阅读说明：本技术 一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法 (Method for obtaining total chlorogenic acid and stevioside from stevia rebaudiana ) 是由 唐婷 覃蒙珍 陈久福 李�杰 宋云飞 于 2021-08-16 设计创作，主要内容包括：本发明属于植物提取领域,特别涉及一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法。一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法,是将甜叶菊以水为溶剂逆流提取,提取液用生物酶酶解,酶解液通过硅藻土过滤机澄清过滤之后,再利用有机滤膜浓缩过滤；将收集到的膜透过液通过非极性或极性树脂进一步纯化、浓缩干燥得总绿原酸；将收集到的膜浓缩液通过活性炭、弱碱型阴离子树脂等进一步脱色、浓缩干燥得甜菊糖苷。本方法全程只用到水和乙醇作为溶剂,没有用到有毒有机试剂,操作简单,很适合工业大生产。本制作方法来的产品既可以作为最终产品直接销售,也可以作为中间产品用于进一步制备高纯度产品,产品溶剂残留少,无农药残留,品质稳定。(The invention belongs to the field of plant extraction, and particularly relates to a method for obtaining total chlorogenic acid and stevioside from stevia rebaudiana. A method for obtaining total chlorogenic acid and stevioside from sweet stevia comprises extracting sweet stevia with water as solvent under countercurrent, subjecting the extractive solution to enzymolysis with biological enzyme, clarifying the enzymolysis solution with diatomite filter, filtering, concentrating with organic filter membrane, and filtering; further purifying the collected membrane permeate with nonpolar or polar resin, concentrating, and drying to obtain total chlorogenic acid; further decolorizing the collected membrane concentrated solution with active carbon, weak base type anion resin, etc., concentrating and drying to obtain stevioside. The method only uses water and ethanol as solvents in the whole process, does not use toxic organic reagents, is simple to operate and is very suitable for industrial mass production. The product obtained by the preparation method can be directly sold as a final product, can also be used as an intermediate product for further preparing a high-purity product, and has the advantages of little solvent residue, no pesticide residue and stable quality.)

一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法

技术领域

本发明属于植物提取领域，特别涉及一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法。

背景技术

甜叶菊为菊科泽兰属植物，其叶片中含有6-12％的甜菊糖苷，其甜度是蔗糖的200-300倍，而热量仅为蔗糖的1/300。目前，甜叶菊主要作为甜菊糖苷的提取原料植物使用。现代研究表明，甜叶菊中含有5％左右的绿原酸类物质，其中包括绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C等，这些绿原酸类物质具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒等药理活性，是可以被利用的植物功能性成分。但在传统生产工艺中，为了获取甜叶菊中的甜菊糖苷，往往将甜叶菊中的绿原酸类物质视为杂质，利用化学絮凝剂将它们除去，这样既产生了污染环境的废渣又造成了资源浪费。

目前虽然已有少数技术资料，提出了甜叶菊中绿原酸和甜菊糖苷的提取分离方法，如：发明201210055626.3主要用有机溶剂萃取的方法，但此法使用溶剂较多，这将非常不利于后续的产品纯化及溶剂回收工作；发明201610745221和201811162854.4等主要用树脂分离总绿原酸和甜菊糖苷，但无论是用树脂先吸附甜菊糖苷，还是用树脂先吸附总绿原酸，这些工序都较为繁琐，并且由于在用树脂吸附之前没有使用絮凝剂预先除去提取液中杂质，提高了树脂再生的难度，降低了树脂的分离纯化效果，这将变相提高工业生产甜菊糖苷的成本。

发明内容

为了解决上述现有技术的不足之处，本发明提供了一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的新方法，操作工艺易于实现的同时还能将绿原酸以及甜菊糖苷分离。

本发明的目的通过如下技术方案实现：

一种从甜叶菊中获取总绿原酸和甜菊糖苷的方法，包括以下步骤：

1)甜叶菊以水为溶剂逆流提取，提取液用生物酶酶解，酶解液通过硅藻土过滤机澄清过滤之后，再利用有机滤膜浓缩过滤；

2)将收集到的膜透过液通过非极性或极性树脂纯化、浓缩干燥得总绿原酸；

3)将收集到的膜浓缩液通过活性炭、弱碱型阴离子树脂脱色、浓缩干燥得甜菊糖苷。

优选的是，步骤1)所述的逆流提取温度为65～100℃。

优选的是，步骤1)所述水用量为20～25倍甜叶菊重量。

优选的是，步骤1)所述生物酶使用量为0.1％～1.0％甜叶菊重量，所述生物酶由纤维素酶、单宁酶和蛋白酶组成，所述酶解温度为45～60℃，酶解时间为1～4h。

优选的是，步骤1)所述酶解液通过硅藻土过滤机进行澄清过滤，有机膜截留分子量为500～800，过膜压力0.3～0.7MPa。

优选的是，步骤2)使用的树脂型号选自D101、T8100、AB-8、LX-8、LX-19、XDA-8中的任意一种。

优选的是，步骤2)树脂纯化使用的洗脱液为45～75vt％乙醇。

优选的是，步骤3)活性炭的使用量为0.1％～0.5％甜叶菊重量，使用的树脂型号选自LX-T5、D301、D941中的任意一种。

本发明有益效果如下：

1本发明利用生物酶酶解甜叶菊提取液，代替传统化学絮凝剂除杂步骤，有效除去了提取液中的大分子杂质、充分保留了甜叶菊提取液中的绿原酸类物质、避免化学性杂质的引入及化学絮凝剂对绿原酸类物质的破坏。

2基于绿原酸类物质与甜菊糖苷类物质分子量差异，选用截留分子量500-800的有机膜，有效分离甜叶菊酶解液中的总绿原酸和甜菊糖苷；其中膜透过液富含绿原类物质酸，膜浓缩液富含甜菊糖苷；膜分离总绿原酸与甜菊糖苷的同时，也纯化浓缩了甜菊糖苷。

3本方法全程只用到水和乙醇作为溶剂，没有用到有毒有机试剂，操作简单，很适合工业大生产。

4本制作方法来的产品既可以作为最终产品直接销售，也可以作为中间产品用于进一步制备高纯度产品，产品溶剂残留少，无农药残留，品质稳定。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。这些实施例仅用于说明本发明，而非用于限制本发明的范围。此外，在阅读本发明的内容后，本领域的技术人员可以对本发明作各种修改，这些等价变化同样落于本发明所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

取100kg甜叶菊干叶原料用超微粉碎机粉碎，用22倍重量水，保持温度在70℃，逆流提取，得甜叶菊提取液。待甜叶菊提取液温度降至60℃，在甜叶菊提取液中依次加入0.5kg纤维素酶、0.1kg单宁酶、0.2kg蛋白酶，保持温度50℃，酶解2h。用硅藻土过滤机对甜叶菊酶解液进行澄清过滤，除去水不溶性杂质；再过有机膜，有机膜截留分子量为550，过膜压力0.5MPa，分别收集膜透过液和膜浓缩液。膜透过液继续进AB-8树脂柱，再用65vt％乙醇对树脂进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥得总绿原酸7.4kg。膜浓缩液加入0.3kg活性炭脱色，常温搅拌1h，板框过滤除去活性炭，再过LX-T5树脂进一步脱色，收集膜浓缩脱色液，干燥得甜菊糖苷20.3kg。经HPLC测定，上述工艺所得总绿原酸含量为75.6％，甜菊糖总苷含量为92.7％。

实施例2

取100kg甜叶菊干叶原料用超微粉碎机粉碎，用20倍重量水，保持温度在65℃，逆流提取，得甜叶菊提取液。待甜叶菊提取液温度降至60℃，在甜叶菊提取液中依次加入0.05kg纤维素酶、0.01kg单宁酶、0.04kg蛋白酶，保持温度45℃，酶解1h。用硅藻土过滤机对甜叶菊酶解液进行澄清过滤，除去水不溶性杂质；再过有机膜，有机膜截留分子量为500，过膜压力0.3MPa，分别收集膜透过液和膜浓缩液。膜透过液继续进LX-8树脂柱，再用45vt％乙醇对树脂进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥得总绿原酸7.3kg。膜浓缩液加入0.5kg活性炭脱色，常温搅拌1h，板框过滤除去活性炭，再过D301树脂进一步脱色，收集膜浓缩脱色液，干燥得甜菊糖苷19.1kg。经HPLC测定，上述工艺所得总绿原酸含量为75.4％，甜菊糖总苷含量为93.4％。

实施例3

取100kg甜叶菊干叶原料用超微粉碎机粉碎，用25倍重量水，保持温度在100℃，逆流提取，得甜叶菊提取液。待甜叶菊提取液温度降至60℃，在甜叶菊提取液中依次加入0.5kg纤维素酶、0.1kg单宁酶、0.4kg蛋白酶，保持温度60℃，酶解4h。用硅藻土过滤机对甜叶菊酶解液进行澄清过滤，除去水不溶性杂质；再过有机膜，有机膜截留分子量为800，过膜压力0.7MPa，分别收集膜透过液和膜浓缩液。膜透过液继续进D101树脂柱，再用75vt％乙醇对树脂进行洗脱，收集洗脱液浓缩干燥得总绿原酸7.2kg。膜浓缩液加入0.1kg活性炭脱色，常温搅拌1h，板框过滤除去活性炭，再过D941树脂进一步脱色，收集膜浓缩脱色液，干燥得甜菊糖苷19.7kg。经HPLC测定，上述工艺所得总绿原酸含量为78.2％，甜菊糖总苷含量为91.4％。