阅读说明：本技术 一种土著型微生物菌剂及其制备方法 (Indigenous microbial agent and preparation method thereof ) 是由 王蕾 于 2021-08-11 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种土著型微生物菌剂及其制备方法,属于河湖水治理技术领域,包括以下步骤：S1：准备；S2：取样；S3：总DNA提取；S4：PCR扩增；S5：DGGE分离；S6：测序和鉴定,确定微生物群落；S7：提取已确定微生物,经过纯化,形成不同微生物纯种菌群；S8：准备；S9：不同微生物纯种菌群分别等量倾倒在若干倾倒有等量水样的无菌观察箱内并标注；S10：观察并记录,筛选出多个土著型有益微生物纯种菌群；S11：复配；S12：准备；S13：不同复合型微生物菌群分别等量倾倒在若干倾倒有等量水样的无菌观察箱内并标注；S14：观察并记录,筛选出最优土著型微生物菌群；S15：二次扩配、复壮,应用于本土水环境治理；本发明能够快速且有效的改善本体水环境的质量。(The invention discloses an indigenous microbial agent and a preparation method thereof, belonging to the technical field of river and lake water treatment and comprising the following steps: s1: preparing; s2: sampling; s3: extracting total DNA; s4: PCR amplification; s5: DGGE separation; s6: sequencing and identifying, and determining microbial community; s7: extracting determined microorganisms, and purifying to form pure microbial floras of different microorganisms; s8: preparing; s9: respectively pouring different pure microbial floras into a plurality of aseptic observation boxes with equivalent water samples in an equivalent manner, and labeling; s10: observing and recording, and screening a plurality of indigenous beneficial microorganism pure flora; s11: compounding; s12: preparing; s13: respectively pouring different compound microbial floras into a plurality of aseptic observation boxes with the same amount of poured water samples in an equal amount and labeling; s14: observing and recording, and screening out the optimal indigenous microbial community; s15: secondary expanding preparation and rejuvenation, and is applied to the treatment of the native water environment; the invention can quickly and effectively improve the quality of the body water environment.)

一种土著型微生物菌剂及其制备方法

技术领域

本发明属于河湖水治理

技术领域

，具体涉及一种土著型微生物菌剂及其制备方法。

背景技术

随着社会经济不断发展，工业污废水排放量与城市生活用水排放量不断增加，随之带来的河湖水污染日益严重，对人们的生活健康造成巨大威胁，只有从河湖水污染上着手处理改善水质环境，才能使得有限的水资源得到持续健康的循环，从而世世代代为人类的生存发展提供源泉。

现有河湖水处理改善水质环境的方法是将多种有益微生物菌群配置成菌剂，投放在河湖水中，由于不同区域的河湖水的水质不同，因此该菌剂中的有益微生物菌群对于不同区域的河湖水来说也不尽然均具有定向消解能力，因此针对性较差，导致河湖水处理改善水质环境的时间较长，且效果较差。

发明内容

为解决上述背景技术中提出的问题。本发明提供了一种土著型微生物菌剂及其制备方法，具有针对性强，能够快速且有效的改善本体水环境质量的特点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种土著型微生物菌剂及其制备方法，包括以下步骤：

S1：取用若干形状、尺寸均相同的无菌水样采集袋并进行编号；

S2：从本土水环境中的若干位置分别取待检水样，将若干待检水样分别注入不同编号的无菌水样采集袋内，在不同编号的无菌水样采集袋上分别标注待检水样的取水位置以及取水时间；

S3：将若干无菌水样采集袋内的待检水样分别进行总DNA的提取；

S4：通过聚合酶连锁反应将提取的若干总DNA中的特定序列进行扩增；

S5：将若干扩增产物分别利用DGGE进行分离；

S6：对若干DGGE条带进行测序以及鉴定分析，确定本土水环境中存在的微生物群落；

S7：从本土水环境中提取出已确定的微生物，经过筛选、提纯、驯化、扩配、复壮后，形成不同的微生物纯种菌群；

S8：取用若干形状、尺寸均相同的无菌观察箱并进行编号；

S9：从本土水环境中的相同位置采样，将水样等量倾倒在若干无菌观察箱内，将不同的微生物纯种菌群分别等量倾倒在若干无菌观察箱内，在不同编号的无菌观察箱上分别标注倾倒的微生物纯种菌群名称；

S10：观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况，根据记录的水样情况，可以得出不同的微生物纯种菌群对水样的影响，筛选出多个土著型有益微生物纯种菌群；

S11：将多个土著型有益微生物纯种菌群进行两种或多种的复配，形成多种复合型微生物菌群；

S12：取用若干形状、尺寸均相同的无菌观察箱并进行编号；

S13：从本土水环境中的相同位置采样，将水样等量倾倒在若干无菌观察箱内，将不同的复合型微生物菌群分别等量倾倒在若干无菌观察箱内，在不同编号的无菌观察箱上分别标注倾倒的复合型微生物菌群名称；

S14：观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况，将不同的复合型微生物菌群的定向消解能力与上述土著型有益微生物纯种菌群的定向消解能力进行对比，筛选出最优的土著型微生物菌群；

S15：将筛选出的最优土著型微生物菌群进行二次扩配、复壮，形成土著型微生物菌剂，应用于本土水环境的治理。

本发明中进一步的，所述步骤S3中，待检水样的总DNA提取方法可采用冷冻-解冻法、酶法、化学法、超声破碎法、液氮下研磨法中的一种或任意几种组合。

本发明中进一步的，所述步骤S6中，如果若干DGGE条带上微生物群落的鉴定分析结果相同，则确定本土水环境中最终的微生物群落，如果若干DGGE条带上微生物群落的鉴定分析结果存在差异，则需要再次从本土水环境中的不同位置分别取待测水样，按照相同步骤进行鉴定分析，以此类推，直至若干DGGE条带上的鉴定分析结果与现有鉴定分析结果不存在差异，则确定本土水环境中最终的微生物群落。

本发明中进一步的，所述步骤S10和步骤S14中，观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况采用的仪器是水质检测仪。

本发明中进一步的，所述步骤S11中，将多个土著型有益微生物纯种菌群进行两种或多种复配前需要查阅相关资料，筛选出存在冲突的土著型有益微生物纯种菌群，复配时，可剔除存在冲突的土著型有益微生物纯种菌群间的复配。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明先采用变性梯度凝胶电泳技术对本土水环境中的微生物序列进行筛选，确定本土水环境中的微生物种类，再通过提取微生物进行筛选、提纯、驯化、扩配、复壮得到多种微生物纯种菌群，以观察多种微生物纯种菌群的定向消解能力筛选出土著型有益微生物纯种菌群，后通过复配土著型有益微生物菌群，以观察复合型微生物菌群与土著型微生物纯种菌群的定向消解能力筛选出最优土著型微生物菌群，对最优土著型微生物菌群进行扩配、复壮并应用于本地河湖水治理工程中，针对性强，能够快速且有效的改善本体水环境的质量。

附图说明

图1为本发明土著型微生物菌剂及其制备方法的流程图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

请参阅图1，本发明提供以下技术方案：一种土著型微生物菌剂及其制备方法，包括以下步骤：

S1：取用若干形状、尺寸均相同的无菌水样采集袋并进行编号；

S2：从本土水环境中的若干位置分别取待检水样，将若干待检水样分别注入不同编号的无菌水样采集袋内，在不同编号的无菌水样采集袋上分别标注待检水样的取水位置以及取水时间；

S3：将若干无菌水样采集袋内的待检水样分别进行总DNA的提取；

S4：通过聚合酶连锁反应将提取的若干总DNA中的特定序列进行扩增；

S5：将若干扩增产物分别利用DGGE进行分离；

S6：对若干DGGE条带进行测序以及鉴定分析，确定本土水环境中存在的微生物群落；

S7：从本土水环境中提取出已确定的微生物，经过筛选、提纯、驯化、扩配、复壮后，形成不同的微生物纯种菌群；

S8：取用若干形状、尺寸均相同的无菌观察箱并进行编号；

S9：从本土水环境中的相同位置采样，将水样等量倾倒在若干无菌观察箱内，将不同的微生物纯种菌群分别等量倾倒在若干无菌观察箱内，在不同编号的无菌观察箱上分别标注倾倒的微生物纯种菌群名称；

S10：观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况，根据记录的水样情况，可以得出不同的微生物纯种菌群对水样的影响，筛选出多个土著型有益微生物纯种菌群；

S11：将多个土著型有益微生物纯种菌群进行两种或多种的复配，形成多种复合型微生物菌群；

S12：取用若干形状、尺寸均相同的无菌观察箱并进行编号；

S13：从本土水环境中的相同位置采样，将水样等量倾倒在若干无菌观察箱内，将不同的复合型微生物菌群分别等量倾倒在若干无菌观察箱内，在不同编号的无菌观察箱上分别标注倾倒的复合型微生物菌群名称；

S14：观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况，将不同的复合型微生物菌群的定向消解能力与上述土著型有益微生物纯种菌群的定向消解能力进行对比，筛选出最优的土著型微生物菌群；

S15：将筛选出的最优土著型微生物菌群进行二次扩配、复壮，形成土著型微生物菌剂，应用于本土水环境的治理。

具体的，步骤S3中，待检水样的总DNA提取方法可采用冷冻-解冻法、酶法、化学法、超声破碎法、液氮下研磨法中的一种或任意几种组合。

具体的，步骤S6中，如果若干DGGE条带上微生物群落的鉴定分析结果相同，则确定本土水环境中最终的微生物群落，如果若干DGGE条带上微生物群落的鉴定分析结果存在差异，则需要再次从本土水环境中的不同位置分别取待测水样，按照相同步骤进行鉴定分析，以此类推，直至若干DGGE条带上的鉴定分析结果与现有鉴定分析结果不存在差异，则确定本土水环境中最终的微生物群落。

具体的，步骤S10和步骤S14中，观察并记录若干无菌观察箱内水样的情况采用的仪器是水质检测仪。

具体的，步骤S11中，将多个土著型有益微生物纯种菌群进行两种或多种复配前需要查阅相关资料，筛选出存在冲突的土著型有益微生物纯种菌群，复配时，可剔除存在冲突的土著型有益微生物纯种菌群间的复配。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。