抗b7h3嵌合抗原受体及其应用
阅读说明：本技术 抗b7h3嵌合抗原受体及其应用 (anti-B7H3 chimeric antigen receptor and application thereof ) 是由 罗敏 李光超 周兆 王学俊 于 2020-12-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供了抗B7H3嵌合抗原受体及其应用,所述抗B7H3嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域；所述抗原结合结构域为抗人B7H3抗体。本发明的抗B7H3嵌合抗原受体对B7H3阳性肿瘤细胞具有特异性靶向作用,表达抗B7H3嵌合抗原受体的T细胞体内外杀伤作用显著,能够有效清除B7H3阳性肿瘤细胞,在肿瘤治疗领域具有重要意义。(The invention provides an anti-B7H3 chimeric antigen receptor and application thereof, wherein the anti-B7H3 chimeric antigen receptor comprises an antigen binding domain, a hinge region, a transmembrane domain and a signaling domain; the antigen binding domain is an anti-human B7H3 antibody. The anti-B7H3 chimeric antigen receptor has a specific targeting effect on B7H3 positive tumor cells, has an obvious in-vivo and in-vitro killing effect on T cells expressing the anti-B7H3 chimeric antigen receptor, can effectively remove the B7H3 positive tumor cells, and has important significance in the field of tumor treatment.)
本申请是名称为：抗B7H3嵌合抗原受体及其应用，申请号为CN202011476183.6的发明专利的分案申请，母案申请日为2020年12月14日。
技术领域
本发明属于生物医药
技术领域
，涉及抗B7H3嵌合抗原受体及其应用。背景技术
B7-H3(B7 homolog 3 protein，又名CD276)属于B7/CD28免疫球蛋白超家族，是一种拥有单向跨膜结构的蛋白质(参见：Steinberger P,Majdic O,Derdak S V,etal.Molecular Characterization of Human 4Ig-B7-H3,a Member of the B7 Familywith Four Ig-Like Domains[J].Journal of Immunology,2004,172(4):2352-2359.)，由316个氨基酸组成，在氨基端有一信号肽，包括细胞外的免疫球蛋白样可变区(IgV)、恒定区(IgC)、跨膜区和45个氨基酸的胞浆区，在单核细胞、树突细胞以及激活的T细胞中表达。
B7-H3是一种T细胞共抑制分子，具有部分共刺激功能，当存在抗CD3抗体时，B7-H3可促进CD4+T细胞和CD8+T细胞群的增殖，选择性地刺激γ-干扰素(IFN-γ)的产生，TLT-2转入T细胞后，通过与B7-H3相互作用可以促进白细胞介素(IL)-2和IFN-γ的产生，阻断B7-H3和TLT-2的相互作用可以控制由CD8+T细胞介导的超敏反应。另一方面，在人类和小鼠中的实验证明，B7-H3也具有共抑制作用，可以抑制Treg细胞，从而使肿瘤逃逸免疫反应，B7-H3还可抑制组织培养中的NK细胞活性，从而降低NK细胞的功能。
B7H3在肿瘤细胞中的高表达通常与肿瘤浸润淋巴细胞减少、癌症进展加快以及恶性肿瘤(神经系统肿瘤、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结肠直肠癌、胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌、肺癌和透明细胞肾癌)的临床结果密切相关。由于其在多种肿瘤中广泛表达，B7H3已成为癌症免疫疗法的潜在靶标。但目前鲜有靶向B7H3的免疫疗法报道。
发明内容
针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供了抗B7H3嵌合抗原受体及其应用，所述抗B7H3嵌合抗原受体采用对人B7H3具有结合能力的抗B7H3抗体为抗原结合结构域，不仅可以结合游离的B7H3蛋白，还可以结合细胞表面的B7H3蛋白，在肿瘤治疗领域具有重要应用前景。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了抗B7H3嵌合抗原受体，所述抗B7H3嵌合抗原受体包括抗原结合结构域、铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域，所述抗原结合结构域为抗B7H3抗体，所述抗B7H3抗体包括SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。
本发明中，采用对B7H3具有结合能力的抗B7H3抗体作为嵌合抗原受体的抗原结合结构域，使得嵌合抗原受体可以特异性结合B7H3阳性肿瘤细胞，实现对B7H3阳性肿瘤的特异性靶向作用。
优选地，SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2通过连接肽连接形成抗B7H3抗体23H1；
SEQ ID NO:1：
DIVMTQSPSSLTVTAGENVTMSCKSSQTLLNNGNQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYLASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKLELK；
SEQ ID NO:2：
EVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMSWVRQPPGKALEWLGFIRNKVNDYTTEYSVSVKGRFTISRDNSQTILYLQMNTLRAEDSATYYCARDSPYRPFAYWGQGTLVTVSA。
优选地，所述抗原结合结构域包括SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4通过连接肽连接形成抗B7H3抗体Enoblituzumab(Eno)；
SEQ ID NO:3：
DIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIK；
SEQ ID NO:4：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSS。
优选地，所述抗原结合结构域包括SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6通过连接肽连接形成抗B7H3抗体huM30；
SEQ ID NO:5：
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRLIYMHWYQQKPGQAPRPLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWNSNPPTFGQGTKVEIK；
SEQ ID NO:6：
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYVMHWVRQAPGQGLEWMGYINPYNDDVKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGYYGSPLYYFDYWGQGTLVTVSS。
优选地，所述铰链区包括CD8α铰链区。
优选地，所述跨膜结构域包括CD8α跨膜区和/或CD28跨膜区。
优选地，所述信号传导结构域包括CD3ζ。
优选地，所述信号传导结构域还包括4-1BB、CD28胞内区、DAP10或OX40中的任意一种或至少两种的组合。
优选地，所述抗B7H3嵌合抗原受体还包括信号肽。
优选地，所述信号肽包括IgGκ轻链信号肽、CD8α信号肽、GM-CSF信号肽、HSA信号肽、IgG重链信号肽、IgG轻链信号肽、CD33信号肽、IL-2信号肽或胰岛素信号肽中的任意一种。
作为优选技术方案，本发明提供了抗B7H3嵌合抗原受体，所述抗B7H3嵌合抗原受体包括信号肽、抗B7H3抗体、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ。
优选地，所述抗B7H3嵌合抗原受体L23H1-CAR由IgGκ信号肽、抗B7H3抗体23H1、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ串联形成，包括SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:7：
MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARCDIVMTQSPSSLTVTAGENVTMSCKSSQTLLNNGNQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYLASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKLELKGGGGSGGGGSGGGGSEVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMSWVRQPPGKALEWLGFIRNKVNDYTTEYSVSVKGRFTISRDNSQTILYLQMNTLRAEDSATYYCARDSPYRPFAYWGQGTLVTVSATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。
优选地，所述抗B7H3嵌合抗原受体23H1-CAR由CD8α信号肽、抗B7H3抗体23H1、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ串联形成，包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:8：
MALPVTALLLPLALLLHAARPDIVMTQSPSSLTVTAGENVTMSCKSSQTLLNNGNQKNFLTWYQQKPGQPPKLLIYLASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYTYPLTFGAGTKLELKGGGGSGGGGSGGGGSEVKLVESGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFTDYYMSWVRQPPGKALEWLGFIRNKVNDYTTEYSVSVKGRFTISRDNSQTILYLQMNTLRAEDSATYYCARDSPYRPFAYWGQGTLVTVSATTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。
优选地，所述抗B7H3嵌合抗原受体Eno-CAR由CD8α信号肽、抗B7H3抗体Enoblituzumab、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ串联形成，包括SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:9：
MALPVTALLLPLALLLHAARPDIQLTQSPSFLSASVGDRVTITCKASQNVDTNVAWYQQKPGKAPKALIYSASYRYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNNYPFTFGQGTKLEIKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAYISSDSSAIYYADTVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRDEDTAVYYCGRGRENIYYGSRLDYWGQGTTVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。
优选地，所述抗B7H3嵌合抗原受体huM30-CAR由CD8α信号肽、抗B7H3抗体huM30、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ串联形成，包括SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列；
SEQ ID NO:10：
MALPVTALLLPLALLLHAARPEIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASSRLIYMHWYQQKPGQAPRPLIYATSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWNSNPPTFGQGTKVEIKGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTNYVMHWVRQAPGQGLEWMGYINPYNDDVKYNEKFKGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARWGYYGSPLYYFDYWGQGTLVTVSSTTTPAPRPPTPAPTIASQPLSLRPEACRPAAGGAVHTRGLDFACDIYIWAPLAGTCGVLLLSLVITLYCKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR。
第二方面，本发明提供了核酸分子，所述核酸分子包括第一方面所述的抗B7H3嵌合抗原受体的编码基因。
优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:11所示的核酸序列，为L23H1-CAR的编码基因。
优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:12所示的核酸序列，为23H1-CAR的编码基因。
优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:13所示的核酸序列，为Eno-CAR的编码基因。
优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:14所示的核酸序列，为huM30-CAR的编码基因。
第三方面，本发明提供了一种表达载体，所述表达载体包括第二方面所述的核酸分子。
优选地，所述表达载体为含有第二方面所述的核酸分子的慢病毒载体、逆转录病毒载体或腺相关病毒载体中的任意一种，优选为慢病毒载体。
第四方面，本发明提供了一种重组慢病毒，所述重组慢病毒由转染有第三方面所述的表达载体和辅助质粒的哺乳动物细胞制备得到。
第五方面，本发明提供了一种嵌合抗原受体T细胞，所述嵌合抗原受体T细胞表达第一方面所述的抗B7H3嵌合抗原受体。
本发明中，表达抗B7H3嵌合抗原受体的T细胞利用嵌合抗原受体的抗原结合结构域靶向B7H3阳性肿瘤细胞，发挥T细胞的杀伤功能，实现了对B7H3阳性肿瘤的杀伤作用。
优选地，所述嵌合抗原受体T细胞的基因组中整合有第二方面所述的核酸分子。
优选地，所述嵌合抗原受体T细胞包括第三方面所述的表达载体和/或第四方面所述的重组慢病毒。
第六方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括第五方面所述的嵌合抗原受体T细胞。
优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂中的任意一种或至少两种的组合。
第七方面，本发明提供了第一方面所述的抗B7H3嵌合抗原受体、第二方面所述的核酸分子、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的重组慢病毒、第五方面所述的嵌合抗原受体T细胞或第六方面所述的药物组合物在制备恶性肿瘤治疗药物中的应用。
优选地，所述恶性肿瘤包括急性淋巴细胞白血病、髓性白血病、黑色素瘤、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌或宫颈癌中的任意一种或至少两种的组合。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明采用抗人B7H3抗体作为抗原结合结构域构建CAR分子，表达抗B7H3 CAR的T细胞在不同的效靶比下对B7H3阳性肿瘤细胞均具有显著的杀伤作用；
(2)本发明的抗B7H3 CAR-T细胞与肿瘤细胞共培养后分泌大量的细胞因子IFN-γ，间接证明了CAR-T对肿瘤细胞的杀伤功效；
(3)本发明的抗B7H3 CAR-T具有显著的体内药效，向肿瘤模型小鼠给药后，可以明显抑制肿瘤细胞生长、促进肿瘤细胞凋亡、同时分泌细胞因子IFN-γ，有效清除肿瘤细胞。
附图说明
图1为抗B7H3 CAR分子的结构示意图；
图2为重组慢病毒载体pCDH-EF1-anti-B7H3-CAR图谱；
图3为Eno-CAR-T、huM30-CAR-T流式细胞图；
图4A为Eno-CAR-T按照不同的效靶比与靶细胞共孵育后分泌IFN-γ的情况，图4B为huM30-CAR-T按照不同的效靶比与靶细胞共孵育后分泌IFN-γ的情况。
具体实施方式
为进一步阐述本发明所采取的技术手段及其效果，以下结合实施例和附图对本发明作进一步地说明。可以理解的是，此处所描述的具体实施方式仅仅用于解释本发明，而非对本发明的限定。
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购获得的常规产品。
实施例1 CAR-T细胞的制备
本实施例选择抗B7H3抗体23H1、Enoblituzumab(Eno)和huM30作为抗原结合结构域构建CAR分子，其中，23H1对B7H3具有显著的结合能力，不仅可以结合游离的B7H3蛋白，还可以结合细胞表面的B7H3蛋白；huM30是日本第一三共公司(Daiichi Sankyo)的人源化B7H3抗体(CN103687945B)，正在开展临床I期试验用于治疗B7H3阳性的实体肿瘤(NCT02192567)；Enoblituzumab(MGA271)是一款经过免疫分子优化的、针对B7H3靶点的全新单克隆抗体，由MacroGenics采用独家Fc优化技术开发，具有独特的抗体优势和治疗潜力，全球尚无此类药物获批，Enoblituzumab代表了全球领先的B7H3抗体药物。
本实施例以上述抗B7H3抗体为CAR分子的抗原结合结构域，结合铰链区、跨膜结构域和信号传导结构域，构建图1所示的抗B7H3 CAR分子。
具体地，CAR分子为：
a.IgGκ轻链信号肽、23H1、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ(SEQ ID NO:7)；
b.CD8α信号肽、23H1、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ(SEQ ID NO:8)；
c.CD8α信号肽、Eno、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ(SEQ ID NO:9)；
d.CD8α信号肽、huM30、CD8α铰链区、CD8α跨膜区、4-1BB和CD3ζ(SEQ ID NO:10)。
全基因合成以上CAR分子的编码基因，通过PCR、酶切、重组等步骤将合成的CAR分子编码基因克隆至慢病毒载体pCDH中，得到如图2所示的重组慢病毒载体pCDH-EF1-anti-B7H3-CAR。
利用293T细胞和辅助质粒将重组慢病毒质粒载体包装为重组慢病毒颗粒，感染激活的T细胞，得到表达不同CAR的CAR-T细胞23H1-CAR-T、L23H1-CAR-T、Eno-CAR-T和huM30-CAR-T。
实施例2 CAR-T细胞对CAR的表达效率
采用流式细胞仪检测CAR-T细胞CAR的表达率。
如图3所示，Eno-CAR-T细胞CAR的表达率为27.3％，huM30-CAR-T细胞CAR的表达率为45.2％。
实施例3 CAR-T细胞与肿瘤细胞共培养分泌IFN-γ的能力
将Eno-CAR-T细胞用含2mM GlutaMAX、10mM HEPES、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640无血清培养基稀释后，按照不同的效靶比分别与1×104个靶细胞(Daudi、H929、Jurkat、Tonly、A375、A549、PC9、HCT116、SY5Y、SH、MC或293T)共培养于96孔圆底板中，每个实验设置3个复孔，37℃、5％CO2培养箱孵育16h；每孔取50μL上清液检测细胞因子IFN-γ的分泌情况。
huM30-CAR-T细胞用含2mM GlutaMAX、10mM HEPES、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI-1640无血清培养基稀释后，按照效靶比为10:1分别与1×104个靶细胞(Jurkat、A375、A549、HCT116、K562、SK-N-BE(2)、HONE1或HTB20)共培养于96孔圆底板中，每个实验设置3个复孔，37℃、5％CO2培养箱孵育16h；每孔取50μL上清液检测细胞因子IFN-γ的分泌情况。
采用人IFN-γ酶联免疫试剂盒(深圳欣博盛生物科技有限公司)检测上清液中的IFN-γ含量：用试剂盒内的样品稀释液将上清液稀释20～30倍，吸取100μL加入到预包被的酶标板中，密封后37℃孵育1.5小时；孵育后的酶标板用PBST洗涤、甩干后，每孔加入100μL生物素化抗体，37℃孵育1小时，洗涤、甩干；每孔加入100μLHRP标记链霉亲和素，用铂纸包裹，37℃培养箱温育30min，洗涤、甩干；每孔加入100μLTMB底物显色液，37℃避光反应15min，加入100μL/孔终止液终止反应；用Infinite F50酶标仪(TECAN)读取450nm波长的OD值。
如图4A所示，Eno-CAR-T细胞与B7H3阳性的黑色素瘤细胞A375、肺癌细胞A549、PC9、结肠癌细胞HCT116、神经母细胞瘤SH-SY5Y、SK-N-SH、SK-N-MC细胞等共孵育，都能释放大量的IFN-γ；而与B7H3表达阴性的靶细胞Daudi、H929、jurkat共孵育不能释放明显的IFN-γ。
如图4B所示，huM30-CAR-T和Eno-CAR-T细胞都能杀伤A375、A549、HTC116、K562、HONE1和HTB20，而对Jurkat、SK-N-BE(2)无杀伤作用。
综上所述，本发明的抗B7H3 CAR-T细胞在不同的效靶比下对B7H3阳性肿瘤细胞具有显著的杀伤作用，与肿瘤细胞共培养后分泌大量的细胞因子IFN-γ，体内药效显著，能够有效清除B7H3阳性肿瘤细胞。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州百暨基因科技有限公司
<120> 抗B7H3嵌合抗原受体及其应用
<130> 20210804
<160> 14
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Thr Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Glu Asn Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asn Asn
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
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1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
35 40 45
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50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Gln Thr Ile
65 70 75 80
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85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Pro Tyr Arg Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Asn Tyr Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 4
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val
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65 70 75 80
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Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
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<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
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20 25 30
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<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
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<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
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85 90 95
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala
115 120 125
Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly
165 170 175
Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly
180 185 190
Lys Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Val Asn Asp Tyr
195 200 205
Thr Thr Glu Tyr Ser Val Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
210 215 220
Asp Asn Ser Gln Thr Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala
225 230 235 240
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Pro Tyr Arg Pro
245 250 255
Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Thr Thr
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
275 280 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
290 295 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
305 310 315 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
325 330 335
Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
340 345 350
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
355 360 365
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
370 375 380
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
385 390 395 400
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
405 410 415
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
420 425 430
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
435 440 445
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
450 455 460
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
465 470 475 480
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 8
<211> 492
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
20 25 30
Thr Val Thr Ala Gly Glu Asn Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln
35 40 45
Thr Leu Leu Asn Asn Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln
50 55 60
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr
65 70 75 80
Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Gln Asn Asp Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Glu Leu Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
145 150 155 160
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe
165 170 175
Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys
180 185 190
Ala Leu Glu Trp Leu Gly Phe Ile Arg Asn Lys Val Asn Asp Tyr Thr
195 200 205
Thr Glu Tyr Ser Val Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
210 215 220
Asn Ser Gln Thr Ile Leu Tyr Leu Gln Met Asn Thr Leu Arg Ala Glu
225 230 235 240
Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Ser Pro Tyr Arg Pro Phe
245 250 255
Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Thr Thr Thr
260 265 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
275 280 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
290 295 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305 310 315 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
325 330 335
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
340 345 350
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
355 360 365
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe
370 375 380
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
385 390 395 400
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
405 410 415
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
420 425 430
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
435 440 445
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
450 455 460
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
465 470 475 480
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485 490
<210> 9
<211> 488
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu
20 25 30
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln
35 40 45
Asn Val Asp Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
50 55 60
Pro Lys Ala Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
100 105 110
Asn Asn Tyr Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly
165 170 175
Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
180 185 190
Tyr Ile Ser Ser Asp Ser Ser Ala Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Gly
225 230 235 240
Arg Gly Arg Glu Asn Ile Tyr Tyr Gly Ser Arg Leu Asp Tyr Trp Gly
245 250 255
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
260 265 270
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
275 280 285
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
290 295 300
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
305 310 315 320
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
325 330 335
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
340 345 350
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
355 360 365
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
370 375 380
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
385 390 395 400
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
405 410 415
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
420 425 430
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
435 440 445
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
450 455 460
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
465 470 475 480
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485
<210> 10
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu
20 25 30
Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Ser
35 40 45
Arg Leu Ile Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
50 55 60
Arg Pro Leu Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Ile Pro Ala
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Asn
100 105 110
Ser Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val
145 150 155 160
Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Val Met
165 170 175
His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Tyr
180 185 190
Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Asp Val Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Gly
195 200 205
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
210 215 220
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Trp Gly Tyr Tyr Gly Ser Pro Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
245 250 255
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro
260 265 270
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
275 280 285
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
290 295 300
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
305 310 315 320
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
325 330 335
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
340 345 350
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
355 360 365
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
370 375 380
Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
385 390 395 400
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
405 410 415
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
420 425 430
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
435 440 445
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
450 455 460
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
465 470 475 480
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
485
<210> 11
<211> 1482
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
atggacatgc gggtgcctgc tcagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gagaggagcc 60
aggtgcgata ttgttatgac ccaaagtcca tcctctctga cagtgacagc tggcgaaaac 120
gttaccatga gttgcaagtc aagtcagacc ctgctcaaca acggtaatca gaagaatttc 180
ctgacctggt accagcagaa gcccggacag ccacccaaac tgctgatcta cctggcttcc 240
actcgcgaga gcggagtgcc cgataggttc accgggtcag gcagcggaac cgacttcaca 300
ctgacaatat catctgtgca ggcagaggat ctcgccgttt attactgcca gaatgactat 360
acatacccac tcacatttgg cgccggaact aagctggagc tgaagggagg aggcgggtcc 420
ggcggaggcg gttcaggagg cggcggaagt gaagtgaaac tggttgaatc tggaggcggt 480
ctggtgcaac ccggaggctc cctgagactc agctgcgcca cctccgggtt cacttttaca 540
gactattata tgagttgggt ccgccagcca ccaggcaaag ccctggaatg gctcggcttt 600
attagaaata aggtgaacga ttacactact gaatatagcg tgtccgttaa agggcgcttt 660
accatcagcc gggataatag ccagacaata ctgtacctgc aaatgaatac cctcagagcc 720
gaggatagcg ctacatacta ctgtgctcgg gactcaccat acaggccctt cgcttattgg 780
ggacagggta ctctggtcac agtttctgca actacgaccc ctgcaccgcg gccgcctact 840
cctgcaccta caatcgcaag tcagccactg agtctcagac ccgaagcatg ccgccctgct 900
gcaggcggag ctgtccatac acgcggactg gactttgcat gcgatatata catctgggca 960
ccactggccg gcacttgcgg cgtgctgctc ctgtccctcg tgattaccct gtactgcaaa 1020
cgcggcagga agaagctcct gtatatcttt aaacagccct tcatgaggcc agtgcagacc 1080
actcaagagg aagacggttg tagctgccgg tttcccgagg aagaagaggg aggctgcgag 1140
ctccgcgtga agttctcccg ctcagccgat gcacccgcct atcagcaagg gcagaaccag 1200
ctgtacaatg agctcaacct gggaagaagg gaggaatatg acgttctgga taaacggcgc 1260
ggtcgcgatc ccgaaatggg tgggaagcct cgcaggaaga atcctcagga agggctctac 1320
aatgagctgc agaaagacaa aatggcagag gcctattctg aaatcggcat gaagggcgag 1380
cgccgcagag gcaaaggaca cgacggcctg taccagggcc tgtctacagc caccaaggac 1440
acctatgacg ctctccacat gcaagccctg ccaccaaggt ga 1482
<210> 12
<211> 1479
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
atggctctgc ctgttactgc tctgctgctg cctctggctc tcctgctgca tgctgccagg 60
ccagatatcg tcatgaccca atctccatca tcactcaccg tcacagctgg agaaaatgtg 120
accatgtcat gcaaaagtag tcagaccctg ctcaataatg gtaaccagaa gaactttctc 180
acttggtatc agcagaaacc cgggcagcca ccaaagctcc tgatctacct cgccagtaca 240
cgggaatcag gtgtgcccga taggttcacc gggagtggtt ccggcacaga cttcaccctg 300
acaatcagca gtgtgcaggc cgaggacctg gccgtttact attgccagaa cgattatacc 360
tatcctctga cttttggcgc tgggacaaaa ctggagctga agggaggtgg cgggtcagga 420
ggaggcgggt ctggcggcgg aggttctgag gtgaaactgg tggaatcagg tggcggcctg 480
gtgcagcctg gcggatctct gaggctgagt tgcgccacca gtgggtttac tttcacagat 540
tattacatgt cttgggtgag gcagccacct ggaaaggccc tggaatggct cggcttcatc 600
cggaacaaag tgaatgacta caccacagag tacagtgtga gcgtgaaggg cagattcacc 660
atctcccggg ataacagtca gaccatcctg tatctgcaga tgaacaccct gcgggctgag 720
gattcagcaa cctactactg tgcaagagac agcccttatc ggcccttcgc ctactgggga 780
cagggaacac tggtgaccgt ctctgcaact acgacccctg caccgcggcc gcctactcct 840
gcacctacaa tcgcaagtca gccactgagt ctcagacccg aagcatgccg ccctgctgca 900
ggcggagctg tccatacacg cggactggac tttgcatgcg atatatacat ctgggcacca 960
ctggccggca cttgcggcgt gctgctcctg tccctcgtga ttaccctgta ctgcaaacgc 1020
ggcaggaaga agctcctgta tatctttaaa cagcccttca tgaggccagt gcagaccact 1080
caagaggaag acggttgtag ctgccggttt cccgaggaag aagagggagg ctgcgagctc 1140
cgcgtgaagt tctcccgctc agccgatgca cccgcctatc agcaagggca gaaccagctg 1200
tacaatgagc tcaacctggg aagaagggag gaatatgacg ttctggataa acggcgcggt 1260
cgcgatcccg aaatgggtgg gaagcctcgc aggaagaatc ctcaggaagg gctctacaat 1320
gagctgcaga aagacaaaat ggcagaggcc tattctgaaa tcggcatgaa gggcgagcgc 1380
cgcagaggca aaggacacga cggcctgtac cagggcctgt ctacagccac caaggacacc 1440
tatgacgctc tccacatgca agccctgcca ccaaggtga 1479
<210> 13
<211> 1464
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
atggcactgc ctgtgactgc cctcctgctg cctctggcac tcctgctcca cgcagcccgg 60
cctgacatcc agctgactca gtcaccctct ttcctgagcg catctgtggg agacagggtt 120
accatcacct gcaaggcaag ccaaaatgtg gacaccaacg tggcctggta tcagcagaag 180
ccaggcaagg cacccaaagc cctgatctac agcgccagct accgctactc cggagtccca 240
tctcggttct ctggatcagg cagcggaacc gactttacac tgacaatctc aagcctccaa 300
ccagaggact ttgccaccta ttactgccag cagtacaaca attacccttt cacattcggg 360
cagggaacca agctggaaat taaaggcggc ggtggatctg gaggtggcgg gagtggtgga 420
ggagggtcag aggtgcagct ggtggagtct ggtggtggac tggtccaacc aggcggttct 480
ctgcgcctca gttgtgccgc ctcagggttt acattctcta gcttcggaat gcattgggtg 540
aggcaagctc caggcaaagg tctggaatgg gtggcttaca tctcttccga cagttcagcc 600
atctattacg ctgataccgt taagggccgc tttaccatca gcagagataa tgccaagaac 660
tcactgtacc tgcagatgaa tagtctccgg gatgaggaca ccgcagtcta ttattgcggt 720
agaggtcggg agaatatata ctacggctcc agactggact actggggcca agggactact 780
gtcaccgtga gctccactac gacccctgca ccgcggccgc ctactcctgc acctacaatc 840
gcaagtcagc cactgagtct cagacccgaa gcatgccgcc ctgctgcagg cggagctgtc 900
catacacgcg gactggactt tgcatgcgat atatacatct gggcaccact ggccggcact 960
tgcggcgtgc tgctcctgtc cctcgtgatt accctgtact gcaaacgcgg caggaagaag 1020
ctcctgtata tctttaaaca gcccttcatg aggccagtgc agaccactca agaggaagac 1080
ggttgtagct gccggtttcc cgaggaagaa gagggaggct gcgagctccg cgtgaagttc 1140
tcccgctcag ccgatgcacc cgcctatcag caagggcaga accagctgta caatgagctc 1200
aacctgggaa gaagggagga atatgacgtt ctggataaac ggcgcggtcg cgatcccgaa 1260
atgggtggga agcctcgcag gaagaatcct caggaagggc tctacaatga gctgcagaaa 1320
gacaaaatgg cagaggccta ttctgaaatc ggcatgaagg gcgagcgccg cagaggcaaa 1380
ggacacgacg gcctgtacca gggcctgtct acagccacca aggacaccta tgacgctctc 1440
cacatgcaag ccctgccacc aagg 1464
<210> 14
<211> 1464
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
atggctctgc ctgttactgc tctgctcctg cctctggctc tgctgctgca cgccgcacgg 60
cccgagatcg tcctgacaca gagtcctgcc accctcagcc tcagtcctgg cgaaagagcc 120
accctgtcct gtagagcaag ctcaagactg atatacatgc actggtacca acagaaaccc 180
ggacaggcac caagacctct gatatatgcc acaagcaacc tggcatcagg gataccagct 240
agattttctg gatctggtag cggcactgat ttcaccctca ctatctccag tctggagcct 300
gaagatttcg ctgtgtacta ctgccagcaa tggaactcta acccacccac tttcgggcag 360
ggcacaaagg tcgagattaa aggtggaggc gggtcaggag gaggaggatc tggaggtggc 420
gggagtcagg tccagctggt ccagtccggc gctgaagtta agaaaccagg tagttctgtt 480
aaagtctcat gcaaggccag cggctacact tttacaaatt atgtcatgca ctgggtgcgg 540
caggctccag gacaagggct cgagtggatg ggctatatta acccttataa tgacgatgtg 600
aagtataatg agaaattcaa agggagggtg accatcactg ccgacgagag tacctcaacc 660
gcatacatgg agctgtcctc cctgaggtcc gaggacaccg ccgtgtacta ttgcgcacgc 720
tgggggtatt atgggagccc actgtactac tttgactact ggggacaggg taccctcgtc 780
accgtgtcct ccactacgac ccctgcaccg cggccgccta ctcctgcacc tacaatcgca 840
agtcagccac tgagtctcag acccgaagca tgccgccctg ctgcaggcgg agctgtccat 900
acacgcggac tggactttgc atgcgatata tacatctggg caccactggc cggcacttgc 960
ggcgtgctgc tcctgtccct cgtgattacc ctgtactgca aacgcggcag gaagaagctc 1020
ctgtatatct ttaaacagcc cttcatgagg ccagtgcaga ccactcaaga ggaagacggt 1080
tgtagctgcc ggtttcccga ggaagaagag ggaggctgcg agctccgcgt gaagttctcc 1140
cgctcagccg atgcacccgc ctatcagcaa gggcagaacc agctgtacaa tgagctcaac 1200
ctgggaagaa gggaggaata tgacgttctg gataaacggc gcggtcgcga tcccgaaatg 1260
ggtgggaagc ctcgcaggaa gaatcctcag gaagggctct acaatgagct gcagaaagac 1320
aaaatggcag aggcctattc tgaaatcggc atgaagggcg agcgccgcag aggcaaagga 1380
cacgacggcc tgtaccaggg cctgtctaca gccaccaagg acacctatga cgctctccac 1440
atgcaagccc tgccaccaag gtga 1464
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