含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用

文档序号:80629 发布日期:2021-10-08 浏览:27次 >En<

阅读说明:本技术 含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用 (Aspergillus flavus toxigenic bacteria reference substance containing aflatoxin early warning molecules, and preparation method and application thereof ) 是由 李培武 张奇 毛劲 白艺珍 姜俊 于 2021-06-01 设计创作,主要内容包括:本发明公开了含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质及其应用。其由黄曲霉产毒菌制备获得,黄曲霉产毒菌产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01,黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质通过检测标定其中AFT-YJFZ01的含量,作为参考物质使用。可用于鉴别比较农田土壤、农产品及饲料等产品的黄曲霉毒素污染风险水平;稳定性好,货架期长,易操作,实用性强,容易推广应用。(The invention discloses an aspergillus flavus toxigenic bacteria reference substance containing aflatoxin early warning molecules and application thereof. The aflatoxin-producing bacterium reference substance is prepared from aflatoxin-producing bacteria, wherein the aflatoxin-producing bacteria produce aflatoxin early warning molecules AFT-YJFZ01, the amino acid sequence of the aflatoxin early warning molecules AFT-YJFZ01 is shown in SEQ ID NO.1, and the aflatoxin-producing bacterium reference substance containing the aflatoxin early warning molecules is used as a reference substance by calibrating the content of AFT-YJFZ01 in the aflatoxin-producing bacterium reference substance through detection. The method can be used for identifying and comparing the aflatoxin pollution risk level of products such as farmland soil, agricultural products, feed and the like; good stability, long shelf life, easy operation, strong practicability and easy popularization and application.)

含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方 法及其应用

技术领域

本发明涉及含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用。

背景技术

黄曲霉毒素毒性强、危害大,是污染食品种类最多的污染物,近年总体呈现污染加重趋势,严重威胁食品安全和人民健康。黄曲霉毒素是自然界毒性最强的一类真菌毒素,其中黄曲霉毒素B1是国际癌症研究组织(International Agency for Research on Cancer,IARC)认定的I类致癌物,已引发过多起人畜群体中毒事件,成为肝癌病例高发的主要原因之一。根据近5年Web of Science检索数据统计:黄曲霉毒素污染食品及原料种类超过了110种,高居污染物首位。

对黄曲霉毒素污染产品实施预警是国际通行做法。现有黄曲霉毒素预警方法主要是基于黄曲霉毒素检测技术建立,用于毒素污染水平评价或产后污染程度与消费风险评估,一旦检测发现,污染往往已经发生,难以满足事前预警与指导防控的迫切要求。欧盟食品和饲料快速预警系统(Rapid Alert System for Food and Feed,RASFF)利用限量标准与检测获得食品与饲料中黄曲霉毒素含量,对各国输入欧盟的食品与饲料进行快速预警。美国研究机构基于黄曲霉毒素检测技术与污染监测数据,研究建立了多元罗吉斯蒂回归分析和叠加高斯处理等预警模型,主要用于评估产后玉米等农产品真菌毒素污染程度与消费风险。

已有研究表明,黄曲霉毒素的产毒真菌不同菌株之间产毒力差异很大,从不产毒真菌菌株一直到高产毒力菌株都有分布。以花生中分离的黄曲霉菌株为例,有相当一部分黄曲霉菌株缺失了产毒基因或产毒关键调控基因,它们不具有产生黄曲霉毒素的能力;有约不到20%的黄曲霉菌株为强产毒力菌株。如何在黄曲霉毒素污染事前评估预警风险?这一直是本领域的世界性难题。

综合国内外近二十年研究进展,当前黄曲霉毒素早期预警分子不明是根本原因。针对这一瓶颈难题,发明人团队经过十多年攻关研究,构建了我国黄曲霉毒素产毒菌株库、菌株产毒力数据库、强产毒菌株蛋白质抗体库,建立了用于发掘黄曲霉菌株产毒力指示分子的抗体库方法,发现了黄曲霉毒素的产毒真菌产毒力指示分子,并首次明确其具有黄曲霉毒素污染事前预警功能,因此成为黄曲霉毒素预警分子。研究发现该预警分子发生水平与黄曲霉毒素污染水平之间存在显著的正相关关联性,由此利用此关联性,进一步建立了黄曲霉毒素分子预警方法。然而,在实际应用中我们发现黄曲霉毒素预警分子纯品用作标准物质时存在稳定性较差容易引发检测结果偏离的问题。进一步,我们为了通过准确检测黄曲霉毒素预警分子以实现其预警功能,本发明提供了含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质及其制备方法,并建立了参考物质的标准曲线,用于黄曲霉毒素污染风险预测预警,攻克了上述难题。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足,提供含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用,其用于预测预警黄曲霉毒素风险水平,容易推广应用。

为解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案为:

含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质,其由黄曲霉产毒菌制备获得,黄曲霉产毒菌产黄曲霉毒素预警分子,黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质通过检测标定其中AFT-YJFZ01的含量,作为参考物质使用。

按上述方案,所述的含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质中的AFT-YJFZ01含量通过采用黄曲霉毒素产毒菌产毒力预警分子AFT-YJFZ01的氨基酸序列或其中的部分序列,通过常规抗体制备流程,制备出与该蛋白质对应的抗体,并实现对该预警分子蛋白质的定量检测,也可以通过其他检测技术手段实现对这些与该黄曲霉毒素预警分子蛋白质有一一对应关系的定量检测,从而达到上述用途,部分序列是指与该黄曲霉毒素预警分子蛋白质有一一对应关系的全序列中的一部分。

按上述方案,所述的黄曲霉产毒菌优选为产毒力经鉴定不小于10μg/kg的黄曲霉产毒菌。可采用经NY/T 2311—2013标准方法进行产毒力测试。

上述含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的制备方法,包括:将黄曲霉产毒菌接种到察氏培养基中培养,收集长成的菌丝,用液氮研磨菌丝至粉末状,再将菌丝粉末置于水或常规缓冲液中,随后用高压均质仪裂解菌丝粉末,获得黄曲霉产毒菌裂解液,裂解液经过脱盐处理,并通过检测标定其中预警分子AFT-YJFZ01的含量,得到黄曲霉产毒菌参考物质得到。

按上述方案,上述方法还包括将脱盐后裂解液,再通过常规的冷冻干燥去除水分,获得黄曲霉产毒菌裂解液干物质,通过检测标定黄曲霉产毒菌裂解液干物质中预警分子AFT-YJFZ01的含量。

黄曲霉产毒菌参考物质的应用:

提供一种测定样品中黄曲霉产毒菌参考物质含量的方法,以黄曲霉产毒菌参考物质建立标准曲线,测定样品中黄曲霉产毒菌参考物质含量,进一步地,结合黄曲霉产毒菌参考物质中AFT-YJFZ01的黄曲霉毒素预警分子标定含量,用于黄曲霉产毒菌产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量的检测。

按上述方案,上述应用包括:标定黄曲霉产毒菌参考物质中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量;建立标准曲线,测定样品中黄曲霉产毒菌参考物质含量。

按上述方案,上述标定黄曲霉产毒菌参考物质中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量为通过黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01检测方法标定上述黄曲霉产毒菌裂解液或者上述黄曲霉产毒菌裂解液干物质中AFT-YJFZ01含量,具体的过程为:

a制备黄曲霉产毒菌参考物质溶液,加入到孔底包被有黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板孔中,反应,洗板;

b加入黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体反应,洗板;

c加入与黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体,反应,洗板;

d加入显色液反应;加入终止液,酶标仪读取并计算待测样品中AFT-YJFZ01的浓度;

用系列浓度的起标准物质作用的黄曲霉毒素产毒菌产毒力预警分子AFT-YJFZ01纯品溶液,替换待测液,用于制作标准曲线,得到黄曲霉产毒菌参考物质中AFT-YJFZ01的浓度,标定黄曲霉产毒菌参考物质中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量。

按上述方案,所述的应用方法为:间接非竞争双抗体夹心ELISA法,荧光免疫层析法或其他可以达到检测目的的方法。

所述非竞争双抗体夹心ELISA法为:

a制备待测样品待测液,加入到孔底包被有黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体的酶标板孔中,反应,洗板;

b加入黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体反应,洗板;

c加入与黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体,反应,洗板;

d加入显色液反应;加入终止液,酶标仪读取并计算待测样品中AFT-YJFZ01的浓度;

以系列浓度的黄曲霉产毒菌参考物质替换待测液,用于制作标准曲线,用于计算得到待测样品中黄曲霉产毒菌参考物质的含量。计算得到待测样品中黄曲霉产毒菌参考物质的含量,可结合黄曲霉产毒菌参考物质中AFT-YJFZ01的黄曲霉毒素预警分子标定含量,得到样品中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量,预测预警黄曲霉毒素污染风险水平。

所述的荧光免疫层析法为:

提供黄曲霉毒素风险预警智能感知卡,包括黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体、信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、底板、羊抗兔抗体,底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫,相邻各垫在连接处交叠连接,所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫,硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线,所述的质控线上包被有羊抗兔抗体,所述的检测线上包被有黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或者黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体,所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体装载在样品垫上,或者单独装载,所述的黄曲霉毒素预警分子是指AFT-YJFZ01肽,其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示;

用常规察氏培养基培养并制备待鉴别菌株或待鉴别样品的待测液,然后即可用上述黄曲霉毒素风险预警智能感知卡测定黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量,具体方法为:样品垫上装载有信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体时,将待鉴菌株或待鉴别样品的待测液加到黄曲霉毒素风险预警智能感知卡的样品垫上,反应一段时间,读取分析结果;

样品垫上没有装载信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体,将待鉴菌株或待鉴别样品的待测液加到信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体中,然后将黄曲霉毒素风险预警智能感知卡插入待鉴菌株或待鉴别样品的待测液中,反应一段时间,读取分析结果。

按上述方案,所述的信号材料是指常规的铕乳胶微球、金纳米颗粒以及其他可达到类似效果的标记材料,均可通过商业购买获得。

按上述方案,所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体,是指信号材料通过常规标记方法与黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体发生偶联以后的产物。

所述的样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、底板、羊抗兔抗体为免疫试纸条常规材料,均可通过商业购买获得。

上述待鉴别样品液的制备:待鉴别样品培养,获得待鉴别样品的待测液;具体可为:称量待鉴别样品,转移至无菌水中,室温震荡至均匀,制成待测样品稀释液,取10-1000μL样品稀释液加在含6-600mL常规沙氏液体培养基中,置于15-35℃下200±50rpm震荡培养,培养6-24h后取样,形成待鉴别样品的待测液。

所述的产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的黄曲霉产毒菌可以为公开文献《中国典型花生产区黄曲霉菌分布、产毒力与侵染研究》——中国农业科学院硕士学位论文,作者张杏,第33页——公布的产毒菌株JSnt-1、HuNdx-7、HBHA-8-17以及3.4408黄曲霉菌标准菌株,也可采用其他产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的黄曲霉产毒菌株,均可达到类似功效。

按上述方案,所述的样品可以为农田土壤、农产品、饲料等。将样品粉碎后转移至水或样品稀释液中,常规方法匀浆后静置,取上清即可制成待测样品待测液。

所述的样品稀释液可为含有0.1%山梨醇和绵糖的0.01mol/L磷酸盐缓冲液,配制方法为:山梨醇与糖各0.5g、NaCL 4.0g、Na2HPO4·12H2O 1.45g、KCL 0.1g、KH2PO4 0.1g,加入去离子水定容至500mL。

所述的预测预警黄曲霉毒素污染风险水平,是指测定实际样品中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01或含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的含量,其浓度越高,则说明黄曲霉毒素污染风险越高。

本发明有益效果在于:

1.可用于建立检测黄曲霉毒素预警分子以及检测含有黄曲霉毒素预警分子的产毒黄曲霉菌的标准曲线。

2.可用于鉴别比较农田土壤、农产品及饲料等产品的黄曲霉毒素污染风险水平。

3.稳定性好,货架期长,易操作,实用性强,容易推广应用;

4.对促进农业产业高质量发展与保障食品安全具有重要意义。

附图说明

图1为利用含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质建立黄曲霉毒素风险预警标准曲线。

具体实施方式

实施例1黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的制备

按照如下配方配置察氏培养基:3%(w/v)蔗糖,0.3%(w/v)NaNO3,0.1%(w/v)K2HPO4,0.05%(w/v)MgSO4·7H2O,0.05%(w/v)KCl,0.001%(w/v)FeSO4,pH6.5,配置获得察氏培养基。随机选取公开文献《中国典型花生产区黄曲霉菌分布、产毒力与侵染研究》——中国农业科学院硕士学位论文,作者张杏,第33页——公布的产毒菌株HLJ-1、HeNZY-2、HuBha-24、JXZS-29-2、LNct-6、GXfc-34、GDZJ-122-2、JSnt-1、HuNdx-7、HBHA-8-17等10株,分别接种到上述察氏培养基中,于28℃200rpm/min培养5天后,常规方法充分匀浆、破碎细胞,再用常规的蛋白质纯化系统、蛋白质电泳、免疫亲和等方法,即可纯化获得黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01。试验结果表明,上述产毒菌株培养物中均可以制备得到AFT-YJFZ01,在同样培养条件下,HBHA-8-17制备得到AFT-YJFZ01的量最多,而HLJ-1制备得到AFT-YJFZ01的量最少。

所述的免疫亲和方法,是利用黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体,通过常规方法制备成免疫亲和柱,再利用免疫亲和方法从黄曲霉毒素产毒真菌细胞破碎液中富集纯化,去离子水溶解获得。上述免疫亲和柱是指利用黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01抗体通过常规的亲和柱制备方案制备获得。具体可用上样液稀释黄曲霉毒素产毒菌细胞破碎液,经常规滤纸过滤后,再连续加到上述免疫亲和柱中,待基本流尽时,再免疫亲和柱常规淋洗液洗涤柱体,最后用pH 2.2的甘氨酸缓冲液或者70%甲醇水溶液洗脱,收集洗脱液后通过常规超滤离心方法及时去除溶液,再用无菌水从超滤离心管中溶解出留在超滤离心管内的蛋白质,即可获得黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01水溶液。

黄曲霉毒素产毒菌产毒力预警分子AFT-YJFZ01的初始获得用发掘方法:

用于发掘黄曲霉菌株产毒力预警分子的方法如下:

(1)取黄曲霉强产毒力菌株,培养获得菌株培养物和胞外分泌蛋白质混合物;然后将菌株培养物细胞破碎,获得胞内蛋白质混合物;将上述胞外分泌蛋白质混合物和胞内蛋白质混合物合并,加入碳二亚胺偶联获得黄曲霉抗原;

(2)将上述黄曲霉抗原免疫试验动物,获得纳米抗体库或单克隆抗体库;

(3)获得不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质合并溶液,利用步骤(2)获得的抗体库中的抗体,检测不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质,获得系列检测信号;

(4)找出检测信号与上述黄曲霉菌株产毒力呈现正相关的纳米抗体,即黄曲霉菌株产毒力预警分子抗体,与黄曲霉菌株产毒力预警分子抗体对应的蛋白质即发掘出的黄曲霉菌株产毒力预警分子。

上述方案中,步骤(1)的黄曲霉强产毒力菌株是通过常规方法从自然界分离、鉴定,或者通过人工改造获得,其产毒力经NY/T 2311—2013标准方法鉴定结果不小于10μg/kg。

步骤(3)中所述的不同产毒力的黄曲霉菌株不少3株,其产毒力经NY/T 2311—2013标准方法鉴定结果呈现为高、中、低至少3个层次。

所述的黄曲霉强产毒力菌株培养中采用的培养基为察氏培养基或者其他可供黄曲霉正常生长的营养物,培养时间不少于12h,培养的环境温度为15~35℃。

所述的菌株培养物细胞破碎是通过常规液氮研磨或者细胞破碎仪等方法。

所述的碳二亚胺的用量为每1.0mL合并的胞外分泌蛋白质混合物和胞内蛋白质混合物中,加入碳二亚胺量为0.005~0.1g。

所述的偶联反应指在15~37℃反应2~6h,在4~10℃反应过夜。

所述的免疫是常规免疫方式,接种黄曲霉抗原。所述的试验动物是指小白鼠或者羊驼或者其他具有相似效果的试验动物。

按上述方案,所述的抗体制备流程是指常规的纳米抗体制备技术流程或者常规的基于细胞融合的杂交瘤单克隆抗体制备技术流程。

按上述方案,所述的检测不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质是指采用常规的Western Blot技术流程,即将不同产毒力的黄曲霉菌株的蛋白质移至硝酸纤维素膜上,再利用上述抗体库中抗体,经直接方法或者间接方法检测,或者采用具有类似功效的其他技术流程。

按上述方案,上述直接方法是指将上述抗体库中抗体通过常规方法与信号材料偶联,再与上述移至硝酸纤维素膜上的相应蛋白质发生免疫结合反应。

按上述方案,上述间接方法是指将上述抗体库中抗体先与上述移至硝酸纤维素膜上的相应蛋白质发生免疫结合反应,然后再利用第二抗体与信号材料偶联物与上述结合到硝酸纤维素膜上的抗体发生免疫结合反应。

上述检测中信号材料是辣根过氧化物酶或者是胶体金或者是荧光材料或者是具有类似功效的其他材料。检测信号是显色反应信号或者是斑点信号或者是荧光信号。

上述黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01抗体也可以在获知黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01全部序列后,利用其全部肽段或部分肽段通过常规的抗体制备技术流程制备获得。

实施例2黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01纳米抗体制备

利用AFT-YJFZ01作为免疫抗原,采用常规方式免疫羊驼或者Balb/c鼠,再利用已知常规的纳米抗体或鼠源单克隆抗体制备技术方案即可研制获得。

将上述制备获得的AFT-YJFZ01溶解在常规PBS缓冲液或者生理盐水中至浓度不低于0.1mg/mL,再和弗氏完全佐剂等体积混合乳化,通过背部皮下或皮内多点注射方式免疫羊驼,之后每隔2-4周加强免疫1次,加强免疫时用弗氏不完全佐剂替换弗氏完全佐剂。采用常规ELISA流程监测免疫效果,至羊驼血清效价不再上升后,随后对免疫羊驼的静脉取血、提取总RNA、合成cDNA、VHH基因的扩增、VHH基因片段的回收、VHH基因与双酶切处理的pCANTAB 5E(his)载体的连接、连接产物电转化、构建纳米抗体基因库以及纳米抗体基因库的拯救等操作按照专利文献CN103866401A的方法完成,最终获得拯救后的纳米抗体基因库。

将上述制备获得的AFT-YJFZ01按8μg/孔、2μg/孔、0.5μg/孔、0.1μg/孔的梯度固定在96孔酶标板等固相载体上,按照专利文献CN103866401A的方法对上述拯救后的纳米抗体基因库进行2-4次淘选,再用AFT-YJFZ01和间接非竞争ELISA鉴定每一噬菌体克隆产生的抗体,阳性结果对应的噬菌体为噬菌体阳性克隆,再将此阳性克隆通过纳米抗体制备的常规方式制备出纳米抗体,即为AFT-YJFZ01的纳米抗体,用于进一步应用研究工作,优选经ELISA方法表征,具有特异性强、亲和力高的纳米抗体。

实施例3黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01单克隆抗体制备

利用AFT-YJFZ01作为免疫抗原,采用常规方式免疫羊驼或者Balb/c鼠,再利用已知常规的纳米抗体或鼠源单克隆抗体制备技术方案即可研制获得。

将上述制备获得的AFT-YJFZ01溶解在常规PBS缓冲液或者生理盐水中至浓度不低于0.1mg/mL,再和弗氏完全佐剂等体积混合乳化,通过背部皮下或皮内多点注射方式BALB/c鼠,之后每隔2-4周加强免疫1次,加强免疫时用弗氏不完全佐剂替换弗氏完全佐剂。采用常规ELISA流程监测免疫效果,至BALB/c鼠血清效价不再上升后,随后分离免疫小鼠脾细胞、脾细胞与鼠源骨髓瘤细胞SP2/0融合、半固体培养基对杂交瘤细胞的选择性培养操作参考专利文献CN103849604A的方法完成,待半固体培养基上长出针尖白色斑点后,将白色斑点分别挑取到内置杂交瘤常规培养基的96孔培养板,从而获得单克隆杂交瘤资源库。

参考专利文献CN103849604A的方法获取上述单克隆杂交瘤培养上清即单克隆抗体,将上述制备获得的AFT-YJFZ01按8μg/孔、2μg/孔、0.5μg/孔、0.1μg/孔的梯度固定在96孔酶标板等固相载体上,再用间接非竞争ELISA程序鉴定每一单克隆抗体,挑取阳性克隆,获得AFT-YJFZ01单克隆抗体,并用于进一步应用研究工作,优选经检测具有特异性强、亲和力高的特点AFT-YJFZ01单克隆抗体。

实施例4黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01兔源多克隆抗体制备

利用AFT-YJFZ01作为免疫抗原,采用常规方式免疫新西兰大白兔等试验兔,再利用已知常规的兔多克隆抗体制备技术方案即可研制获得。

将上述制备获得的AFT-YJFZ01直接用作抗原,以浓度不低于0.1mg/mL的溶液与弗氏完全佐剂等体积混合乳化,通过背部皮下或皮内多点注射方式新西兰大白兔,之后每隔2-4周加强免疫1次,加强免疫时用弗氏不完全佐剂替换弗氏完全佐剂。采用常规ELISA流程监测免疫效果,至免疫动物血清效价不再上升后,通过常规方法制备获得免疫动物的血清,即为黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的兔源多克隆抗体。

实施例5含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的标定

将上述黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01纳米抗体或单克隆抗体溶解在常规的ELISA包被缓冲液中,形成0.2-8.0μg/mL的包被液,再以200μL/孔加入至96孔酶标板中,4℃放置过夜或者37℃放置不少于2h后,去除上述酶标板中包被液,再用ELISA常规洗液洗涤酶标板;然后,以浓度不低于1%的脱脂奶粉作为封闭液,每孔加300μL,放置室温或37℃封闭不少于1h后,再弃去封闭液,再用ELISA常规洗液洗涤酶标板;然后以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质适当稀释,再每孔加入200μL,或者每孔加入200μL系列浓度AFT-YJFZ01溶液(浓度为0.000003、0.00003、0.0003、0.003、0.03、0.3、3.0、30ng/mL,用于获得标准曲线),放置室温或37℃封闭不少于1h后,弃去液体,再用ELISA常规洗液洗涤酶标板;然后,以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将上述AFT-YJFZ01兔源多克隆抗体适当稀释,再每孔加入200μL,放置室温或37℃封闭不少于1h后,弃去液体,再用ELISA常规洗液洗涤酶标板;然后,以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将商业化的辣根过氧化物酶标记羊抗兔抗体按说明稀释,再每孔加入200μL,放置室温或37℃封闭不少于1h后,弃去液体,再用ELISA常规洗液洗涤酶标板;然后,先后加入ELISA常规的显色液、终止液,最后通过酶标仪读取并基于标准曲线计算黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01含量结果。

实施例6含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的制备

制备方法流程包括:将产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的黄曲霉产毒菌接种到察氏培养基中培养,收集长成的菌丝,用液氮研磨菌丝至粉末状,再将菌丝粉末置于水或常规缓冲液中,随后用高压均质仪裂解菌丝粉末,获得黄曲霉产毒菌裂解液,裂解液经过脱盐,然后再通过常规的冷冻干燥去除水分,获得黄曲霉产毒菌裂解液干物质。最后通过黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01检测方法标定上述黄曲霉产毒菌裂解液或者上述黄曲霉产毒菌裂解液干物质中AFT-YJFZ01含量,即可获得含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质溶液或者固体的含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质。

所述的产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的黄曲霉产毒菌可以为公开文献《中国典型花生产区黄曲霉菌分布、产毒力与侵染研究》——中国农业科学院硕士学位论文,作者张杏,第33页——公布的产毒菌株JSnt-1、HuNdx-7、HBHA-8-17以及3.4408黄曲霉菌标准菌株,也可采用其他产黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的黄曲霉产毒菌株,均可达到类似功效。

如下以3.4408黄曲霉菌标准菌株为例,阐述含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的制备过程,具体如下:

(1)将黄曲霉菌标准菌株接种于PDA固体培养基上进行活化,28℃温箱内恒温黑暗培养7天后取出,用灭菌的0.1%的吐温水冲洗孢子得到孢子悬浮液,将孢子液加至察氏培养基培养基中,使其终浓度为5×105cfu/mL,继续放置在摇床中培养5d后,用灭菌滤纸过滤收集菌丝;

(2)用液氮充分研磨上述收集的菌丝至粉末状,将菌丝粉末溶解于常规磷酸盐缓冲液中,随后用高压均质仪充分裂解黄曲霉菌菌丝,裂解过程中要保持低温状态,即可获得黄曲霉产毒菌裂解液;

(3)上述裂解液经过常规的脱盐处理,然后再通过常规的冷冻干燥去除水分,获得黄曲霉产毒菌裂解液干物质;

(4)最后通过实施例5建立的黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01检测方法标定上述黄曲霉产毒菌裂解液和上述黄曲霉产毒菌裂解液干物质中AFT-YJFZ01含量,结果为:上述黄曲霉产毒菌裂解液干物质中AFT-YJFZ01含量为0.16ng/μg,由此获得了含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质溶液或者固体的含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质。

所述的黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01检测方法,可以为实施例5的ELISA法,也可以为荧光免疫层析法及其他可以定量测定黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的方法,均可以达到类似功效。

实施例7黄曲霉毒素风险预警智能感知卡制备

黄曲霉毒素风险预警智能感知卡由黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体、信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体、样品垫、硝酸纤维素膜、吸水垫、底板、羊抗兔抗体通过常规的免疫试纸条搭建方式组装而成,即底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫,相邻各垫在连接处交叠连接,所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫,硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线,所述的质控线上包被有羊抗兔抗体,所述的检测线上包被有黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或者黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体,所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体装载在样品垫上,或者单独装载,其中不同之处在于核心试剂的装载:

(1)所述的硝酸纤维素膜的检测线上固定有黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体,固定方法为:采用常规点膜仪喷涂,喷涂黄曲霉毒素预警分子纳米抗体或黄曲霉毒素预警分子单克隆抗体的浓度为1mg/mL,喷涂速度为0.6μL/cm;质控线上固定有羊抗兔抗体,固定方法为:采用常规点膜仪喷涂,喷涂羊抗兔抗体浓度为0.5mg/mL,喷涂速度为0.6mL/cm。

(2)所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体装载在样品垫上,或者单独装载在常规的小孔、小瓶等器皿中,通过常规冷冻干燥处理后即可。

如下以常规铕乳胶微球为例,说明所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体制备方法:取100μL铕乳胶微球,于900μL pH 6.0的MES溶液涡旋混匀,置于超声波细胞破碎仪中,功率20%,超声9s,11000rpm离心10min,小心弃上清,沉淀中加入1mL硼酸缓冲溶液(pH 8.2)重悬,涡旋混匀后再重复超声9s,加入20μL现配15mg/mL的碳二亚胺水溶液活化,室温剧烈震荡15min,11000rpm离心10min,小心弃去上清液,沉淀中加入1mL硼酸缓冲溶液重悬,涡旋混匀后再超声9s,加入60μg黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体,10℃摇床震荡2h,11000rpm离心10min,沉淀物用1mL 0.1%牛血清白蛋白-磷酸盐缓冲液复溶,重复超声步骤,4℃下摇床震荡1h,使牛血清白蛋白封闭微球表面未结合的位点;反应完成后即可获得所述的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体,置于4℃保存备用。使用时,采用含有1%蔗糖、0.5%卵清蛋白、2.5%吐温-20、0.5%PVPK30的常规磷酸盐缓冲液将上述制备获得的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体稀释1000倍再使用。

(3)与上述(2)方案相互呼应的是:所述的硝酸纤维素膜质控线上固定有羊抗兔抗体。

实施例7利用含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质建立黄曲霉毒素风险预警标准曲线

以上述铕乳胶微球最终制备成的黄曲霉毒素风险预警智能感知卡为例,阐述利用含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质建立黄曲霉毒素风险预警标准曲线过程。

采用实施例6制备的含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质,用常规磷酸盐缓冲液配置成0.00001、0.0001、0.001、0.01、0.1、1mg/mL等系列浓度的溶液,然后依次用其溶解黄曲霉毒素风险预警智能感知卡的信号材料标记的黄曲霉毒素预警分子兔多克隆抗体,再通过常规的免疫层析反应15min,最后通过读取黄曲霉毒素风险预警智能感知卡上荧光信号,以荧光信号作纵坐标,以黄曲霉产毒菌参考物质作横坐标绘制标准曲线见附图1,结果表明,黄曲霉毒素风险预警智能感知卡快速定量测定黄曲霉产毒菌参考物质的含量,其检测限可达1.0μg/mL,相关系数达0.99。再采用常规方法评价黄曲霉毒素风险预警智能感知卡快速测定黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的重复性和准确度,重复性评价结果显示:测定结果的变异系数均在10%以下,表明方法测定结果重复性良好;准确度评价结果表明,向花生、玉米、大米等产品中添加实施例1制备的黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01,回收率范围为83%-107%,表明方法测定结果准确度良好。因此,快速定量测定AFT-YJFZ01的黄曲霉毒素风险预警智能感知卡方法具有良好的检测灵敏度和准确度。

方法特异性评价:为评价黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的上述免疫检测方法的特异性,研究选取几株与黄曲霉菌具有一定同源性的真菌尖孢镰刀菌、黑曲霉、赭曲霉菌、串珠镰刀菌等,通过对这些真菌培养物的细胞破碎液进行检测,测定结果表明,上述方法对与黄曲霉菌有同源性的真菌的蛋白质均无明显的交叉反应,表明建立的黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01免疫快速检测方法具有良好的特异性。

实施例8含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质与黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01纯品的稳定性比较

将实施例1制备的黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01纯品和实施例6制备的含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质,在相同条件下存放,比较二者的稳定性即货架期。采用实施例5和实施例7共两种方法测定,研究结果均表明:含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质与黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01纯品相比,稳定性更高,货架期更长,4℃保存可延长3个月以上。

实施例9含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质在预测预警黄曲霉毒素污染风险水平方面的应用

随机选择土壤、花生、玉米、稻米、小麦、核桃、开心果等样品共299份,采用实施例5的方法测定上述样品中黄曲霉毒素预警分子AFT-YJFZ01的浓度,并采用《GB 5009.22-2016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定》中的高效液相色谱-质谱联用方法测定黄曲霉毒素水平。测定结果表明:当测定的AFT-YJFZ01浓度小于0.16μg/g时,86%样品的黄曲霉毒素污染水平在1.0μg/kg以下,为低风险;当测定的AFT-YJFZ01浓度大于1.12μg/g时,76%样品的黄曲霉毒素污染水平在10μg/kg以上,为高风险;其余测定AFT-YJFZ01浓度在0.16μg/g~1.12μg/g则为中风险。

利用上述低风险时黄曲霉毒素预警分子阈值——0.16μg/g,高风险时黄曲霉毒素预警分子阈值——1.12μg/g,以及上述实施例6中标定结果为0.16ng/μg的含有黄曲霉毒素预警分子的参考物质,则可获知:当含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质在1.0mg/g以下时属于低风险区域,当含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质在7.0mg/g以上时属于高风险区域,由此建立基于含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的黄曲霉毒素污染风险预测预警方法。

利用实施例7基于含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质建立的黄曲霉毒素风险预警标准曲线,采用该方法测定花生根际土壤样品6个、花生样品6个、大米样品6个、核桃样品3个、开心果样品3个、小麦样品3个、饲料样品6个,通过测定获知有1个土壤样品、2个花生样品、1个开心果样品、3个饲料样品的结果都在7.0mg/g以上,其余样品测定结果均在1.0mg/g以下,根据上述基于含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质的黄曲霉毒素污染.风险预测预警方法判断:7.0mg/g以上的1个土壤样品、2个花生样品、1个开心果样品、3个饲料样品的黄曲霉毒素污染风险水平较高,应予以预警重视,并及时采取有效的防控措施来降低污染危害;而其余样品的黄曲霉毒素污染风险水平属于低风险,在指导生产生上可以放心利用,在没有遭遇恶劣天气影响下无需采取任何额外的防控措施。

综合以上实施例证明,本发明技术方案具有如下优势:

1.可用于建立检测黄曲霉毒素预警分子以及检测含有黄曲霉毒素预警分子的产毒黄曲霉菌的标准曲线。

2.可用于鉴别比较农田土壤、农产品及饲料等产品的黄曲霉毒素污染风险水平。

3.稳定性好,货架期长,易操作,实用性强,容易推广应用;

4.对促进农业产业高质量发展与保障食品安全具有重要意义。

<110> 中国农业科学院油料作物研究所

<120> 含有黄曲霉毒素预警分子的黄曲霉产毒菌参考物质、制备方法及其应用

<160> 1

<210> 1

<211> 33172

<212> PRT

<213> 黄曲霉

<400> 1

AIGVEEPEAD PTYYHNAIGV EEPEADPTYY HNNKAIGVEE PEADPTYYHN NKTTASMVWE 60

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NEISFNQAWL RLVDWPIVTI THQEMSANFL DRKPLGTGTD LANGNVAGNI LVIAKHQEMS 7560

ANFLDRYNRD QCNYSLQYTI GNKAWYENGI TNCVGDNTRA WYENGITNCV GDNTRAWYEN 7620

GITNCVGDNT RAWYENGITN CVGDNTRAWY ENGITNCVGD NTRAWYENGI TNCVGDNTRA 7680

WYENGITNCV GDNTRAWYEN GITNCVGDNT RDADACNGGG IEYDSPADTP LEFKDADACN 7740

GGGIEYDSPA DTPLEFKDAD ACNGGGIEYD SPADTPLEFK DNTCNAPIPV SFPVAPTDTK 7800

DNTCNAPIPV SFPVAPTDTK DPYMFHQAND PYMFHQANLR DPYMFHQANL RDPYMFHQAN 7860

LRDPYMFHQA NLRDQCNYSL QYTIGNKEIS FNQAWLREIS FNQAWLREIS FNQAWLREIS 7920

FNQAWLREIS FNQAWLREIS FNQAWLREIS FNQAWLRFAA NGNYGSETTA AVINNFNGRF 7980

AANGNYGSET TAAVINNFNG RFAANGNYGS ETTAAVINNF NGRFAANGNY GSETTAAVIN 8040

NFNGRFAANG NYGSETTAAV INNFNGRFAA NGNYGSETTA AVINNFNGRF AANGNYGSET 8100

TAAVINNFNG RFAANGNYGS ETTAAVINNF NGRFAANGNY GSETTAAVIN NFNGRITTAD 8160

MDGISSWLPT INGKITTADM DGISSWLPTI NGKITTADMD GISSWLPTIN GKITTADMDG 8220

ISSWLPTING KITTADMDGI SSWLPTINGK KPLGTGTDLW PKKPLGTGTD LWPKKPLGTG 8280

TDLWPKKPLG TGTDLWPKKP LGTGTDLWPK KPLGTGTDLW PKKPLGTGTD LWPKKPLGTG 8340

TDLWPKKPLG TGTDLWPKKP LGTGTDLWPK KPLGTGTDLW PKKPLGTGTD LWPKLDDLFV 8400

WWTTPANRLD DLFVWWTTPA NRLDDLFVWW TTPANRLDDL FVWWTTPANR LVDWPIVTIT 8460

HQEMSANLVD WPIVTITHQE MSANFLDRLV DWPIVTITHQ EMSANFLDRM NAGSSYFVEV 8520

GHNGNGVIEA AAGKMNAGSS YFVEVGHNGN GVIEAAAGKM NAGSSYFVEV GHNGNGVIEA 8580

AAGKMNAGSS YFVEVGHNGN GVIEAAAGKM NAGSSYFVEV GHNGNGVIEA AAGKMNAGSS 8640

YFVEVGHNGN GVIEAAAGKM NAGSSYFVEV GHNGNGVIEA AAGKMNAGSS YFVEVGHNGN 8700

GVIEAAAGKM NAGSSYFVEV GHNGNGVIEA AAGKTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ 8760

VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ 8820

VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ 8880

VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ VNPRTPLLNQ QNSMWPYFTT SASDGFDGMQ 8940

VNPRVIANGN VAGNILVIAK VIANGNVAGN ILVIAKYFTS NGIIPPAITG LHNGDALRAS 9000

HTVDKNGIWS SEVKATDNYI ANAAAAVAKD LLQDIVTWDD KEAGIYLIAR GPLNEGGLYA 9060

ERGTNYVALS LWALESDGAK HTDYSSQEST SYKLGSFELS YTTPVLTGYG NVESPEQPKL 9120

SGQDASAITW KLTGNLGGED YQDKLTGNLG GEDYQDKVRN SAYNYWVPEL PTEGTSPGFS 9180

TSKPGIGFYT AQFDLDLPKQ GFHQPQPPSE SWESGSPLEG LSKSPGSFFV VRSSYDDSAW 9240

VSADLPKTSY DYGSPITETR YPDADYMQYV MDQARNGIWS SEVKVLVLYG GPKASPSYLT 9300

ATPRYLDTLP EIKTLHLEQS PSTPYAQLYV NGYQYGKKAD IVVPFPWGGP GFEKAQLYVN 9360

GYQYGKAQLY VNGYQYGKAT DNYIANAAAA VAKLSGQDAS AITWKLTGNL GGEDYQDKVR 9420

NGIWSSEVKQ GFHQPQPPSE SWESGSPLEG LSKSSYDDSA WVSADLPKYP DADYMQYVMD 9480

QARYPDADYM QYVMDQARAL TNGAGAIKEA IADVLEHLGE NDEDIAVYAP NPFYKGFAPL 9540

EYLGSNFENG ELPKGFDNAG FVMGTSSSLF NQFILRGKMP MPILVADGRH FQLINTAAYW 9600

KIPNVAIAVS GGGYRLNGTD IPNFLKLNLS SFDASGYIDR LPDICNTCFK MPMPILVADG 9660

RNSILEGPDV KSAAALSTSE KDWLQVRSSS LFNQFILRTF LNLGLNKTNT KLPDICNTCF 9720

KTSLTDYWGR SSFDASGYID RSTSEKDWLQ VRGTDIPNFL KLNLGLNKGF DNAGFVMGTS 9780

SSLFNQFEYL GSNFENGELP KMPILVADGR DLYDAVKINT AAYWKSIALG DDFKKALTNG 9840

AGAIKALTNG AGAIKALTNG AGAIKALTNG AGAIKGKMPM PILVADGRGK MPMPILVADG 9900

RGKMPMPILV ADGRGKMPMP ILVADGRGKM PMPILVADGR GKMPMPILVA DGRHFQLINT 9960

AAYWKHFQLI NTAAYWKLPD ICNTCFKLPD ICNTCFKMPI LVADGRMPMP ILVADGRMPM 10020

PILVADGRMP MPILVADGRM PMPILVADGR MPMPILVADG RMPMPILVAD GRMPMPILVA 10080

DGRMPMPILV ADGRMPMPIL VADGRNSILE GPDVKNSILE GPDVKNSILE GPDVKSAAAL 10140

STSEKDWLQV RSAAALSTSE KDWLQVRSAA ALSTSEKDWL QVRSAAALST SEKDWLQVRS 10200

AAALSTSEKD WLQVRSAAAL STSEKDWLQV RSAAALSTSE KDWLQVRSAA ALSTSEKDWL 10260

QVRSAAALST SEKDWLQVRS AAALSTSEKD WLQVRSAAAL STSEKDWLQV RSAAALSTSE 10320

KDWLQVRSAA ALSTSEKDWL QVRSAAALST SEKDWLQVRS AAALSTSEKD WLQVRSAAAL 10380

STSEKDWLQV RSAAALSTSE KDWLQVRSAA ALSTSEKDWL QVRSAAALST SEKDWLQVRS 10440

AAALSTSEKD WLQVRSAAAL STSEKDWLQV RSAAALSTSE KDWLQVRSAA ALSTSEKDWL 10500

QVRSAAALST SEKDWLQVRS AAALSTSEKD WLQVRSAAAL STSEKDWLQV RTNTKLPDIC 10560

NTCFKTNTKL PDICNTCFKT NTKLPDICNT CFKAASLPAS FSGFKALVSH DGTFVADAKE 10620

NSLVWHQQVL GWLNKFNAVF SGTLKGDAGS PVFSPDSKGD AGSPVFSPDS KKIAYWQMAD 10680

ESYEADHRIQ AFVIYPENFD KLFSIPADAG DDYKPKLNPE GLISAPRLPV SEGLSLFNIL 10740

QERMINWIQG SDLGRNAESP YPPFGGASDY DLSPDGKRSE AIPNPSGDVA VFSQSQYSFK 10800

SEAIPNPSGD VAVFSQSQYS FKTAVPINGP DSPGTPEGVK TAVPINGPDS PGTPEGVKGD 10860

AGSPVFSPDS KTLATANKID PELKTLYVYT VGSEETIPSL AADWDRTTSQ WNVLDLKVVT 10920

TDSGDVRWIQ GSDLGRALVS HDGTFVADAK ALVSHDGTFV ADAKGDAGSP VFSPDSKKIA 10980

YWQMADESYE ADHRIAYWQM ADESYEADHR IAYWQMADES YEADHRLFSI PADAGDDYKP 11040

KLFSIPADAG DDYKPKLNPE GLISAPRRSE AIPNPSGDVA VFSQSQYSFK RSEAIPNPSG 11100

DVAVFSQSQY SFKTAVPING PDSPGTPEGV KTAVPINGPD SPGTPEGVKT AVPINGPDSP 11160

GTPEGVKGDA GSPVFSPDSK TTSQWNVLDL KTTSQWNVLD LKAASNFDGD TLVLGYDSGN 11220

GNPETSFMTL MRAGSTIAVT DVQITGGAVG IKASGTCSGP IQSAPTSYWL ADQDHSGDAR 11280

DAGSPKPVVQ IGHEGDVGVA EIQNMRFSVA EILPGAKGDG STDDSASLNA ILANNAANCK 11340

GTCSGPIQSA PTSYWLADQD HSGDARIVGE AWAVITGAGD AFKNSQILIQ NLSHDNSNAI 11400

AVDSKNSQIL IQNLSHDNSN AIAVDSKDNI KNVVLDTTAL SANTKSAPTS YWLADQDHSG 11460

DARVGTIITG DPLDPPVLKV TNSPSNLVWY SISTRYPAEV FLPGGTYQLG KSLGSLVLLD 11520

SSSINSGPVV RDTLVIPPGS RAQPTYAEYS NDQIVNVKSG TCSGPIQSAP TSYWLADQDH 11580

SGDARAGSTI AVTDVQITGG AVGIKAQPTY AEYSNDQIVN VKAQPTYAEY SNDQIVNVKD 11640

AGSPKPVVQI GHEGDVGVAE IQNMRFSVAE ILPGAKNSQI LIQNLSHDNS NAIAVDSKNS 11700

QILIQNLSHD NSNAIAVDSK NSQILIQNLS HDNSNAIAVD SKNSQILIQN LSHDNSNAIA 11760

VDSKDNIKNS QILIQNLSHD NSNAIAVDSK DNIKNSQILI QNLSHDNSNA IAVDSKDNIK 11820

NVVLDTTALS ANTKSAPTSY WLADQDHSGD ARVTNSPSNL VWYSISTRVT NSPSNLVWYS 11880

ISTRAGALLL GKAGVIPESL HQDTVGTFGK DRLETTAGSW ALLGSVVPRG IMDETYYQAL 11940

EFCQRGKTPE GGYAQFLTNK GPLHGIPFIV KIHQTQPYLN AILQVNPDAF KLETTAGSWA 12000

LLGSVVPRNS VVGIKPTVGL TSRTIVSPDG FNWDYGSTRT PEGGYAQFLT NKTTREEGID 12060

AALKVDFYNN LKDYLSEVEN TKAALSEWAD MRALGTETDG SVINPAQREE GIDAALKDAV 12120

YALDAIYGID ARAALSEWAD MRAALSEWAD MRAGVIPESL HQDTVGTFGK AGVIPESLHQ 12180

DTVGTFGKAG VIPESLHQDT VGTFGKAGVI PESLHQDTVG TFGKGIMDET YYQALEFCQR 12240

IHQTQPYLNA ILQVNPDAFK NSVVGIKPTV GLTSRNSVVG IKPTVGLTSR NSVVGIKPTV 12300

GLTSRTIVSP DGFNWDYGST RTTREEGIDA ALKAVWPGDM GVAVPAAFVS TGDLESVKAY 12360

QGYFHSNDDL LNRDGSASYV MPDKDRAVWP GDMGVAVPAA FVSTGDLESV KDSAFPGLWE 12420

ENIYAPSSRG GSGALGLAFS EAKGVYYVDD TATITVSGGG SHRIWYSGAY TLQTNAVPVN 12480

TGRNALQTMY DTQDKNALQT MYDTQDKTTG AFDESGPPLS QKSPDGYTLQ FSVPPGTKSS 12540

EKPSITIDGN NINKTTGAFD ESGPPLSQKI APQFGDLKAL ELIRRFQASW DKSPDGYTLQ 12600

FSVPPGTKIS SFEIQGHFKA VWPGDMGVAV PAAFVSTGDL ESVKAYQGYF HSNDDLLNRA 12660

YQGYFHSNDD LLNRAYQGYF HSNDDLLNRA YQGYFHSNDD LLNRDGSASY VMPDKDGSAS 12720

YVMPDKDRAV WPGDMGVAVP AAFVSTGDLE SVKGVYYVDD TATITVSGGG SHRGVYYVDD 12780

TATITVSGGG SHRISSFEIQ GHFKNALQTM YDTQDKNALQ TMYDTQDKNA LQTMYDTQDK 12840

NALQTMYDTQ DKTTGAFDES GPPLSQKNAL QTMYDTQDKT TGAFDESGPP LSQKNALQTM 12900

YDTQDKTTGA FDESGPPLSQ KNALQTMYDT QDKTTGAFDE SGPPLSQKSP DGYTLQFSVP 12960

PGTKSPDGYT LQFSVPPGTK SSEKPSITID GNNINKSSEK PSITIDGNNI NKSSEKPSIT 13020

IDGNNINKTT GAFDESGPPL SQKDNILPEN LDDGLPSQFV YEKFGPHEYN GDQYTSIIRL 13080

VIDLSGNGGG YILQGYDTFR NVGLVSVSLD GKPSSDPMQG IGGIKQLFPS IVQDGYTRSD 13140

KYAGEYEFQA DLFKSFEPST PAEFQAVLEK YAGEYEFQAD LFKPFAASTP GFDGYFSGSA 13200

RAASTPGFDG YFSGSARYDL NLENKAFNLA HDGHFRHFTS LEEKFFPDLL TKSIAIGGRP 13260

SSDPMQGIGG IKFGPHEYNG DQYTSIIRFG PHEYNGDQYT SIIRQLFPSI VQDGYTRQLF 13320

PSIVQDGYTR QLFPSIVQDG YTRSDKYAGE YEFQADLFKE PGAEGVCETT PGVKFANQMP 13380

NGCQDLISTC KGCQDLISTC KQLPKNPTGV KSAGYTPLKV NGVEYGETRS YSGYVDTSPE 13440

SHTFTALADY ALCAEATNMC RTIFGWDIAE GQKTIFGWDI AEGQKKVYEA GHEVPYYQPI 13500

ASLYKEPGAE GVCETTPGVK LSGLPSLDSR SYSGYVDTSP ESHTFFHNPE TAPITLWLNK 13560

IWPSYKVYEA GHEVPYYQPI ASVNGVEYGE TRTALADYAL CAEATNMCAE GVCETTPGVK 13620

FANQMPNGCQ DLISTCKFAN QMPNGCQDLI STCKFANQMP NGCQDLISTC KFANQMPNGC 13680

QDLISTCKFA NQMPNGCQDL ISTCKFANQM PNGCQDLIST CKKIWPSYKK IWPSYKSAGY 13740

TPLKVNGVEY GETRSAGYTP LKVNGVEYGE TRSAGYTPLK VNGVEYGETR SAGYTPLKVN 13800

GVEYGETRSA GYTPLKVNGV EYGETRSAGY TPLKVNGVEY GETRSAGYTP LKVNGVEYGE 13860

TRSAGYTPLK VNGVEYGETR SAGYTPLKVN GVEYGETRSA GYTPLKVNGV EYGETRSAGY 13920

TPLKVNGVEY GETRTALADY ALCAEATNMC RTALADYALC AEATNMCRTA LADYALCAEA 13980

TNMCRTALAD YALCAEATNM CRTALADYAL CAEATNMCRT ALADYALCAE ATNMCRTALA 14040

DYALCAEATN MCRTALADYA LCAEATNMCR TALADYALCA EATNMCRTIF GWDIAEGQKT 14100

IFGWDIAEGQ KTIFGWDIAE GQKTIFGWDI AEGQKTIFGW DIAEGQKTIF GWDIAEGQKT 14160

IFGWDIAEGQ KTIFGWDIAE GQKTIFGWDI AEGQKTIFGW DIAEGQKTIF GWDIAEGQKT 14220

IFGWDIAEGQ KTIFGWDIAE GQKKVNGVEY GETRVNGVEY GETRVNGVEY GETRYKEPGA 14280

EGVCETTPGV KYKEPGAEGV CETTPGVKYK EPGAEGVCET TPGVKYKEPG AEGVCETTPG 14340

VKYKEPGAEG VCETTPGVKA SDFWANELVT WWNKEAEPSQ EYVSYSHGVF LRFSYEEGEK 14400

FLNKGAKDDV FIKGGSILPM QEVALTTRKA TGDVLFNTKN AHGQEILLRN HNVLSAIPQE 14460

PYRQYQLSTV GLPAMQQYNT LGFHQCRSSE AEPSQEYVSY SHGVFLRTLG GSVDLTFYSG 14520

PTQAEVTKWA SVIDATKSEA EPSQEYVSYS HGVFLRAEPS QEYVSYSHGV FLRAEPSQEY 14580

VSYSHGVFLR AEPSQEYVSY SHGVFLRAEP SQEYVSYSHG VFLRASDFWA NELVTWWNKE 14640

AEPSQEYVSY SHGVFLREAE PSQEYVSYSH GVFLREAEPS QEYVSYSHGV FLRFSYEEGE 14700

KFLNKGGSIL PMQEVALTTR GGSILPMQEV ALTTRNAHGQ EILLRNAHGQ EILLRNHNVL 14760

SAIPQEPYRN HNVLSAIPQE PYRNHNVLSA IPQEPYRNHN VLSAIPQEPY RNHNVLSAIP 14820

QEPYRSEAEP SQEYVSYSHG VFLRWASVID ATKWASVIDA TKDPSINDDS VMIYAPAVRF 14880

LDEALTYPPP KGIQINDPSI NDDSVMIYAP AVRIASAMLD EEDEKYFNVK NGDQSPPSAL 14940

GPLPSVIERP SINDDSVMIY APAVRTDYSV CGETTIFKVY LTGESYAGQY IPYIASAMLD 15000

EEDEKVYLTG ESYAGQYIPY IASAMLDEED EKYFNVKIAS AMLDEEDEKT DYSVCGETTI 15060

FKNGDQSPPS ALGPLPSVIE RVYLTGESYA GQYIPYTLIA GAGLLGTAHT ERETTIFKNG 15120

DQSPPSALGP LPSVIERTDV QKALHVPRDD SVMIYAPAVR FLDEALTYPP PKGIQINDPS 15180

INDDSVMIYA PAVRGIQIND PSINDDSVMI YAPAVRGIQI NDPSINDDSV MIYAPAVRGI 15240

QINDPSINDD SVMIYAPAVR IASAMLDEED EKIASAMLDE EDEKYFNVKI ASAMLDEEDE 15300

KYFNVKIASA MLDEEDEKYF NVKIASAMLD EEDEKYFNVK IASAMLDEED EKYFNVKIAS 15360

AMLDEEDEKY FNVKIASAML DEEDEKYFNV KNGDQSPPSA LGPLPSVIER TDYSVCGETT 15420

IFKNGDQSPP SALGPLPSVI ERTDYSVCGE TTIFKNGDQS PPSALGPLPS VIERVYLTGE 15480

SYAGQYIPYI ASAMLDEEDE KYFNVKAHIL PPNGRDLNPN GSQFITPGGK DLNPNGSQFI 15540

TPGGKNDPVA VFDGSVIPKE AGLVPFQVSP TTKFHVLTAQ LSFPRFRDLN PNGSQFITPG 15600

GKLDRPPVIP LPPSDSDVTA FRNDPVAVFD GSVIPKPVAV FDGSVIPKTI SNVVDNELAR 15660

TTNGIVSTNE SGRDPVAVFD GSVIPKFALS TWARILPATS QVSTKAHILP PNGRAHILPP 15720

NGRAHILPPN GRDLNPNGSQ FITPGGKFAL STWARFALST WARFHVLTAQ LSFPRFHVLT 15780

AQLSFPRFRD LNPNGSQFIT PGGKFRDLNP NGSQFITPGG KFRDLNPNGS QFITPGGKND 15840

PVAVFDGSVI PKTISNVVDN ELARTISNVV DNELARTISN VVDNELARTT NGIVSTNESG 15900

RDWSDSYYQG PAFKFGLGAD NTLAFEVVTA DGQLVTASRG VGSDAWTVSE SGRITNEYVP 15960

QLEAVTPGSG CYQNEGNFRN VLENNPTGMA SVLRSKWDPN NFFYVLKTTA LTDLGIAYKV 16020

SAGVMGYQIL NAAHAKVSYT EYDSYYDHYN KYMGPLPYGN LAVATYQYGG RWDPNNFFYV 16080

LKDWSDSYYQ GPAFKGVGSD AWTVSESGRG VGSDAWTVSE SGRGVGSDAW TVSESGRGVG 16140

SDAWTVSESG RITNEYVPQL EAVTPGSGCY QNEGNFRNVL ENNPTGMASV LRNVLENNPT 16200

GMASVLRVSA GVMGYQILNA AHAKVSAGVM GYQILNAAHA KVSAGVMGYQ ILNAAHAKVS 16260

AGVMGYQILN AAHAKVSAGV MGYQILNAAH AKVSAGVMGY QILNAAHAKV SAGVMGYQIL 16320

NAAHAKVSYT EYDSYYDHYN KYMGPLPYGN LAVATYQYGG RALMNGAGAI KDAGYETSIT 16380

DYWGRDFFNH VTIKDGNWTT CVGCAILSRG FVPLEYVGSK HVYDAVQDKP TVYGFVPLEY 16440

VGSKTNTQVP DACTQCFQKQ ADMPMPLLVA DGRTAFSDIL AKSIALTDTF KILDSATYYK 16500

ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK 16560

ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK ALMNGAGAIK DAGYETSITD YWGRDAGYET SITDYWGRDA 16620

GYETSITDYW GRDAGYETSI TDYWGRDAGY ETSITDYWGR DFFNHVTIKD FFNHVTIKDF 16680

FNHVTIKDFF NHVTIKGFDN AGFVMGTSSS LFNQFMPLLV ADGRMPLLVA DGRMPMPLLV 16740

ADGRMPMPLL VADGRMPMPL LVADGRMPMP LLVADGRMPM PLLVADGRMP MPLLVADGRM 16800

PMPLLVADGR QADMPMPLLV ADGRQADMPM PLLVADGRQA DMPMPLLVAD GRQADMPMPL 16860

LVADGRTSIT DYWGRAHDDT VNYLYEELKK ATAFAVATYA NDLSSIPKGG DPNNVVALGG 16920

HTDSVEAGPG INDDGSGIIS NLVIAKGPYS AIVGISLEDG QKNLGCSEAD YPSDVEGKQP 16980

QVHLWSNADQ TLKTMTYSPS VEVTADVAVV KTTYNVVAQT KVGDEEIEAK AHDDTVNYLY 17040

EELKKAHDDT VNYLYEELKK AHDDTVNYLY EELKKQPQVH LWSNADQTLK TMTYSPSVEV 17100

TADVAVVKAG QFPISANDGA TSTKAGVLSW SYTWSPADKE AASAALAAGY KFDGVTWDEE 17160

NWLLKFDPSA AIYPWTSGRF VGGASTDAFA DPKLLPEEGI YITPNLPPQI PYVKPSAAIY 17220

PWTSGRVVLT LTGIEPSTIY TAEEENQVRA YVASDSELEY VTWTVDNRGD WEVTSILSID 17280

QERTLIPADK IPTGKTLSTN EEGYETSAVR VSQTNPTVTL SLLNIASKYP ILFTPYGGPG 17340

AQEVTKDGTD GWLDNLLSMK TLSTNEEGYE TSAVRKFYDS MYTERTLIPA DKIPTGKATS 17400

GGTSAAAPVF AGLVGMLNDA RDFTDITAGS SIGCDGVNPQ TGKGFPDVAA HSLTPRPDVA 17460

AHSLTPRPNS ALPQVLSNSY GDEEQTVPEY YAKSALPQVL SNSYGDEEQT VPEYYAKSYG 17520

DEEQTVPEYY AKVCNLIGLM GLRLKDLVLS LAWYQESAVS KATSGGTSAA APVFAGLVGM 17580

LNDARATSGG TSAAAPVFAG LVGMLNDARA WYQESAVSKA WYQESAVSKD FTDITAGSSI 17640

GCDGVNPQTG KGFPDVAAHS LTPRGFPDVA AHSLTPRGFP DVAAHSLTPR SALPQVLSNS 17700

YGDEEQTVPE YYAKVCNLIG LMGLRDAEEE PYDWSNEGRG ISDGIDWQAG YSAVQKMDDA 17760

EQYEATSRNI YIQSATLDGK PYSKSLNYIP VEDFDYKTLE YSYDDFTIAQ MARTMINPQD 17820

YTGENPLWKD NGIFVNSRSI NGYPLPGGAF VRMDDAEQYE ATSRTLEYSY DDFTIAQMAR 17880

DIDFGENGDG IKDYVPNTQI PVTVAANTFP GGQEGFIDFV KFQESPEGAD FWGARTKVTI 17940

SPELSIRVFQ TAFGPAGTML TYEPIVRADA IVAAIRLAED HINWVEIRVT ISPELSIRHE 18000

LGVDEIWRDI DFGENGDGIK DIDFGENGDG IKFQESPEGA DFWGARLAED HINWVEIRAG 18060

VKPSNYVGDI FGTLGGTPDF GPGRCDVATT DVYYSGKSKY TAEGYEAATK TASNFDQPHS 18120

DESALQHLRY CASAQEDNAT LQALLRYTAE GYEAATKYVD AGGFEPSIKL QALLRSKYTA 18180

EGYEAATKTA SNFDQPHSDE SALQHLRGHL TAMTGDGVND APSLKTAALV QGASDSGHFK 18240

TGTLTANQLS IRAYGIVVAT AKTGDGVNDA PSLKMLTGDA LAIAKLAIEH EVDAHGKIEN 18300

MLSHLSKDKS ETETETEIEI SNKIKEIQEA GDVRLSDELE DDNAPIGFET TKSVEIAQLH 18360

SEVEALVEKY TVTAGELTSD FKEVEVEKEW TKTETKTEIE IERIKEIQEA GDVRASSDDS 18420

NYGWEDSKGI QDAGVIATAK IGAQSTVLLK NFGEIGDASE YVYPEGLERY TPPNFSSWTR 18480

VNEFVDVQRA VDIVSQMTLT EKDSPNWDVD SDALPAIPEG AKEIPVGYSA ADIDTNRGVD 18540

YQPGGSSNLA DPIADAEGCK RNTLAFFSGN EVINDGPSSK YGLVEIDDGK VKTLADFDAL 18600

KYGLVEIDDG KVKDLMQAMA DFGPKFPGGN NLEGDTLDGR TGEVYASAVI VSKYPSNLDA 18660

WIPVDGSALS LKYVEVGNED NLNDGLDSYK FQAFYDAIKE QTYTGSFYVK ASLGHPEPWT 18720

VKDLMQAMAD FGPKELPSGP YFVSLYTGEV FKGISPEAHQ SLTTFTRLYP DDNLAFIQAG 18780

ISDEKQLLLA GGGWDGKSLF VSVYSVGTTD YRLYYTPTAE KPLAGLRGIS PEAHQSLTTF 18840

TRQLLLAGGG WDGKDSLSEA IAYAKGGGGG TFGVVMESTH RIANECQNQE LFWALRSQGG 18900

TAVIEEFPSW YEFYQKYVVP NAVTVGNAHF AATRSSGQGT LSLWTRAVTV GNAHFAATRG 18960

GGGGTFGVVM ESTHRGGGGG TFGVVMESTH RGGGGGTFGV VMESTHRIAN ECQNQELFWA 19020

LRSSGQGTLS LWTRYVVPNA VTVGNAHFAA TRYVVPNAVT VGNAHFAATR YVVPNAVTVG 19080

NAHFAATRAS SVSGVITLSD GRTTADSDGN FSFENVRVQD ETWELSDGSY ITKYDWSDFI 19140

NSAKYEEFEV PAGTLVKIWQ IGTLDRAYTQ YTETSVYGML KDGDLVTQQN ELQGKHEGWI 19200

DEAAVQEAKL HYGAYSIKSN LFNSYSENQV LLPASVYGSY KETYGSAAGW DKLADALAAS 19260

SLPEAWWGEN YEPLLNIKGG GGGTFGVVIE STHRIANECQ NQDLFWALRV EPQLSFVAAV 19320

IKYVTSNAVS VGVTHFAGSR AVFETAEGRG GGGGTFGVVI ESTHRYVTSN AVSVGVTHFA 19380

GSRDAEVAPP NDPVDPMAPD SSTKFEGYLP DARGSTGNVL VDVSHVLPSF RVGISWLSTE 19440

KLSITATGGD GNGDSQIYVQ KGAVNWEDGY RDAEVAPPND PVDPMAPDSS TKDSVKEDDY 19500

EDLFNYICAK KFTDTPVLYG PKMLDDAGIY LITDLSSPSE SINRSDGQCS DLLKQQLSFV 19560

MNQWYEKYGA YSVCSPKTLP AIESKKFTDT PVLYGPKMLD DAGIYLITDL SSPSESINRS 19620

DGQCSDLLKA DAAGSHGEAL NEVQAKAKAD AAGSHGEALN EVQAKLEAAE QALSEARVGA 19680

LESQLSTEQD AIKEAAESAG TTHSQQLQEL RDALEAAEAA AKIQEQLKGQ TPLPILVADG 19740

RNNILEGPDV KSHLSVVDGG EDGQNIPLHP LIQPERTIDY WTELVDTVKT STTLPEVCSK 19800

AMLNGAGALK AMLNGAGALK AMLNGAGALK AMLNGAGALK AMLNGAGALK GQTPLPILVA 19860

DGRINLGLNK NNILEGPDVK SHLSVVDGGE DGQNIPLHPL IQPERTFINL GLNKTSLTDY 19920

WGRFNVDETA FTGAWGRIGS LAITDVSLPF FKIQGISNPS GALSSGGLGE PKVQNGAVTW 19980

ESDPNRATTV YGESIKSIYA INSGRELDTQ HIHPPDSYFV SPLTRGFTEI DELWNGVTAE 20040

TNAAQDLRQA QVAHDFWQKF YHQVVELNRK DAELTDAGVK LNTGAVIPVL VRELDTQHIH 20100

PPDSYFVSPL TRLNTGAVIP VLVRLNTGAV IPVLVRQAQV AHDFWQKQAQ VAHDFWQKAI 20160

NDYIDSQLDK KGVQISTNIP KSSPWIMLGG SYPGMRYQSL EYQQSLCYRL FSLALKISIP 20220

IDHEDPSMGT YQNRAINDYI DSQLDKKCSS HDDCSDELAC TDGVCACTAD SAVTCSWEGH 20280

CAGAKLNLQY QASGDAKKSL VDFSAARGDN PSILGLRSAV TCSWEGHCAG AKIGTTIDDI 20340

KCTADSAVTC SWEGHCAGAK CTADSAVTCS WEGHCAGAKC TADSAVTCSW EGHCAGAKCT 20400

ADSAVTCSWE GHCAGAKAFP DVAAQGMNFA VYDKELYNIG DYQADANSGS KIAFASYLEE 20460

YARQGLQDIT LGASIGCTGR YADLENFENY LAPWAKAFPD VAAQGMNFAV YDKAFPDVAA 20520

QGMNFAVYDK ELYNIGDYQA DANSGSKYAD LENFENYLAP WAKYADLENF ENYLAPWAKA 20580

GSSPTDIISG ISDKTDALDS AIKKVEQAID DIIAKSAADG LASAITSKSG DDISTTDALA 20640

LPEPVQALTK SPTDIISGIS DKTDALDSAI KAQNDPNAFG VVAARLGACP PGKETALLGD 20700

KPNAFGVVAA RQNDPNAFGV VAARAATYCP ENIEKIENQS DADGYSSCST LKLTGLTTLT 20760

TLSFAALTKS DKLNVIDFPK VGSIEFTALP QLQSLDFTKL NVIDFPKTVN GGFQIARGVA 20820

AWLFERLSFG SIDLENANIN RSLSFIPGVL YDGSPIGKQE STFAAVERSC FEIGKFVDPL 20880

IGSNNGGNVF AGASLPYGMA KGWTQGGSNA DVVLTDAYVK VGISYISTDR AGNWQNLYKA 20940

QHPFLTIVDP EAQSRSVFSQ NESVAAGLKT TAVLFDEGKE ICLAALGRAL VIVSDSIRTD 21000

TIHGVGQNSF YKASHPIEVP VKASHPIEVP VKIMSILLGG AIPDDLKPLV LFDSVTKTAT 21060

ESEPSLSDIE KTGYVNYNVD TTNLRKHNPL VLFDSVTKTS PFPYDSKKHN PLVLFDSVTK 21120

KHNPLVLFDS VTKKHNPLVL FDSVTKTGYV NYNVDTTNLR APTPPDFSLG YIQSKIEQDG 21180

SESLLTNEYA PLKGYAFIWN MPAQGRTSGW GGNPGGYRYQ LASYLRDYLD EYLVFPPAGV 21240

QPQKIYVTGE SYAGRVDHLP DVPFDVGEMY SGLVPIDKDD KNFQELFGIK KTPLDDFRAD 21300

DVLEVNPLAD PEVVSYFRLD ADAITAQYFG NDAPWYRSDY ASFLYGPYRL VFAPQEEKAT 21360

WDGVDADKIR FQYPGDLFDQ GTTIRFTGDA ATVNSIAARP DSDEIYFGGQ FEKNLEVLSL 21420

TKHVAAYSFG SKAWTALGGG VNGPVHKNLA LLDGKDLTDY LMKSYELPDG QVITIGNERV 21480

APEEHPVLLT EAPINPKQEY DESGPSIVHR QEYDESGPSI VHRVAPEEHP VLLTEAPINP 21540

KVAPEEHPVL LTEAPINPKV APEEHPVLLT EAPINPKAEL PEGYPESSAN PAFRDIQYLE 21600

NYQGQGYSGP AVKFVTVTEE TDPDLFWALR LSLGDSGACK DAEVEPANWG VEGRLGGAQL 21660

FTSRTVSLVE DGSNTPATLS AGTFARSLVD IYRTVSLVED GSNTPATLSA GTFARAYVEM 21720

MQCTDEKEPL VRLEKDLPGT TLSSKYYGYG GGNPLGPAQG IGFANELIAR LEKDLPGTTL 21780

SSKLSEAGHS VLLIEKTPIE SDATSYLNDR GGPMGTYLVS ASERVILSAG TFGTPKAVIT 21840

DIVNQQRLIN QVELSEDKTI ARGGSNNFGI VTRLLLSDAM WYTRERPSAQ LLSGKFDTLG 21900

TSGPTAKLAN AYTWEGGRAV ADRIPLAIHD EVSPVGDTDA LLERAPVVQY ALNRDGYMGY 21960

HGVPQIPIYA YKAIHDEVSP VGDTDALLER AIHDEVSPVG DTDALLERAI HDEVSPVGDT 22020

DALLERDGYM GYHGVPQIPI YAYKLAEESA ALGVKVNPII LTGDMWRVSD NAGLGDWVPN 22080

PDRFPDGLTP LVEDVTKALG GTSTINGMAY TRSQLSDYAA ATVKAEDVQI DVWQKALGGT 22140

STINGMAYTR EIGFTVQEDN TDGKIDFGSA PNIVNAIAED RNSPVWPDGI QQTYEYPNRA 22200

STNMITSNSG AGLVPQDENR IGGSAGTELQ SDKITGEVWP VLMAYGQKSA ISQYGDSFAK 22260

SQSDFESEFS TAKVNAGIGI GPDDLVSFIK GNAMDHFSSI MERYGPTYAA YFLDQNEKAI 22320

TETQYEEAKD LTLDLPDIGL QYAGTVKTVA ALINWRNIWD GTTAQNVKKE DLETSSYSFS 22380

GDGKVDFASL QSAATQSTTY SNAPAVKTCS LVFLFPKKED LETSSYSFSG DGKFDGILGL 22440

GFDTISVNKY GSGSLSGFVS QDTLKWYSVY DLGNGAVGLA KDAYSPHEIY SRIFEQLEGM 22500

SLSKTYEVVG NVYKDQVLKD VALIKAVPGT AQQAAAIKDA GEFDVERGTV VTNDQCGGAS 22560

SVRLHLVTAE EADIKIIYDM PDGSSCKGID VAKPTGRVNG VWTVTHSPFE GLSALKSAMT 22620

LPRVNGVWTV THSPFEGLSA LKVPTVLMSP WVGKSIDQFF NDAKNVAPDD PDHSITGGNQ 22680

QVYSTYHPNA KESTLHLVLR IQDKEGIPPD QQRIQDKEGI PPDQQRIQDK EGIPPDQQRD 22740

VSLVANHIDT VGKTAATVNT WTGGWSDSKA IGTYQNSGLS QYTVRYSEGV HFPARTVANW 22800

LVREVAGDVD NAVNPAWRLG AGVQGFEAYE AANAQGLRLD GGVIEDFAQK NPDLSSTSDT 22860

TDVIRGPDEP YSGQYDEERQ FISVTNPTGA EPVPKFLSEL LEDEYFTKFV NIWLENTDYE 22920

SAANDPHLSK LLEYDIASGT PVYRNNNQGL EALTISPDGK VYAISDQDDT GPWIRDAYQN 22980

DFAARVDPST AVDYNHYSDA ADRSGDVQTL QFAWALQHLS ERTGNQTGQL GTYFNKNINM 23040

LLYGTDDCSG KGMVFSIDAQ GEKNINMLLY GTDDCSGKNP NPDQAFLQVR FWVATGDSSK 23100

AALDALQQSI YLQPKFSDGN GLFYQYERVA VAGYDDTTGG VGPLLAQKAI AIALQSSHRQ 23160

TGSVDGYAYT DANKNDLITY LKSVVENNND GLTAAYRVAP NSGAYLNEAD FRSLPLIVGN 23220

SDQEGKANEQ PTWVYRSDYQ ECADAPGQKF GATGDEYREP SNDPNPPETY SKVALLFSER 23280

LADGSIPTRS ISSDEDSAET EQSDSSDPKV AIIDGLADPW RTMGVGYATN DDSTIRDVPI 23340

MQELNTNTIR DVDPIVIKVE TGVIKPGMVV TFAPANVTTE VKIVVIGHVD SGKDDADLQE 23400

LGAKSSAFAF RKDPSDAIPS IPSIPISYKE AIPFLKEAAE IDSHWERDDY MPFIEVPRDD 23460

YMPFIEVPRA LQGVDELVEK DALHPQFDNF YQEQPKASYG AGVTIQDRDL SVFFTRINDL 23520

LPVYVELLQK AALTNMVNAA KGEITPEQYE KIINEPTAAA IAYGLDKQLT SEEIWQAEEK 23580

LDKPAGDYTI RDYSNNWESG ALKLAPNQMT GSLDATYLKL APNQMTGSLD ATYLKCASDG 23640

SAETCSWEGH CKCASDGSAE TCSWEGHCKC ASDGSAETCS WEGHCKCASD GSAETCSWEG 23700

HCKCASDGSA ETCSWEGHCK LAAISVEPGK ASELGCSSGD LDCLCKVGEC AQMCISNMNA 23760

KGTLLSSNQG SQAADVKNDD DFLNYGISSK APSVITYDEA TKYEAAGITV HKDDYLPFID 23820

MPSEVTQIDA KIPMALDDWP TLSNMIFSGK DNFDTSSVTH RGYQINFLSN SAKDNIQGIT 23880

KPAIRDNIQG ITKPAIGPLG LSPKLQLWDT AGQERAEDYL LNPSPKNFGI GQDIQPKIDA 23940

TTNPGMRQLG LAMLGNKLVI DGLKEVTEIP ATADASRVNV DYTEVPRLAV NMVPFPRYCD 24000

LILGEWRDQI KDVLRIDYIG GGDLFRGSSP NVLYKSANWT PPEGIVRAAS TGSMAEQYTK 24060

AATGTYASST TVYKAENQAV AVGRALVEGS TFAKALYSSA ATGTYASSTT VYKATGTYAS 24120

STTVYKATTV YGESIKAYAD GYVQIVQTYA ASTGSMAEQY TKDLTWSYAA LLTANNRFNV 24180

DETAFTGAWG RGQSAQGASP GVVIASPSKI GADGQSAQGA SPGVVIASPS KIGSLAITDV 24240

SLPFFKIQGI SNPSGALSSG GLGEPKKYTV PSTCGVKPSG ALSSGGLGEP KQAILNNIGA 24300

DGQSAQGASP GVVIASPSKS DPDYFYTWTR SIYAINSGRT GTYASSTTVY KTVGSSCPYC 24360

DSQAPQVRVQ NGAVTWESDP NRVQNGAVTW ESDPNRKPDY FYTWTRYTVP STCGVKSSAA 24420

TGTYASSTTV YKGAVTWESD PNRIVGSISQ LGSWNPSSAT ALSAVQSDVW RDINTVLGSI 24480

HTFDPQNIGA DGQSAQGASP GVVIASPSKA ASTGSMAEQY TKAENQAVAV GRAENQAVAV 24540

GRALVEGSTF AKALVEGSTF AKALYSSAAT GTYASSTTVY KAYADGYVQI VQTYAASTGS 24600

MAEQYTKDLT WSYAALLTAN NRDLTWSYAA LLTANNRIQG ISNPSGALSS GGLGEPKIQG 24660

ISNPSGALSS GGLGEPKNIG ADGQSAQGAS PGVVIASPSK PDYFYTWTRQ AILNNIGADG 24720

QSAQGASPGV VIASPSKQAI LNNIGADGQS AQGASPGVVI ASPSKQAILN NIGADGQSAQ 24780

GASPGVVIAS PSKQAILNNI GADGQSAQGA SPGVVIASPS KQAILNNIGA DGQSAQGASP 24840

GVVIASPSKQ AILNNIGADG QSAQGASPGV VIASPSKQAI LNNIGADGQS AQGASPGVVI 24900

ASPSKQAILN NIGADGQSAQ GASPGVVIAS PSKQAILNNI GADGQSAQGA SPGVVIASPS 24960

KQAILNNIGA DGQSAQGASP GVVIASPSKQ AILNNIGADG QSAQGASPGV VIASPSKQAI 25020

LNNIGADGQS AQGASPGVVI ASPSKQAILN NIGADGQSAQ GASPGVVIAS PSKSAVQSDV 25080

WRSAVQSDVW RSAVQSDVWR SAVQSDVWRS AVQSDVWRSD PDYFYTWTRS DPDYFYTWTR 25140

SDPDYFYTWT RSDPDYFYTW TRSDPDYFYT WTRSDPDYFY TWTRSIYAIN SGRSIYAINS 25200

GRSIYAINSG RTVGSSCPYC DSQAPQVRTV GSSCPYCDSQ APQVRVQNGA VTWESDPNRV 25260

QNGAVTWESD PNRVQNGAVT WESDPNRVQN GAVTWESDPN RVQNGAVTWE SDPNRVQNGA 25320

VTWESDPNRV QNGAVTWESD PNRVQNGAVT WESDPNRVQN GAVTWESDPN RVQNGAVTWE 25380

SDPNRVQNGA VTWESDPNRV QNGAVTWESD PNRVQNGAVT WESDPNRVQN GAVTWESDPN 25440

RKVQNGAVTW ESDPNRKVQN GAVTWESDPN RKVQNGAVTW ESDPNRKASM VWEEAQQVSG 25500

KAVSPSFEDV WSQPRDGAGQ MFIPLNPNAY SPNTLNKDVG GPIEDQNSLQ VGDRFGFDLF 25560

DPTKGPTLLE DFIFRHGGPN FEQLPINQPR HVDGFGIHLF SYLDTQLNRL FYNSLTPAEQ 25620

QFVVDAIRNN VIIQLNRQDL FEAIEAGRSL TPAEQQFVVD AIRSVTSGFV DGIKVGFLAS 25680

VETPASIEAA SELSKTTDVG TFGQKDVHGF ATRIVPEEYV PITKFVTDNG DSKASMVWEE 25740

AQQVSGKASM VWEEAQQVSG KASMVWEEAQ QVSGKASMVW EEAQQVSGKA SMVWEEAQQV 25800

SGKASMVWEE AQQVSGKAVS PSFEDVWSQP RAVSPSFEDV WSQPRAVSPS FEDVWSQPRA 25860

VSPSFEDVWS QPRAVSPSFE DVWSQPRDGA GQMFIPLNPN AYSPNTLNKD GAGQMFIPLN 25920

PNAYSPNTLN KHGGPNFEQL PINQPRHGGP NFEQLPINQP RHGGPNFEQL PINQPRHGGP 25980

NFEQLPINQP RLFSYLDTQL NRNNVIIQLN RNNVIIQLNR NNVIIQLNRS VTSGFVDGIK 26040

SVTSGFVDGI KAAALAELVW SGNRAELVWS GNRASNSLQY VNVQVKDAYS PHEIYSREYL 26100

VANGVQAQAL VPKGIMLDTG RGVQAQALVP KHIVGATAPL WGEQVDDINV SHIVGATAPL 26160

WGEQVDDINV SSMIFEQLEG MSLSKVIPEI DMPSHSSSGW KYNVMANPDA NTPNFNYGGN 26220

GGSWCAPYKT YEVVGNVYKD IEADLQHAET VWGALHAFLV MWEDIALSAD NAHDVPKAAA 26280

LAELVWSGNR AAALAELVWS GNRAAALAEL VWSGNRAAAL AELVWSGNRA SNSLQYVNVQ 26340

VKASNSLQYV NVQVKASNSL QYVNVQVKAS NSLQYVNVQV KDAYSPHEIY SRDAYSPHEI 26400

YSRDAYSPHE IYSRDAYSPH EIYSRDAYSP HEIYSRDAYS PHEIYSRDAY SPHEIYSREY 26460

LVANGVQAQA LVPKEYLVAN GVQAQALVPK EYLVANGVQA QALVPKGIML DTGRIFEQLE 26520

GMSLSKIFEQ LEGMSLSKIF EQLEGMSLSK IFEQLEGMSL SKTYEVVGNV YKYNVMANPD 26580

ANTPNFNYGG NGGSWCAPYK YNVMANPDAN TPNFNYGGNG GSWCAPYKYN VMANPDANTP 26640

NFNYGGNGGS WCAPYKYNVM ANPDANTPNF NYGGNGGSWC APYKATSGGT SAAAPVFAGL 26700

VGMLNDARAW YQESAVSKDF TDITAGSSIG CDGVNPQTGK GFPDVAAHSL TPRPDVAAHS 26760

LTPRPNSALP QVLSNSYGDE EQTVPEYYAK SALPQVLSNS YGDEEQTVPE YYAKSNSYGD 26820

EEQTVPEYYA KSYGDEEQTV PEYYAKYLDQ QITAETKAWY QESAVSKAWY QESAVSKAWY 26880

QESAVSKAWY QESAVSKGFP DVAAHSLTPR GFPDVAAHSL TPRGFPDVAA HSLTPRGFPD 26940

VAAHSLTPRG FPDVAAHSLT PRPDVAAHSL TPRSALPQVL SNSYGDEEQT VPEYYAKYLD 27000

QQITAETKYL DQQITAETKA NEQPTWVYRF FCPTDYLIDV RGTPSVLTEQ GLVKLGVPGN 27060

ELAIEIGSTG DYNARQGTPS VLTEQGLVKS LPLIVGNSDQ EGKTFQGTPS VLTEQGLVKY 27120

PVVQNPVTLA ESSCQSVFNP NIPKNPSAGP GWDQAKPTNG PLAKFQGTPS VLTEQGLVKA 27180

NEQPTWVYRA NEQPTWVYRG TPSVLTEQGL VKNPSAGPGW DQAKPTNGPL AKSLPLIVGN 27240

SDQEGKSLPL IVGNSDQEGK SLPLIVGNSD QEGKARNHGT STVAPQVQAS VYRASVDISN 27300

VDTYSSTEVA NDDSFQQVGK ATFLVWDQQR KASVDISNVD TYSSTEVAND DSFQQVGKNH 27360

GTSTVAPQVQ ASVYRSSTEV ANDDSFQQVG KTLYLTDTDA GVPMIDPRTV YAFDVSEDGS 27420

YLKVASNGYV ITGAGKARNH GTSTVAPQVQ ASVYRARNHG TSTVAPQVQA SVYRATFLVW 27480

DQQRATFLVW DQQRATFLVW DQQRKASVDI SNVDTYSSTE VANDDSFQQV GKTVYAFDVS 27540

EDGSYLKVAS NGYVITGAGK VASNGYVITG AGKIENQSDA DGYSSCSTLK LTGLTTLTTL 27600

SFAALTKSAS SLNSIGDTFK SDKLNVIDFP KSLNSIGDTF KVGSIEFTAL PQLQSLDFTK 27660

TVNGGFQIAR LNVIDFPKGQ LGFWGNKGTY SGDLQLNGVK LNVIDFPKSD KLNVIDFPKS 27720

DKLNVIDFPK TVNGGFQIAR TVNGGFQIAR AVGSDEWTVR LGITYTTYSK MTNDYISALT 27780

KSEMLAEQDK MTNDYISALT KSTITTPWKS VVENNNDGLT AAYRVAPNSG AYLNEADFRY 27840

FYGDNYATLR SGAYLNEADF RTAVGSDEWT VRLGITYTTY SKMTNDYISA LTKMTNDYIS 27900

ALTKMTNDYI SALTKSEMLA EQDKMTNDYI SALTKSEMLA EQDKMTNDYI SALTKSEMLA 27960

EQDKMTNDYI SALTKSVVEN NNDGLTAAYR SVVENNNDGL TAAYRSVVEN NNDGLTAAYR 28020

SVVENNNDGL TAAYRETTMF VLQGFGASMA RLNALQGGRL VQNDFNTLLR QDILGGMVDS 28080

YTDPKTGETT QIHARYGLEA AVPLMYESTG LGLGDMTKVS VADVKIDYIG GGDLFRLVQN 28140

DFNTLLRQDI LGGMVDSYTD PKYGLEAAVP LMYESTGLGL GDMTKALEAY KVNGKAVDFS 28200

GHDEFQGKEP SNDPNPPETY SKFGATGDEY RSDYQECADA PGQKYIARPD IMKSTLPDLS 28260

EVIKVNGKEV GQFKSVDNFH LLTVYAVDFS GHDEFQGKFG ATGDEYRYIA RPDIMKFLDE 28320

ALTYPPPKGI QINDPSINDD SVMIYAPAVR IASAMLDEED EKYFNVKNGD QSPPSALGPL 28380

PSVIERPSIN DDSVMIYAPA VRTDYSVCGE TTIFKTVDDE EGVAAQFKIA SAMLDEEDEK 28440

FLDEALTYPP PKFLDEALTY PPPKGIQIND PSINDDSVMI YAPAVRGIQI NDPSINDDSV 28500

MIYAPAVRIA SAMLDEEDEK IASAMLDEED EKYFNVKIAS AMLDEEDEKY FNVKNGDQSP 28560

PSALGPLPSV IERNGDQSPP SALGPLPSVI ERAGAVAAVV YNNEKHGIPG GGIATGAEGI 28620

KLVLGDAVPE SAAPMGLTPP TKSDKELVSS SAFQSHVKSF EGFPKRLVAH SVATYARIAD 28680

LGKEEYNHPT RAGAVAAVVY NNEKHGIPGG GIATGAEGIK HGIPGGGIAT GAEGIKLVLG 28740

DAVPESAAPM GLTPPTKLVL GDAVPESAAP MGLTPPTKLV LGDAVPESAA PMGLTPPTKS 28800

DKELVSSSAF QSHVKFTDTP VLYGPKKFTD TPVLYGPKML DDAGIYLITD LSSPSESINR 28860

QQLSFVMNQW YEKYGAYSVC SPKSDGQCSD LLKWDVDLYS RLITDLSSPS ESINRDLSSP 28920

SESINRKFTD TPVLYGPKKF TDTPVLYGPK QQLSFVMNQW YEKQQLSFVM NQWYEKCDVA 28980

TTDVYYSGKG GTPDFGPGRS KYTAEGYEAA TKVATIGSAT FARYCASAQE DNATLQALLR 29040

YTAEGYEAAT KYVDAGGFEP SIKSKYTAEG YEAATKVATI GSATFARVAT IGSATFARYV 29100

DAGGFEPSIK DADACNGGGI EYDSPADTPL EFKDNTCNAP IPVSFPVAPT DTKEISFNQA 29160

WLRFAANGNY GSETTAAVIN NFNGRITTAD MDGISSWLPT INGKVIANGN VAGNILVIAK 29220

SDVSDFKEAG LKDADACNGG GIEYDSPADT PLEFKDADAC NGGGIEYDSP ADTPLEFKDA 29280

DACNGGGIEY DSPADTPLEF KFAANGNYGS ETTAAVINNF NGRANNYCSN QVEGPYSLYS 29340

GRVSIWTESY GGRYGPSFTA FFQEQNEKTV YDMAMEAWSK ISYKEPGICE TTPGVKSAGY 29400

APLKPGGCKD QIIECRANNY CSNQVEGPYS LYSGRANNYC SNQVEGPYSL YSGRANNYCS 29460

NQVEGPYSLY SGRISYKEPG ICETTPGVKV SIWTESYGGR AIMGAEEAAK TGGAMWPYRT 29520

LIPDVVGIFA GTPKFVTNMQ AALLKALSEM ILQSEKDYYA SMLQQPKANF EVETPRGITG 29580

TSIARANFEV ETPRDYYASM LQQPKFVTNM QAALLKFVTN MQAALLKTGG AMWPYRTGGA 29640

MWPYRAEDYL LNPSPKLSDL TGDTEYAQLS QKTDDQVSLF ETTIRTDSGF AGLTNVNAAN 29700

GGGRYDNQES FLFAEVLKIT GQEIYRAEDY LLNPSPKTDD QVSLFETTIR AGFAGDDAPR 29760

QEYDESGPSI VHRSYELPDG QVITIGNERV APEEHPVLLT EAPINPKDLT DYLMKIIAPP 29820

ERSYELPDGQ VITIGNERVA PEEHPVLLTE APINPKALLF GAAGSAEDPV VVKNVGFPVV 29880

TVAEDAASSS IKVYATPDQD IEHGRAVEQS LDAIRQGLLT VEDRGPLNEG GLYAERLSGQ 29940

DASAITWKLT GNLGGEDYQD KASPSYLTAT PRALMNGAGA IKDAGYETSI TDYWGRPTVY 30000

GFVPLEYVGS KTAFSDILAK TNTQVPDACT QCFQKMPMPL LVADGRTAFS DILAKAFPDV 30060

AAQGMNFAVY DKELYNIGDY QADANSGSKI AFASYLEEYA RLETIGDTFK QGLQDITLGA 30120

SIGCTGRAFP DVAAQGMNFA VYDKELYNIG DYQADANSGS KQGLQDITLG ASIGCTGRLV 30180

EGAAAGIVVA SPSKQGVLNN IGADGKSSSA YESLTSAVKA SALIAYGNSL ISSDKSVYGI 30240

NNGRPDYFYT WTRPDYFYTW TRSNPDYFYT WTRSNPDYFY TWTRSNPDYF YTWTRSNPDY 30300

FYTWTRSNPD YFYTWTRSNP DYFYTWTRFS VAEILPGAKN VVLDTTALSA NTKVGTIITG 30360

DPLDPPVLKY PAEVFLPGGT YQLGKADKET DIGSAIEKAS AIQLDGIIYR QLSGHVGPLT 30420

SSSSKETDIG SAIEKADKET DIGSAIEKQL SGHVGPLTSS SSKQLSGHVG PLTSSSSKIY 30480

SFFVGGAVPE NLRQTSSEQN PSLEEIQAAQ ATVLPHSPVS NVKSAGEYNT FSPEWPVPLT 30540

KTFDENDTYE IGNKSIDQFF NDAKVPTVLM SPWVGKDGQE ATFHFDRVDW SPSFRAAEVI 30600

NYYTPDHVPV FNAMSIDQFF NDAKNAFITN YPSEQRYDTA TFIDKRIDAT TNPGMRQLGL 30660

AMLGNKNMHD VIGNDGTVPS EFRIDATTNP GMRIDATTNP GMRNAFITNY PSEQRNAFIT 30720

NYPSEQRQLG LAMLGNKAQI TAVNLEARGD GGGGPTFEHL EKSMDNDNTS LLVFGKMGES 30780

VDDFFARAQI TAVNLEARMG ESVDDFFARG IVSGEGEESS DPVKVDNVVA SFKYMQQLLD 30840

QTKVVWQDSV RAQNDPNAFG VVAARDPNAF GVVAARNDPN AFGVVAARAA TYCPENIEKA 30900

QNDPNAFGVV AARAQNDPNA FGVVAARTIF GWDIAEGQKS AGYTPLKVNG VEYGETRSAG 30960

YTPLKVNGVE YGETRSAGYT PLKVNGVEYG ETRGGSILPM QEVALTTRWA SVIDATKKAT 31020

GDVLFNTKHT ADGAWAKGGS ILPMQEVALT TRGGSILPMQ EVALTTRWAS VIDATKDGLE 31080

GSFKWDNLDS AALNTKVEDG NLILTMPKVE DGNLILTMPK VEDGNLILTM PKWDNLDSAA 31140

LNTKWDNLDS AALNTKSAIS QYGDSFAKSQ SDFESEFSTA KVNAGIGIGP DDLVSFIKSA 31200

ISQYGDSFAK SQSDFESEFS TAKGFNIVVA PGLDGRHVDV PLTGEDEITI LAIHDEVSPV 31260

GDTDALLERA PVVQYALNRY LVDQLNPEGK AIHDEVSPVG DTDALLERAI HDEVSPVGDT 31320

DALLERAPVV QYALNRAPVV QYALNRDAEL TDAGVKQAQV AHDFWQKLNT GAVIPVLVRL 31380

GDLSANPIER VLPQVIEATN RIYVTGQSYA GRLGDLSANP IERVLPQVIE ATNRVLPQVI 31440

EATNRNDPVA VFDGSVIPKE AGLVPFQVSP TTKTLGIDIA RGQTPLPILV ADGRTSTTLP 31500

EVCSKNNILE GPDVKGQTPL PILVADGRIN TAAYWKEAIA DVLEHLGEND EDIAVYAPNP 31560

FYKNSILEGP DVKMPMPILV ADGRMPMPIL VADGRNDDDF LNYGISSKSP VTSEYTSVRS 31620

IFEAANEKAI NDYIDSQLDK YLTNSQALAD LPYFAEKGVQ ISTNIPKGVQ ISTNIPKEII 31680

STYSIDGLRS VYQTMTDRYN TDAELYKGGS ELGFRSAADG LASAITSKSG DDISTTDALA 31740

LPEPVQALTK AGSSPTDIIS GISDKTDALD SAIKYDYENV DSDGANKYNL SNGAPAPETV 31800

TNKSMPTSGA VDLVAKCSSH DDCSDELACT DGVCACTADS AVTCSWEGHC AGAKGDNPSI 31860

LGLRCTADSA VTCSWEGHCA GAKDSPNWDV DSDALPAIPE GAKTLADFDA LKTLADFDAL 31920

KINPGPLARL YPDDNLAFIQ AGISDEKLYT GEVFKTDEGK GQEPPAAIVE VQKVAIIDGL 31980

ADPWRSVNIV NYTPSDSYTY SDNSGSWQSV KVTTGGQGAE FTLAKDQTTW SVDGNVVRVT 32040

TGGQGAEFTL AKVTTGGQGA EFTLAKAGQF PISANDGATS TKEAASAALA AGYKQTYTSC 32100

NPLKKTLNYA DALDGENYPQ TPSRVAVAGY DDTTGGVGPL LAQKINPSSG LLEPQTPLAV 32160

SPGSGPRVAV AGYDDTTGGV GPLLAQKTTG AFDESGPPLS QKNALQTMYD TQDKAALDAL 32220

QQSIYLQPKF SDGNGLFYQY ERLGAEVVTA GRIYAVADTQ ERLINQVELS EDKAVITDIV 32280

NQQRAVITDI VNQQRGENIL SAPLITYAPA GPELDEKELG FTAVGGEGKD IQYLENYQGQ 32340

GYSGPAVKIL QYAQGRDYSN NWESGALKDD YMPFIEVPRE AAEIDSHWER TIPIDNDVDY 32400

VVTGYRVYWV DSGPRTGDGV NDAPSLKDGQ EQEILARADA IVAAIRSALI AFEKNINMLL 32460

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