OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用
阅读说明：本技术 OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用 (Application of OsLPS1 gene and mutant thereof in response to exogenous hormone ) 是由 饶玉春 褚晓洁 杨窑龙 林晗 王盛 叶涵斐 芦涛 严钢 于 2021-01-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用,属于植物生物技术领域。OsLPS1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；突变体核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明提供的水稻早衰OsLPS1基因及其突变体在影响水稻衰老和响应外源激素方面具有广阔的应用前景,通过研究激素在水稻衰老中的遗传调控机制,为培育耐早衰优质高产的农作物提供基础。(The invention discloses an application of OsLPS1 gene and mutant thereof in response to exogenous hormone, and belongs to the technical field of plant biology. The OsLPS1 gene has a nucleotide sequence shown as SEQ ID NO.1, and a coded amino acid sequence shown as SEQ ID NO. 3; the mutant nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO.2, and the coded amino acid sequence is shown as SEQ ID NO. 4. The rice premature senility OsLPS1 gene and the mutant thereof provided by the invention have wide application prospects in the aspects of influencing rice senescence and responding to exogenous hormones, and provide a foundation for cultivating premature senility-resistant high-quality and high-yield crops by researching the genetic regulation mechanism of hormones in rice senescence.)
技术领域
本发明涉及植物生物技术领域，更具体的说是涉及OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用。
背景技术
水稻生长发育的过程是其不断对抗、适应生物胁迫和非生物胁迫等不利环境的过程，而植物激素在调节生长发育、参与植物抗逆性方面有着不可缺少的作用，其可以由外界环境胁迫诱导产生，在植物体内往往以低水平调节各种生理反应，这对于保障水稻的生存及生长发育有着极其重要的意义。
植物的衰老是植株在生长发育最后阶段自发启动的一种程序性细胞死亡过程，这一过程由基因控制并受内部外部环境因素影响和诱导；其中包括植物内源激素、遗传和基因调控以及外界环境等影响，这些因素相互联系又相互制约，构成了一个复杂的调控网络。
目前水稻衰老相关基因的研究多集中于定位与功能等方面，对于衰老的分子机理以及激素参与水稻衰老的调控机制并不清楚。因此，需要进一步地深入研究，以揭示激素在水稻衰老中的调控机制，为水稻优质品种的选育奠定基础。
发明内容
有鉴于此，本发明对水稻早衰OsLPS1基因及其突变体进行研究，其在水稻衰老以及响应外源激素胁迫方面表现出显著影响。
本发明采用如下技术方案：
水稻早衰OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用，
OsLPS1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；
OsLPS1基因突变体核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所编码的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。
上述突变体与OsLPS1基因相比，第566位核苷酸G突变为A，导致编码的氨基酸序列提前终止。该突变体使水稻从三叶期就表现出叶黄的早衰表型，在成熟期还表现出株高、有效分蘖、结实率和千粒重显著降低的现象；其与OsLPS1基因在响应外源激素方面表现出显著差异。
进一步地，响应外源激素为响应外源激素胁迫。
优选地，外源激素为茉莉酸甲酯(Methyl Jasmonate，MeJA)或脱落酸(AbscisicAcid，ABA)。
进一步地，通过以下至少一种方式响应外源激素胁迫：
(1)抑制或促进地上部分长度；
(2)抑制或促进地下部分长度；
(3)上调或下调脱落酸合成及代谢相关基因的表达水平；
(4)上调或下调OsLPS1基因在胁迫前后的表达水平。
进一步地，脱落酸合成及代谢相关基因包括OsABA1、OsABA2、OsABA3、OsNCED1、OsNCED2、OsNCED3、OsNCED5、OsZEP、OsZDS、OsABA80x1、OsABA80x2或OsABA80x3。
水稻早衰OsLPS1基因及其突变体对外源激素的响应作用在水稻品种选育中的应用，OsLPS1基因及其突变体如上所述。
进一步地，可以分别对待筛选水稻样本、含OsLPS1基因的水稻、含OsLPS1基因突变体的水稻进行组织培养，培养过程中进行外源激素胁迫，对比水稻对外源激素胁迫的响应结果，以筛选耐早衰优质高产水稻品种。
由于优质水稻品种筛选过程中还需要考虑水稻产量、抗逆性等多种因素，实验较为繁琐，因此，充分利用水稻早衰OsLPS1基因及其突变体对外源激素的响应作用进行组培筛选，有利于缩短筛选周期，提高筛选效率。
进一步地，可以利用基因工程的方法对水稻早衰OsLPS1基因及其突变体进行改造或对其表达水平进行调控，进而通过其对外源激素的响应作用筛选耐早衰优质高产水稻品种。
综上所述，本发明提供的水稻早衰OsLPS1基因及其突变体在影响水稻衰老和响应外源激素方面具有广阔的应用前景。
附图说明
图1所示为本发明所用突变体lps1的突变位点示意图；
图2所示为突变体lps1的表型特征；
A：野生型“龙粳31”与突变体lps1三叶期表型；
B：野生型“龙粳31”与突变体lps1三叶期叶片表型；
C：野生型“龙粳31”与突变体lps1分蘖期表型；
D野生型“龙粳31”与突变体lps1成熟期表型；
图3所示为野生型“龙粳31”及突变体lps1材料在MeJA胁迫下的生长情况(A)以及胁迫前后对野生型“龙粳31”与突变体lps1株高(B)和根长(C)的影响；
图4所示为野生型“龙粳31”以及突变体lps1材料在ABA胁迫下的生长情况(A)以及胁迫前后对野生型“龙粳31”与突变体lps1株高(B)和根长(C)的影响；
图5所示为ABA胁迫前后野生型“龙粳31”及突变体lps1中ABA合成和代谢相关基因表达水平；
A：胁迫前；B：胁迫后；
图6所示为ABA胁迫前后野生型“龙粳31”和突变体lps1中OsLPS1基因的表达水平。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1水稻突变体lps1材料的获得
以粳稻品种“龙粳31”野生型为原材料，进行EMS(ethyl methane sulphonate)化学诱变：用清水将待处理的野生型“龙粳31”干种子浸种8-10小时，沥干后在28℃条件下，用浓度为1.5％的EMS溶液浸泡待处理种子10小时，用自来水冲洗10-12小时，最后放入到37℃烘箱内催芽。
对诱变处理后的材料进行自交，从而获得M2代。
M2代突变库中筛选到一早衰突变体，后经多代自交，发现该突变体的早衰表型能稳定遗传，并获得纯合的突变体株系，将其命名为lps1。
提取突变体lps1的基因组DNA，分别用lps1-867F(cggccaaaattatagctgga)和lps1-2260R(atgggcaggaactggtagtg)，lps1-2162F(gacttgcatgacagcaggaa)和lps1-3642R(acaacggcattgtttcaggt)，lps1-3461F(tcggtcacaacatcaaatcc)和lps1-4868R(gattgcgagggaagtctctg)，lps1-4572F(ccgctggcatctaccattat)和lps1-6020R(acaccaggaagtccagaacg)，lps1-5762F(ttcttaggataggcgcactga)和lps1-7249R(ctgcccctgtttggataaga)，lps1-7056F(gctcatggttaagcatttacagc)和lps1-8486R(cgtgggagaagaggagctta)，lps1-8322F(gccggaaagaaaccaaattc)和lps1-9047R(aagtggcaggagcaaacagt)组成的引物对进行PCR鉴定，并进行序列比对。
如图1所示，与野生型“龙粳31”的基因组DNA相比，突变体lps1仅在第一个外显子上有一个单碱基的替换，即OsLPS1基因第566bp的G替换为A，导致其编码的氨基酸序列提前终止。其中，野生型“龙粳31”的OsLPS1基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；突变体lps1的OsLPS1基因突变体核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
实施例2水稻植株表型分析
比较野生型“龙粳31”与突变体lps1水稻植株表型，从三叶期开始就出现叶片发黄的表型(图2A，2B)，随着植株不断地生长发育，其叶片发黄的面积逐渐增多，但叶基部一直保持绿色(图2C)，这种表型一直持续到成熟期(图2D)。除此之外，成熟期还表现出株高、有效分蘖、结实率和千粒重等显著降低的现象(表1)。
表1野生型与突变体lps1的主要农艺性状比较
实施例3外源激素胁迫试验
选取籽粒饱满的水稻种子(野生型“龙粳31”和突变体lps1)，去壳后，用70％的酒精消毒2min，再用30％的次氯酸钠溶液消毒30min，然后用蒸馏水冲洗干净，接种于含有0、2.5μM、5μM MeJA或0.2μM、0.25μMABA的1/2MS培养基上，放在人工气候培养箱中培养10d，分别统计株高和根长，每组3个重复。培养箱设置条件为光照/黑暗(14h/10h)，温度为30℃，湿度为70％。
培养10d后，对水稻幼苗进行采样，用无菌水将残留的培养基清洗干净，测定水稻幼苗的株高和根长，每组6个重复。
另外，利用植物总RNA提取试剂盒(Axygen)，提取所采样水稻的总RNA，将1μg总RNA利用cDNA反转录试剂盒(TOYOBO)逆转录cDNA。使用SYBR Green Realtime PCR Master Mix(TOYOBO)及表2中的引物进行实时荧光定量PCR，检测ABA相关基因及OsLPS1基因的表达水平，以水稻Actin为内参基因。
表2实时定量引物序列表
试验结果：
1.对MeJA胁迫的生理响应
如图3所示，在无MeJA胁迫的情况下，突变体lps1与野生型的株高和根长差异均不显著；在2.5μM MeJA胁迫下野生型的株高和根长为无MeJA胁迫的85％和54％，而突变体lps1的株高和根长分别为无MeJA胁迫的61％和37％；在5μM MeJA胁迫下野生型的株高和根长为无MeJA胁迫的66％和42％，而突变体lps1的株高和根长分别为无MeJA胁迫的50％和43％；不同浓度的MeJA胁迫条件下，突变体lps1的株高和根长均被显著抑制，表现出对MeJA显著的超敏表型。结果表明，抑制OsLPS1基因的表达可以增强幼苗对MeJA的不耐受性。
2.对ABA胁迫的生理响应
如图4所示，在0.2μMABA胁迫下野生型的株高和根长为无ABA胁迫的52％和90％，而突变体lps1的株高和根长分别为无ABA胁迫的41％和160％；在0.25μM ABA胁迫下野生型的株高和根长为无ABA胁迫的47％和76％，而突变体lps1的株高和根长分别为无ABA胁迫的34％和93％；不同浓度的ABA胁迫显著抑制了突变体lps1的株高，但是在0.2μMABA胁迫下，突变体lps1的根长明显伸长；随着ABA胁迫浓度的升高，其根长又被显著抑制。说明OsLPS1基因的突变可以在一定条件下增强水稻幼苗根对ABA的耐受性。
3.ABA胁迫下突变体lps1中ABA生物合成和代谢相关基因的变化
如图5所示，在ABA胁迫前，与野生型相比，突变体lps1中与ABA合成相关基因OsABA1、OsABA3、OsNCED1、OsNCED3、OsNCED5、OsZEP和OsZDS的表达量显著下调，与ABA代谢相关基因OsABA80x1和OsABA80x2的表达水平显著下调；在ABA胁迫后，突变体lps1中与ABA合成相关基因OsABA3、OsNCED1和OsZEP的表达水平显著上调，而OsNCED3的表达水平被下调，同时与ABA代谢相关基因OsABA80x1显著下调。
结果证实，在ABA胁迫前，突变体lps1中与ABA合成和代谢相关基因的表达受到抑制，而在ABA胁迫后，与ABA合成相关基因(OsABA3、OsNCED1、OsZEP)的表达水平被显著上调，说明OsLPS1基因突变后lps1突变体可以通过影响ABA合成途径响应外源ABA的处理。
4.ABA胁迫下OsLPS1基因的表达水平
如图6所示，在ABA胁迫前，突变体lps1中OsLPS1基因的表达水平显著降低，是野生型中OsLPS1基因表达量的0.3倍；在ABA胁迫后，突变体lps1中OsLPS1基因的表达水平显著上调，是野生型中OsLPS1基因表达量的5.7倍。结果证实，在ABA胁迫下lps1突变体中OsLPS1基因的表达被显著诱导。
综上所述，lps1突变体不但响应外源MeJA处理，还通过影响ABA合成途径响应外源ABA的处理；同时，在ABA的胁迫下，还显著诱导了OsLPS1基因在lps1突变体中的表达水平。因此，进一步研究OsLPS1基因的功能及作用机制，对于抵御水稻叶片衰老、提高水稻抗逆性具有重要意义，为培育具有高抗逆性的水稻新品种提供参考。
本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
序列表
<110> 浙江师范大学
<120> OsLPS1基因及其突变体在响应外源激素中的应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 2631
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 1
atggatctat atgcaattga ctcggacact gagtcatacg ctgaaactag tgacagtgaa 60
gaagaccaag aagaatgtga acttacatac tgtggtcatg cccagaacat cttgtccagc 120
ttggacgaga gcattggaaa gatcgataac tttctaagtt ttgaaagagg atttctgcat 180
ggagacatag tttgctctgc agctgaccca tcaggtcagc tgggccgtgt agttggagtt 240
gatatgcttg ttgacttgga aacgagctct ggtgacataa taaaacatgt caacagcaag 300
aaactttcaa gagttagatc ctttgtctct ggtgattgtg tggtgatggg gccatggatt 360
ggacgggtga tcagggcatt tgacctggtc actgttgtgt tcagtgatgg ggcaaggtgt 420
gaaatgctct taagagattc tgaggtactg aagcccattc ctccaatcct ttttgaagat 480
gcaccttatt tttactatcc aggccaacgt gtgagaattg ttcatccttc catttctaag 540
tcgggtacat ggttgtgtgg atcatggaaa gctagtagag atgaaggagt agtgtctcat 600
gtcgacgttg ggctggtaca tgtgaactgg atcacctcag taacaaatgt ttggggaggt 660
caatcatcaa gtcctccaaa ctttcaggac ccaaagaagc tcactttgct ttcatgcttc 720
ccttatgcca attggcagtt gggtgactgg tgcactcttt cggattgcga gggaagtctc 780
tgggaaaatt ctgacaaatc ttgcttcatg agtatgacct ggaagtccag ctccgacact 840
caaacggcta tcggaactta tggttcagat tattctcaaa catatgttgt tgcaaagaca 900
aagagtagtg ttgatgtttt atggcaagat ggaagtacat ctcttggttt agaacctcaa 960
agtttggttc ctgtgagtac tcttggtgat catgattttt ggcctgggca atttatcctt 1020
gagaaattga cagttgagga taatggtaga tgccagcgga ctgggatagt gacaagtgtg 1080
gatgcacttg aacggactgt aaaggtaaaa tgggctgttt cagttgatag tgacactgtc 1140
agttatggag atggactcac tgaggagact gtgagtgctt atgagctagt attacaccca 1200
gatttctcct tcttcactgg cgaagtcatt attagatctg ctgtcaacat agaaaattct 1260
gaagcaaatc ttaccaatgg aaccgtggca gttagcaggg agagcttgga tacctcctct 1320
gccttcttat catgtattgg caatgttctt ggatacaatg atgaaggact tgaagtccaa 1380
tgggctagtg gtgcgatatc tagggttcag cattttgaaa ttattgcatt agataggatt 1440
ctagatgatt ctctagaatc catgatcgag gagcacacta ctgatgattt ggtagacatg 1500
gctgagcagg agaaaatgca ccttgaggat actaagagtg cgctggaaga atctgctgga 1560
gactgtacag gatccttgcg caaagccact gctttcctct tttccaagac agcatttaat 1620
tttctgacaa atgtggcttc tagtttgttt ggtgctcatg attcaacatt ttccagctcg 1680
gtcaatgcag attctcagta tcaaattgtg acgacagcag aactgcagcc atctgcagaa 1740
gatatctctg aagagaaaca gaccatggag ctgataacac agtttgagaa gccaacatta 1800
gcttcagaaa atgccatgac aaaaggattt gatgttgtga ccgactgttc tgatcaccac 1860
tttgtcaaag aaattggtca cgaaaatgtc aaaagaggtt gggtgaagaa gatacaacag 1920
gaatggtcaa tcttacaaaa cgatctgcca gatggtattc atgttagagt ttatgaagaa 1980
aggatggacc tcctgagggc atgccttgta ggtgcagctg gaacacctta tcatgacaat 2040
cttttcttct ttgatatttt ctttcctcct gattatcctc atgagccacc ttctgttcac 2100
taccattccg gtggcctccg tttgaaccca aatttgtatg agtctggcaa agtgtgcctt 2160
agcctgctca aaacatgggc aggaactggt agtgaagtgt gggaccctga aaattcaact 2220
gttcttcaac tgctgctgtc ccttcaagct cttgttctca atgaaaaacc ttacttcaat 2280
gaggctggct atgacaaatt catggggaaa gcagatggag agaagaactc catcacttac 2340
aatgagaacg ctttcctgct gtcatgcaag tccatgacgt acattttaca caagccacca 2400
aagcatttcg agaattttgt caaggagcac ttcacttgtt gcgcgccgca cattctggat 2460
gcctgcaagg cttatctcgg cggcgatctt gttggacatg ctcgtgacag cgcctatata 2520
tcggatgacg gatgcaagaa ctcctcaacc ggtttcaaga taatgctagc caagctcttg 2580
ccgaagcttg tcaccacctt ctctgaagcc ggcatcccct gcagcccgtg a 2631
<210> 2
<211> 2631
<212> DNA
<213> Oryza sativa
<400> 2
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gagaaattga cagttgagga taatggtaga tgccagcgga ctgggatagt gacaagtgtg 1080
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gccttcttat catgtattgg caatgttctt ggatacaatg atgaaggact tgaagtccaa 1380
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tcggatgacg gatgcaagaa ctcctcaacc ggtttcaaga taatgctagc caagctcttg 2580
ccgaagcttg tcaccacctt ctctgaagcc ggcatcccct gcagcccgtg a 2631
<210> 3
<211> 877
<212> PRT
<213> Oryza sativa
<400> 3
Met Asp Leu Tyr Ala Ile Asp Ser Asp Thr Glu Ser Tyr Ala Glu Thr
1 5 10 15
Ser Asp Ser Glu Glu Asp Gln Glu Glu Cys Glu Leu Thr Tyr Cys Gly
20 25 30
His Ala Gln Asn Ile Leu Ser Ser Leu Asp Glu Ser Ile Gly Lys Ile
35 40 45
Asp Asn Phe Leu Ser Phe Glu Arg Gly Phe Leu His Gly Asp Ile Val
50 55 60
Cys Ser Ala Ala Asp Pro Ser Gly Gln Leu Gly Arg Val Val Gly Val
65 70 75 80
Asp Met Leu Val Asp Leu Glu Thr Ser Ser Gly Asp Ile Ile Lys His
85 90 95
Val Asn Ser Lys Lys Leu Ser Arg Val Arg Ser Phe Val Ser Gly Asp
100 105 110
Cys Val Val Met Gly Pro Trp Ile Gly Arg Val Ile Arg Ala Phe Asp
115 120 125
Leu Val Thr Val Val Phe Ser Asp Gly Ala Arg Cys Glu Met Leu Leu
130 135 140
Arg Asp Ser Glu Val Leu Lys Pro Ile Pro Pro Ile Leu Phe Glu Asp
145 150 155 160
Ala Pro Tyr Phe Tyr Tyr Pro Gly Gln Arg Val Arg Ile Val His Pro
165 170 175
Ser Ile Ser Lys Ser Gly Thr Trp Leu Cys Gly Ser Trp Lys Ala Ser
180 185 190
Arg Asp Glu Gly Val Val Ser His Val Asp Val Gly Leu Val His Val
195 200 205
Asn Trp Ile Thr Ser Val Thr Asn Val Trp Gly Gly Gln Ser Ser Ser
210 215 220
Pro Pro Asn Phe Gln Asp Pro Lys Lys Leu Thr Leu Leu Ser Cys Phe
225 230 235 240
Pro Tyr Ala Asn Trp Gln Leu Gly Asp Trp Cys Thr Leu Ser Asp Cys
245 250 255
Glu Gly Ser Leu Trp Glu Asn Ser Asp Lys Ser Cys Phe Met Ser Met
260 265 270
Thr Trp Lys Ser Ser Ser Asp Thr Gln Thr Ala Ile Gly Thr Tyr Gly
275 280 285
Ser Asp Tyr Ser Gln Thr Tyr Val Val Ala Ala Lys Thr Lys Ser Ser
290 295 300
Val Asp Val Leu Trp Gln Asp Gly Ser Thr Ser Leu Gly Leu Glu Pro
305 310 315 320
Gln Ser Leu Val Pro Val Ser Thr Leu Gly Asp His Asp Phe Trp Pro
325 330 335
Gly Gln Phe Ile Leu Glu Lys Leu Thr Val Glu Asp Asn Gly Arg Cys
340 345 350
Gln Arg Thr Gly Ile Val Thr Ser Val Asp Ala Leu Glu Arg Thr Val
355 360 365
Lys Val Lys Trp Ala Val Ser Val Asp Ser Asp Thr Val Ser Tyr Gly
370 375 380
Asp Gly Leu Thr Glu Glu Thr Val Ser Ala Tyr Glu Leu Val Leu His
385 390 395 400
Pro Asp Phe Ser Phe Phe Thr Gly Glu Val Ile Ile Arg Ser Ala Val
405 410 415
Asn Ile Glu Asn Ser Glu Ala Asn Leu Thr Asn Gly Thr Val Ala Val
420 425 430
Ser Arg Glu Ser Leu Asp Thr Ser Ser Ala Phe Leu Ser Cys Ile Gly
435 440 445
Asn Val Leu Gly Tyr Asn Asp Glu Gly Leu Glu Val Gln Trp Ala Ser
450 455 460
Gly Ala Ile Ser Arg Val Gln His Phe Glu Ile Ile Ala Leu Asp Arg
465 470 475 480
Ile Leu Asp Asp Ser Leu Glu Ser Met Ile Glu Glu His Thr Thr Asp
485 490 495
Asp Leu Val Asp Met Ala Glu Gln Glu Lys Met His Leu Glu Asp Thr
500 505 510
Lys Ser Ala Leu Glu Glu Ser Ala Gly Asp Cys Thr Gly Ser Leu Arg
515 520 525
Lys Ala Thr Ala Phe Leu Phe Ser Lys Thr Ala Phe Asn Phe Leu Thr
530 535 540
Asn Val Ala Ser Ser Leu Phe Gly Ala His Asp Ser Thr Phe Ser Ser
545 550 555 560
Ser Val Asn Ala Asp Ser Gln Tyr Gln Ile Val Thr Thr Ala Glu Leu
565 570 575
Gln Pro Ser Ala Glu Asp Ile Ser Glu Glu Lys Gln Thr Met Glu Leu
580 585 590
Ile Thr Gln Phe Glu Lys Pro Thr Leu Ala Ser Glu Asn Ala Met Thr
595 600 605
Lys Gly Phe Asp Val Val Thr Asp Cys Ser Asp His His Phe Val Lys
610 615 620
Glu Ile Gly His Glu Asn Val Lys Arg Gly Trp Val Lys Lys Ile Gln
625 630 635 640
Gln Glu Trp Ser Ile Leu Gln Asn Asp Leu Pro Asp Gly Ile His Val
645 650 655
Arg Val Tyr Glu Glu Arg Met Asp Leu Leu Arg Ala Cys Leu Val Gly
660 665 670
Ala Ala Gly Thr Pro Tyr His Asp Asn Leu Phe Phe Phe Asp Ile Phe
675 680 685
Phe Pro Pro Asp Tyr Pro His Glu Pro Pro Ser Val His Tyr His Ser
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Gly Gly Leu Arg Leu Asn Pro Asn Leu Tyr Glu Ser Gly Lys Val Cys
705 710 715 720
Leu Ser Leu Leu Lys Thr Trp Ala Gly Thr Gly Ser Glu Val Trp Asp
725 730 735
Pro Glu Asn Ser Thr Val Leu Gln Leu Leu Leu Ser Leu Gln Ala Leu
740 745 750
Val Leu Asn Glu Lys Pro Tyr Phe Asn Glu Ala Gly Tyr Asp Lys Phe
755 760 765
Met Gly Lys Ala Asp Gly Glu Lys Asn Ser Ile Thr Tyr Asn Glu Asn
770 775 780
Ala Phe Leu Leu Ser Cys Lys Ser Met Thr Tyr Ile Leu His Lys Pro
785 790 795 800
Pro Lys His Phe Glu Asn Phe Val Lys Glu His Phe Thr Cys Cys Ala
805 810 815
Pro His Ile Leu Asp Ala Cys Lys Ala Tyr Leu Gly Gly Asp Leu Val
820 825 830
Gly His Ala Arg Asp Ser Ala Tyr Ile Ser Asp Asp Gly Cys Lys Asn
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Ser Ser Thr Gly Phe Lys Ile Met Leu Ala Lys Leu Leu Pro Lys Leu
850 855 860
Val Thr Thr Phe Ser Glu Ala Gly Ile Pro Cys Ser Pro
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<210> 4
<211> 188
<212> PRT
<213> Oryza sativa
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Ser Asp Ser Glu Glu Asp Gln Glu Glu Cys Glu Leu Thr Tyr Cys Gly
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Asp Asn Phe Leu Ser Phe Glu Arg Gly Phe Leu His Gly Asp Ile Val
50 55 60
Cys Ser Ala Ala Asp Pro Ser Gly Gln Leu Gly Arg Val Val Gly Val
65 70 75 80
Asp Met Leu Val Asp Leu Glu Thr Ser Ser Gly Asp Ile Ile Lys His
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Val Asn Ser Lys Lys Leu Ser Arg Val Arg Ser Phe Val Ser Gly Asp
100 105 110
Cys Val Val Met Gly Pro Trp Ile Gly Arg Val Ile Arg Ala Phe Asp
115 120 125
Leu Val Thr Val Val Phe Ser Asp Gly Ala Arg Cys Glu Met Leu Leu
130 135 140
Arg Asp Ser Glu Val Leu Lys Pro Ile Pro Pro Ile Leu Phe Glu Asp
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Ala Pro Tyr Phe Tyr Tyr Pro Gly Gln Arg Val Arg Ile Val His Pro
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Ser Ile Ser Lys Ser Gly Thr Trp Leu Cys Gly Ser
180 185
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