发明内容

因此，需要开发新的测试来检测肝脂肪变性，特别是当与炎症(NASH)或纤维化相关联时，以简化这种多分析物生物标记物的可行性。该测试优选地应当具有与现有技术的测试(Steatotest)相同的质量。

通常，通过绘制接收工作特征(ROC)曲线并测量接收工作特征曲线下面积(AUROC)来确定测试的质量。

针对不同的阈值(从0到1)，根据测试获得的结果，在对患者分类后通过绘制灵敏度对(1-特异性)的曲线而绘制出ROC曲线。

通常公认的是，其下面积的值大于0.7的ROC曲线是良好的预测曲线。必须承认ROC曲线是允许预测测试的质量的曲线。最好使AUROC尽可能地接近1，此值描述了100％特异和灵敏的测试。

要提醒的是

(1)灵敏度是指在具有所寻求表型的个体中诊断为阳性(真阳性被检测到)的概率：如果患者具有该表型，则该测试为阳性。当假阴性数高时，灵敏度是低的。灵敏度的计算公式为SE＝(存在标识(sign)的具有表型的个体数)/(存在标识的具有表型的个体数+缺乏标识的具有表型的个体数)。

(2)特异性是指在没有所寻求表型的个体中诊断为阴性(真阴性未被检测到)的概率：如果患者未患病，则测试为阴性。假阳性数高时，特异性是低的。特异性的计算公式为SP＝(缺乏标识的不具有表型的个体数)/(缺乏标识的不具有表型的个体数+存在标识的不具有表型的个体数)。

(3)阳性预测值(PPV)：是指如果诊断测试为阳性则是患病(即患者不是假阳性)的概率：如果测试为阳性，则患者具有表型。阳性预测值的计算公式为PPV＝(存在标识的具有表型的个体数)/(存在标识的具有表型的个体数+存在标识的不具有表型的个体数)。

(4)阴性预测值(NPV)：是指如果诊断测试为阴性则是未患病(即患者不是假阴性)的概率：如果测试为阴性，则患者不具有表型。阴性预测值的计算公式为NPV＝(缺乏标识的不具有表型的个体数)/(缺乏标识的不具有表型的个体数+缺乏标识的具有表型的个体数)。

为了获得良好的诊断测试，重要的是同时提高特异性和灵敏度。

通常，诊断方法包括：

i.从患者收集信息的步骤；

ii.将所述信息与阈值比较的步骤；

iii.根据患者信息与阈值之间的差异推导出患者是否患有特定疾病、患者疾病的阶段或患者的状态是否将演变为给定状态的步骤。

作为说明

i.能从患者收集的信息可以直接地从患者收集(例如来自NMR、扫描仪、放射线照相、对比增强计算机断层扫描的图像)，或间接地从患者收集，例如来自已经从患者获取的生物样品(例如尿液、血液样品...)。信息可以是特定生物标记物的存在(或不存在)和/或水平，对病原决定因素(细菌或病毒DNA/RNA)是否特异，或升高的患者标记物水平；

ii.在获得信息后，就将其与不同的值/标准进行比较，并评估相对于这些标准的偏差。作为说明，应将某些生物标记物的水平与健康患者通常观察到的水平以及患有该疾病的患者(或对于预后方法而言，已知后来会演变为特定疾病阶段的患者)通常观察到的水平进行比较。可存在阈值，其中超过该阈值的95％的患者患有疾病，而没有超过该阈值的95％的患者没有患有疾病。对于可以确定多个临床阶段的疾病，这种阈值可以区分不同的阶段。在此步骤ii中，可以将各种类型的信息与其各自的标准进行比较，以便能够在步骤iii中进行诊断(作为说明，可以使用从各种血液或血浆标记物的测量、扫描仪的图像和身体质量指数获得的值和信息)。

iii.最后的步骤实际上是通过特别是考虑到从患者收集的信息、如上所述的阈值来进行诊断(或者，确定预后)，即确定患者是否患有所寻疾病(或者患者是否将演变成给定的临床状态)。医生还可以考虑其他因素(例如所收集信息的一致性等)来进行诊断。

某些方法，例如本申请中公开的方法，还应包括步骤i.a)，其包括修正从患者获得的信息以便获得一种新型信息的步骤，所述新型信息是然后在步骤ii中与标准相比较的信息。此类修正是将函数中变量的值组合，并获得最终值。

还应注意的是，如本文公开的，仅测量患者血浆或血清中标记物水平的值并将其在算法中组合是方法的一部分，但仅提供中间结果(最终值或指数)，然后将其与参考指数(阈值)进行比较，以真正能够进行诊断。

还应注意，就输出值(由本文公开的公式计算出的指数)不是关于患者状态的明确答案的意义而言，本文公开的测试不是“金标准”测试。实际上，这些测试是基于统计学的，因此可能会有假阳性或假阴性结果，这就是为什么解释指数时医生的具体经验对于为每位患者做出预后和决定采取哪种随访是至关重要的原因。

然而，由于本文为指数的各种阈值提供的测试的特异性、灵敏度、阳性预测值和阴性预测值，因此在调研临床病例时，这些测试在为医生提供帮助方面具有极大的意义。因此，如上公开的步骤iii不是直接且立即来自步骤ii，因为医生必须根据临床和一般情况来解释结果才能得出结论。

因此，本发明涉及一种用于诊断受试者中脂肪变性的存在的体外方法，其包括以下步骤：

(a)在数学函数中组合至少三种生物标记物的值，所述值选自：

○测量的在受试者的血液、血清或血浆中循环的生化标记物的量，以及

○患者的身体特征

以便获得最终值。

函数还可以包括以下步骤：

(b)任选地将最终值与预定值进行比较，以及

(c)基于在(a)计算出的最终值来确定脂肪变性的存在，

条件是受试者的身体质量指数和胆红素水平未用作(a)中的生物标记物。

该方法在体外或离体进行。当在函数中组合至少三个，优选至少四个，优选至少五个，优选至少或正好六个，优选至少或正好七个，优选至少或正好八个，优选至少或正好九个生物标记物的值时是优选的。

以下描述了可用于执行本文公开的方法的一些函数。然而，应注意的是，遵循本发明的教导并且避免在所用标记物和变量中使用胆红素和BMI，获得和开发与本文公开的函数一样(或更)有效的其他函数没有技术上的困难。

还应注意，尽管已通过逻辑回归获得了本文的示例性函数，但是可以使用其他统计学方法来提供这样的函数，即其将使用各种标记物的值并提供指示脂肪变性存在的值。

尽管可以在所公开的函数中使用任何标记物，但是出于以上公开的原因应避免在函数中使用胆红素(总胆红素)和BMI。

预定值由本领域技术人员根据实际函数来计算和确定。优选具有第一预定值，在所述第一预定值以下，阴性预测值高于90％，优选高于95％，更优选高于98％。因此，任何低于该第一预定值的最终值将意味着患者没有脂肪变性。优选对函数进行归一化，使得该第一预定值为0.25。

也可以限定第二预定值，在所述第二预定值以上，阳性预测值高于75％，优选高于85％，更优选高于90％。因此，任何高于该第二预定值的最终值将意味着患者患有脂肪变性，并且应诊断NASH和纤维化(脂肪变性的两种严重并发症)。优选对函数进行归一化，使得该第二预定值为0.50。

本方法使用半定量函数，该半定量函数使得可以提供有关患者肝脏中脂肪变性的信息。这意指最终值越高，患者肝脏中的脂肪变性越严重。

本方法应由医生按以下方式使用：

当测试为阳性时(即，最终值高于预定阈值时)，医生将首先寻找可能引起脂肪变性且易于检测的任何其他肝病原因，即患者是否患有最常见酒精性脂肪变性、有特异性标记物的病毒性肝炎(乙型、丙型肝炎)、药物诱导性肝炎或者遗传性脂肪变性或传染性脂肪变性。如果排除了脂肪变性的这种潜在原因，医生将考虑其他代谢原因(例如超重、2-型糖尿病、血脂异常、高血压、高尿酸血症…)。存在的这种其他原因使得可以最终确定诊断，因为这些原因与肝脏中增加的脂肪有关。

还应注意的是，在检测到某些异常(例如常见肝标记物异常或者通过回波描记术检测到肝脏中的脂肪)之后，患者通常会咨询肝病学家，从而使得更容易地进行诊断。

因此，本文公开的方法通常将与其他现有测试(WO0216949中公开的Fibrotest和WO2018050804中公开的NASH测试)一起执行。获得所有这些测试的结果将使得医生能够对患者的肝病做出准确的诊断。

总之，还要考虑患者的一般状况和临床评估(这是诊断方法始终要考虑的)，最终值使得可确定脂肪变性的存在。因此，本方法使得可以得出患者中存在还是不存在脂肪变性的结论和/或诊断相关的炎症(NASH)或纤维化的存在。

该方法特别有益于检测脂肪变性的不存在(当最终值低于第一预定值时)，因为其使得可避免对患者进行任何不必要的检查，并在需要时指导医生调查其他原因。

在本方法中，优选以下一项或多项(以任一组合)：

(a)在步骤(a)中测量浓度的生化标记物中不包括胆红素；

(b)步骤(a)的生化标记物选自α2-巨球蛋白(A2M)、GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、触珠蛋白、载脂蛋白A-I(apoA1)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯、总胆固醇、空腹葡萄糖、γ-球蛋白、白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、IL10、TGF-β1、apoA2、apoB、细胞角蛋白18、血小板数、凝血酶原水平、透明质酸、尿素、N-端III型原胶原蛋白、1型组织抑制剂金属蛋白酶(TIMP-1)、IV型胶原蛋白(Coll IV)、骨保护素、miRNA122、细胞角蛋白18、血清淀粉样蛋白A(SAA)、α-1-抗胰蛋白酶(同种型1)、果糖二磷酸醛缩酶A、果糖二磷酸醛缩酶B、富马酰乙酰乙酸酶、运甲状腺素蛋白、PR02275、C反应蛋白(同种型1)、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂A11、DNA指导的RNA聚合酶I亚基RPA1、遮蔽蛋白(同种型1)、α骨骼肌肌动蛋白、主动脉平滑肌肌动蛋白、碱性磷酸酶、不典型(uncharacterized)蛋白C22orf30(同种型4)、血清淀粉样蛋白A2(同种型a)、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、载脂蛋白A-II、聚合免疫球蛋白受体、von Willebrand因子、氨基酰化酶-1、G蛋白偶联受体98(同种型1)、对氧磷酶/芳基酯酶1、补体成分C7、血红素结合蛋白(hemopexin)、补体C1q亚成分、对氧磷酶/内酰胺酶3、补体C2(片段)、多能蛋白聚糖(versican)核心蛋白(同种型Vint)、细胞外基质蛋白1(同种型1)、E3SUMO-蛋白连接酶RanBP2、触珠蛋白相关蛋白(同种型1)、脂联素、视黄醇结合蛋白、铜蓝蛋白(ceruloplasmin)、α2抗纤溶酶、抗凝血酶、甲状腺素结合蛋白、蛋白C、α2脂蛋白、四连蛋白、岩藻糖基化的A2M、岩藻糖基化的触珠蛋白、岩藻糖基化的apoA1和碳水化合物不足转铁蛋白；

(c)步骤(a)的生化标记物选自α2-巨球蛋白、AST(天冬氨酸转氨酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、总胆红素、触珠蛋白、apoA1、甘油三酯、总胆固醇、空腹葡萄糖、γ-球蛋白、白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、IL10、TGF-β1、apoA2、apoB、细胞角蛋白18和细胞角蛋白19成分、血小板数、凝血酶原水平、透明质酸、尿素、N-端III型原胶原蛋白、1型组织抑制剂金属蛋白酶(TIMP-1)、IV型胶原蛋白(Coll IV)和骨保护素；

(d)步骤(a)的生化标记物为α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇和甘油三酯；

(e)在数学函数中使用至少6个，更优选至少7个，更优选至少8个，更优选至少或恰好9个生化标记物；

(f)a)的函数还包括患者的至少一个，优选两个身体特征，所述身体特征选自患者的性别和年龄；

(g)BMI不用作患者的身体特征；

(h)(a)的函数包括对循环的α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯测量的值以及与患者的年龄和性别相对应的值；

(i)a)的函数将α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇和甘油三酯的测量值以及患者的年龄和性别组合；

(j)函数是逻辑函数，即通过逻辑回归获得的函数，如下所述；

(k)函数为半定量函数。

在一个特定的实施方案中，函数已通过以下方式获得：

a)评估一组患者中脂肪变性的存在，其中患者的循环生化标记物的值是已知的；

b)通过一维分析，鉴定以下的组之间值显著不同的循环生化标记物：

i.患有脂肪变性的患者，和

ii.没有脂肪变性的患者；

c)针对脂肪变性的发生，进行逻辑回归分析以评估和考量步骤b)中鉴定的标记物的独立判别值；

d)从而通过将这些鉴定的独立因子组合起来获得函数。

下面提供进一步说明这种用于获得诊断函数的过程。

在优选的实施方案中，函数为a0+a1×年龄(岁数)+a2×ApoA1(g/l)+a3×Log(A2M，g/l)+a4×Log(GGT，IU/l)+a5×Log(ALT，IU/l)+a6×Log(AST，IU/l)+a7×Log(Hapto，g/l)+a8×Log(甘油三酯TG，mmol/l)+a9×Log(总胆固醇CT，mmol/l)+a10×Log(空腹葡萄糖，g/l)+a11×性别(女性为0，男性为1)。

特别地，

a)4.8≤a0≤5.5，优选5≤a0≤5.3；

b)-0.03≤a1≤-0.015，优选-0.025≤a1≤-0.02；

c)0.9≤a2≤1.2，优选0.95≤a2≤1.05；

d)1.8≤a3≤2.2，优选1.95≤a3≤2.05；

e)-1.3≤a4≤-1.1，优选-1.2≤a4≤-1.1；

f)-1.45≤a5≤-1.2，优选-1.36≤a5≤-1.3；

g)0.5≤a6≤0.7，优选0.55≤a6≤0.65；

h)-0.35≤a7≤-0.22，优选-0.3≤a7≤-0.25；

i)-1.45≤a8≤-1.25，优选-1.4≤a8≤-1.3；

j)-0.8≤a9≤-0.6，优选-0.75≤a9≤-0.65；

k)-3.55≤a10≤-3.35，优选-3.5≤a10≤-3.4；

l)0.35≤a11≤0.55，优选0.4≤a11≤0.5。

在优选的实施方案中，函数为5.17-0.022×年龄(岁数)+1.02×ApoA1(g/l)+1.99×Log(A2M，g/l)-1.16×Log(GGT，IU/l)-1.33×Log(ALT，IU/l)+0.6×Log(AST，IU/l)-0.29×Log(Hapto，g/l)-1.35×Log(甘油三酯TG，mmol/l)-0.68×Log(总胆固醇CT，mmol/l)-3.46×Log(空腹葡萄糖，g/l)+0.46×性别(女性为0，男性为1)。

如上所提供的公式的系数已经四舍五入到小数点后第二位，并且使用四舍五入到小数点后一位(further)或更低(lower)小数位的系数的任何函数也可以如本文所公开地使用，因此将是等效的。

作为说明，使用四舍五入到小数点后第五位的系数的函数可以为5.17005-0.02202×年龄(岁数)+1.01850×ApoA1(g/l)+1.98726×Log(A2M，g/l)-1.16378×Log(GGT，IU/l)-1.32517×Log(ALT，IU/l)+0.60003×Log(AST，IU/l)-0.28781×Log(Hapto，g/l)-1.34979×Log(甘油三酯TG，mmol/l)-0.68426×Log(总胆固醇CT，mmol/l)-3.45945×Log(空腹葡萄糖，g/l)+0.46473×性别(女性为0，男性为1)。这种函数也是本发明的主题。

因此，本文公开的方法利用不同变量的值的离体组合，以获得指示患者中存在脂肪变性的最终结果。因此，将排除在患者身体上施加的任何步骤。在本文公开的方法中，应理解，测量其值并作为变量用于函数中的标记物是存在于患者的血液、血浆或血清中的循环蛋白质或天然成分。所选标记物的值应根据本领域已知的方法在预先采集的血液、血浆或血清样品上进行测量。这些值以根据本领域的单位表示。但是，如果本领域技术人员选择其他单位来表示测量值，则这将仅仅改变逻辑函数内的系数。因此本方法将仍然适用。

但是，在另一个实施方案中，本发明涉及一种用于预后患者中存在脂肪变性的方法，其包括以下步骤：从患者采集血液、血浆或血清，测量采集的样品中存在的标记物的值，以及通过如上公开的函数组合所测量的值。标记物如上所公开。因此，所述方法还可以包括获得(测量)逻辑函数中使用的不同值的步骤，例如测量已预先从患者采集的血液或血浆样品中如上所述各种生物标记物的浓度/值/量的步骤。

所述方法还可以包括以下步骤：将第一指数与预定阈值进行比较，特别是用以确定第一指数是高于还是低于所述阈值。

所述方法还可以包括以下步骤：如果第一指数超过所述阈值，则推导出所述患者中存在脂肪变性。

在此设计的测试是定量测试，最终结果值为0至1。可认为当最终结果等于或大于0.25时，患者很可能存在脂肪变性(如上所述)，因此需要进行治疗或随访。

在以上所述的方法中，将第一预定值设定为0.25，并且如果最终结果高于或等于0.25，则患者患有非酒精性脂肪性肝炎(脂肪变性)。

简而言之，对于低于0.25的最终值，患者没有脂肪变性。对于在0.25至0.50之间的最终值，需要对患者进行定期随访，并进行新的评估。对于在0.50至0.75之间的最终值，具有临床意义，应进行治疗(从饮食和运动开始)。高于0.75时，脂肪变性很明显，应开始强化治疗，患者可能还有其他肝病。

本发明还包括一种用于诊断患者中脂肪变性的设备，其包括：

a)第一装置，其中所述第一装置通过以下方式提供第一指数：通过逻辑函数将对患者的血清或血浆中存在的标记物所测量的值组合，其中所述第一逻辑函数为

a1+a2×Log(A2M，g/l)+a3×年龄(岁数)+a4×Log(ALT，IU/l)+a5 x(Apoa1，g/l)+a6×Log(AST，IU/l)+a7×Log(BILI，μmol/l)+a8×Log(CT，mmol/l)+a9×性别(女性为0，男性为1)+a10×Log(GGT，IU/l)+a11×Log(Hapto，g/l)+a12×Log(TG，mmol/l)；

其中

--8≤a1≤-7；

-0.1≤a2≤0.6，优选0.15≤a2≤0.55；

-0.02≤a3≤0.05，优选0.03≤a3≤0.04；

-1.1≤a4≤1.5，优选1.2≤a4≤1.4；

--0.2≤a5≤1.0；

-1.8≤a6≤2.3，优选1.95≤a6≤2.2；

-0.8≤a7≤1.6，优选0.9≤a7≤1.5；

--1.7≤a8≤-1.3，优选-1.6≤a8≤-1.4；

-0.015≤a9≤0.20；

-0.15≤a10≤0.25，优选0.20≤a10≤0.22；

--0.3≤a11≤0.1；

-0.9≤a12≤1.2，优选1.0≤a12≤1.1。

随后，所述第一指数可以用于确定所述患者中脂肪变性的存在以及是否有必要发起治疗或随访，特别是借助上表1。

在具体的实施方案中，第一装置是计算机化的。它可以是记录有公式的电子表格，当输入上述各种因素时，其提供作为输出的第一指数。它也可以是计算机程序，在接收到上述各种因素之后，其提供作为输出的第一指数。

第一装置可以表现出以下一项或多项(以任一组合)：

-在私有或公共网络中运行；

-从远隔地的发送者接收输入(上述各种因素的值)(即，将这些输入从与第一装置所在位置不同的位置发送到第一装置)；

-要求发送者在发送输入之前先确定自己的身份；

-以安全的方式接收输入(上述各种因素的值)；

-将输出(第一指数)发送到输入的发送者；

-将输出存储在数据库中(可能具有唯一的标识符，从而可以将输入、输出分配给该标识符)；

-为第一指数提供进一步的信息(例如与患者所属群体中的患病率相关的灵敏度和/或特异性和/或阳性预测值和/或阴性预测值)。

还可预见一种非暂时性计算机可读存储介质，其上存储有包括程序指令的计算机程序，当该计算机程序由数据处理设备运行时，该计算机程序可加载到数据处理单元中，并且适于使数据处理单元执行用于通过以下方式计算第一指数的方法：通过如上公开的逻辑函数将对患者的血清或血浆中存在的标记物所测量的值组合。

在另一个实施方案中，本发明涉及一种包括计算机算法的微处理器，该计算机算法用于执行确定患者中脂肪变性的存在的方法：提供患者的血液标记物的值以及任选地提供年龄和分配给患者性别的值；以及执行数学函数(如上公开，或如上公开所获得的)以组合这些值来获得用于患者中存在脂肪变性的评分。

本发明还涉及函数、设备和/或微处理器的用途，以便通过使用函数并将结果与预定阈值进行比较以确定患者中脂肪变性的存在，从而对患者中脂肪变性的存在进行诊断。

本发明还涉及一种用于诊断患者中肝病的离体方法，其包括以下步骤：

-执行本文公开的方法以确定患者中脂肪变性的存在，

-确定患者中肝纤维化的存在，

-确定患者中肝炎症的存在，以及

根据上述确定的结果来诊断患者中的肝病。

当通过特别是经由Fibrotest在函数中组合生物标记物的值来确定肝纤维化时，是优选的。在其他实施方案中，通过振动控制的瞬时弹性成像对肝硬度进行离体测量来确定肝纤维化。

当通过特别是经由NASH测试在函数中组合生物标记物的值来确定患者中肝炎症的存在时，是优选的。

用于执行本方法的设备也是本发明的主题。

特别地，本发明还涉及用于检测患者中肝病的方法和设备，包括以下步骤：

-执行本文公开的用于检测脂肪变性的方法，

-执行WO0216949中公开的用于确定肝纤维化的方法(Fibrotest)，

-执行用于确定炎症的方法(WO2018050804中公开的NASH测试)，

根据每种方法获得的结果来得出关于肝病的结论。

将五种标记物α2-巨球蛋白、触珠蛋白、载脂蛋白A1、总胆红素和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)组合，并根据性别和年龄进行调整。的算法如下：4.467×Log(α2巨球蛋白(g/l))-1.357×Log(触珠蛋白(g/l))+1.017×Log(GGT(IU/l))+0.0281×年龄(岁数)+1.737×Log(胆红素(μmol/l))-1.184×ApoA1(g/l)+0.301×性别(女性＝0，男性＝1)-5.540。它使得可确定纤维化的状态(根据METAVIR分类为F2或更高)。

NASH测试的形式为a1+a2×Log(A2M，g/l)+a3×年龄(岁数)+a4×Log(ALT，IU/I)+a5 x(Apoa1，g/l)+a6×Log(AST，IU/l)+a7×Log(BILI，μmol/l)+a8×Log(CT，mmol/l)+a9×性别(女性为0，男性为1)+a10×Log(GGT，IU/l)+a11×Log(Hapto，g/l)+a12×Log(TG，mmol/l)；

其中

--8≤a1≤-7；

-0.1≤a2≤0.6，优选0.15≤a2≤0.55；

-0.02≤a3≤0.05，优选0.03≤a3≤0.04；

-1.1≤a4≤1.5，优选1.2≤a4≤1.4；

--0.2≤a5≤1.0；

-1.8≤a6≤2.3，优选1.95≤a6≤2.2；

-0.8≤a7≤1.6，优选0.9≤a7≤1.5；

--1.7≤a8≤-1.3，优选-1.6≤a8≤-1.4；

-0.015≤a9≤0.20；

-0.15≤a10≤0.25，优选0.20≤a10≤0.22；

--0.3≤a11≤0.1；

-0.9≤a12≤1.2，优选1.0≤a12≤1.1。

该NASH测试使得当最终结果高于0.25时可检测到炎症。

这些测试在本领域中是已知的，并且它们的用途没有进一步发展。

如上所述，本文公开的方法中使用的函数可以是通过逻辑回归获得的函数(可以称为逻辑函数)。

执行逻辑回归的方法在本领域中是已知的。总而言之，它们包括评估受试者群体之间标记物的个体差异(一个具有例如脂肪变性的输出，而另一个不具有输出)。可以选择变化最大的标记物，并进行逻辑回归分析以考量所选标记物的独立判别值。如果某些标记物在组之间无变化，则这些标记物在函数中的系数会很低(从而表明这些标记物的权重对于性状的存在没有真正的影响)。

然后可以对函数进行归一化(例如，使最终结果始终介于0至1之间)。

因此，本发明还涉及一种获得用于鉴定患者中脂肪变性的存在(或不存在)(或诊断脂肪变性)的函数的方法，其中所述函数将所述患者的血液/血清或血浆中生化标记物的浓度值以及任选的患者年龄、性别组合，所述方法包括以下步骤：

a)评估一组患者中脂肪变性的存在，其中患者的循环生化标记物的值是已知的；

b)通过一维分析，鉴定以下的组之间值显著不同的循环生化标记物：

i.患有脂肪变性的患者，和

ii.没有脂肪变性的患者

c)鉴定患者的年龄、性别是否在以下的组之间显著不同：

i.患有脂肪变性的患者，和

ii.没有脂肪变性的患者

d)针对脂肪变性的发生，进行逻辑回归分析以评估和考量步骤b)和c)中鉴定的标记物的独立判别值，其中身体质量指数和胆红素水平未纳入进行逻辑回归的标记物清单中；

e)从而通过组合这些鉴定的独立因子来获得函数，其中所述函数能够用于诊断受试者中非酒精性脂肪性肝炎(脂肪变性)的存在，并且不使用胆红素或BMI值。

在开发这种诊断测试的方法中，优选以下一项或多项(以任一组合)：

(a)在步骤a)中，使用包括至少100名患者的测试组；

(b)在a)的组中，至少50％的患者应表现出代谢综合征的至少一种因子(因此处于患有脂肪变性的风险)，而不是排除因子(慢性或急性肝病)；

(c)在a)的组中，至少10％的患者是没有脂肪变性且没有活动度(activity)的患者；

(d)步骤(a)的生化标记物选自α2-巨球蛋白(A2M)、GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、触珠蛋白、载脂蛋白A-I(apoA1)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、甘油三酯、总胆固醇、空腹葡萄糖、γ-球蛋白、白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、IL10、TGF-β1、apoA2、apoB、细胞角蛋白18、血小板数、凝血酶原水平、透明质酸、尿素、N-端III型原胶原蛋白、1型组织抑制剂金属蛋白酶(TIMP-1)、IV型胶原蛋白(Coll IV)、骨保护素、miRNA122、细胞角蛋白18、血清淀粉样蛋白A(SAA)、α-1-抗胰蛋白酶(同种型1)、果糖二磷酸醛缩酶A、果糖二磷酸醛缩酶B、富马酰乙酰乙酸酶、运甲状腺素蛋白、PR02275、C反应蛋白(同种型1)、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂A11、DNA指导的RNA聚合酶I亚基RPA1、遮蔽蛋白(同种型1)、α骨骼肌肌动蛋白、主动脉平滑肌肌动蛋白、碱性磷酸酶、不典型蛋白C22orf30(同种型4)、血清淀粉样蛋白A2(同种型a)、载脂蛋白C-III、载脂蛋白E、载脂蛋白A-II、聚合免疫球蛋白受体、von Willebrand因子、氨基酰化酶-1、G蛋白偶联受体98(同种型1)、对氧磷酶/芳基酯酶1、补体成分C7、血红素结合蛋白、补体C1q亚成分、对氧磷酶/内酰胺酶3、补体C2(片段)、多能蛋白聚糖核心蛋白(同种型Vint)、细胞外基质蛋白1(同种型1)、E3 SUMO-蛋白连接酶RanBP2、触珠蛋白相关蛋白(同种型1)、脂联素、视黄醇结合蛋白、铜蓝蛋白、α2抗纤溶酶、抗凝血酶、甲状腺素结合蛋白、蛋白C、α2脂蛋白、四连蛋白、岩藻糖基化的A2M、岩藻糖基化的触珠蛋白、岩藻糖基化的apoA1和碳水化合物不足转铁蛋白；

(e)步骤(a)的生化标记物选自α2-巨球蛋白、AST(天冬氨酸转氨酶)、ALT(丙氨酸转氨酶)、GGT(γ-谷氨酰转肽酶)、总胆红素、触珠蛋白、apoA1、甘油三酯、总胆固醇、空腹葡萄糖、γ-球蛋白、白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、IL10、TGF-β1、apoA2、apoB、细胞角蛋白18和细胞角蛋白19成分、血小板数、凝血酶原水平、透明质酸、尿素、N-端III型原胶原蛋白、1型组织抑制剂金属蛋白酶(TIMP-1)、IV型胶原蛋白(Coll IV)和骨保护素；

(f)步骤(a)的生化标记物为α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇和甘油三酯；

(g)在数学函数中使用至少6个，更优选至少7个，更优选至少8个，更优选至少或恰好9个生化标记物；

(h)最后获得的函数包括患者的至少一个，优选两个身体特征，所述身体特征选自患者的性别和年龄；

(i)函数包括对循环的α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯测量的值以及与患者的年龄和性别相对应的值；

(j)函数将α-2-巨球蛋白、ApoA1、GGT、触珠蛋白、ALT、AST、空腹葡萄糖、总胆固醇和甘油三酯的测量值以及患者的年龄和性别组合；

(k)方法还包括以下步骤：在包括至少100名患者的验证组中验证逻辑函数。

为了获得尽可能准确的函数，所述组中的患者数量应尽可能多，这表示其优选包括多于50名患者，优选多于100名患者，优选多于200名患者，更优选多于500名患者，或者甚至多于1000名患者。如所述，患者数量没有上限，越多越好。

在患者中诊断出脂肪变性后，医生就可以开始并提供相关的严重疾病、炎症(NASH)或纤维化的适当诊断。本发明还涉及一种用于治疗需要确认存在脂肪变性的NASH患者的方法，其包括以下步骤：执行如上所公开的诊断方法，以及根据其脂肪变性的程度向患者提供适当的治疗。在另一个实施方案中，本发明提供一种用于治疗患者的方法，其包括根据脂肪变性的程度向患者提供适当的脂肪变性治疗的步骤。当通过上述公开的方法计算出的最终值高于0.25，优选高于0.50时，尤其应该进行这样的治疗。

脂肪变性患者的主要治疗是饮食治疗，以便控制肥胖、高血糖、高血脂和过量铁水平(如果存在)。还应避免饮酒。还旨在减轻患者的体重。

当脂肪变性与NASH或纤维化相关联时，也可以向患者提供药物。作为说明，尤其是在没有糖尿病的NASH患者中，可以引用吡格列酮，这是一种2型糖尿病的药物。

维生素E也可以用于患有NASH且没有糖尿病或肝硬化的人。

也可以引用奥贝胆酸(obethicholic acid)来改善非酒精性脂肪性肝炎的组织学特征。(Neuschwander-Tetri等人，Lancet.2015Mar 14；385(9972)：956-65)。

也可以使用其他药物，例如乙基-二十碳五烯酸或二十碳五烯酸乙酯(ethylicosapentate)(临床试验NCT01154985)、丝图珠单抗(simtuzumab)(GS 6624)(临床试验，NCT01672866和NCT01672879)、GFT 505(临床试验NCT01694849)、利拉鲁肽(临床试验NCT01237119)、氯沙坦(临床试验NCT01051219)、cenicriviroc(临床试验NTC002217475)、司隆色替(selonsertib)和aramchol。

该方法的特别益处在于，其使得可以管理患者的随访以及患者中脂肪变性的程度，并且仅对随着时间推移未得到改善的部分患者提出进一步的诊断测试(例如活检)。

以下实施例旨在描述本发明的一个方面，但不应限制本发明。