一种细胞保存液及其使用方法
阅读说明：本技术 一种细胞保存液及其使用方法 (Cell preservation solution and using method thereof ) 是由 赵国栋 熊尚岷 于 2020-12-30 设计创作，主要内容包括：本发明属于生物医学领域,具体涉及一种细胞保存液及其使用方法,所述的保存液含有核酸稳定剂0.1％-10％、渗透压稳定剂0.05-1％、pH稳定剂0.01～0.1％、冻干保护剂0.05～1％、其余为水。本发明所述的细胞保存液具有更优的时间稳定性和温度稳定性,对于无法当天送达检测地点且缺乏有效运输设备的地区可以起到节约样本采集费用,加速核酸检测效率。(The invention belongs to the field of biomedicine, and particularly relates to a cell preservation solution and a using method thereof, wherein the preservation solution contains 0.1-10% of a nucleic acid stabilizer, 0.05-1% of an osmotic pressure stabilizer, 0.01-0.1% of a pH stabilizer, 0.05-1% of a freeze-drying protective agent and the balance of water. The cell preservation solution has better time stability and temperature stability, and can save sample collection cost and accelerate nucleic acid detection efficiency for areas which cannot be delivered to a detection site on the same day and lack effective transportation equipment.)
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种细胞保存液及其使用方法。
背景技术
确诊金标准及普筛金标准均为核酸检测的单链RNA病毒的RNA稳定性较差，尤其是在室温下及长时间保存的稳定性较差。而涉及到病毒或核酸检测的标本应置于4℃冰箱保存，保存时间不超过24h。由此可见，样本采集保存液对后续检测结果的灵敏度有着极大的影响。目前核酸检测的灵敏度在 30-50％左右，为了避免假阴性，需要至少2次以上的检测才能确诊；因此，在一定程度限制了核酸检测能力，在人力物力上也消耗极其严重。对于无法当天送达检测地点且缺乏有效运输设备的地区而言，急需一种可在时间稳定性和温度稳定性上都更优的保存液。而能够保证更优的室温稳定性的保存液对于样本采集节约费用，加速核酸检测效率也具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种细胞保存液及其使用方法，本发明所述的细胞保存液具有更优的时间稳定性和温度稳定性。
为实现本发明的目的，本发明采用的技术方案是：
一种细胞保存液，所述的保存液含有以下质量百分比的组分：核酸稳定剂 0.1％-10％、渗透压稳定剂0.05-1％、pH稳定剂0.01～0.1％、冻干保护剂0.05～1％、其余为水。
进一步的，所述核酸稳定剂为十二烷基硫酸钠、异硫氰酸胍、乙二胺四乙酸中的一种或多种。
进一步的，所述渗透压稳定剂为氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠和磷酸二氢钾中的一种或多种。
进一步的，所述pH稳定剂为Tris-HCl。
进一步的，所述冻干保护剂为蔗糖、葡萄糖、海藻糖中的一种或多种。
进一步的，所述细胞保存液还含有抗生素，所述抗生素的浓度为20～30 ug/mL。
进一步的，所述抗生素为卞卡青霉素。
进一步的，所述抗生素的浓度为20～30ug/mL。
本发明还提供上述细胞保存液在核酸采样中的应用，所述核酸为脱氧核糖核酸和核糖核酸。
本发明还提供一种细胞保存液使用方法，使用采样拭子采样后浸入细胞保存液，室温保存运输时间不超过7天，4摄氏度保存时间不超28天，超过28天保存放置于-80℃。
相对于现有技术，本申请取得了以下有益效果：
本发明所述的细胞保存液具有更优的时间稳定性和温度稳定性，对于无法当天送达检测地点且缺乏有效运输设备的地区可以起到节约样本采集费用，加速核酸检测效率，本发明还可同时用于DNA和RNA的保存液，且在后续检测中，无需裂解步骤，可直接进行核酸纯化，加速检测流程。
附图说明
图1为RNA在37℃保存7天稳定性；
图2为DNA在4℃和室温保存28天稳定性。
图3为本发明保存液与CytoPrep保存液和Pierce保存液保存RNA效果对比；
图4为不同组分保存液的保存效果对比。
具体实施方式
实施例1
使用1％十二烷基硫酸钠、0.1％异硫氰酸胍、0.1％乙二胺四乙酸、0.05％氯化钠、0.05％氯化钾、0.05％磷酸氢二钠、0.05％磷酸二氢钾、0.05％Tris-HCl缓冲液(pH＝8.0),0.1％蔗糖和25ug/ml卞卡青霉素配制成细胞保存液。对新鲜的 HeLa细胞系放置于细胞保存液保存在37℃0天，1天，3天，7天的样本，采用凯杰公司的RNeasy Mini kit提取RNA后，进行荧光定量PCR检测了ACTB、 GADPH、IL1B、TLR4等四种基因，每组样本重复3次。如图1所示，新鲜的 RNA和经细胞保存液处理的RNA在37℃下保存0-7天内，4个基因的RNA检测Ct值无明显变化。
实施例2
使用1％异硫氰酸胍、0.1％乙二胺四乙酸、0.05％氯化钠、0.05％氯化钾、0.05％磷酸氢二钠、0.05％磷酸二氢钾、0.01％Tris-HCl缓冲液(pH＝8.0),0.1％葡萄糖和 25ug/ml卞卡青霉素配制成细胞保存液。采用苏州国科闻普生物科技有限公司高危型HPV体外分子诊断试剂盒，对新鲜的HeLa细胞系和经细胞保存液保存在 4℃和室温(RT)下0天，7天，14天，21天和28天的样本，采用苏州国科闻普生物科技有限公司基因组提取试剂盒提取DNA后，进行荧光定量PCR检测，每组样本重复3次。
如图2所示，新鲜的DNA和经细胞保存液处理的DNA在4℃和室温保存 28天后，Ct值无明显差异，达到保护DNA稳定性标准。
实施例3
使用1％十二烷基硫酸钠、0.1％异硫氰酸胍、0.1％乙二胺四乙酸、0.05％氯化钠、0.05％氯化钾、0.05％磷酸氢二钠、0.05％磷酸二氢钾、0.01％Tris-HCl缓冲液(pH＝8.0)、0.1％蔗糖和25ug/ml卞卡青霉素配制成细胞保存液。对新鲜的 HeLa细胞系放置于细胞保存液保存在37℃0天，1天，3天，7天的样本，同时采用VersaBio公司基于醇基的CytoPrep保存液和赛默飞公司的Pierce保存液同样保存鲜的HeLa细胞系放置于细胞保存液保存在37℃0天，1天，3天，7 天。采用凯杰公司的RNeasy Mini kit提取RNA后，进行荧光定量PCR检测了 ACTB、GADPH、IL1B、TLR4等四种基因，每组样本重复3次。如图3所示，新鲜的RNA和经本发明细胞保存液处理的RNA在37℃下保存0-7天内，4个基因的RNA检测Ct值无明显变化，但是经CytoPrep保存液和Pierce保存液处理的RNA在第一天就发生了明显的降解，Ct值延后了近10个，也就是说降解后的RNA仅剩余原来的1/1000。
实施例4
使用0.1％异硫氰酸胍、0.1％乙二胺四乙酸、0.05％磷酸氢二钠、0.05％磷酸二氢钾、0.1％蔗糖和25ug/ml卞卡青霉素配制成组分1，1％十二烷基硫酸钠、 0.05％氯化钠、0.05％氯化钾、0.01％Tris-HCl缓冲液(pH＝8.0)配制成组分2，再将组分1和组分2混合之后配制本发明细胞保存液(合并组分)。对新鲜的HeLa 细胞系放置于组分1、组分2、细胞保存液(合并组分)保存在室温7天。采用凯杰公司的RNeasy Mini kit提取RNA后，进行荧光定量PCR检测了ACTB基因，每组样本重复3次。如图4所示，组分1和组分2虽然可以一定程度保护 RNA，但是有一定的降解，剩余DNA为原来的1/10，但是将组分1和组分2 混合之后，Ct仅有轻微延迟。
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