阅读说明：本技术 依克多因和灵芝提取物对皮肤炎症的协同作用 (Synergistic effect of ectoin and ganoderma extract on skin inflammation ) 是由 安德鲁·菲利普·萨拉扎 乔尔格·冯·哈根 亚历山德拉里·兰 鲁楠 于 2019-09-27 设计创作，主要内容包括：本发明涉及由依克多因和从灵芝(Ganode rma)获得的提取物组成的活性混合物,以及包含所述组合物或组分的化妆品制剂、皮肤病学制剂、药物组合物或医疗设备。本发明还涉及：依克多因与从灵芝(Ganoderma)获得的提取物的组合的用途,其表现出所述提取物的抗炎活性的效力的增强,以及衍生的非治疗方法。(The present invention relates to an active mixture consisting of ectoin and an extract obtained from ganoderma lucidum (ganoderma), and to a cosmetic, dermatological, pharmaceutical or medical device comprising said composition or component. The invention also relates to: use of ectoin in combination with an extract obtained from Ganoderma lucidum (Ganoderma) showing an enhancement of the efficacy of the anti-inflammatory activity of said extract, and derived non-therapeutic methods.)

具体实施方式

本发明意义上的“活性混合物”是指所述组分的混合物，其对皮肤细胞，优选对人皮肤细胞具有协同作用。

依克多因是一种低分子量的环状氨基酸衍生物，可从各种嗜盐微生物中分离或合成制备。依克多因具有不与细胞代谢反应的优点。

依克多因指(S)-1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸，CAS号96702-03-3。

依克多因是市售的，每种质量都可以不受限制地使用。依克多因是市售的，例如，来自默克KGaA公司，达姆施塔特的Ectoin，来自bitop的来自Bloomage Biotechnology的Bioecto^TM Ectoin，或Uniproma的Ectoine。

依克多因的制备在文献(DE4342560)中进行说明。(S)-1,4,5,6-四氢-2-甲基-4-嘧啶羧酸也可以通过微生物方法(Severin et al.,J.Gen.Microb.138(1992)1629-1638或EP1409707A)获得。

如所公开的，所述由依克多因和从灵芝(Ganoderma)，优选从灵芝(Ganodermalucidum)得到的提取物组成的活性混合物的特征在于灵芝提取物是水提取物。

文献中对于灵芝描述了超过150种化合物。优选灵芝水提取物的主要成分是87％的碳水化合物，例如β葡聚糖，果糖，甘露醇，10％的苯酚衍生物，例如没食子酸，芪，2％的单宁酸和1％生物碱类，黄酮类，皂甙。优选的灵芝水提取物显示出极性和极性较小的物质的混合物，其在UV中吸收。

灵芝(Ganoderma lucidum)或紫芝(Ganoderma sinensis)的干燥子实体可商购获得。用水提取是基于在提取领域中常见的阶段，并且本领域技术人员能够基于一般知识调整其参数。

灵芝提取物可以优选通过包括以下步骤的方法获得：

-提供干燥的灵芝子实体，和

-在100℃用水萃取。

提取过程之后可以进行超滤，纳米过滤，反渗透和/或喷雾干燥。

或者，灵芝(Ganoderma lucidum)或紫芝(Ganoderma sinensis)水提取物可商购获得。

优选的灵芝提取物优选是可商购自Draco Natural Products,Inc的提取物。

本发明进一步涉及如前所述或优选描述的活性混合物，其中依克多因和灵芝提取物以5：1至1：5的重量比存在，优选以3：1至1：3(重量)的比例存在，特别优选是1：1(重量)的比率。

本发明进一步涉及如之前描述的所述活性混合物或优选具有如之前描述的组分的所述活性混合物在制备化妆品、皮肤病学或药物组合物或医疗设备中的用途。

所述化妆品、皮肤病学或药物组合物或医疗装置可包含如前所述或优选描述的活性混合物，其量为0.01至10重量％，优选0.1至5重量％，更优选0.5至3重量％，基于组合物的总重量。

本发明还涉及化妆品、皮肤病学、药物组合物或医疗装置，其包含依克多因和如前所述或优选描述的灵芝(Ganoderma)的提取物。

在所述化妆品、皮肤病学或药物组合物或医疗装置中，依克多因的总重量含量为0.01至10重量％，优选0.1至5重量％，更优选0.5至3重量％，基于组合物或装置的总重量。

在所述化妆品、皮肤病学或药物组合物或医疗装置中，灵芝提取物的总重量含量为0.01至10重量％，优选0.1至5重量％，更优选0.5至3重量％，基于组合物或装置的总重量。

在所述化妆品、皮肤病学或药物组合物或医疗装置中，依克多因和灵芝提取物以5：1至1：5的重量比，优选以3：1至1：3的重量比存在，特别优选以按重量计1：1的比例存在。

出于本发明的目的，术语“组合物”也与术语“制剂”同义使用。

这里的制剂通常是化妆品或皮肤病学上的制剂，其可以局部施用。“可以局部施用”是指制剂在外部和局部施用，即制剂必须是合适的，例如，能够施用于皮肤。在这种情况下，制剂包含化妆品上、药学上或皮肤病学上合适的载体，并且根据所需的性质特征，任选还包含其他合适的成分。局部制剂优选用作化妆品组合物。合适的载体和助剂或填料在本领域中是已知的。

根据本发明的制剂还可含有研磨剂，抗痤疮剂，抗皮肤老化剂，抗蜂窝织炎剂，去头屑剂，抗炎剂，刺激预防剂，刺激抑制剂，抗氧化剂，收敛剂，汗液抑制剂，防腐剂，抗静电剂，粘合剂，缓冲剂，载体材料，螯合剂，细胞刺激剂，清洁剂，护理剂，脱毛剂，表面活性剂，除臭剂，止汗剂，软化剂，乳化剂，酶，精油，纤维，成膜剂，固定剂，泡沫形成剂，泡沫稳定剂，防止发泡的物质，泡沫促进剂，胶凝剂，凝胶形成剂，护发剂，头发定型剂，头发拉直剂，保湿剂，湿润物质，保湿物质，漂白剂，增强剂，染色去除剂，光学增白剂，浸渍剂，防污剂，减摩剂，润滑剂，遮光剂，增塑剂，包覆剂，抛光剂，光泽剂，聚合物，蛋白质，再润滑剂，研磨剂，有机硅，皮肤舒缓剂，皮肤清洁剂，护肤剂，皮肤修复剂，亮肤剂，护肤剂，皮肤柔软剂，头发促进剂，清凉剂，皮肤清凉剂，温热剂，皮肤温热剂，稳定剂，紫外线吸收剂，有机紫外线过滤剂，无机紫外线过滤剂，洗涤剂，织物调理剂，悬浮剂，皮肤鞣剂，增稠剂，维生素油，蜡，脂肪，磷脂，饱和脂肪酸，单或多不饱和脂肪酸，α-羟基酸，多羟基脂肪酸，液化剂，染料，颜色保护剂，颜料，防腐剂，芳香剂，调味物质，有气味物质，多元醇，表面活性剂或电解质。

对于组合特别适合的活性成分是，羟基依克多因，海藻糖，甘油，糖基甘油，β-甘露糖基甘油(firoin)，β-mannosylglyceramide(firoin A)，二-磷酸肌醇(DIP)，环状2,3-二磷酸甘油酸(cDPG)，1,1-二甘油磷酸酯(DGP)，二甘露糖基二磷酸肌醇(DMIP)，甜菜碱，甘氨酸甜菜碱，脯氨酸甜菜碱，谷氨酸甜菜碱，丙氨酸，脯氨酸，谷氨酰胺，N-乙酰赖氨酸，谷氨酰胺1-酰胺，牛磺酸，胆碱，胆碱O-硫酸盐，肉毒碱，砷甜菜碱，巴豆甜菜碱，磺基乙酸二甲酯，磺酸二甲酯，高甜菜碱，三甲胺N-氧化物，泛醇，山梨糖醇，葡甲胺，透明质酸或透明质酸衍生物，尿素尿素)和烟酰胺(烟酰胺)，5,7-二羟基-2-甲色酮，以商品名上市销售或商业产品 RenouMer，VTA，Poppy SE，Isoquercetin，Cyclopeptide 5，Cyclopeptide 5无醇，SereneShield，Emblica，或液体。

制剂可包括或包含，基本上由上文和/或下文提到的必要或任选组分组成或由其组成。可用于制剂中的所有化合物或组分是已知的和可商购的或可通过已知方法合成。

这些其它活性成分优选以0.01至20重量％，特别优选0.1至15重量％，非常特别优选0.2至8重量％的量存在于局部制剂中，基于制剂的总量。

有机紫外线过滤剂，即所谓的亲水或亲脂防晒过滤剂，在UVA区域和/或UVB区域和/或IR和/或VIS区域是有效的(吸收剂)。这些物质尤其可选自二苯甲酰甲烷衍生物，肉桂酸衍生物，水杨酸衍生物，樟脑衍生物，三嗪衍生物，β,β-二苯基丙烯酸酯衍生物，对氨基苯甲酸衍生物和聚合物过滤剂和硅氧烷过滤剂。所述UV过滤剂通常根据INCI命名法命名如下。

特别适合与本发明的活性混合物组合的是水杨酸乙基己酯，苯基苯并咪唑磺酸，二苯甲酮-3，二苯甲酮-4，二苯甲酮-5，2-(4-二乙氨基-2-羟基苯甲酰基)苯甲酸正己酯，4-甲基亚苄基樟脑，对苯二甲酰二樟脑磺酸，苯基二苯并咪唑四磺酸二钠，亚甲基双(苯并三唑基)四甲基丁基苯酚，丁基甲氧基二苯甲酰甲烷，乙基己基三嗪酮，二乙基己基丁酰胺三嗪酮，三唑甲酚三硅氧烷，亚苯基双二苯基三嗪，聚硅氧烷-15，1,1-二羧基(2,2'-二甲基丙基)-4,4-二苯基丁二烯，2,4-双[5-1(二甲基丙基)苯并恶唑-2-基(4-苯基)亚氨基]-6-(2-乙基己基)亚氨基-1,3,5-三嗪，及其混合物。这些有机UV过滤剂通常以0.01重量％至20重量％，优选1重量％至10重量％的量掺入制剂中。

制剂可优选包含助剂，例如化妆油(例如辛酸/癸酸甘油三酯，C12-15烷基苯甲酸酯，肉豆蔻酸异丙酯，芳基烷基苯甲酸酯，例如苯甲酸苯乙酯(X-Tend 226)或Cosmacol品牌的油组分，如二肉豆蔻醇酒石酸酯，三C14-C15烷基柠檬酸酯，C12-C13乳酸烷基酯，十三烷醇水杨酸酯，C12-C13烷基辛酸酯，C12-C13烷基苹果酸酯，C12-C13烷基柠檬酸酯，C12-C13烷基酒石酸盐，或极性-质子助剂(例如丙二醇，甘油，异丙醇，乙醇)或所谓的增溶剂(例如丁基邻苯二甲酰亚胺，异丙基邻苯二甲酰亚胺，二甲基异山梨醇)。非常特别优选的化妆油是C12-C13乳酸烷基酯(可以以商品名Cosmacol ELI购得)，以及苯乙酸苯乙酯(可以以商品名为X-Tend 226购得)。

如前所述的制剂可以通过将根据本发明的活性混合物或所述活性混合物的单一组分与适合于这种制剂的载体混合并任选地与助剂和/或填料混合来合成。合适的载体和助剂或填料在以下部分中详细描述。

制剂的所述组分可以借助于本领域技术人员熟知的技术以常规方式掺入。

适合外用的制剂，例如可以作为乳霜或乳(O/W，W/O，O/W/O，W/O/W，W/Si)，作为洗液或乳液，以油-醇，油-水或水-醇凝胶或溶液的形式应用或喷洒至皮肤上。它们可以是固体棒的形式或配制成气溶胶。它们可以是洗发水，沐浴露，洁面乳或精华素。

下文中，例如，可以提及作为待使用的制剂的应用形式：溶液，悬浮液，乳液，PIT乳液，糊剂，软膏，凝胶，霜剂，洗剂，粉末，油，气雾剂，膏药，压布，绷带和喷雾剂。

优选的助剂来自防腐剂，稳定剂，增溶剂，着色剂，气味改进剂，增稠剂，增塑剂，保湿剂，界面活性剂，乳化剂，防腐剂，消泡剂，香料，蜡，羊毛脂，推进剂和化妆品中常用的其它成分。

软膏，糊剂，乳膏和凝胶可包含适于局部施用的常规载体，例如动物和植物脂肪，蜡，石蜡，淀粉，黄蓍胶，纤维素衍生物，聚乙二醇，硅氧烷，膨润土，二氧化硅，滑石和氧化锌，或这些物质的混合物。

粉末和喷雾剂可包含常规载体，例如乳糖，滑石，二氧化硅，氢氧化铝，硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物。喷雾剂可另外包含常规易挥发的液化推进剂，例如氯氟烃，丙烷/丁烷或二甲醚。也可以有利地使用压缩空气。

溶液和乳液可包含常规载体，例如溶剂，增溶剂和乳化剂，例如水，乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油，特别是棉籽油，花生油，小麦胚芽油，橄榄油，蓖麻油和芝麻油，XTend 226，甘油脂肪酸酯，聚乙二醇和脱水山梨糖醇的脂肪酸酯，或这些物质的混合物。

悬浮液可包括常规载体，例如液体稀释剂，例如水，乙醇或丙二醇，悬浮介质，例如乙氧基化异硬脂醇，聚氧乙烯山梨糖醇酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯，微晶纤维素，偏氢氧化铝，膨润土，琼脂和黄蓍胶，或这些物质的混合物。

面部和身体油可包含常规载体，例如合成油，例如脂肪酸酯，脂肪醇，硅油，天然油，例如植物油和油性植物提取物，石蜡油，羊毛脂油或这些物质的混合物。

进一步典型的化妆品应用形式还有唇膏，唇部护理棒，粉末化妆品，乳液化妆品和蜡化妆品，以及防晒剂，晒前和晒后制剂。

优选的制剂形式还特别包括乳液。

乳液是有利的，并且包括例如所述脂肪，油，蜡和其它脂肪物质，以及水和乳化剂，如通常用于此类制剂的那样。可以使用的乳化剂例如是已知的W/O和O/W乳化剂。在优选的O/W乳液中使用其它常规助乳化剂是有利的。

用于所述局部制剂的优选油和/或脂质包括：石蜡，异链烷烃，二辛基醚，PPG-15，硬脂基醚，蜂蜡，烛树蜡，巴西棕榈蜡，硬脂酸乙基己酯，辛酸/癸酸甘油三酯，乳酸十六烷基酯，硬脂酸硬脂酸酯，异壬酸异壬酯，辛基十二烷醇，己基癸醇，角鲨烯，天然甘油三酯如樱桃仁油(Prunus Cerasus)，鳄梨油，红花籽油，澳洲坚果籽油，可可脂(Theobroma Cacao)，牛油果黄油及其混合物。

用于所述制剂的优选吸收和/或增稠剂包括改性玉米淀粉，二氧化硅，滑石，硬脂酸锌，硫酸镁，氧化锌，硼硅酸钙和铝，淀粉和衍生物，聚氨酯，以及它们的混合物。

如前所述，依克多因能够增加如之前描述的或之前优选描述的灵芝提取物的抗炎活性的效力。

因此，本发明还涉及依克多因作为如前所述或优选描述的从灵芝(Ganoderma)获得的提取物的活性增强剂的非治疗用途。

因此，本发明还涉及依克多因与如前所述或优选描述的从灵芝(Ganoderma)获得的提取物的组合使用。

因此，本发明还涉及依克多因与提取物的组合使用，所述提取物从如前所述或优选描述的灵芝(Ganoderma)获得，表现出所述提取物的抗炎活性的效力增加。

因此，本发明还涉及通过向人类皮肤局部施用如前所述或优选描述的活性混合物来减少或预防炎症和刺激的非治疗方法。

因此，本发明还涉及通过向人类皮肤局部施用如前所述或优选描述的活性混合物来预防经由TNFR的受体介导的炎症和刺激的非治疗方法。

因此，本发明另外涉及通过向人类皮肤局部施用包含如前所述或优选描述的活性混合物的化妆品组合物或包含如前所述或优选描述的活性混合物的组分的化妆品组合物来减少或预防炎症和刺激的非治疗方法。

因此，本发明另外涉及通过向人类皮肤局部施用包含如前所述或优选描述的活性混合物的化妆品组合物或包含如前所述或优选描述的活性混合物的组分的化妆品组合物来减少或预防经由TNFR的受体介导的炎症和刺激的非治疗方法。

因此，本发明还涉及如前所述或优选描述的活性混合物，用于通过局部施用于人皮肤来减轻炎症和刺激。

因此，本发明还涉及如前所述或优选描述的活性混合物，用于通过局部施用于人皮肤来减轻经由TNFR的受体介导的炎症和刺激。

因此，本发明还涉及皮肤病学或药物组合物或医疗装置，其包含如前所述或优选描述的所述活性混合物的组分，用于通过局部施用于人皮肤来减轻炎症和刺激。

因此，本发明还涉及皮肤病学或药物组合物或医疗装置，其包含如前所述或优选描述的所述活性混合物的组分，用于通过局部施用于人皮肤来减轻经由TNFR的受体介导的炎症和刺激。

优选地，如前所述的活性混合物或包含所述活性混合物或包含所述混合物的组分的组合物能够减少经由TNFR的受体介导的炎症。特别优选地，如前所述的活性混合物或包含所述活性混合物或包含所述混合物的组分的组合物能够减少经由TNFR的受体介导的炎症，如由下列诱导的：芳烃和/或挥发性有机化合物(VOCs)或颗粒物质，如烟草烟雾，城市灰尘，细尘或柴油废气或工业气体中的颗粒，细菌或病毒抗原。

该应用使用标准技术进行，例如通过将洗发剂，沐浴露，乳霜，洁面乳，糊剂，凝胶，洗剂，精华素施用于待治疗的皮肤，或将预定量的包含如前所述的活性混合物的制剂或如前所述的活性混合物溶解在水中和随后使用由所述水混合或形成的泡沫用于清洁或皮肤处理。

应该指出的是，本发明中描述的实施例的变型包含在本发明的范围内。除非明确排除，否则本发明中公开的任何特征可以替换用于相同目的或等同或类似目的的替代特征。因此，除非另有说明，否则本发明中公开的任何特征应被视为通用系列或等同或类似特征的示例。

除非特定特征和/或步骤相互排斥，否则本发明的所有特征可以以任何方式彼此组合。对于本发明的优选特征尤其如此。同样，非必要组合的特征可以单独使用(而不是组合使用)。

本发明所公开的技术教导可以被抽象出来并与其他例子相结合。

上文和下文提及的所有申请和出版物的完整公开内容通过引用并入本申请。

以下实施例旨在说明本发明。但是，它们绝不应被视为限制。

实施例

材料和方法：

灵芝提取物获自Draco Natural Products,Inc。所述的提取物在下文中被命名为GS。

依克多因获自Merck,Darmstadt(Art.130200)的Ectoin。所述产品在下文中称为Ectoin。

实施例1中使用的活性混合物是GS与Ectoin的重量比为1：1的混合物。所述混合物在下文中称为GS+Ectoin。

NF-κB活化测定：GloResponse NF-κB-RE-luc2P HEK293细胞系(Promega)中稳定整合pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]荧光素酶报告基因。pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]载体包含5个拷贝的NF-κB应答元件(NF-κB-RE，其驱动萤光素酶报告基因luc2P(Photinus pyralis)的转录)。L uc2P是合成衍生的荧光素酶序列，具有人源化密码子优化，其被设计用于高表达和减少的异常转录。luc2P基因含有hPEST，蛋白质去稳定序列。由luc2P编码的蛋白质在诱导时比luc2基因编码的蛋白质反应更快。根据制造商的说明，在Tecan Spark 20M光度计(Tecan，Switzerland)上用One-Glo荧光素酶测定系统试剂(Promega)测定荧光素酶活性。

实施例1：

在以下实验中，使用NF-κB-RE-luc2P HEK293细胞系测试成分的抗炎潜力，所述细胞系是人胚肾293(HEK293)细胞的克隆衍生物。这些细胞含有在具有多个核因子-κB反应元件(NF-κB-RE)的最小TATA启动子控制下的荧光素酶基因(luc2P)。NF-κB-RE是NF-κB转录因子的DNA结合序列，其负责调节炎症，免疫应答，细胞生长和细胞凋亡。通过报告细胞测定中发光的增加来指示RE的活化。

NF-κB-RE-luc2P HEK293细胞在37℃和5％CO₂中在补充有10％FCS(Biochrome，默克，德国)的DMEM(Thermo Fisher,德国)中培养。接种密度为1×10⁴/cm²。加入处理后培养细胞24小时，用TNFα刺激5小时。刺激后，加入荧光素酶试剂。使用单侧ANOVA进行统计。

在该实验中，NF-κB的活化在仅使用TNFα的刺激下被严格诱导，TNFα结合于TNFR并内部激活TRADD结构域，这导致MAP激酶信号级联的活化。该途径不直接受HSP70调节，因此该实施例中的作用与Buommino等人报道的HSP70活化无关。

结果：

如图1所示，用GS处理报告细胞与未处理的相比显示减少了47％，与地塞米松相当，地塞米松处理减少了46％。依克多因未显示降低(109.8％)，而GS和依克多因的组合显示NF-κB活化的协同统计学显著降低66.9％。

依克多因作为单一治疗没有显示出NF-κB的减少，但组合显示出更高的减少，比单一治疗多减少了20％，这些数据证明了协同作用。

所测试的组合显示出协同效应，因为与对照(RFU 1086,49)相比，使用依克多因处理(RFU 1098,26)作为单一处理未显示NF-κB的减少。在TNFα诱导的炎症后使用GS进行处理能够将NF-κB的活化从556,31RFU减少到530,02。与对照相比，该组合能够协同地减少NF-κB的活性减少14％(RFU 331,02)。

配方实例

实例1：O/W日间护理配方

程序：

将Solagum AX分散在水中并搅拌至均匀。添加依克多因和甘油，搅拌至均匀。

将A相和B相分别加热至80℃。将B相搅拌到A相中。均化。在搅拌的同时冷却。将C相防腐剂溶于水并加入灵芝提取物。在40℃下将相C加入乳液中。最后调节D相至pH 6.00。

供应商

(1)Merck KGaA,Darmstadt,Germany/EMD Performance Materials,(2)Seppic,(3)Gattefossé(Deutschland)GmbH,(4)BASF AG,(5)Greentech SA,(6)Croda,(7)DracoNatural Products,Inc

实例2：W/O夜间护理配方

程序：

将A相和B相加热至75℃。将A相搅拌到B相中。均化。在搅拌的同时冷却。在低于40℃逐步添加C相的成分。

供应商

(1)Merck KGaA,Darmstadt,Germany/EMD Performance Materials,(2)Dr.Straetmans,(3)BASF AG,(4)Gustav Heess GmbH,(5)Evonik Nutrition&Care GmbH,(6)IOI Oleo GmbH,(7)ISP Global Technologies,(8)Draco Natural Products,Inc

实例3：具有防晒的W/O BB配方

程序：

加热A1相至70-80℃。在搅拌的同时将A2相加入到A1相中。将A相和B相加热至70-80℃。在强烈混合下将B相缓慢加入A相中。在40℃加入C相。冷却至室温。

供应商

(1)Merck KGaA,Darmstadt,Germany/EMD Performance Materials,(2)EvonikNutrition&Care GmbH,(3)H.Erhard Wagner GmbH,(4)BASF AG,(5)Biesterfeld,(6)Gustav Heess GmbH,(7)S.Goldmann GmbH&Co.KG