二芳基衍生物及其制备方法和用途
阅读说明：本技术 二芳基衍生物及其制备方法和用途 (Diaryl derivative and preparation method and application thereof ) 是由 陈俐娟 于 2021-03-31 设计创作，主要内容包括：本发明属于化学医药领域,具体涉及二芳基衍生物及其制备方法和用途。本发明提供了一种二芳基衍生物及其制备方法和用途,其结构式如式Ⅰ所示。此外,本发明还提供了上述二芳基衍生物及其制备方法和用途。本发明化合物能够有效治疗肿瘤或/和皮肤疾病,可以用于制备治疗肿瘤或/和皮肤疾病的药物。(The invention belongs to the field of chemical medicine, and particularly relates to diaryl derivatives, and a preparation method and application thereof. The invention provides a diaryl derivative, a preparation method and application thereof, and the structural formula of the diaryl derivative is shown as a formula I. In addition, the invention also provides the diaryl derivative, a preparation method and application thereof. The compound can effectively treat tumors or/and skin diseases, and can be used for preparing medicaments for treating tumors or/and skin diseases.)
技术领域
本发明属于化学医药领域，具体涉及二芳基衍生物及其制备方法和用途。
背景技术
Src是一种非受体蛋白酪氨酸激酶(PTK)，是第一个被鉴定的原癌基因，在过去的三十多年中受到了广泛的研究。Src在增殖、迁移和侵袭中的重要作用及其在多种肿瘤中的高表达，使其成为治疗剂开发的有希望的靶标。在临床治疗中，大多数Src激酶抑制剂都是ATP竞争性抑制剂。然而，由于酪氨酸激酶之间的高度同源性，会对其他酪氨酸激酶产生抑制作用，这些试剂可能具有意想不到的副作用。
微管是真核细胞中主要的细胞骨架成分之一，并且在有丝分裂过程中它们在维持细胞形状，蛋白质运输，信号传导和染色体分离中起关键作用，因此微管是癌症治疗的有效靶点。靶向微管的药物通过干扰微管动力学，该过程控制着微管组装和微管拆卸之间的平衡。已确定了这些药物的四个主要结合位点：taxane位点和laulimalide/peloruside A位点，均用于微管稳定剂，vinca位点和colchicine位点是微管去稳定剂。近年对秋水仙碱位点抑制剂的开发兴趣日益强烈，该类抑制剂在癌症治疗中可以抑制血管生成和治疗癌症的血管分裂。而且康维他汀家族秋水仙碱位点抑制剂正在为此目的通过临床试验。同样令人感兴趣的是秋水仙碱定点剂可能能够规避紫杉烷和长春花生物碱的临床使用中βIII-微管蛋白过表达而产生的耐药性。
KX01(结构式)是Src和微管蛋白聚合双重靶标抑制剂。值得注意的是，KX01靶向Src蛋白中具有独特结构的激酶肽底物位点，具有避免多激酶小分子抑制剂可能表现出的意外副作用的潜力。KX01已进入光化性角化病临床三期和治疗骨转移性去势抵抗性前列腺癌(CSPC)临床二期。但是，由于缺乏抗肿瘤活性，CSPC的治疗已在II期提前结束。根据CSPC男性II期临床试验的结论报告，每天两次40mg的剂量下，药物体内暴露量不能达到微管蛋白聚合抑制所需的Cmax(≥142ng/mL)。与BRAF或EGFR突变体或BCR-Abl融合蛋白不同，Src不是肿瘤发生的主要驱动因素，而是参与许多促进细胞分裂和存活的途径的参与者。此外，肿瘤中的Src突变体非常罕见。因此，抗Src单一疗法不可能有效地治疗癌症。我们认为，对KX01进行优化得到具有较高微管蛋白聚合抑制作用的优化化合物，实现所需微管蛋白聚合抑制作用的较高Cmax可能是较好的解决方案。
发明内容
本发明提供了一种具有Src激酶和微管蛋白聚合双靶点的二芳基衍生物。
本发明提供了一种式Ⅰ所示的二芳基衍生物或其药学上可接受的盐：
其中，X为O或NH；m＝0～3；n＝0～3；
R1为取代或未取代的5～12元饱和杂环或所述杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；所述5～12元饱和杂环的取代基为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、
R3为C3～C8环烷基；
R4、R5独立的为C1～C8烷基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基取代的C1～C4烷基或卤素取代的C3～C8环烷基；
R2为取代或未取代的C5～C10芳基或取代或未取代的5～10元杂芳基；所述杂芳基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C10芳基或5～10元杂芳基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基或取代基结合形成含O饱和杂环；
所述二芳基衍生物不包括
作为本发明优选的方案，上述二芳基衍生物中，m＝1；n＝1～3。
作为本发明优选的方案，上述二芳基衍生物中，R1为取代或未取代的5～10元饱和杂环或所述杂原子为N或O，杂原子个数为1或2个；所述5～10元饱和杂环的取代基为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、
优选的，R1为 R6～R10独立的为-H、C1～C8烷基或C1～C8烷氧基；R11～R15独立的为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、
更优选的，R1为 R6～R10独立的为-H、C1～C6烷基或C1～C6烷氧基；R11～R15独立的为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、氰基、
进一步优选的，R1为 R6～R10独立的为-H、C1～C4烷基或C1～C4烷氧基；R11～R15独立的为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、氰基、
最优选的，R1为 R6～R10独立的为-H、C1～C4烷基或C1～C4烷氧基；R11、R12、R14、R15独立的为-H；R13为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、氰基、
作为本发明的优选方案，上述二芳基衍生物中，R3为C3～C6环烷基。优选的，R3为环丙烷。
作为本发明的优选方案，上述二芳基衍生物中，R4、R5独立的为C1～C6烷基、C3～C6环烷基、C1～C6烷氧基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基或卤素取代的C3～C6环烷基。
优选的，R4、R5独立的为C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基或氟取代的C3～C6环烷基。
最优选的，R4、R5独立的为C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基、或氟取代的环丙基。
作为本发明的优选方案，上述二芳基衍生物中，R2为取代或未取代的C5～C6芳基或取代或未取代的5～6元杂芳基；所述杂芳基的杂原子为N或O，杂原子个数为1或2个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基或取代基结合形成含O饱和杂环。
优选的，R2为取代或未取代的苯基、所述取代苯基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基或C1～C8烷氧基。
更优选的，R2为苯基或卤素取代的苯基、
最优选的，R2为苯基或氟取代的苯基、
作为本发明的优选方案，上述二芳基衍生物中，R1为 R6～R10独立的为-H、C1～C4烷基或C1～C4烷氧基；R11、R12、R14、R15独立的为-H；R13为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、氰基、
R3为环丙烷；R4、R5独立的为C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基、或氟取代环丙基；R2为苯基或氟取代的苯基、
作为本发明的优选方案，上述二芳基衍生物中，结构式如式Ⅴ所示：
其中，R13为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、R4、R5独立的为C1～C8烷基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基取代的C1～C4烷基或卤素取代的C3～C8环烷基；R2为取代或未取代的C5～C10芳基或取代或未取代的5～10元杂芳基；所述杂芳基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C10芳基或5～10元杂芳基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基或取代基结合形成含O饱和杂环。
进一步的，上述二芳基衍生物中，R13为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、
优选的，R13为-H、C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、氰基、
最优选的，R13为-H、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、卤素、氰基、
进一步的，上述二芳基衍生物中，R4、R5独立的为C1～C6烷基、C3～C6环烷基、C1～C6烷氧基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基或卤素取代的C3～C6环烷基。
优选的，R4、R5独立的为C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基、C3～C6环烷基取代的C1～C4烷基或氟取代的C3～C6环烷基。
最优选的，R4、R5独立的为C1～C4烷基、C3～C6环烷基、C1～C4烷氧基、或氟取代的环丙基。
进一步的，上述二芳基衍生物中，R2为取代或未取代的C5～C6芳基或取代或未取代的5～6元杂芳基；所述杂芳基的杂原子为N或O，杂原子个数为1或2个；所述取代C5～C6芳基或5～6元杂芳基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基或取代基结合形成含O饱和杂环。
优选的，R2为取代或未取代的苯基、所述取代苯基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基或C1～C8烷氧基。
更优选的，R2为苯基或卤素取代的苯基、
最优选的，R2为苯基或氟取代的苯基、
上述二芳基衍生物，结构式如下：
本发明还提供了上述二芳基衍生物的制备方法，合成路线如下：
步骤a：在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，再加入2当量的相应胺(例如芳基苄胺)和2当量的催化剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，在室温下反应6小时。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3；
步骤b：在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3，接着加入0.1当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物或其他钯催化剂，5当量的氟化钾，氮气保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5；
步骤c：在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的丙酮溶解，然后加入4当量的1,2-二溴乙烷或1,3-二溴丙烷或1,4-二溴丁烷，2当量的碳酸铯和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干丙酮，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤二氯甲烷层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体6；
步骤d：在反应瓶里加入1当量的中间体6，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的碘化钾和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入N,N-二甲基甲酰胺用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物I；
其中，X为O或NH；m＝0～3；n＝0～3；
R1为取代或未取代的5～12元饱和杂环或所述杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；所述5～12元饱和杂环的取代基为-H、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基、卤素、氰基、
R3为C3～C8环烷基；
R4、R5独立的为C1～C8烷基、C3～C8环烷基、C1～C8烷氧基、C3～C8环烷基取代的C1～C4烷基或卤素取代的C3～C8环烷基；
R2为取代或未取代的C5～C10芳基或取代或未取代的5～10元杂芳基；所述杂芳基的杂原子为N、O或S，杂原子个数为1～3个；所述取代C5～C10芳基或5～10元杂芳基的取代基为-H、卤素、-OH、-NO2、-CN、C1～C8烷基、C1～C8烷氧基或取代基结合形成含O饱和杂环；
所述二芳基衍生物不包括
当n＝1时，X为O，R2为苯基时，式Ⅱ化合物制备方法如下：
步骤a：在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，再加入2当量的苯甲胺和2当量的催化剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，在室温下反应6小时。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3；
步骤b：在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3，接着加入0.1当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物或其他钯催化剂，5当量的氟化钾，氮气保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5；
步骤c：在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的丙酮溶解，然后加入4当量的1,2-二溴乙烷，2当量的碳酸铯和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干丙酮，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤二氯甲烷层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体6；
步骤d：在反应瓶里加入1当量的中间体6，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的碘化钾和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入N,N-二甲基甲酰胺用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物Ⅱ。
当n＝2时，X为O，R2为苯基时，式Ⅲ化合物制备方法如下：
步骤a：在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，再加入2当量的苯甲胺和2当量的催化剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，在室温下反应6小时。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3；
步骤b：在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3，接着加入0.1当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物或其他钯催化剂，5当量的氟化钾，氮气保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5；
步骤c：在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的丙酮溶解，然后加入4当量的1,3-二溴丙烷，2当量的碳酸铯和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干丙酮，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤二氯甲烷层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体7；
步骤d：在反应瓶里加入1当量的中间体7，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的碘化钾和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入N,N-二甲基甲酰胺用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物Ⅲ。
当n＝3时，X为O时，R2为苯基时，式Ⅳ化合物制备方法如下：
步骤a：在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，再加入2当量的苯甲胺和2当量的催化剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，在室温下反应6小时。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3；
步骤b：在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3，接着加入0.1当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物或其他钯催化剂，5当量的氟化钾，氮气保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5；
步骤c：在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的丙酮溶解，然后加入4当量的1,4-二溴丁烷，2当量的碳酸铯和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干丙酮，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤二氯甲烷层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体8；
步骤d：在反应瓶里加入1当量的中间体8，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的碘化钾和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入N,N-二甲基甲酰胺用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物Ⅳ。
当n＝1时，X为O，R1为时，通式Ⅴ化合物制备方法如下：
步骤a：在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，再加入2当量的相应胺(例如苯甲胺)和2当量的催化剂O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，在室温下反应6小时。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3；
步骤b：在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3，接着加入0.1当量的[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物或其他钯催化剂，5当量的氟化钾，氮气保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5；
步骤c：在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的丙酮溶解，然后加入4当量的1,2-二溴乙烷，2当量的碳酸铯和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干丙酮，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤二氯甲烷层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体6；
步骤d：在反应瓶里加入1当量的中间体6，用足量的N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的碘化钾和2当量的三乙胺，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入N,N-二甲基甲酰胺用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得中间体9；
步骤e：在反应瓶里加入1当量的中间体9，用足量的二氯甲烷溶解，0℃下加入5当量的三氟乙酸，升至室温反应两小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干溶剂和三氟乙酸，并用二氯甲烷溶解，用饱和的碳酸氢钠溶液中和残余的三氟乙酸，分离有机相，依次用水洗涤，饱和的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪旋干得中间体10；
步骤f：在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的相应的酸，磺酰氯或酰氯，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V。
本发明还提供了上述二芳基衍生物药学上可接受的盐。其中与酸成盐是指，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得。无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等。有机酸包括乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。
本发明所用的术语“药学上可接受的”是指在在合理的医学判断范围，能适于用来与人类和其他哺乳动物的组织接触，而没有不当毒性、刺激、过敏反应等，其在对受者给药时能直接或间接地提供本发明的化合物或化合物的前药。
本发明还提供了上述二芳基衍生物药学上可接受的药物组合物，这种药物组合物是由式I～V所示的二芳基衍生物或其盐添加药学上可以接受的辅助性成分制备而成的。所述的辅助性成分如环糊精、精氨酸或葡甲胺。所述的环糊精选自α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精、(C1-4烷基)-α-环糊精、(C1-4烷基)-β-环糊精、(C1-4烷基)-γ-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羟基-C1-4烷基)-γ-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-α-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-β-环糊精、(羧基-C1-4烷基)-γ-环糊精、α-环糊精的糖类醚、β-环糊精的糖类醚、γ-环糊精的糖类醚、α-环糊精的磺丁基醚、β-环糊精的磺丁基醚和γ-环糊精的磺丁基醚。所述的辅助性成分还包含医学上可接受的载体、佐剂或媒剂。可用于药学上可接受的药物组合物还离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵凝脂；缓冲物质包括磷酸盐、甘氨酸、精氨酸、山梨酸等。
上述药物组合物可以为液体形式或固体形式。其中，所述的液体形式可以为水溶液形式。所述的固体形式可以为粉末、颗粒、片剂或冻干粉形式。该药物组合物还含有注射用水、盐水溶液、葡萄糖水溶液、注射/输注用盐水、注射/输注用葡萄糖、格林氏溶液或含有乳酸盐的格林氏溶液。
式I～V所示的二芳基衍生物或其盐或药物组合物在制备微管寡聚化抑制剂中的用途。
式I～V所示的二芳基衍生物或其盐或药物组合物在制备Src激酶抑制剂中的用途。
式I～V所示的二芳基衍生物或其盐或药物组合物在制备微管寡聚化和Src激酶双靶点抑制剂中的用途。
式I～V所示的二芳基衍生物或其盐或药物组合物在制备治疗皮肤病、肿瘤和/或其他疾病的药物中的用途。
上述用途中，所述肿瘤包括：实体瘤、肉瘤、血液系统癌症，亚型有乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、子宫颈癌、睾丸癌、结肠癌、结肠直肠癌、肝癌、非小细胞肺癌、鳞状细胞癌、小细胞肺癌、胃癌、胃肠道间质瘤、胰腺癌、膀胱癌、生殖细胞瘤、肥大细胞瘤、肥大细胞增多症、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、星形细胞瘤、黑色素瘤、B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、缓慢进展淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓瘤和/或骨髓增生异常综合症等。
上述用途中，所述皮肤疾病包括：光化性角化病、银屑病、异位性皮炎、牛皮癣、白癜风、玫瑰疹和/或系统性红斑狼疮等。
上述用途中，所述“其它疾病”包括但不局限于下面所述：自身免疫型糖尿病、糖尿病视网膜病变、肝纤维化、肺纤维化、肾纤维化、阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈症、肌萎缩侧索硬化、脊髓小脑退行性病变、动脉粥样硬化、贫血、镰刀形红细胞贫血症、地中海贫血症、骨关节炎、类风湿性关节炎、疟疾、锥形虫病、蠕虫病、原虫感染、多发性硬化症、狼疮、哮喘、过敏性鼻炎和/或炎性肠病等。
本发明提供的二芳基衍生物既可以作为微管蛋白和Src激酶双靶点抑制剂，又可以是具有单独的微管蛋白或者Src激酶的抑制剂，为制备抗肿瘤药物和/或治疗皮肤病药物提供了新的选择。
附图说明
图1体内药效学实验；图中(A)肿瘤体积(mm3)，每3天评估一次，持续30天；(B)各组小鼠的体重(g)；(C)每组在第30天的肿瘤重量(g)；
图2体外寡聚化实验；
图3细胞周期阻滞实验；
图4抑制Src/FAK信号通路。
具体实施方式
为方便后面对实施例合成路线及方法的描述，现将实施例所用原料或试剂的缩写制成下表。
试剂
缩写
[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯
PdCl<sub>2</sub>(dppf)
甲醇
MeOH
O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲
HATU
N,N-二甲基甲酰胺
DMF
氟化钾
KF
盐酸溶液
HCl
无水硫酸钠
Na<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>
碳酸铯
CsCO<sub>3</sub>
氮气
N<sub>2</sub>
石油醚
PE
丙酮
ACE
三乙胺
Et<sub>3</sub>N
二氯甲烷
DCM
碘化钾
KI
三氟乙酸
TFA
碳酸氢钠
NaHCO<sub>3</sub>
水
H<sub>2</sub>O
四氢呋喃
THF
小时
h
中间体3a的合成
在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸(1)，用足量的DMF溶解，再加入2当量的苯甲胺和2当量的催化剂HATU，在室温下反应6h。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3a，产率90％。
中间体5a的合成
在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3a，接着加入0.1当量的PdCl2(dppf)或其他钯催化剂，5当量的KF，N2保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8h，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5a，产率80％。
中间体6a的合成
在反应瓶里加入1当量的中间体5a，用足量的ACE溶解，然后加入4当量的1,2-二溴乙烷，2当量的CsCO3和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干ACE，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤DCM层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体6a，产率90％。
实施例1化合物II-1的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6a，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-1。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝2.1Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.36–7.27(m,3H),7.24(d,J＝2.4Hz,2H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.49(d,J＝5.8Hz,2H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),3.81(s,2H),3.08(d,J＝8.6Hz,2H),2.88(t,J＝6.0Hz,2H),2.47(d,J＝8.1Hz,2H),1.39–1.32(m,2H),0.70(dd,J＝7.6,3.8Hz,1H),0.36(td,J＝7.7,4.4Hz,1H).MS(ESI),m/z:428.2340[M+H]+.
实施例2化合物II-2的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6a，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-2。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),7.64(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.31(dd,J＝15.2,7.2Hz,3H),7.25(m,2H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),4.15(t,J＝5.7Hz,2H),3.81(s,2H),3.77–3.66(m,2H),2.82(dd,J＝13.6,8.1Hz,4H),2.11–1.74(m,4H),1.17(d,J＝6.3Hz,6H).MS(ESI),m/z:460.2595[M+H]+.
实施例3化合物II-3的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6a，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-3。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.61(s,1H),7.51–7.46(m,2H),7.36–7.28(m,3H),7.24(d,J＝2.3Hz,2H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.49(d,J＝5.8Hz,2H),4.29(s,2H),4.11(t,J＝5.7Hz,2H),3.82(s,2H),2.77(t,J＝5.5Hz,2H),2.65(d,J＝11.0Hz,2H),2.49(d,J＝10.8Hz,2H),1.95(d,J＝6.3Hz,2H),1.90–1.81(m,2H).MS(ESI),m/z:458.2444[M+H]+.
实施例4化合物II-4的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6a，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-4。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝1.9Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.64(s,1H),7.52–7.45(m,2H),7.35–7.28(m,3H),7.26–7.21(m,2H),7.02(d,J＝8.8Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.13(t,J＝6.1Hz,2H),3.81(s,2H),3.04(t,J＝6.1Hz,2H),2.96(dd,J＝9.2,6.9Hz,2H),2.64(dd,J＝9.2,5.6Hz,2H),2.26–2.12(m,2H),1.64–1.54(m,2H),1.49(ddd,J＝20.5,13.9,8.5Hz,4H),1.39–1.29(m,2H).MS(ESI),m/z:470.2800[M+H]+.
实施例5-13
化合物II-5～II-13的合成操作同上，只是更改参与反应相应的胺，结果展示如下：
中间体3b的合成
在反应瓶里加入1当量的2-(5-溴吡啶-2-基)乙酸(1)，用足量的DMF溶解，再加入2当量的3,4-亚甲二氧基苄胺和2当量的催化剂HATU，在室温下反应6h。待反应完后，加入大量的水析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤3次。干燥滤饼得中间体3b，产率90％。
中间体5b的合成
在反应瓶里加入1当量的对羟基苯硼酸频哪醇酯4，再加入1.2当量的中间体3b，接着加入0.1当量的PdCl2(dppf)或其他钯催化剂，5当量的KF，N2保护下加入二氧六环：水(10：1)的混合溶剂。80℃反应8h，薄层色谱监测反应。待反应完后，硅藻土过滤除去不溶物，收集滤液，旋蒸旋干滤液，硅胶柱纯化得到中间体5b，产率80％。
中间体6b的合成
在反应瓶里加入1当量的中间体5b，用足量的ACE溶解，然后加入4当量的1,2-二溴乙烷，2当量的CsCO3和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干ACE，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤DCM层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体6b，产率90％。
实施例14化合物II-14的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6b，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-14。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.73(d,J＝2.1Hz,1H),8.54(t,J＝5.7Hz,1H),7.95(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),7.63(d,J＝8.7Hz,2H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.05(d,J＝8.7Hz,2H),6.83(d,J＝7.5Hz,2H),6.74(d,J＝8.0Hz,1H),5.96(s,2H),4.20(d,J＝5.9Hz,2H),4.13(t,J＝5.7Hz,2H),3.68(s,2H),3.62–3.52(m,4H),2.70(t,J＝5.7Hz,2H),2.50–2.44(m,4H).MS(ESI),m/z:476.2174[M+H]+.
实施例15化合物II-15的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6b，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物II-15。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝2.1Hz,1H),8.55(t,J＝5.7Hz,1H),7.96(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.38(d,J＝8.1Hz,1H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),6.84(d,J＝7.5Hz,2H),6.76(d,J＝8.0Hz,1H),5.98(s,2H),4.20(d,J＝5.9Hz,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.70(s,2H),3.62–3.52(m,4H),2.76(t,J＝5.7Hz,2H),2.50–2.44(m,4H),2.06–1.89(m,1H),0.79–0.60(m,4H).MS(ESI),m/z:543.2607[M+H]+.
中间体7的合成
在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的ACE溶解，然后加入4当量的1,3-二溴丙烷，2当量的CsCO3和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干ACE，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤DCM层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体7，产率90％。
实施例16化合物III-16的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体7，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物III-16。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝1.9Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.3Hz,1H),7.64(s,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.31(dd,J＝12.8,7.1Hz,3H),7.27–7.20(m,3H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),4.40(s,1H),4.09(t,J＝6.2Hz,2H),4.05(d,J＝7.8Hz,1H),3.81(s,2H),3.63(dd,J＝7.7,1.3Hz,1H),3.49(s,1H),2.95(d,J＝9.9Hz,1H),2.87–2.78(m,1H),2.78–2.68(m,1H),2.55(d,J＝10.0Hz,1H),1.96(dt,J＝13.3,6.7Hz,2H),1.87(d,J＝9.7Hz,1H),1.74(d,J＝9.7Hz,1H).MS(ESI),m/z:458.2441[M+H]+.
实施例17化合物III-17的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体7，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物III-17。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.3Hz,1H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.31(dd,J＝12.7,7.3Hz,3H),7.25(d,J＝7.2Hz,3H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.28(s,2H),4.07(t,J＝6.4Hz,2H),3.82(s,2H),2.60(d,J＝10.8Hz,2H),2.48(t,J＝6.7Hz,2H),2.32(d,J＝10.6Hz,2H),1.99–1.87(m,4H),1.87–1.78(m,2H).MS(ESI),m/z:472.2600[M+H]+.
中间体8的合成
在反应瓶里加入1当量的中间体5，用足量的ACE溶解，然后加入4当量的1,4-二溴丁烷，2当量的CsCO3和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干ACE，加入足量的二氯甲烷，并用水洗涤DCM层3次，无水硫酸钠干燥有机溶剂，旋转蒸发仪旋干并用硅胶柱纯化得到中间体8，产率90％。
实施例18化合物IV-18的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体8，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物IV-18。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.64(s,1H),7.53–7.45(m,2H),7.35–7.28(m,3H),7.27–7.21(m,3H),6.99(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.39(s,1H),4.03(t,J＝6.5Hz,3H),3.81(s,2H),3.62(dd,J＝7.8,1.6Hz,1H),3.50(s,1H),2.94(dd,J＝10.0,1.5Hz,1H),2.69(dt,J＝11.6,7.3Hz,1H),2.60(dt,J＝11.6,7.6Hz,1H),2.52(d,J＝10.0Hz,1H),1.91–1.82(m,3H),1.73(d,J＝9.7Hz,1H),1.66(dt,J＝14.8,7.4Hz,2H).MS(ESI),m/z:472.2599[M+H]+.
实施例19化合物IV-19的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体8，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物IV-19。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.48(d,J＝8.7Hz,2H),7.39–7.27(m,3H),7.26–7.21(m,3H),6.99(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.28(d,J＝2.2Hz,2H),4.03(t,J＝6.4Hz,2H),3.81(s,2H),2.59(d,J＝10.8Hz,2H),2.35(t,J＝7.1Hz,2H),2.28(d,J＝9.6Hz,2H),1.96–1.89(m,2H),1.84(td,J＝12.5,6.8Hz,4H),1.62(dt,J＝14.4,7.2Hz,2H).MS(ESI),m/z:486.2756[M+H]+.
实施例20化合物V-20的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体6a，用足量的DMF溶解，加入1.5当量的相应的胺，4当量的KI和2当量的Et3N，50℃下反应过夜，薄层色谱监测反应。待反应完后，加入DMF用量5倍体积的水，析出浅棕色固体，抽滤。滤饼用水洗涤2次，用硅胶柱纯化，用MeOH/DCM体系洗脱得目标产物V-20，也称中间体9。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝2.1Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.36–7.27(m,3H),7.25(dd,J＝7.8,2.6Hz,3H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.81(s,2H),3.53–3.41(m,4H),2.85(t,J＝5.7Hz,2H),2.60–2.48(m,4H),1.46(s,9H).MS(ESI),m/z:531.2973[M+H]+.
实施例21化合物V-21的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体9，用足量的二氯甲烷溶解，0℃下加入5当量的三氟乙酸，升至室温反应两小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，旋干溶剂和三氟乙酸，并用二氯甲烷溶解，用饱和的碳酸氢钠溶液中和残余的三氟乙酸，分离有机相，依次用水洗涤，饱和的氯化钠溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪旋干得化合物V-21，也称中间体10，产率98％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.65(s,1H),7.52–7.45(m,2H),7.36–7.28(m,3H),7.26–7.22(m,3H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.16(t,J＝5.7Hz,2H),3.81(s,2H),3.08–2.92(m,4H),2.84(t,J＝5.7Hz,2H),2.63(s,4H).MS(ESI),m/z:431.2441[M+H]+.
实施例22化合物V-22的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的环丙乙酸，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-22，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.70(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.61(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.31(dd,J＝14.8,7.4Hz,3H),7.26–7.21(m,3H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.17(t,J＝5.6Hz,2H),3.81(s,2H),3.72(dd,J＝13.9,7.0Hz,4H),2.87(t,J＝5.6Hz,2H),2.61(d,J＝25.9Hz,4H),1.77–1.71(m,1H),1.03–0.94(m,2H),0.81–0.70(m,2H).MS(ESI),m/z:499.2704[M+H]+.
实施例23化合物V-23的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的乙酰氯，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-23，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝1.8Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.2Hz,1H),7.63(s,1H),7.49(d,J＝8.6Hz,2H),7.31(dd,J＝16.4,7.2Hz,3H),7.25(dd,J＝8.0,2.5Hz,3H),7.01(d,J＝8.6Hz,2H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.16(t,J＝5.5Hz,2H),3.82(s,2H),3.69–3.61(m,2H),3.54–3.45(m,2H),2.86(t,J＝5.5Hz,2H),2.66–2.52(m,4H),2.09(s,3H).MS(ESI),m/z:495.2372[M+H]+.
实施例24化合物V-24的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的环丙乙酰氯，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-24，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.68(d,J＝1.9Hz,1H),7.82(dd,J＝8.0,2.3Hz,1H),7.65(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.36(d,J＝8.1Hz,1H),7.33–7.27(m,2H),7.23(dd,J＝8.0,5.1Hz,3H),7.00(d,J＝8.7Hz,2H),4.47(d,J＝5.7Hz,2H),4.19(t,J＝5.4Hz,2H),3.82(s,2H),3.70(s,2H),3.53(s,2H),2.90(t,J＝5.3Hz,2H),2.63(s,4H),2.28(d,J＝6.8Hz,2H),1.10–0.96(m,2H),0.61–0.48(m,2H),0.16(m,2H).MS(ESI),m/z:513.2874[M+H]+.
实施例25化合物V-25的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的(1R,2R)-2-氟-环丙甲酸，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-25，产率在60-90％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝2.0Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.3Hz,1H),7.62(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,2H),7.31(dd,J＝15.3,7.0Hz,3H),7.24(s,3H),7.01(d,J＝8.7Hz,2H),4.88–4.80(m,1H),4.71–4.64(m,1H),4.48(d,J＝5.8Hz,2H),4.20(t,J＝5.4Hz,2H),3.93(d,J＝11.4Hz,1H),3.81(s,3H),3.76–3.64(m,1H),3.63–3.50(m,1H),2.90(t,J＝5.3Hz,2H),2.73(d,J＝29.7Hz,2H),2.65–2.48(m,2H),1.94–1.80(m,2H),1.11–0.98(m,1H).MS(ESI),m/z:517.2617[M+H]+.
实施例26化合物V-26的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的环丁酰氯，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-26，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.69(d,J＝1.9Hz,1H),7.81(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.63(s,1H),7.48(d,J＝8.8Hz,2H),7.37–7.27(m,3H),7.26–7.20(m,3H),7.00(d,J＝8.8Hz,2H),4.48(d,J＝5.7Hz,2H),4.18(t,J＝5.4Hz,2H),3.82(s,2H),3.67(s,2H),3.46–3.37(m,2H),3.31–3.18(m,1H),2.88(t,J＝5.2Hz,2H),2.60(s,4H),2.35(dtd,J＝17.9,9.2,2.2Hz,2H),2.19–2.09(m,2H),2.00–1.84(m,2H).MS(ESI),m/z:513.2866[M+H]+.
实施例27化合物V-27的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的环丙磺酰氯，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-27，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.75(d,J＝2.2Hz,1H),8.62(t,J＝5.8Hz,1H),7.96(dd,J＝8.1,2.4Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.40(d,J＝8.1Hz,1H),7.35–7.20(m,5H),7.07(d,J＝8.7Hz,2H),4.31(d,J＝5.9Hz,2H),4.14(t,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,2H),3.25–3.13(m,4H),2.78(t,J＝5.6Hz,2H),2.66–2.54(m,5H),1.02–0.87(m,4H).MS(ESI),m/z:535.2377[M+H]+.
实施例28化合物V-28的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的2,2-二氟环丙甲酸，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-28，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.75(d,J＝1.9Hz,1H),8.66(t,J＝5.7Hz,1H),7.97(dd,J＝8.1,2.3Hz,1H),7.65(d,J＝8.7Hz,2H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.37–7.18(m,5H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),4.31(d,J＝5.9Hz,2H),4.16(t,J＝5.6Hz,2H),3.72(s,2H),3.66–3.48(m,4H),2.77(t,J＝5.6Hz,2H),2.71–2.58(m,1H),2.52–2.38(m,4H),1.95–1.76(m,2H).MS(ESI),m/z:535.2520[M+H]+.
实施例29化合物V-29的制备
在反应瓶里加入1当量的中间体10，用足量的二氯甲烷溶解，加入1.1当量的(1S,2R)-2-氟代环丙烷羧酸，再加入1.5当量的O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲(HATU)，室温下反应5小时，薄层色谱监测反应。待反应完后，直接将反应液拌样硅胶柱纯化得到目标产物V-29，产率在60-90％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.66(s,1H),8.54(s,1H),7.89(d,J＝6.1Hz,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,1H),7.28–7.10(m,5H),6.99(d,J＝8.6Hz,2H),4.78,4.62(d,1H),4.23(d,J＝5.7Hz,2H),4.08(t,J＝5.3Hz,2H),3.62(m,4H),3.10(s,1H),2.69(t,J＝5.3Hz,2H),2.57–2.28(m,4H),1.40–1.22(m,1H),1.06(m,1H).MS(ESI),m/z:517.2615[M+H]+.
药效学试验部分
实施例30体外生化水平抑制细胞生长活性实验
本发明所述的二芳基衍生物具有显著的药理活性，为证实上述特点，对本发明部分化合物进行了体外生化水平抑制细胞生长活性实验。
1)细胞系和细胞培养
人慢性髓系白血病细胞K562、人卵巢癌细胞SKOV3、人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231来自美国典型培养物中心(American Type Culture Collection,ATCC)，由四川大学生物治疗国家重点实验室细胞库培养保种。以上肿瘤细胞常规培养于含10％胎牛血清、100U.mL-1青霉素和100mg.L-1链霉素的DMEM培养液中，置饱和湿度、37℃的5％CO2孵箱中培养。
2)仪器设备
CO2培养箱：新加坡ESCO CCL-170B-8。数码倒置显微镜：Olympus CKX31。正置研究级显微镜：Olympus BX51TRF。酶标仪：美国Molecular Device公司M5。常温离心机：Thermosicentific公司产品，thermo SOROALLST16。纯水仪：美国Millipore产品，FTPNO9748。立式高压灭菌锅：日本SANYO产品，MLS-3780。恒温水浴箱：巩义市予华仪器有限责任公司DF-101S。超净工作台：新加坡ESCO产品，ESCO Bilogical safety Cabinet，AC2-L1S1 Class II。旋涡混匀器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司cel-866。pH计：METTLERTOLEDO公司产品DELTA320。体重秤：龙腾电子有限公司，LD5102。温湿度计：河北衡水市武强温湿表制造中心，GJWS-A5。液氮罐：美国Thermo公司产品，CY50985-70。
3)细胞计数
体外培养的细胞经0.25％胰蛋白酶消化，轻轻吹落，收集，离心，1200g*3min，用新鲜培养基重悬，将细胞稀释到合适的密度。混匀后吸取少量悬液滴加到血球计数板上，在倒置显微镜下计数。记下4个大格的细胞总数，取平均数后乘以104，再乘以稀释倍数得到细胞密度，乘以总体积即得到细胞总数。
4)体外培养细胞接种96孔板
细胞用0.25％的胰酶消化后离心，加完全培养基悬浮，用血球计数板对细胞进行计数。96孔板按每孔1000-10000个细胞加入稀释好的细胞悬液。置于CO2孵箱中培养过夜。
5)MTT试验
选用对数生长期的肿瘤细胞，用0.25％的胰酶消化后，用完全培养基调整细胞悬液浓度，以每孔1000～10000个细胞接种到96孔板，每孔200μL，37℃的5％CO2孵箱中培养24h，实验组更换新的含有不同浓度的待测化合物的培养基，对照组则换成含有等体积的新鲜培养基，每组设置5个平行孔，37℃的5％CO2孵箱中培养。
在药物作用72小时后弃去上清，每孔加入200uL新鲜配制的含有0.2mg/mL的MTT的无血清的培养基，37℃继续培养1～4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，并加入200uL DMSO(二甲基亚砜)，用微型超声振荡器振荡15～20分钟，使结晶物充分溶解混匀后，在酶标仪上检测570nm，参比波长为450nm，测定光密度值。
6)数据处理
按公式计算药物浓度梯度下对肿瘤细胞的生长抑制率：肿瘤细胞生长相对抑制率％＝(1-OD实验组/OD对照组)×100％。
以同一样品的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图，可得到剂量反应曲线，从中求出半数抑制浓度IC50。每个实验均重复3次，测出每个化合物在不同肿瘤细胞中的半数致死浓度微摩尔(μM)(IC50)或纳摩尔浓度(nM)。
7)实验结果
下表1提供了本发明化合物关于K562细胞的平均IC50范围，其中，“A”表示IC50值小于10nM，“B”表示IC50值在10nM与100nM之间，“C”表示IC50值在100nM与1000nM之间。
表1
实施例
K562(IC<sub>50</sub>)
实施例
K562(IC<sub>50</sub>)
KX01
B
II-15
B
II-1
B
III-16
B
II-2
A
III-17
B
II-3
A
IV-18
B
II-4
B
IV-19
B
II-5
A
V-20
B
II-6
B
V-21
B
II-7
B
V-22
A
II-8
B
V-23
A
II-9
B
V-24
A
II-10
B
V-25
A
II-11
B
V-26
A
II-12
C
V-27
B
II-13
C
V-28
B
II-14
C
V-29
B
下表2提供了本发明化合物关于SKOV3细胞和MDA-MB-231的平均IC50范围，其中，“A”表示IC50值小于10nM，“B”表示IC50值在10nM与100nM之间，“C”表示IC50值在100nM与1000nM之间。
表2
实施例
SKOV3(IC<sub>50</sub>)
实施例
MDA-MB-231(IC<sub>50</sub>)
KX01
B
KX01
B
II-3
A
II-3
A
V-22
A
V-22
A
V-23
A
V-23
B
V-24
A
V-24
A
V-25
A
V-25
A
V-26
A
V-26
A
V-28
B
V-28
B
实施例31人卵巢癌SKOV3异种移植肿瘤模型上药效学
1)试验方法
使用SPF级裸鼠，鼠龄4-6周，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，建立人卵巢癌SKOV3异种移植小鼠模型考察其抗肿瘤效果，以上耐药肿瘤细胞系经传代培养后，收集生长状态良好的细胞，无血清培养基洗涤1次，计数，无血清培养基调整细胞浓度，将计数的肿瘤细胞接种于裸鼠右侧后肢皮下，当肿瘤体积达到一定体积时，随机分组，每组5只。经口服每天1次给予不同剂量化合物，每三天一次并测量肿瘤体积，制作肿瘤生长曲线，连续给30天，处死小鼠，拍照，取出肿瘤组织和重要脏器(心、肝、脾、肺、肾、胰腺等)，肿瘤称重，统计，抑瘤率＝(未治疗组小鼠肿瘤体积-治疗组小鼠肿瘤体积)/未治疗组小鼠肿瘤体积×100％。
2)实验结果
如图1所示，口服30天V-24(5mg/kg和10mg/kg)可显著抑制SKOV3异种移植小鼠模型的肿瘤生长，TGI分别为52％和70％，优于KX01(10mg/kg)，TGI为42％。此外，在任何一组中均无明显的体重下降。
实施例32化合物体外抑制微管蛋白聚合
1)实验方法
实验当天用灭菌水配制100×GTP液(100mM浓度，GTP粉末购自大连美仑生物技术有限公司)。
微管蛋白购买自cytoskeleton公司，-80℃保存，使用时置于冰上，用预冷的微管聚合缓冲液(Genaral Tubulin Buffer，成分为80mM哌嗪-1,4-二乙磺酸、2mM氯化镁、0.5mM乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸，pH值为6.9)溶解微管蛋白，冰上混匀，放置30min-1h，使微管蛋白充分解聚；同时将实验用的96孔板放酶标仪中预热，调温至全程37℃，并调好酶标仪设置：动态读数(kinetic模式)，测340nm波长吸光值，测试时间设定为30-60min，每1min读值一次；再取部分General Tubulin Buffer平衡至室温。
将微管蛋白转移至预冷的EP管中，13000rpm，4℃离心20min，取上清放冰上。用Bradford法进行蛋白定量，按定量结果加微管聚合缓冲液将微管蛋白浓度调至3mg/mL。
将待测化合物按实验浓度的10倍配至100μL预热至室温的general tubulinbuffer中，即为待测化合物10×液。对照组配制等体积比例的DMSO。观察化合物溶解良好，未发生析出后，从酶标仪中取出预热的96孔板，尽快按每个实验组加10μL相应10×液加入化合物，然后再将96孔板放回酶标仪中37℃孵育。
往微管蛋白液中加100×GTP液至终浓度1mM，快速混匀。
从酶标仪中取出96孔板，快速往每个孔中加入90μL微管蛋白(加样过程中防止气泡产生)。
快速将96孔板放入酶标仪，开始读值。
2)实验结果
如图2所示，V-24显示了微管蛋白聚合的抑制能力。我们进一步发现，在体外微管蛋白聚合试验中，在5.0μM浓度下，V-24对微管蛋白聚合的抑制作用优于KX01。
实施例33化合物细胞周期抑制
1)实验方法
细胞培养：取对数生长期的细胞，按1×106cells/mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，用0,1,5,10nM的V-24,0,10,20或100nM KX01处理SKOV3细胞16h，特定时间后终止培养，进行下一步的实验。
细胞固定：800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75％乙醇，于4℃固定4h以上。
细胞染色：800rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭(PI，50ug/mL)，100ulRNaseA(100ug/mL)，4℃避光孵育60min。
流式分析：以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2～3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。
2)实验结果
如图3所示，所有的微管蛋白抑制剂都能阻止G2/M期的细胞周期。随后进行细胞周期分析，结果表明，V-24诱导的SKOV3细胞株G2/M期细胞周期阻滞优于KX01，即使在较低浓度下也是如此。这些结果还表明，V-24比KX01具有更好的抗肿瘤活性，至少部分是由于增强的微管蛋白聚合抑制活性。
实施例34化合物抑制Src信号通路
1)试验方法
在1、10和100nM的浓度下，用V-24和KX01处理SKOV3细胞24h，然后用RIPA裂解缓冲液(Beyotime Co.P0013B)根据制造商的指示提取总蛋白。用变性SDS-PAGE分离等量的蛋白质样品，然后转移到PVDF膜上，分别用抗体进行检测。主要抗体包括：Src(Cell signalingtechnology)，p-Src(Cell signaling technology)，FAK(Cell signaling technology)，p-FAK(Cell signaling technology)。
2)实验结果
通常，Src处于非活性构象。然而，Src蛋白通过SH2与FAK结合后，在蛋白激酶结构域内Tyr416/419残基的自磷酸化，Src激酶被激活。FAK进一步磷酸化，然后进行下游信号传递。KX01是一种非ATP竞争性Src激酶抑制剂，无细胞系统的激酶抑制试验不会显示出有效的Src抑制作用，因为肽底物结合位点不完整，抑制剂捕获动力学和热力学上不稳定的分离蛋白的罕见构象可能性极低。因此，在全细胞试验中，用标准的Western Blot检测Src抑制以验证先导化合物能抑制肿瘤细胞Src激酶和Src/FAK信号通路。如图4所示，实验结果证实V-24可抑制SKOV3细胞中Src磷酸化和Src/FAK信号通路。