没食子酸中性损失(损失170Da)的预期质量；以及一组从m/z 331.07到m/z 939.09的离子峰，它们被152的恒定差值分开，对应于没食子酰基部分(C₇H₄O₄)的预期质量。

上述结果与Berardini等人[Rapid Commun Mass Spectrom 2004,18:2208-2216]对涉及没食子酸的中性损失(损失170.02Da)和没食子酰基裂变(损失152.01Da)的与(芒果皮、果肉和果仁中)没食子单宁相关的裂解途径的描述一致。

因此，上述结果表明SH-401包括多个没食子酰基部分，并且具有约940Da的分子量；并表明包括五个没食子酰基和分子量为180Da的附加部分的化合物(例如，己糖，其中SH-101是C₄₁H₃₂O₂₆)。

SH-401没食子单宁的结构由¹H-NMR和¹³C-NMR 1D光谱数据(在CD₃OD中在700MHz下获得)以及由DEPT、COSY、HMBC和HMQC 2D-NMR确定。

如下详述，如图5所示，基于NMR数据分析确定SH-401具有1,2,3,4,6-五没食子酰-β-D-葡萄糖(β-D-吡喃葡萄糖，五元(3,4,5-三羟基苯甲酸酯)。¹H和¹³C化学位移的分配总结在下表3中。上述结构还得到上文讨论的UV吸收、红外和质谱数据的支持。

¹H-NMR光谱包括了五个芳香族单峰，在6.5和7.15ppm之间的光谱范围内，这与分配给分子中没食子酰基的五个磁性非等价质子的五个芳香族部分的存在一致。

由出现在4.35和6.25ppm之间的共振表示的第二组质子，归属于吡喃葡萄糖基部分的七个碳连接质子。在糖区，光谱示出五个明显向下位移的质子共振。一个¹H信号，6.23ppm处的双峰，耦合常数很大，可以归因于α、β构型的葡萄糖异构质子。5.90ppm处的¹H三重峰和5.61ppm(d，J＝12Hz)和4.40ppm(dd，J＝12，44Hz)和5.58ppm处的三个¹H信号分配给H-2和H-4以及H-6葡萄糖质子。与β-D-吡喃葡萄糖中的信号相比这些质子的信号显著降低，表明没食子酰单元在这些中心的位置。

如HMBC实验所示，葡萄糖亚甲基的2H信号出现在4.51和4.37处。DEPT NMR数据表明，SH-401仅包含一个亚甲基(CH₂)基团。

表3：由¹H-NMR和¹³C-NMR观察到的化学位移与1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖的原子的相关性。

如表3所示，¹H–¹H同核COSY实验允许鉴定从H-1到H-6a/b的葡萄糖部分的耦合网络。此外，观察到的4.37ppm处的质子和4.51ppm处的质子之间的相关性证实了这些质子分配给葡萄糖亚甲基(CH₂)基团。

¹³C-NMR光谱在93.89、72.26、69.88、74.18、74.50(5异构C)；63.19(葡萄糖亚甲基C)；166.27(没食子酸酯1，C＝O)；119.81、110.69、146.61、146.61(没食子酸酯1，C)；167.08(没食子酸酯2，C＝O)；120.32、110.48、146.43、140.36(没食子酸酯2，C)；166.99(没食子酸酯3，C＝O)；120.28；110.53；146.50；140.41(没食子酸酯3，C)；167.36(没食子酸酯4，C＝O)；120.44；110.45；146.34；140.18；(没食子酸酯4，C)；167.99；(没食子酸酯6，C＝O)；121.12；110.40；146.53；140.06；(没食子酸酯6，C)处展示出信号(δ_C)。

用于检测单键¹Hx¹³C相关性的HMQC实验表明，五个碳原子(归属于没食子酰基部分的邻位)在约7.11、7.05、6.98、6.95和6.90ppm的化学位移处相连到氢。

用于检测长程¹Hx¹³C相关性的HMBC实验表明，化学位移约为7.05ppm的质子与在约140、122和110ppm处的碳原子相关。

综上所述，这些结果表明C-1、C-2、C-3、C-4和C-6处的羟基被没食子酰化[DeBruyn et al.,Bull Soc Chim Belges 1977,86:259-265]。

上述分子量是已知商业UV过滤剂的三倍以上。这个因素可能会降低渗透到皮肤中的潜力和相关的有害影响。

如图6所示，在0.01mg/ml下，相对于粗提取物的SPF值，纯化方法将获得的SH-401的SPF值提高了超过10倍，从粗西西里漆树混合物的0.67±0.09增加到纯化的SH-401级分的9.09±0.72。

这一结果表明，作为防晒剂，分离的试剂优于粗提取物混合物，从而证实了SH-401作为漆树UV吸收组分的重要性。

如图6进一步所示，SH-401的SPF值(在0.01mg/ml下)至少与所有受试的市售合成UV过滤剂的SPF值一样高。

为了评估光稳定性，通过在载玻片上沉积2ml SH-101溶液并蒸发溶剂，在PMMA(聚甲基丙烯酸甲酯)载玻片上制备均匀的纯SH-401薄膜。然后以不同的时间间隔(范围长达25小时)将样品暴露于UV辐射下。然后将玻璃板浸入乙醇/水(2：98％v/v)的混合物中，并超声溶解薄膜。然后通过UV-可见光吸收光谱对UV样品进行定量，并根据上文所述的方法确定SPF值并作为时间的函数作图。

如图7所示，SH-401对UV辐射表现出相当大稳定性，在暴露于UV辐射12小时后，SPF值基本上没有变化。

综上所述，上述结果表明SH-401具有足够的UV吸收和光稳定性，可作为有效的防晒剂。

示例4

漆树叶子中的SH-401对人体皮肤细胞的影响

为了研究(如示例2中所述分离的)活性化合物SH-401的安全性和功效，根据上文材料和方法部分中所述的方法，对人皮肤外植体进行了若干实验。

如图8A所示，在整个测试的浓度范围内(直至最大溶解度)，通过MTT测定确定，SH-401的外部施用不会损害皮肤活力。该结果表明人类皮肤对SH-401具有良好的耐受性。

如图8B和图8C所示，分别通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3活化试验和ELISA试验确定，SH-401减弱UVB诱导的表皮细胞凋亡(图8B)和TNFα过度分泌(图8C)。如其中进一步所示，SH-401的效果与用作对照的市售制剂Ultrasol^TMSPF 30制剂(Dr.Fisher)的效果相当。

UVB诱导损伤的一个共同特征是ROS(活性氧)生成，这会增加DNA损伤，放大脂质过氧化的产生并阻碍细胞内的蛋白质和细胞膜[Schuch et al.,Free Rad Biol Med 2017,107:110-124]。因此，测试了SH-401对皮肤细胞中UVB诱导的ROS生成的影响，这被认为是抵消UVB辐射的有害影响的因素。通过DCFDA(二氯荧光素二乙酸酯)测定以及通过测量与ROS生成有关的脂质过氧化(通过ELISA)，在皮肤外植体中评估UVB辐射后的ROS生成。

如图9所示，通过DCFDA测定确定，SH-401以剂量依赖性方式减弱皮肤细胞中UVB诱导的ROS生成。

此外，如图10所示，SH-401以剂量依赖性方式减弱皮肤细胞中UVB诱导的脂质过氧化。

上述结果表明SH-401减弱皮肤细胞中UVB辐射导致的ROS形成。

使用DPPH(二苯基苦基肼)方法进一步评估抗氧化能力。在SH-401存在下DPPH的色移并根据校准曲线转换为Trolox(6-羟基-2,5,7,8-四甲基色烷-2-羧酸)当量抗氧化能力的单位。

如图11所示，SH-401是强抗氧化剂，1重量百分比的溶液表现出每100克约2,310微摩尔Trolox当量(TE)单位。

这些结果表明，SH-401表现出的对UV辐射的防护至少部分是由该化合物的抗氧化特性介导的。

此外，根据制造商的说明使用OxiSelect^TMComet分析试剂盒，通过COMET(单细胞凝胶电泳)分析确定类似处理样品的DNA碎片化。

如图12所示，通过COMET分析确定，SH-401减弱了UVB诱导的DNA损伤。

如图13所示，SH-401降低了UVB诱导的环丁烷嘧啶二聚体(CPD)的形成，这是由UVB引起的DNA突变的主要类型。

通过处理过的皮肤外植体的组织学检查进一步评估SH-401对细胞的影响。

如图14A至图14D所示，UVB辐射诱导固缩“晒伤细胞”的形成和表皮层的减少(图14B)，并且SH-401逆转了辐射的这种有害影响。

这些结果表明SH-401可有效保护人体皮肤免受UV辐射。

示例5

SH-401对皮肤老化和伤口愈合的影响

通过检查影响皮肤老化和皱纹形成的细胞外基质平衡中的两个重要参数：环境损伤后的胶原蛋白合成；和胶原蛋白降解的关键酶基质金属蛋白酶-1(MMP1)的活性，来评估SH-401对皮肤老化的影响。

如图15A和图15B所示，在环境损伤(UVB辐射)后，SH-401以剂量依赖性方式增强了胶原蛋白合成并降低了MMP1活性。

这些结果表明SH-401在皮肤中表现出抗衰老特性。

使用融合的HaCaT细胞伤口闭合的体外模型来评估SH-401对皮肤伤口愈合的影响。

如图16所示，SH-401在体外模型中增强了伤口闭合。

这些结果表明SH-401促进伤口愈合。

尽管已经连同本发明的具体的实施例对本发明进行了描述，但是显然，对于本领域技术人员而言，许多替代选择、修改和变化将是显而易见的。因此，所有落入所附权利要求的精神和广泛范围内的此类替代选择、修改和变化都意图被涵盖。

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