一种含有水飞蓟提取物和后生元的组合物及其在护肝中的应用
阅读说明：本技术 一种含有水飞蓟提取物和后生元的组合物及其在护肝中的应用 (A composition containing herba Silybi Mariani extract and metazoan, and its application in protecting liver ) 是由 丁峰 李靖 于 2021-09-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种组合物,组合物含有水飞蓟提取物和后生元；水飞蓟提取物可以为水飞蓟提取物微胶囊形式,后生元可以选择为灭活的植物乳杆菌L137,后生元可以调节肠道菌群平衡,修复肠道,减少肠漏降低对肝炎的诱因,水飞蓟提取物与后生元的组合具有减少肝损伤的功效。(The invention discloses a composition, which contains silybum marianum extract and metazoan; the herba Silybi Mariani extract can be in the form of microcapsule, and the metazoan can be inactivated Lactobacillus plantarum L137, and can regulate intestinal flora balance, repair intestinal tract, reduce intestinal leakage, reduce cause of hepatitis, and reduce liver injury.)
技术领域
本发明涉及一种组合物，具体涉及减少肝损伤等效果的组合物及其应 用。
背景技术
水飞蓟，又名奶蓟草，原产于地中海地区，其作为药用植物使用已经 有接近两千年的历史，至今仍作为一种非常有效的护肝植物被广泛使用。 它可以帮助肝脏解毒，也可以用于控制慢性肝脏疾病。水飞蓟能激活肝脏 蛋白的再生，恢复被酒精和病毒所破坏的肝细胞的活性，还可清除自由 基、维持肝脏细胞膜的通透性，降低毒素对肝脏的损伤，保护长期饮酒伤 肝和患有急慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化和中毒性肝损害的人群。
水飞蓟提取物以水飞蓟Silybummarianum的干燥果实为原料,商品提取 物通常标化为含总水飞蓟素80％。水飞蓟素是多酚类的复杂混合物，包括 七种关系密切的黄酮醇-木质素加成物(水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞 蓟宾A、异水飞蓟宾B、水飞蓟亭、异水飞蓟亭及水飞蓟宁)和一种类黄 酮黄杉素(taxifolin)。水飞蓟宾是水飞蓟素的半纯化部分，主要是两种 非对映异构体(水飞蓟宾A和水飞蓟宾B)的混合物。
当我们处于健康状态时，小肠肠壁只允许营养物质穿过肠壁进入血 液，通过血液循环流到身体所需的其它部位。其它不允许进入的物质一律 被拒之门外。肠壁细胞与细胞之间通过紧密连接结合在一起，然而，这种 紧密连接很容易受到破坏，如肥胖，慢性疲劳，菌群失调等。
对于压力大，肥胖，代谢失调，肠道紊乱等的亚健康人群，肠道细胞 和紧密连接蛋白被破坏，细胞与细胞之间的间隙就会变得更大，使得来源 于微生物或食物的脂多糖穿过肠壁，与脂蛋白绑定进入肝脏循环，从而导 致肝脏炎症。对亚健康人群，单纯补充抗菌抗炎抗氧化的补充剂如水飞蓟 只能减少已经在发生的炎症，对于外部入侵的脂多糖等导致的肝脏炎症无 法起到保护作用。
本发明将水飞蓟与后生元组合在一起，从而起到对肝脏疾病的预防和 治愈的作用。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种组合物，含有 水飞蓟提取物和后生元。
进一步的，水飞蓟提取物包括水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾 A、异水飞蓟宾B、水飞蓟亭、异水飞蓟亭、水飞蓟宁、黄杉素中的一种 或多种；进一步优选的，水飞蓟提取物包括水飞蓟宾A和其他类型水飞蓟 提取物的组合。
进一步的，水飞蓟提取物为水飞蓟提取物微胶囊形式和/或水飞蓟提 取物脂质体形式和/或水飞蓟提取物自微乳化形式，优选为水飞蓟提取物- 磷脂的形式、水飞蓟提取物-磷脂-胆固醇的形式、水飞蓟提取物-环糊精的 形式的一种或多种。
进一步优选为水飞蓟提取物-磷脂-胆固醇的脂质体形式和水飞蓟提取 物-磷脂复合物的形式复配，或为飞蓟提取物-磷脂-胆固醇的脂质体形式和 水飞蓟提取物-环糊精的形式复配。
进一步的，所述后生元为死菌体，或为包含活菌体和死菌体。优选为 至少含有死菌体。死菌体和活菌体的组合中，死菌体与活菌体的比例为 99:1、95:5、90:10、80:20、75:25、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、 10:90、1:99。
进一步的，后生元含有菌体和菌体的代谢产物。
进一步的，后生元为植物乳杆菌制成的后生元。
进一步的，植物乳杆菌为植物乳杆菌L137。
进一步的，植物乳杆菌为L-137的死菌体。
进一步的，组合物中水飞蓟提取物含量为1-99.9％(w/w)，优选为 10-99.5％(w/w)，进一步优选为90-99％(w/w)；植物乳杆菌为0.01- 99％(w/w)，优选为0.05-90％(w/w)，进一步优选为1-10％(w/w)。
进一步的，水飞蓟提取物中的水飞蓟宾(水飞蓟宾A和水飞蓟宾B) 占水飞蓟宾A、水飞蓟宾B、异水飞蓟宾A、异水飞蓟宾B、水飞蓟亭、 异水飞蓟亭、水飞蓟宁、黄杉素总含量的20％以上，具有为30％以上、 40％以上、50％以上、60％以上、70％以上、80％以上、90％以上、95％以 上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上或100％。
水飞蓟提取物的纯度为50％以上，具有60％以上、70％以上、80％以 上、90％以上、95％以上、96％以上、97％以上、98％以上、99％以上或 100％。
进一步所述死菌体，灭活方式可以为加热、紫外辐照、化学处理；优 选为热灭活菌体。所述热灭活菌体可以为在培养结束后，收集菌体后制备 加热死菌体，或者也可以不将菌体从培养液中暂时分离，而是将培养液中 的菌体制成加热死菌体，然后采集该加热死菌体。植物乳杆菌L-137的加 热死菌体加热温度通常约为60～100℃，优选约为70～90℃，作为加热手 段，可以为使用加热器的公知手段。在达到所需温度后，加热时间通常约 为5～40分钟，优选约为10～30分钟。
死菌体可进一步进行研磨、破碎或冻结干燥处理等，从而制成死菌体 处理物。在本发明中，所述死菌体处理物也可适宜地用作死菌体。
本发明中死菌体的形态可以为糊状形态、悬浊液形态、乳状形态、粉 状形态、颗粒形态，优选为粉末形态。
本发明中死菌体的数量为其活菌的数量灭活后的死菌体数量。因死菌 体数量的检测手段的有限性，本发明中，死菌体的菌体数量可由对生产该 死菌体的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
进一步的，组合物中包含或者不包含填充剂/载体，组合物中的植物 乳杆菌用量为0.5亿/g-500亿/g，进一步1亿/g-100亿/g，进一步10亿/g- 50亿/g，进一步20亿/g-30亿/g。
进一步的，组合物中还含有谷胱甘肽。
本发明还提供了一种产品，包括上述组合物，所述产品剂型为注射 液、口服液、片剂、硬胶囊、软胶囊、糖果、固体饮料、液体饮料、膏滋 中的一种。
进一步的，所述产品还包括辅料；其中辅料包括：水、赋形剂、色 素、甜味剂、pH调节剂、增稠剂、粘合剂、崩解剂、填充剂。
本发明还提供了组合物在肝损伤类药品、保健食品、膳食补充剂和食 品中的应用；
或/和在护肝类药品、保健食品、膳食补充剂和食品中的应用。
术语解释
本文所用的“抗”，在没有特别说明的情况下，包含有预防、抑制、清 除的效果。
本文所用的“肝损伤”，在没有特别说明的情况下，包含有物理、化 学、生物等方式带来的损伤。
本文所用的“死菌体”，在没有特别说明的情况下，为灭活的菌体。
本文所用的“后生元”，为益生菌经加工处理后的益菌成分统称，包 括菌体与代谢产物。
本文所用的“L137”，在没有特别说明的情况下，为灭活的植物乳杆 菌L137。
附图说明
：图1为护肝效果动物试验1的ALT的试验情况；
图2为护肝效果动物试验2的AST的试验情况。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步 的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟 提取物中水飞蓟宾(包括水飞蓟宾A和水飞蓟宾B)占水飞蓟提取物的 80％，水飞蓟提取物为水飞蓟-磷脂复合物的形式，水飞蓟提取物为40％ (w/w)，灭活的植物乳杆菌L137为60％(w/w)。
实施例2
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟 提取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的70％，水飞蓟提取物为20％ (w/w)，灭活的植物乳杆菌L137为80％(w/w)。
实施例3
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137和活的植 物乳杆菌，水飞蓟提取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的90％，水飞蓟提取 物为33.3％(w/w)，植物乳杆菌为66.7％(w/w)。
实施例4
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟 提取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为40％ (w/w)，灭活的植物乳杆菌L137为40％(w/w)，谷胱甘肽为20％ (w/w)。
实施例5
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟 提取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为99％ (w/w)，灭活的植物乳杆菌L137为1％(w/w)。
实施例6
一种组合物，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟 提取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为10％ (w/w)，灭活的植物乳杆菌L137为90％(w/w)。
实施例7
一种胶囊，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟提 取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为0.12g，灭活的 植物乳杆菌L137为2.4mg。
实施例8
一种胶囊，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟提 取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为水飞蓟提取物- 磷脂-胆固醇脂质体的形式，水飞蓟提取物为0.06g，灭活的植物乳杆菌 L137为1.2mg。
实施例9
一种胶囊，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟提 取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的80％，水飞蓟提取物为0.24g，灭活的 植物乳杆菌L137为4.8mg。
实施例10
一种胶囊，含有水飞蓟提取物和灭活的植物乳杆菌L137，水飞蓟提 取物中水飞蓟宾占水飞蓟提取物的60％，水飞蓟提取物为0.08g，灭活的 植物乳杆菌L137为0.8mg。
实验例1
动物：雄性昆明小鼠(20±2g)：将小鼠置于动物实验室，室温培养。分 笼饲养。
护肝效果动物试验1：
分组：取50只小鼠随机平均分为5组，即为：控制组、脂多糖组 (肝脏损伤组)、脂多糖+水飞蓟组、脂多糖+L137组、脂多糖+水飞蓟 +L137组。
控制组：饲料+生理盐水填喂15天，腹腔注射生理盐水。
脂多糖组(肝脏损伤组)：饲料+生理盐水填喂15天，腹腔注射4mg/kg Escherichiacoli脂多糖。
脂多糖+水飞蓟组：饲料+75mg/kg水飞蓟素+生理盐水填喂15天，腹 腔注射4mg/kgEscherichia coli脂多糖。
脂多糖+L137组：饲料+1.5mg/kg L137+生理盐水填喂15天，腹腔注 射4mg/kgEscherichia coli脂多糖。
脂多糖+水飞蓟+L137组：饲料+75mg/kg+1.5mg/kg L137+生理盐水填喂15 天，腹腔注射4mg/kg Escherichia coli脂多糖。
结食12小时后，取小鼠血样，在3000X g，4摄氏度的条件下离心分 离15分钟，取上层澄清液测试。丙氨酸转氨酶ALT和天冬氨酸转氨酶 AST用756P紫外-可见光分光光度计测试。
表1护肝效果动物试验1的ALT和AST的试验情况
ALT(IU/L)
AST(IU/L)
控制组
48.4±5.1
75.5±8.6
脂多糖组(模型组)
102.3±10.7,
169.7±19.3，
脂多糖+水飞蓟
85.7±9.4,p<0.05
127.7±15.9,p<0.05
脂多糖+L137
95.1±9.8,p<0.05
159.2±13.1,p<0.05
脂多糖+水飞蓟+L137
69.6±7.4,p<0.05
108.8±12.3,p<0.05
由数据可知，相比于脂多糖组，L137组血清ALT，AST有所降低， 水飞蓟，及水飞蓟+L137组的保护作用下的血清ALT，AST均有显著降 低。水飞蓟+L137组合物的降低的数值要好于单独的水飞蓟或L137。
说明日常服用水飞蓟+L137的小鼠，对脂多糖等毒素导致的肝脏发炎 有更强的抵抗力。水飞蓟提取物可以优化线粒体代谢，减少细胞内的活性 氧水平，降低NF-κB表达；而L137通过阻断TLR4 mRNA，从而影响 TLR4-NF-κB通路，抑制肝脏中NF-κB表达，对NF-κB降低起到增强 作用，从而能够增强了水飞蓟的抗炎效果。
实验例2
40只957-992g雄性新西兰白兔，其中10只作为为控制组；
控制组：每日饲料+生理盐水填喂，腹腔注射生理盐水，持续两周。
脂多糖组(模型组)：每日饲料+生理盐水填喂，腹腔注射5mcg/kg Escherichiacoli脂多糖，持续两周。
造模结束后，在3000X g，4摄氏度的条件下离心分离15分钟，取上 层澄清液。丙氨酸转氨酶ALT和天冬氨酸转氨酶AST用756P紫外-可 见光分光光度计测试。
控制组：继续喂食每日饲料+生理盐水填喂，持续六周。
将模型组分为三组，分别作为baseline。
脂多糖+L-137组：每日饲料+0.5mg/kg L137+生理盐水填喂，腹腔注 射0.5mcg/kg脂多糖，持续六周。
脂多糖+水飞蓟组：每日饲料+25mg/kg水飞蓟素+生理盐水填喂，腹 腔注射0.5mcg/kg脂多糖，持续六周。
脂多糖+水飞蓟+L137组：每日饲料+25mg/kg水飞蓟素+0.5mg/kg L137+生理盐水填喂，腹腔注射0.5mcg/kg脂多糖，持续六周。
每周取兔子血样，在3000X g，4摄氏度的条件下离心分离15分钟， 取上层澄清液测试。丙氨酸转氨酶ALT和天冬氨酸转氨酶AST用756P 紫外-可见光分光光度计测试。
表2护肝效果动物试验2的ALT的试验情况
表3护肝效果动物试验2的AST的试验情况
由表2-3和图2可知，对于脂多糖导致的肝脏发炎且存在外源脂多糖 干扰的情况下，使用水飞蓟+L137的兔子，曲线斜率更高，即能更快的降 低炎症，更快见效。原因一方面，因此L137影响代谢通路进而影响水飞 蓟的抗炎效果，另一方面，L137对肠道菌群的调节作用有利于修复肠 漏，减少外源性脂多糖透过肠道进入循环系统，对肝脏造成损伤。同时水 飞蓟本身对肝脏具有消炎抗菌的作用，组合物起到了内外协同的保护作 用。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语 (包括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的 一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术 语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除 非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
应当理解，以上借助优选实施例对本发明的技术方案进行的详细说明 是示意性的而非限制性的。本领域的普通技术人员在阅读本发明说明书的 基础上可以对各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术 特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱 离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
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