一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法
阅读说明：本技术 一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法 (Traditional Chinese medicine composition for treating cerebral infarction and preparation method thereof ) 是由 刘树民 卢芳 陈平平 王秋月 刘舒毓 于 2021-03-05 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物制剂技术领域,公开了一种用于治疗脑梗死的中药组合物及其制备方法,所述用于治疗脑梗死的中药组合物由黄芪、赤芍和防风三味药组成。本发明通过均匀设计试验筛选出了上述三味中药的最佳配伍比例为10：3：2。本发明基于整体观念,发挥中医辨证施治优势,选择纯天然药物进行配伍,具有活血通经,散瘀通络的作用。另外,动物实验表明,本发明可使脑梗死体积减少,血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平降低,神经功能得到显著改善。本发明提供的中药组合物可以用来制备疗效好,安全可靠的预防和治疗脑梗死的药物。(The invention belongs to the technical field of pharmaceutical preparations, and discloses a traditional Chinese medicine composition for treating cerebral infarction and a preparation method thereof. The invention screens out the optimal compatibility proportion of the three traditional Chinese medicines as 10: 3: 2. the invention is based on holism concept, exerts the advantages of syndrome differentiation and treatment of traditional Chinese medicine, selects pure natural medicines for compatibility, and has the effects of activating blood and stimulating the menstrual flow, and dissipating blood stasis and dredging collaterals. In addition, animal experiments show that the invention can reduce the volume of cerebral infarction, reduce the expression level of IL-1 beta, TNF-alpha and MMP-9 in serum and obviously improve the nerve function. The traditional Chinese medicine composition provided by the invention can be used for preparing a medicine for preventing and treating cerebral infarction with good curative effect, safety and reliability.)
技术领域
本发明涉及药物领域，特别涉及一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法
背景技术
背景技术
脑梗死，中医称之为中风、卒中，在脑血管病中所占比例较高，约为69.6％～70.8％，可发生于任何年龄段，多见于45-70岁中老年人，发病较急，具有极高的致残率和病死率，现已经成为国民首位死亡原因。随着人民生活水平提高，脑梗死发病率不断上升，脑梗死患者会出现部分或不完全丧失活动能力，给个人、家庭和社会带来沉重的负担。因此迫切需要寻找预防和治疗脑梗死的有效药物，以缓解脑梗死进程及病情加重。近年来，中药复方制剂以其“多成分-多靶点-多途径”的独特优势成为了人们关注的焦点，且在脑血管疾病方面的研究已取得一定进展
中医学认为，中风的内在基础是正虚，致病因素为风火痰瘀，脑脉壅塞直接导致神机失用、半身不遂等。历代医家对于中风的治疗原则多主张醒神开窍、祛风通络、活血化痰等。本发明由黄芪、赤芍、防风配伍组合而成，其中黄芪补气升阳，赤芍凉血散瘀，防风祛风止痛，三药合用，使脑窍之气血运行和谐。黄芪为君药，大补元气，充养脑络，赤芍为臣药，活血散瘀，通经活络，防风为佐使药，轻扬升散，载诸药上达脑窍，充养脑府。
具体来讲，本发明的中药组合物介绍如下：
黄芪为传统补气中药，近代研究发现，黄芪有抑制黄嘌呤氧化酶活性、清除自由基作用、提高超氧化物歧化酶和过氧化酶的活力，改善冠心病患者的血液流变性和抑制血小板聚集功能以及加强心肌收缩力等作用。另外，黄芪可以益气扶正，促使血液通畅，且具有加强毛细血管抵抗力、提高抗病能力、刺激中枢神经系统，延长体外细胞寿命的重要作用，这些都有助于减轻脑缺血性损害。
赤芍，酸苦微寒，有学者以其原成分改造药物通脉脂(即没食子酸丙酯)治疗急性脑血栓患者263例，有效率达92.01％，研究发现其具有增加脑血流量，降低脑血管阻力，抑制血小板聚集，抑制内凝血功能，促进纤溶活性，降低血液黏度等作用，因此可改善脑代谢，增加脑功能，改善半影区脑血流供应，缩小梗死灶。
防风为伞形科植物防风的根，味辛甘，性微温，为肝经风药，《本草经疏》言其“防风治风通用，生发而能散”。现代研究证明防风具有解热、镇痛、抗炎、抗凝血、抗血栓、调节机体免疫等药理作用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
发明内容
本发明的目的是提供一种用于治疗脑梗死的中药组合物及其制备方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种用于治疗脑梗死的中药组合物及其制备方法，所述用于治疗脑梗死的中药组合物的制备方法包括：
步骤一，将所述中药原材料(黄芪、赤芍、防风)与蒸馏水按照重量比1：6～12混合、浸泡；
步骤二，将浸泡后的黄芪、赤芍、防风进行煎煮，煮沸1～2h，过滤得滤渣，再加水混合，煮沸，重复2～3次；
步骤三，合并每次所得的滤液，旋转蒸发仪浓缩，减压真空干燥即得治疗脑梗死的中药组合物。
本发明中药组合物与药学上可接受的辅料配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成一种适宜的剂型。该中药组合物可以是口服液、片剂、胶囊剂、丸剂，优选胶囊剂和片剂。
本发明参照2020版《中国药典》剂量，以生药剂量计X1(黄芪)9-30g/kg，X2(赤芍)6-12g/kg，X3(防风)5-10g/kg为剂量范围，采用longa改良线栓法制备脑梗死模型大鼠，通过神经功能评分确定神经功能，采用TTC染色法确定脑梗死面积，通过血清IL-1β、TNF-α和MMP-9含量确定炎症水平，用以系统深入研究上述中药组分配伍治疗脑梗死的作用。
本发明以黄芪、赤芍、防风作为考察的3个因素，根据均匀设计表设计6个剂量水平，按照均匀设计表U6*(64)进行实验，采用TTC染色法和ELISA法，以神经功能评分、脑梗死面积，以及血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平为考察指标，确定黄芪、赤芍、防风的最佳配伍比例。
本发明所提供的一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法操作简单，成本低，毒副作用小，化学成分稳定，生产过程中更易于进行质量控制。
另外本发明还提供了所述的提取工艺制得的药物。
本发明以水为溶剂确定提取工艺，环保安全。并且，通过旋转蒸发仪浓缩及减压真空干燥提取，使有效成分最大程度的提取出来，避免其损失，提高生产效率。药理研究结果表明，本发明提供的提取工艺制得的中药组合物能够明显减少脑梗死体积，降低血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平，改善神经功能，具有抗炎，抗血栓，以及促进血管生成的作用。
具体实施方式
本发明公开了一种用于治疗脑梗死的中药组合物及制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的中药组合物及制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
以下实施例所用药物和试剂：
黄芪：产地内蒙古，黑龙江修先堂药业有限公司，批号20190501；
赤芍：产地辽宁，黑龙江修先堂药业有限公司，批号20190301；
防风：产地内蒙古，黑龙江修先堂药业有限公司，批号20190402；
尼莫地平片：天津市中央药业有限公司，规格：20mg/片，批号200605；
2％TTC染色液：北京索莱宝科技有限公司，批号20201029；
白介素-1β(IL-1β)；肿瘤坏死因子(TNF-α)；基质金属蛋白酶-9(MMP-9)含量测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所，批号均为20201124
实施例所用仪器：
M200pro酶标仪(瑞士Tecan)；SY500旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；ALPHA1-4/LD-plus冻干机(德国christ公司)；KDC-160HR高速冷冻离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司)；AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)
本发明提供的药物及其提取工艺中所用原料及试剂均可由市场购得。
实施例1基于均匀设计的黄芪赤风汤组分配伍设计
按照均匀试验设计方法U6*(64)优化组分配比，以方中六味中药作为考察因子，以X1、X2、X3分别代表中药复方中的三味中药(即三个因素)，每个因素设置6个剂量水平，实验设计如表1所示，总共有6种组合。
表1基于U6*(64)的中药复方不同组分配伍优化均匀设计表
参照2020版《中国药典》剂量结，以生药剂量计X1(黄芪)9-30g/kg，X2(赤芍)6-12g/kg，X3(防风)5-10g/kg为剂量范围，将其平均分为6个剂量水平。按照均匀设计表格安排各因子及水平，进行组方设计，每一行为一个组方，共6组。
表2基于U6*(64)的中药复方不同组分配伍优化均匀设计方案
实施例2黄芪赤风汤对脑梗死模型大鼠药效学指标测定
1实验动物
SPF级，雄性，SD大鼠，体重(220±20)g，购自黑龙江中医药大学实验动物中心，许可证号SCXK(黑)2013-004。本研究动物经黑龙江中医药大学动物伦理委员会批准，批准号2017042005。
2方法
2.1模型制备
大鼠脑梗死模型采用改良Longa线栓栓塞法。各组大鼠术前禁食不禁水12h以上，10％水合氯醛麻醉，颈部脱毛，沿颈部正中切开皮肤，钝性分离肌肉组织，游离右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)及颈内动脉(ICA)；手术线结扎ECA和CCA近心端，同时动脉夹夹闭ICA，形成一个Y形封闭血管环境；使用眼科剪在CCA远心端剪一小口，将尼龙栓线沿切口插入CCA，顺着血管方向进入ICA至动脉夹处，在开口上方系活结，固定尼龙栓线，防止松开动脉夹后出血，松开ICA动脉夹，缓慢沿着血管插入栓线至稍感阻力即停止插入(动脉分叉处约19-20mm)，扎紧活结，缝合皮肤。假手术组处理方法同上，但不进行结扎。
2.2神经功能评价
神经功能评价：大鼠分别于造模后1d、7d、14d根据改良的Longa评分标准对各组大鼠神经功能进行评价。具体评分标准如下：
大鼠神经功能评分标准
注：评分为0分和4分的大鼠即为模型制备失败
2.4脑梗死体积检测
术后第14天用10％水合氯醛腹腔麻醉大鼠，沿着剑突剪开胸骨后巧开胸腔，暴露心脏，在心尖部插入注射器针头至主动脉的根部，接输液器后用37℃生理盐水从左心室至主动脉快速灌注冲洗血液，再剪开右心耳让灌注液流出。从左心室迅速灌注约50ml生理盐水后可见大鼠口唇、四肢及内脏变白，四肢变僵硬，然后迅速断头取脑。将脑组织于-20℃冰箱中速冻15min，切除嗅球、脑干和小脑，将大脑自前向后切成5个约2mm厚度的冠状切片。将脑片置于2％TTC磷酸盐缓冲溶液中，放于切片盒，37℃恒温箱避光染色20min。其间用镊子翻动脑组织切片，使染色均匀。吸去TTC溶液，加入4％多聚甲醛固定30min，正常组织呈红色，梗死组织呈白色，拍照。应用Image Pro Plus 6.0软件对所拍图像进行分析。根据公式V＝t(A1+A2……+An)/全脑体积计算梗死灶体积，再进一步计算梗死灶体积占全脑体积的百分比即为脑梗死率。其中t为切片厚度，A为梗死面积。
2.5血清IL-1β、TNF-α和MMP-9表达水平检测
各组大鼠于取材前禁食，不禁水12h，10％水合氯醛按0.35mL/100g大鼠体重腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，静置1h，4℃3500r/min离心10min，吸取上清液置于离心管中，-80℃冰箱中保存，待用。通过ELISA试剂盒对各组大鼠血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平进行检测。
2.6统计学处理
采用E[cel 2010软件对实验数据进行分析；计量资料以x±s表示，其中P＜0.05表示有统计学意义。均匀设计应用DPS数据处理系统，进行多种回归分析，选择二次多项逐步回归分析作为最佳分析方法。
3结果
对大鼠神经功能的影响：
与假手术组相比，模型组大鼠神经功能评分明显升高(P<0.01)，初步判断模型制备成功；与模型组相比，给药14d后，N1和N3组大鼠的神经功能评分明显下降(P<0.01，P<0.05)，提示本发明具有改善神经功能的作用。结果见表3
表3各组大鼠神经功能评分比较
注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
对大鼠脑梗死体积的影响：
与假手术组相比，模型组大鼠的脑梗死体积明显增加(P<0.01)，进一步推断模型制备成功；与模型组相比，给药14d后，N1-N5组大鼠的脑梗死体积均明显减少(P<0.01，P<0.05)，且N1组效果最明显，提示本发明可以明显减少脑梗死体积，对脑梗死具有一定的治疗作用。结果见表4
表4各组大鼠脑梗死体积比较
注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
对大鼠血清IL-1β、TNF-α和MMP-9表达水平的影响：
与假手术组相比，模型组大鼠血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平均明显升高(P<0.01)；与模型组相比，给药14d后，N1、N2、N3和N4组大鼠的血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平明显下降(P<0.01，P<0.05)，其中N1组效果最佳，提示本发明具有一定的抗炎及促进血管生成的作用。结果见表5
表5各组大鼠血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。
本研究提示，本发明可使脑梗死体积减少，血清IL-1β、TNF-α和MMP-9的表达水平降低，神经功能得到显著改善。表明本发明具有抗炎，抗血栓，促进血管生成的作用。通过DPS数据处理系统项下二次多项逐步回归分析筛选出黄芪、赤芍、防风的最佳配伍比例为10：3：2。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
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