一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准研究
阅读说明：本技术 一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准研究 (Processing technology of honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces and quality standard research of honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces ) 是由 于秀玲 韩风雨 上官同强 邢界红 于 2019-11-28 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准,重点对其炮制方法进行了研究,在此基础上对蜜炙桔梗饮片的质量控制方法采用了水分、灰分、浸出物、指纹图谱及含量测定的方法。本发明中蜜炙桔梗饮片的质量控制方法的制定填补了蜜炙桔梗饮片质量控制的空白,提高和保证饮片质量稳定,使桔梗临床用药更加合理,保证和提高临床用药疗效。(The invention discloses a processing technology of honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces and a quality standard thereof, which focuses on researching the processing method, and on the basis, a quality control method of the honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces adopts methods of measuring moisture, ash content, extract, fingerprint and content. The formulation of the quality control method of the honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces fills the blank of quality control of the honey-fried platycodon grandiflorum decoction pieces, improves and ensures the quality stability of the decoction pieces, ensures more reasonable clinical medication of platycodon grandiflorum, and ensures and improves the curative effect of the clinical medication.)
技术领域
本发明属于中药材饮片领域，具体涉及一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准研究。
背景技术
桔梗始载于《神农本草经》，列为下品。苏颂谓：“今在处有之。根如小指大，黄白色。春生苗，茎高尺余。叶似杏叶而长椭，四叶相对而生，嫩时亦可煮食。夏开小花紫碧色，颇似牵牛花，秋后结子。八月采根，其根有心，若无心者为荠。在《本草纲目》中也有记载：“此草之根结实而梗直，故名桔梗。桔梗荠乃一类，有甜、苦二种，故本经桔梗一名荠，而今俗称荠，为甜桔梗也”，与现今使用的桔梗基本相符。
桔梗性平味苦辛，归肺经；具有宣肺利咽、祛痰排脓的功效。临床可用于咳嗽痰多，胸闷不畅，咽痛等证，属临床常用中药。现代临床应用有生用和制用两种，而制用又多以蜜制品应用为主，这与传统认为蜜制后能增强润肺止咳作用，多用于肺阴不足之咳嗽有关。然而关于蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准研究报道较少，蜜炙桔梗饮片为形成行业相关标准。为解决上述问题，迫切需要提供一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准，以提高和保证饮片质量稳定，使桔梗临床用药更加合理，保证和提高临床用药疗效，适应中药饮片推行生产批准文号制度的技术要求。
发明内容
为克服现有技术的不足，本发明旨在提供一种蜜炙桔梗饮片的炮制工艺及其质量标准研究，，以提高和保证饮片质量稳定，使桔梗临床用药更加合理，保证和提高临床用药疗效。
本发明的目的是通过下述技术方案来实现的：
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
1.蜜炙桔梗炮制工艺
每100kg饮片加炼蜜25kg，拌匀，闷润30min，至锅内，130℃(锅底温度)炒炙17min。
2.性状
本品呈椭圆形或不规则厚片。表面黄棕色，略有焦斑，有蜜香味。切面皮部黄白色，较窄；形成层环纹明显，棕色；木部宽，有较多裂隙。
3.鉴别
(1)本品横切面：木栓细胞有时残存，不去外皮者有木栓层，细胞中含草酸钙小棱晶。栓内层窄。韧皮部乳管群散在，乳管壁略厚，内含微细颗粒状黄棕色物。形成层成环。木质部导管单个散在或数个相聚，呈放射状排列。薄壁细胞含菊糖。
(2)取本品，切片，用吸甘油装片，置显微镜下观察，可见扇形或类圆形的菊糖结晶。
(3)取桔梗粉末1g，加7％硫酸乙醇-水(1∶3)混合溶液30ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解残渣，作为供试品溶液。另取桔梗对照药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液溶液各10ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以三氯甲烷-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，10％硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加热至斑点显色清晰(约3min)，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.检查
水分桔梗生饮片水分含量不得超12.0％，参照《中国药典》2015年版四部通则0832水分测定法第二法(烘干法)测定。
总灰分桔梗生饮片灰分含量不得超5.0％，照总灰分测定法(《中国药典》2015年版通则2302)测定。
5.浸出物
照醇溶性浸出物测定法(通则2201)项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于43.0％。
6.含量测定
(1)精密称定供试品粉末4g，置于50mL离心管中，加入40mL甲醇，超声提取50min，离心10min，提取上清液。反复三次，合并上清液。将上清液加热浓缩至15～20mL，放冷，加入乙醚50mL，振摇，待其澄清后弃去上清液。在沉淀中分次加入甲醇(20、10、5mL)，加热使沉淀溶解，放冷。滤过，合并甲醇液，加热浓缩至15～20mL，放冷，加入乙醚50mL，待其澄清后弃去上清液，沉淀分次加入甲醇(20、10、5mL)，加热使沉淀溶解。放冷后滤过，将滤液置于干燥至恒重的蒸发皿中，于水浴蒸发至干，在105℃干燥至恒重，计算，即得。
本品含总皂苷不得少于5.4％。
(2)照高效液相色谱法(通则0512)测定。
色谱条件与系统适应性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(30∶70)为流动相；紫外检测器检测。理论板数按桔梗皂苷D峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品粉末(过二号筛)约0.5g，溶解于25ml甲醇中，超声提取30min，摇匀，滤过，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液20μL，供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。
本品按干燥品计算，含桔梗皂苷D(C57H92O28)不得少于0.10％。
7.指纹图谱
色谱条件 YMC-Hydrosphere C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)；流动相水(A)-乙腈(B)，梯度洗脱(B)：0～40min，15％～25％；40～80min，25％～30％；流速0.8mL·min-1；柱温35℃；波长210nm；进样量10μl，自动进样。
样品的制备 取本品粉末(过二号筛)约2g，精密称定，精密加入50％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，置水浴上蒸干，残渣加水20ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液50ml洗涤，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇定容至5ml。分析前过0.22μ滤膜，备用。
8.用法与用量：3～10g。
9.包装贮藏：选择铝箔非真空包装，置通风干燥处，防蛀。
本发明具有如下优点：
本发明规范了蜜炙桔梗的炮制工艺，所得蜜炙饮片含水量低，有光泽，颜色鲜艳，酥脆，饮片受热均匀，无焦化糊点。通过对蜜炙桔梗饮片质量标准的研究及制定，填补了蜜炙桔梗饮片质量标准的空白，提高和保证饮片质量稳定，使桔梗临床用药更加合理，保证和提高临床用药疗效。
附图说明
图1 编号1-7蜜炙桔梗饮片薄层色谱图，其中编号从左至右分别为0对照药材，1安徽20180111，2河南20170720，3吉林长春20170910，4山东淄博20180220，5甘肃成县20170930，6江西20180410，7河北20170930；
图2 编号8-17蜜炙桔梗饮片薄层色谱图，其中编号从左至右分别为0对照药材，8赤峰20170810，9陕西20180110，10四川20170504，11安徽20180310，12河南20170808，13吉林长春20180101，14四川20180404，15甘肃成县20170120，16安徽毫州20170101，17湖南市场20180205；
图3 编号18-27蜜炙桔梗饮片薄层色谱图，其中编号从左至右分别为0对照药材，18安徽20170906 19河北20180110 20安徽20170510 21安徽20170810 22安徽20171020 23河北安国20180109 24河北20180401 25河北安国20170930 26河北安国20170310 27安徽20171201
图4 编号28-37蜜炙桔梗饮片薄层色谱图，其中编号从左至右分别为0对照药材28安徽20180210 29河北20171209 30河北20171112 31山东20180220 32山东20171028 33陕西20171011 34陕西20180110 35赤峰20171118 36赤峰20171101 37赤峰20171012
图5 编号38-41蜜炙桔梗饮片薄层色谱图，其中编号从左至右分别为0对照药材38内蒙20171101 39陕西20170320 40四川20170910 41河北20171226
具体实施方式
下面详细叙述本发明的实施例，需要说明的是，本实施例是叙述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
比较实施例1蜜炙桔梗饮片炮制工艺研究
1.实验设计
本实验选择每100kg饮片加蜜量(A)、炒制温度(B)、炒制时间(C)为考察因素，以醇浸出物含量、总皂苷、桔梗皂苷D作为蜜炙桔梗饮片最佳炒制工艺考察指标，通过预实验各选择3个水平，采用L9(34)表，按正交表安排试验制备样品，取各组桔梗生饮片100g，按照实验设计将饮片与定量的炼蜜(蜜水比为1∶2.5)混合均匀，闷润30min后将饮片至于炒制容器内炒炙完成后，取出放凉后，置于密闭容器内备用。
表1 蜜炙桔梗饮片的炮制工艺研究正交设计
2.蜜炙桔梗饮片工艺的评价
采用加权综合评分法考察蜜炙桔梗饮片最佳炮制工艺，桔梗皂苷D的加权系数为0.5，醇溶性浸出物的加权系数为0.25，总皂苷的加权系数为0.25。综合质量评分＝50*(桔梗皂苷D实际量/桔梗皂苷D最高量)+25*(醇溶性浸出物实际量/醇溶性浸出物最高量)+25*(总皂苷实际量/总皂苷最高量)。
3.正交设计实验结果
选用SPSS 20.0软件处理数据，利用综合加权评分法对结果进行综合评价，桔梗皂苷D、醇浸出物、总皂苷含量权重系数分别为0.5、0.25、0.25。实验结果见下表2，通过分析最终得出每100kg饮片加蜜量25kg，160℃炒制17min为最佳的炮制工艺。
表2 蜜炙桔梗饮片炮制工艺优选实验结果
4.最佳工艺验证试验
本文确定蜜炙桔梗饮片的最佳工艺为：每100kg饮片加炼蜜25kg(蜜水比为1∶2.5)混合均匀，闷润30min，至于160℃炒制容器内炒制17min，取出放凉，置于密闭容器内。
按蜜炙桔梗饮片最佳工艺参数进行3次平行试验，分别测定桔梗皂苷D、醇溶性浸出物、总皂苷的含量结果及综合评分，其RSD值为0.96％，证明该工艺切实可行。
实施例1 薄层鉴定
1.供试品溶液的制备
将所有桔梗饮片打粉过2号筛，取桔梗粉末1g，加70％硫酸乙醇-水(1∶3)混合液30ml，加热回流3小时，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，加水洗涤2次，每次30ml，弃去洗液，三氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液蒸干，加甲醇1ml溶解残渣。
2.对照品溶液的制备
取桔梗对照药材1g，同“1”法制成对照药材溶液。
3.薄层色谱条件
照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一H硅胶薄层板上，条状带点样，条带宽度6mm，原点距底边10mm，以三氯甲烷-乙醚(3∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.实验结果
各批次蜜炙桔梗饮片薄层色谱图如图1、图2、图3、图4、图5。
5.结论
本次实验蜜桔梗饮片共41批，其中安徽8批，安徽亳州1批，赤峰4批，甘肃成县2批，河北6批，河北安国3批，河南2批，湖南市场1批，吉林长春2批，江西1批，内蒙1批，山东淄博1批，山东2批，陕西4批，四川3批。通过相关薄层色谱图可知，安徽、河北所有地区桔梗薄层色谱图大多数斑点清晰完整，个别地区很模糊，表明该地区桔梗整体上质量很好，但是质量稳定性不佳；内蒙、甘肃、吉林、陕西4个地区的薄层色谱图清晰度差别极大，表明该地区的桔梗即有质量很好的也有质量很差的，质量稳定性低；四川地区薄层色谱图斑点清晰且清晰度基本一致，表明四川地区桔梗的质量上乘且质量稳定性高；河南、山东2个地区薄层色谱图表现一般，但是斑点清晰度一致，表明这2个地区桔梗质量一般但是质量的稳定性高；湖南、江西2个地区薄层色谱图清晰度差，说明这2个地区桔梗质量不佳。
实施例2 总皂苷含量测定
精密称定供试品粉末4g，置于50mL离心管中，加入40mL甲醇，超声提取50min，室温下以转速5000r·min-1离心10min，提取上清液。反复三次，合并上清液。将第一次合并的上清液放于电热恒温水浴锅内加热浓缩至15～20mL后放冷，加入乙醚50mL，振摇，待其澄清后弃去上清液。之后在沉淀中分次加入甲醇(20、10、5mL)，加热使沉淀溶解，放冷。滤过，合并甲醇液，加热浓缩至15～20mL，放冷，加入乙醚50mL，震荡瓶身，待其澄清后弃去上清液后再沉淀中分次加入甲醇(20、10、5mL)，加热使沉淀溶解。放冷后滤过，将滤液置于干燥至恒重的蒸发皿中。将蒸发皿放置在电热恒温水浴锅中蒸发至干，放于105℃电热鼓风干燥箱内干燥至恒定质量。桔梗总皂苷质量为蒸发皿前后质量的差值。测得蜜炙桔梗饮片的总皂苷的含量范围在1.66％～17.19％。
运用SPSS20.0软件对41批次蜜炙桔梗饮片总皂苷含量进行分析，41批次蜜炙桔梗饮片总皂苷含量进行统计分析，平均值为7.20％。
表3 批次蜜炙桔梗饮片总皂苷含量
实施例3 桔梗皂苷D含量测定
1.对照品溶液的制备
精密称取桔梗皂苷D对照品适量，置于容量瓶中，加甲醇配制成0.5mg/mL的溶液即可。2.供试品溶液的制备
精密称定供试品0.5g，置于25mL容量瓶中，加入甲醇至近刻度线，超声提取30min。待其冷却后，用甲醇定容，摇匀，滤过，用0.22μm的微孔滤膜对续滤液进行过滤，滤液置于进样品瓶中冷藏备用。
3.色谱条件
色谱柱：Waters C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相：乙腈-磷酸二氢钠(用磷酸调pH为3.0，24∶76)；柱温35℃；流速0.7mL/min；检测波长210nm；进样量20μL。
4.标准曲线的制备
精密吸取桔梗皂苷D对照品溶液2、4、8、12、16、20μL，按“3”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，以峰面积x为纵坐标，对照品含量y为横坐标，进行线性回归。得桔梗皂苷D对照品的回归方程为y＝0.0169x-0.0078，表明桔梗皂苷D含量在5.72～0.143mg范围内线性关系良好。皂苷D回归方程、相关系数和线性范围见表4。
表4 线性回归考察分析结果
5.方法学考察
5.1精密度试验
将“1”项下对照品进样20μL，按6.3项下色谱条件下连续进样6次，计算得皂苷D的RSD值为0.49％，表明在此色谱条件下本仪器精密度较好。
5.2重复性试验
称取同一桔梗饮片6份，分别按6.2项下制备供试品溶液，并按“3”项下的色谱条件下进样，测得平均含量为0.1069％，RSD值为1.88％，表明在该条件下，本实验重复性较好。
5.3稳定性试验
取同一桔梗饮片供试溶液，按“3”项下色谱条件下分别在0、6、12、18、24、48h分别进样20μL，计算桔梗皂苷D的峰面积，得到RSD值为0.83％，表明在该条件下，桔梗生饮片加工品供试溶液在48h稳定性较好。
5.4加样回收试验
精密称取已知桔梗皂苷D含量样品(桔梗皂苷D 1.164mg·g-1)6份各1g，按照“2”项下的方法制备供试品溶液，并各加入皂苷D对照品适量，按照“3”项下色谱条件测定含量，计算得桔梗皂苷D的平均加样回收率为96.17％，RSD值为1.64％。
5.5含量测定
将41个批次的生桔梗饮片制成供试品溶液，按照规定项下色谱条件进行测定，测定峰面积，带入对应的标准曲线计算相对应的含量。测得蜜炙桔梗饮片的皂苷D的含量范围在0.07％～0.21％。
运用SPSS20.0软件对剩余40批次生桔梗饮片桔梗皂苷D含量进行分析，测得本组数据无异常值，平均值为0.14％。
表5 41批次蜜炙桔梗饮片桔梗皂苷D含量
实施例4 产品质量验证
采用优选工艺对自有基地种植所得三批次原药材进行炮制，检测各项指标性成分，对比市场品结果显示按照本发明的炮制工艺所得蜜炙饮片质量优质且含量稳定。
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种红景天的加工方法