Cas蛋白抑制剂的组合物及应用

文档序号:704490 发布日期:2021-04-13 浏览:10次 >En<

阅读说明:本技术 Cas蛋白抑制剂的组合物及应用 (Cas protein inhibitor composition and application ) 是由 刘佳 姜标 马培翔 杨光 于 2019-08-29 设计创作,主要内容包括:本发明提供了能够结合并抑制Cas蛋白与核酸分子结合的能力的氨基酸序列,从而抑制所述Cas蛋白在基因组编辑中的功能。此类Cas蛋白抑制剂可由主要外壳蛋白(G8P)、所述G8P的胞外区(G8P-(EX))或生物等效物组成,可用于改善基于Cas蛋白的基因组编辑过程的特异性。(The present invention provides amino acid sequences capable of binding to and inhibiting the ability of a Cas protein to bind to a nucleic acid molecule, thereby inhibiting the function of the Cas protein in genome editing. Such Cas protein inhibitors may consist of a major coat protein (G8P), the extracellular region of said G8P (G8P) EX ) Or bioequivalent compositions, useful for improving the specificity of Cas protein-based genome editing processes.)

Cas蛋白抑制剂的组合物及应用

本申请要求2018年8月29日提交的PCT/CN2018/102908的优先权,其全文通过引用并入本文。

背景技术

基因组编辑可用于修正隐藏在遗传疾病后的驱动突变,从而能够完全治愈在活生物体中的这些疾病;基因组编辑还可用于工程化作物的基因组,从而提高作物的产量并赋予作物对环境污染或病原体感染的抗性;同样,通过精确的基因组编辑进行微生物基因组转化对可再生生物能源的发展具有重要意义。

因其无与伦比的编辑效率、便利性以及在活生物体中的潜在应用,CRISPR/Cas(规律间隔成簇短回文重复序列/CRISPR相关蛋白)系统已成为最强大的基因组编辑工具。在向导RNA(guideRNA,gRNA)的引导下,Cas核酸酶可以在各种细胞(细胞系和活生物体的细胞)的靶基因组位点产生DNA双链断裂(DoubleStrandBreak,DSB)。然后通过内源性DNA修复系统修复这些DSB,可用于执行所需的基因组编辑。

最近开发了将CRISPR/Cas系统与APOBEC(载脂蛋白B mRNA编辑酶,催化多肽样)胞嘧啶脱氨酶家族整合的碱基编辑器(BaseEditor,BE),其大大提高了CRISPR/Cas9介导的基因修正的效率。通过与Cas9切口酶(nCas9)或无催化活性的Cas9(dCas9)融合,可以将大鼠APOBEC1(rA1)的胞嘧啶(C)脱氨基活性定向到基因组中的靶碱基,并在这些碱基处催化C替换为胸腺嘧啶(T)。

在使用基因组编辑方法的过程中,会产生非特异性和非预期的(“脱靶”)遗传修饰。例如,在CRISPR/Cas系统中,如果复合物不结合靶序列(通常是同源序列和/或错配耐受的结果),它们将切割脱靶的DSB并引起非特异性的遗传修饰。脱靶效应包括不需要的点突变、缺失、插入、倒位和易位。需要开发减少此类脱靶基因修饰的方法。

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