一种快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法

文档序号：753711 发布日期：2021-04-06 浏览：34次 >En<

阅读说明：本技术 一种快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法 (Method for rapidly separating triterpene and sterol in ganoderma lucidum alcohol extract ) 是由蔡鸿飞张琴许文东袁诚刘菊妍杨阳刘春芳于 2020-12-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及天然药物提取分离领域,公开了一种快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法。该方法采用聚酰胺树脂装柱,用特定比例的溶剂进行洗脱,得到灵芝醇提物中三萜和甾醇洗脱液,将洗脱液浓缩干燥即得灵芝三萜和灵芝甾醇。灵芝甾醇与灵芝三萜结构相似,极性相似,均易溶于有机溶剂,分离难度较大,传统制备工艺繁琐、生产成本高。针对现有技术的不足,本发明提供了一种快速分离灵芝三萜和甾醇成分的方法,操作十分简便,分离准确度高,重现性好,且安全性高,成本较低,适合工业化生产。(The invention relates to the field of natural medicine extraction and separation, and discloses a method for quickly separating triterpene and sterol from a ganoderma lucidum alcohol extract. The method adopts polyamide resin column packing, and uses a solvent with a specific proportion for elution to obtain triterpenoid and sterol eluent in the ganoderma alcohol extract, and the eluent is concentrated and dried to obtain ganoderma triterpenoid and ganoderma sterol. The ganoderan and ganoderan have similar structures and polarities, are easy to dissolve in organic solvents, are difficult to separate, and have complicated traditional preparation process and high production cost. Aiming at the defects of the prior art, the invention provides a method for quickly separating ganoderma triterpene and sterol components, which has the advantages of simple and convenient operation, high separation accuracy, good reproducibility, high safety and lower cost and is suitable for industrial production.)

技术领域

本发明涉及天然药物提取分离领域，具体涉及一种快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法。

背景技术

灵芝(Ganoderma lucidum)是一种名贵的药用真菌，属于担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝和紫芝的总称，始载于《神农本草经》，具有补中益气、滋阴强壮、扶正固本、延年益寿等功效。灵芝的成分丰富，包括灵芝多糖、三萜及甾醇成分、核苷、蛋白质和微量元素等，其中灵芝三萜和甾醇成分以及灵芝多糖是最主要的活性物质。现代医药学研究灵芝及其提取物发现，灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤、保肝、降血糖、抑制血管紧张素、抗氧化等功效；灵芝甾醇具有增强人体抵抗疾病的能力，降低血液中的胆固醇浓度，预防前列腺疾病等功效。

目前国内外对灵芝多糖和灵芝三萜的研究比较多，灵芝多糖易溶于水、酸、碱、盐等溶液而难溶于醇、醚、丙酮等有机溶剂，灵芝三萜难溶于水而易溶于有机溶剂，因此灵芝多糖和灵芝三萜较容易分离，其分离工艺比较简单也比较成熟。但灵芝甾醇与灵芝三萜结构相似，极性相似，均易溶于有机溶剂，分离难度较大。灵芝醇提物中主要成分为灵芝三萜和灵芝甾醇，目前对灵芝甾醇类物质的研究不够深入，尤其是对灵芝甾醇类物质分离研究报道非常少，一是因为灵芝甾醇含量相对较低，二是传统制备工艺繁琐、生产成本高，因此，亟需一种简便的方法可以快速分离灵芝三萜和灵芝甾醇。

灵芝三萜和甾醇的提取分离方法主要是有机溶剂浸提法、大孔树脂提取法以及超声波处理法。中国专利CN1629179A采用乙醇回流提取再碱化得到灵芝甾醇类化合物，中国专利CN1560072通过采用超临界提取分离得到灵芝三萜和灵芝多糖成分，中国专利CN101530436A用超声波、酶提等技术提取分离得到灵芝三萜和灵芝多糖成分。目前暂无同时提取分离得到灵芝三萜和灵芝甾醇成分的相关专利，有文献报道采用高压超临界CO₂提取灵芝三萜和甾醇，但所得提取物为混合物，未能将灵芝三萜和灵芝甾醇分离，且高压超临界CO2提取方法所需设备投入较大、操作难度和生产成本也较高。

发明内容

本发明的目的在于，针对现有技术对灵芝三萜和甾醇分离难度较大、工艺繁琐、生产成本高等不足，提供了一种简单快速的方法，可同时提取分离灵芝醇提物中三萜和甾醇成分。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法，采用聚酰胺树脂装柱，以有机溶剂的水溶液对灵芝醇提物进行洗脱，即可使三萜和甾醇分离。

优选的，所述有机溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮中的一种或多种。

优选的，所述聚酰胺树脂装柱包括如下步骤：

A、预浸泡：将所述聚酰胺树脂原料用所述有机溶剂进行浸泡，超声或搅拌除去气泡，浸泡时间为10h以上；

B、装柱：将步骤A浸泡后的所述聚酰胺树脂装柱，用水洗柱至无味，获得聚酰胺树脂柱；

C、上样：取所述灵芝醇提物和步骤A浸泡后的所述聚酰胺树脂按质量比1:1～2拌样，之后蒸干，填装到所述聚酰胺树脂柱中完成上样，上样量不超过2.5g/100ml。

预浸泡的目的一是使填料在溶剂中充分膨胀，二是溶解填料表面的杂质(蜡质)。浸泡时间未完全固定，一般根据填料多少进行预估，通常浸泡10h以上达到可以达到使用效果。采用湿法装柱，水洗是为了除去有机溶剂以及有机溶剂中溶解的杂质，避免影响聚酰胺树脂分离效果。采用干法上样，灵芝醇提物和聚酰胺树脂搅拌均匀后，将溶剂蒸干，填装到聚酰胺树脂柱中。这样湿法装柱与干法上样相结合的方法，可以最大程度地保证填料质量与上样质量，保证了后续三萜和甾醇的分离。

优选的，所述洗脱包括如下步骤：

a、采用40％～60％的所述有机溶剂的水溶液洗柱，洗3～5倍柱体积，得到所述三萜的洗脱液；

b、采用80％～90％的所述有机溶剂的水溶液洗柱，洗3～5倍柱体积，得到所述甾醇的洗脱液。

优选的，在步骤a中，对所述三萜的洗脱液进行蒸干，获得所述三萜。

优选的，在步骤b中，对所述甾醇的洗脱液进行蒸干，获得所述甾醇。

优选的，所述蒸干为减压干燥、喷雾干燥、冷冻干燥中的一种或多种。

优选的，所述聚酰胺树脂装柱的柱直径与填充柱高之比为1:5～20。

优选的，所述聚酰胺树脂为100-400目。

一种如上述快速分离灵芝醇提物中三萜和甾醇的方法获得的三萜和甾醇产品。

灵芝三萜和甾醇均是系列物质而非单一化合物，这也加大了两者的分离难度。而应用本发明能快速地将两类物质分开，为单独研究和应用这两类物质提供技术支持。

与现有技术相比较，实施本发明，具有如下有益效果：

1、针对现有技术的不足，快速分离灵芝三萜和甾醇成分，操作十分简便，分离准确度高；

2、该方法分离完全，重现性好，成本较低，安全性高，适合工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1的灵芝三萜和甾醇提取分离结果图；

图2为本发明实施例2的灵芝三萜和甾醇提取分离结果图；

图3为本发明实施例3的灵芝三萜和甾醇提取分离结果图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

S1、取聚酰胺树脂(100-200目)适量，加入乙醇浸没，超声10min除去气泡，搅拌后静置10h；

S2、装柱：选取玻璃层析柱，柱直径为2.6cm，填充至柱高为20cm，柱径比为1:7，并用去离子水洗脱至无醇味；

S3、取灵芝子实体醇提物1.0g，和步骤S1中浸泡后的聚酰胺树脂按照质量比1:1拌样，在蒸发皿中蒸干乙醇，然后上样；

S4、先采用50％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液A；再采用90％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液B；

S5、对洗脱液A和洗脱液B进行色谱检测，结果如图1所示，从图1可以看出灵芝三萜类成分在洗脱液A中被完全洗脱出来，灵芝甾醇类成分在洗脱液B中被完全洗脱出来；将洗脱液A减压旋蒸、干燥得到灵芝三萜成分；将洗脱液B减压旋蒸、干燥得到灵芝甾醇成分；

S6、取适量三萜成分与香草醛-冰醋酸反应，溶液呈紫色，与Liebermann-Burchard试剂反应，无甾醇颜色反应；取适量灵芝甾醇成分与Liebermann-Burchard试剂反应，溶液呈绿色，与香草醛-冰醋酸反应，无三萜颜色反应；表明所得灵芝三萜和甾醇成分分离完全且无交叉。

实施例2

S1、取聚酰胺树脂(100-200目)适量，加入乙醇浸没，超声10min除去气泡，搅拌后静置15h；

S2、装柱：选取玻璃层析柱，柱直径为5.5cm，填充至柱高为30cm，柱径比为1:5，并用去离子水洗脱至无醇味；

S3、取灵芝子实体醇提物5.0g，和步骤S1中浸泡后的聚酰胺树脂按照质量比1:1.5拌样，在蒸发皿中蒸干乙醇，然后上样；

S4、先采用55％的乙醇洗柱，洗5倍柱体积，得到洗脱液A；再采用85％的乙醇洗柱，洗5倍柱体积，得到洗脱液B；

S5、对洗脱液A和洗脱液B进行色谱检测，结果如图2所示，从图2可以看出灵芝三萜类成分在洗脱液A中被完全洗脱出来，灵芝甾醇类成分在洗脱液B中被完全洗脱出来；将洗脱液A减压旋蒸、干燥得到灵芝三萜成分；将洗脱液B减压旋蒸、干燥得到灵芝甾醇成分；

实施例3

S1、取聚酰胺树脂(100-200目)适量，加入乙醇浸没，搅拌除去气泡，搅拌后静置12h；

S2、装柱：选取玻璃层析柱，柱直径为6cm，填充至柱高为36cm，柱径比为1:6，并用去离子水洗脱至无醇味；

S3、取灵芝子实体醇提物10.0g，和步骤S1中浸泡后的聚酰胺树脂按照质量比1:1拌样，在蒸发皿中蒸干乙醇，然后上样；

S4、先采用45％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液A；再采用80％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液B；

S5、对洗脱液A和洗脱液B进行色谱检测，结果如图3所示，从图3可以看出灵芝三萜类成分在洗脱液A中被完全洗脱出来，灵芝甾醇类成分在洗脱液B中被完全洗脱出来；将洗脱液A减压旋蒸、干燥得到灵芝三萜成分；将洗脱液B减压旋蒸、干燥得到灵芝甾醇成分；

实施例4：

S1、取聚酰胺树脂(100-200目)适量，加入乙醇浸没，搅拌除去气泡，搅拌后静置12h；

S2、装柱：选取玻璃层析柱，柱直径为10cm，填充至柱高为70cm，柱径比为1:7，并用去离子水洗脱至无醇味；

S3、取灵芝子实体醇提物50.0g，和步骤S1中浸泡后的聚酰胺树脂按照质量比1:1拌样，在蒸发皿中蒸干乙醇，然后上样；

S4、先采用50％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液A；再采用90％的乙醇洗柱，洗3倍柱体积，得到洗脱液B；