具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段，做出各种替换和变更，均应包括在本发明的范围内。

具体实施例化合物结构汇总表(表1)：

Table1

Table1(continued)

Table1(continued)

合成实验部分

就如下涉及的实施例而言，使用本文所述的方法或本领域众所周知的其他方法合成本发明的化合物。

通用纯化和分析方法：

在硅胶GF254预涂覆板(merck)上进行薄层色谱。在中压下经硅胶(300-400 目，Greagent)进行柱色谱分离。成分通过UV光(254nm)和通过碘蒸气、碱性 KMnO₄溶液(KMnO₄：K₂CO₃：NaOH：H₂O＝1.5g：10g：0.125g：200ml) 磷钼酸溶液(10g磷钼酸+200ml乙醇)显影。必要时，将化合物通过HPLC 纳谱分析(Chromcore 8-120 C18,8um,10X250 mm)柱纯化，流动相为乙腈 /H₂O(70％～100％),流速：10ml/min。

将1H-NMR谱在400MHz操作的Bruker Avance 400谱仪(对于1H而言)进行记录。将四甲基硅烷信号用作参比。化学位移以百万分率(ppm)进行报道且偶合常数(J)以Hz计。以下缩写用于峰裂分:s＝单；br.s.＝宽信号；d＝双；t＝三； m＝多重；dd＝双双。

电喷雾(ESI)质谱经Finnigan LCQ离子阱获得。

试剂纯化参考Purification of Laboratory Chemicals(Perrin,D.D.,Armarego, W.L.F.and Perrins Eds,D.R.；Pergamon Press:Oxford,1980)一书进行。石油醚是60-90℃馏分、乙酸乙酯、甲醇、二氯甲烷均为分析纯。

下文中的缩写具有以下含义：

DCM：二氯甲烷；HPLC：高效液相色谱法；TFA：三氟乙酸；DIPEA： N,N-二异丙基乙胺；EDCI：1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐； HOBt：1-羟基苯并三唑；rt：室温；EA:乙酸乙酯；DMAP：4-二甲氨基吡啶； DMP：2,2-二甲氧基丙烷；HATU：2-(7-氮杂苯并三氮唑)-N，N-N,N’-四甲基脲六氟磷酸酯；THF:四氢氟喃；Boc₂O：二碳酸二叔丁酯；DMF：N,N-二甲基甲酰胺；DME：乙二醇二甲醚；PPTS：对甲苯磺酸吡啶盐；NIS：N-碘代丁二酰亚胺

具体合成实验

下面通过具体实施例详细描述本发明的实施方式，但是无论如何它们不能解释为对本发明的限制。

1.化合物I-1～I-6的合成通式如下：

化合物2制备：取100ml单口瓶，加入5-(1,1-二甲基庚基)间苯二酚 (1.02g，8.06mmol)，乙腈(16ml)置于冰水浴中，分两次加入NIS(1.86g，8.06mmol)加完后自然升温，反应2h，TLC检测反应完毕，加入饱和NaHCO3，减压除去大部分乙腈，乙醚分液萃取，合并有机相，减压浓缩，柱层析分离纯化(Hexanes/EA＝1:8)，得二酚碘代物(1.88g,93％)。

取25ml单口瓶，加入上述二酚碘代物(0.5g,2mmol)，丙酮(10ml)， K2CO3(0.83g，6mmol),硫酸二甲酯(0.47ml,5mmol)室温反应24h,TLC检测反应完毕。往体系加入10ml水，搅拌10min,减压除去丙酮，加入乙醚分液萃取，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离纯化(Hexanes/EA＝1:20)，得到油状化合物2(0.53g，95％)。

化合物3的制备方法：取25ml反应管，加入化合物2(0.22mmol),化合物 1(0.18mmol)，Cs₂CO₃(0.36mmol)，Pd(PPh₃)₄(0.02mmol)，1，4-二氧六环(2ml)置换Ar气后置于80℃油浴反应12h，TLC检测反应完毕。硅藻土过滤，减压除去溶剂，柱层析分离纯化得化合物3。

化合物I-1～I-6的制备方法：取25ml反应管，加入化合物3(0.18mmol)， DCM 2mL，置于冰乙醇浴中(-15℃)，缓慢滴加0.9ml BBr₃(1.0M in DCM)，自然升温反应12h，TLC检测反应完毕。体系置于冰水浴中，加入0.2ml MeOH 淬灭。再加入水，二氯甲烷，分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离纯化得化合物I-1～I-6。

下面具体描述实施例化合物I-1～I-6的合成:

实施例1

化合物I-1：

化合物1硼酸制备：取250ml三口瓶，加入3-溴-4-甲基苯甲酸甲酯(2.0 g，8.77mmol)、频哪醇联硼酸酯(4.46g，17.54mmol)、PdCl₂(dppf).DCM(143 mg,0.175mmol),KOAc(3.44g,35.08mmol)先置换Ar气，加入1,4-二氧六环(60 ml),除氧(隔膜泵抽体系，置换Ar气)，置于80℃油浴反应12h,TLC检测反应完毕。硅藻土过滤，减压除去溶剂，加入乙醚、水，分液萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离纯化(Hexanes/EA＝20:1)得到较纯硼酸酯化合物,在重结晶除去过量的硼试剂(Hexanes/EA)得白色固体化合物1硼酸酯(1.81g,75％)。将上述硼酸酯，加入甲醇20ml,12N浓硫酸2.7ml,加热回流12h，TLC检测反应完毕，减压浓缩，乙酸乙酯萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩得到硼酸化合物1(1.26 g，95％)。

化合物3制备：取25ml反应管，加入化合物2(274mg,0.70mmol),化合物1硼酸(150mg,0.77mmol)，Cs₂CO₃(458mg,1.40mmol)，Pd(PPh₃)₄(0.07 mmol,81mg)，1,4-二氧六环(3ml)。置换Ar气后置于80℃油浴反应12h， TLC检测反应完毕。硅藻土过滤，减压除去溶剂，柱层析分离纯化(Hexanes/EA ＝8:1)得中间体3(220mg,76％)。

化合物I-1制备：取25ml反应管，加入中间体(100mg,0.24mmol)， DCM 2.4mL，置于冰乙醇浴中(-15℃)，缓慢滴加0.72ml BBr₃(1.0M in DCM)，自然升温反应3h，TLC检测反应完毕。体系置于冰水浴中，加入0.2ml MeOH 淬灭，加入饱和碳酸氢钠，二氯甲烷，分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离纯化(Hexanes/EA＝1:3)得化合物I-1(23mg,25％)。¹H NMR (400MHz,CDCl₃)δ:8.04(dd,J＝8.0,1.7Hz,1H),7.99(s,1H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),6.56(s,2H),4.51(s,2H),3.90(s,3H),2.24(s,3H),1.61–1.54(m,2H), 1.28(s,6H),1.26–1.19(m,6H),1.16–1.07(m,2H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H). MS(ESI)m/z:385[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₄H₃₃O₄ ⁺ 385.2373；Found 385.2368.

实施例2

化合物I-2

以化合物2、相应的硼酸1为原料，参照化合物I-1的方法来获得I-2(72mg, 63％)。¹H NMR(400MHz,MeOD)δ:6.84(d,J＝1.7Hz,1H),6.81(d,J＝8.1 Hz,1H),6.71(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),6.41(s,2H),1.61–1.53(m,2H),1.32–1.19(m,6H),1.26(s,6H)1.17–1.05(m,2H),0.87(t,J＝6.2Hz,3H).

实施例3

化合物I-3

以化合物2、相应的硼酸1为原料，参照化合物I-1的方法来获得I-3(72 mg,44％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.33(t,J＝7.8Hz,1H),6.79–6.73 (m,2H),6.72–6.68(m,1H),6.56(s,2H),4.98(brs,2H),3.76(brs,2H),1.58– 1.55(m,2H),1.26(s,6H),1.25–1.17(m,6H),1.16–1.07(m,2H),0.86(t,J＝ 6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:328[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₁H₃₀NO₂ ⁺328.2271；Found 328.2264.

实施例4

化合物I-4

以化合物2、相应的硼酸1为原料，参照化合物I-1的方法来获得I-4(100 mg,70％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.46–7.38(m,2H),7.38–7.28(m, 2H),6.57(s,2H),4.82(s,2H),3.04–2.91(m,1H),1.63–1.55(m,2H),1.31(d,J ＝6.9Hz,6H),1.26(s,6H),1.25–1.19(m,6H),1.19–1.04(m,2H),0.86(t,J＝ 6.8Hz,3H).GC-MS(EI)m/z:[M]⁺354.24.

实施例5

化合物I-5

以化合物2、相应的硼酸1为原料，参照化合物I-1的方法来获得I-5(38 mg,41％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.38–8.33(m,1H),8.25(ddd,J＝8.2, 2.3,1.1Hz,1H),7.84–7.77(m,1H),7.67(t,J＝7.9Hz,1H),6.53(s,2H),4.76(s, 2H),1.61–1.53(m,2H),1.27(s,6H),1.26–1.19(m,6H),1.15–1.04(m,2H), 0.86(t,J＝6.8Hz,3H).GC-MS(EI)m/z:[M]⁺357.19.

实施例6

化合物I-6

以化合物2、相应的硼酸1为原料，参照化合物I-1的方法来获得I-6(100 mg,64％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.81–7.75(m,2H),7.67–7.61(m,2H), 7.54–7.46(m,4H),7.43–7.36(m,1H),6.59(s,2H),4.87(s,2H),1.63–1.56(m, 2H),1.29(s,6H),1.27–1.20(m,6H),1.17–1.09(m,2H),0.87(t,J＝6.8Hz, 3H).MS(ESI)m/z:389.2[M+H]⁺.

2.化合物I-7合成路线如下：

实施例7

化合物I-7

化合物4制备：取25ml单口瓶，加入化合物3(125mg,0.30mmol)，甲醇 1.5ml，THF1.5ml置于50℃油浴中，反应12h，TLC检测反应完毕。减压除去溶剂，加水后，再加1N HCl调pH 3～5。加入乙酸乙酯萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(Hexanes:EA:AcOH＝4:1:0.05)得中间体4(110mg，91％)。

取25ml反应管，加入化合物4(50mg,0.13mmol)，DCM 1.2mL，置于冰乙醇浴中(-15℃)，缓慢滴加0.6ml BBr₃(1.0M in DCM)，自然升温反应 12h，TLC检测反应完毕，置于冰水浴中，加入0.2ml MeOH淬灭，二氯甲烷，分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，制备分离纯化(Hexanes/Acetone＝1:1) 得化合物I-7(10mg,20％)。¹H NMR(400MHz,Acetone)δ7.94–7.83(m, 2H),7.72(s,2H),7.37(d,J＝7.9Hz,1H),6.54(s,2H),2.23(s,3H),1.63–1.55(m,2H),1.26(s,6H),1.25–1.21(m,6H),1.14(d,J＝4.6Hz,2H),0.85(t,J＝6.8 Hz,3H).MS(ESI)m/z:371[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₃H₃₁O₄ ⁺371.2217；Found371.2216.

3.化合物I-8、I-9合成通式如下：

实施例8

化合物I-8

取25ml反应管，加入化合物4(30mg，0.075mmol)、DMAP(1mg,0.01 mmol)，EDCI(17.2mg,0.09mmol)，Et₃N(26ul,0.19mmol)室温下搅拌30min，后加入1-萘肼盐酸盐(0.15mmol)，反应12h,TLC检测反应完毕。加入饱和 NaHCO₃，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和NaCl洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到酰胺中间体5。

取25ml反应管，加入底物酰胺5(0.038mmol)，DCM 1mL，置于冰乙醇浴中(-15℃)，缓慢滴加0.2ml BBr₃(1.0M in DCM)，自然升温反应12h，TLC检测反应完毕。置于冰水浴中，加入0.1ml MeOH淬灭，加入2ml饱和碳酸氢钠，二氯甲烷，分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，制备分离纯化得化合物I-8(23mg,57％).¹H NMR(400MHz,Acetone)δ:9.84(d,J＝3.7Hz,1H),8.31–8.22(m,1H),7.90(dd,J＝7.9,1.9Hz,1H),7.87–7.83(m,2H), 7.77–7.71(m,3H),7.52–7.47(m,2H),7.43–7.35(m,2H),7.34–7.29(m,1H), 7.04(d,J＝7.4Hz,1H),6.55(s,2H),2.24(s,3H),1.63–1.56(m,3H),1.31– 1.21(m,6H),1.27(s,6H),1.19–1.12(m,2H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI) m/z:511[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd forC₃₃H₃₉N₂O₃ ⁺511.2955； Found 511.2959.

实施例9

化合物I-9

以化合物4、正丁胺为原料，参照化合物I-8的方法来获得I-9(14mg,46 ％)。¹HNMR(400MHz,CDCl3)δ:7.81(dd,J＝7.9,1.8Hz,1H),7.61(d,J＝ 1.7Hz,1H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),6.57(s,2H),6.09(s,1H),4.68(s,2H),3.43 (dd,J＝13.0,7.0Hz,2H),2.22(s,3H),1.63–1.52(m,4H),1.40(dd,J＝15.1,7.4 Hz,2H),1.28(s,6H),1.24(d,J＝10.8Hz,6H),1.12(s,2H),0.95(t,J＝7.3Hz, 3H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:426[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z: [M+H]⁺Calcd for C₂₇H₄₀NO₃ ⁺426.3003；Found 426.3000。

4.化合物I-10～I-14、I-21合成通式如下：

实施例10

化合物I-10

取25ml反应管，加入化合物I-7(30mg，0.08mmol)、s构型脯氨酸甲酯盐酸盐(20mg，0.12mmol),HATU(46.2mg,0.12mmol)，DIPEA(35ul,0.19 mmol)室温下搅拌，反应12h,TLC检测反应完毕。加入饱和NaHCO₃，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和NaCl洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到化合物I-10(29mg，75％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(s,1H),7.45(d,J＝7.9Hz,1H),6.56(s,2H),4.65(dd,J＝8.4, 4.7Hz,1H),3.76(s,3H),3.74–3.65(m,1H),3.64–3.52(m,1H),2.80(s,2H), 2.37–2.24(m,1H),2.20(s,3H),2.10–1.84(m,3H),1.59–1.50(m,2H),1.26(s, 6H),1.25–1.17(m,6H),1.16–1.05(m,2H),0.85(t,J＝6.7Hz,3H).

MS(ESI)m/z:482[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₉H₄₀NO₅ ⁺ 482.2901；Found 482.2894.

实施例11

化合物I-11

以化合物I-7,S构型的酪氨酸甲酯为原料，参照化合物I-10的方法来获得化合物I-11(26mg，47％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.65–7.53(m,2H), 7.36(d,J＝7.9Hz,1H),7.00–6.90(m,2H),6.82(d,J＝7.8Hz,1H),6.72–6.61 (m,2H),6.60–6.51(m,2H),5.75(s,1H),5.08–4.95(m,2H),4.83(s,1H),3.71 (s,3H),3.19(dd,J＝14.0,5.7Hz,1H),3.05(dd,J＝14.0,6.4Hz,1H),2.19(s, 3H),1.61–1.51(m,2H),1.26(s,6H),1.25–1.18(m,6H),1.17–1.05(m,2H), 0.85(t,J＝6.7Hz,3H).MS(ESI)m/z:548[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₃₃H₄₂NO₆ ⁺548.3007；Found 548.3004.

实施例12

化合物I-12

以化合物I-7,S构型的组氨酸甲酯二盐酸盐为原料，参照化合物I-10的方法来获得化合物I-12(25mg，60％)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.83(d,J ＝7.4Hz,1H),7.64(s,1H),7.60(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(s,1H),7.27(s,1H), 6.69(s,1H),6.54(d,J＝4.6Hz,2H),4.93–4.82(m,1H),3.67(s,3H),3.15– 3.01(m,2H),2.18(s,3H),1.61–1.48(m,2H),1.24(s,6H),1.21(s,6H),1.14– 1.06(m,2H),0.85(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:522[M+H]⁺.HRMS(ESI) m/z:[M+H]⁺Calcd for C₃₀H₄₀N₃O₅ ⁺522.2962；Found 522.2960.

实施例13

化合物I-13

以化合物I-7,对溴苯肼为原料，参照化合物I-10的方法来获得化合物 I-13(14mg，32％)。¹H NMR(400MHz,Acetone)δ9.75–9.66(m,1H),7.83(dd, J＝8.0,1.9Hz,1H),7.77(d,J＝1.8Hz,1H),7.69(s,2H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H), 7.35–7.28(m,2H),6.94–6.88(m,2H),6.54(s,2H),2.81(s,2H),2.22(s,3H), 1.65–1.55(m,2H),1.26(s,6H),1.25–1.21(m,6H),1.18–1.12(m,2H),0.85(t, J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:539[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₉H₃₆BrN₂O₃ ⁺539.1904；Found 539.1898.

实施例14、15

化合物I-14和化合物I-21

以化合物I-7,3-氨基苯酚为原料，参照化合物I-10的方法来获得化合物 I-14(3mg，8％)和I-21(4mg，10％)。化合物I-14:¹H NMR(400MHz,Acetone) δ9.47(s,1H),8.30(brs,1H),7.86(dd,J＝7.9,2.0Hz,1H),7.77(d,J＝1.9Hz, 1H),7.68(brs,2H),7.57(t,J＝2.1Hz,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,1H),7.29–7.20 (m,1H),7.11(t,J＝8.1Hz,1H),6.59–6.53(m,3H),2.21(s,3H),1.60(dd,J＝ 9.8,6.4Hz,2H),1.27(s,6H),1.26–1.21(m,6H),1.19–1.13(m,2H),0.86(t,J ＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:462[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₉H₃₆NO₄ ⁺462.2639；Found 462.2636.化合物I-21:¹H NMR(400MHz, Acetone)δ8.00–7.95(m,2H),7.86–7.77(m,2H),7.50–7.42(m,1H),7.08(t, J＝8.0Hz,1H),6.61–6.52(m,4H),6.48–6.42(m,1H),4.82(brs,2H),2.79(s, 2H),2.26(s,3H),1.63–1.55(m,2H),1.26(s,6H),1.25–1.21(m,6H),1.18–

1.10(m,2H),0.85(t,J＝6.7Hz,3H).MS(ESI)m/z:462[M+H]⁺.HRMS(ESI) m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₉H₃₆NO₄ ⁺462.2639；Found 462.2635.

5.化合物I-15合成路线如下：

实施例16

化合物I-15

取25ml反应管，加入I-2(70mg,0.19mmol)、甲苯2ml、2,2-DMP (35μl，0.29mmol)、PPTS(2.4mg,0.01mmol)加热回流，TLC跟踪检测， 6h后基本反应完毕。停止加热，冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠，DCM分液萃取，合并有机相，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析(Hexanes/EA＝10:1)，得化合物I-15(34mg,47％)。¹H NMR(400MHz, CDCl3)δ:6.89(d,J＝7.8Hz,1H),6.82(dd,J＝7.9,1.6Hz,1H),6.77(d,J＝1.6 Hz,1H),6.55(s,2H),4.88(s,2H),1.73(s,6H),1.60–1.52(m,2H),1.26(s,6H), 1.25–1.16(m,6H),1.15–1.06(m,2H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).GC-MS(EI) m/z：384.24[M]⁺。

6.化合物I-16合成路线如下：

实施例17

化合物I-16

取25ml反应管，加入I-3(23mg,0.07mmol)，THF 1ml，Boc₂O(20ul, 0.084mmol)加热回流12h，TLC检测基本反应完毕。冷却至室温，加入饱和碳酸氢钠，减压除去溶剂，DCM分液萃取，合并有机相，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。减压浓缩，柱层析纯化(Hexanes/EA＝3:1)得化合物I-16(24 mg,80％)。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ:7.54–7.38(m,3H),7.09(d,J＝7.2 Hz,1H),6.55(brs,3H),4.86(s,2H),1.59–1.54(m,2H),1.53(s,9H),1.31–1.17 (m,6H),1.26(s,6H),1.15–1.06(m,2H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z: 428[M+H]⁺HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₆H₃₈NO₄ ⁺428.2795；Found 428.2789.

6.化合物I-17合成路线如下：

实施例18

化合物I-17

取25ml反应管，加入化合物I-3(30mg,0.09mmol)、HoBt(15mg,0.11 mmol)，EDCI(21.2mg,0.11mmol)、DCM 1ml,室温下搅拌30min，后加入 4-苯基丁酸(18mg，0.11mmol)，反应12h,TLC检测反应完毕。加入饱和 NaHCO₃，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和NaCl洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到化合物I-17(34mg，78％)。¹H NMR(400MHz, CDCl3)δ:7.65–7.56(m,1H),7.52–7.44(m,2H),7.33–7.26(m,3H),7.23– 7.12(m,5H),6.55(s,2H),4.93(brs,1H),2.71(t,J＝7.5Hz,2H),2.35(t,J＝7.6 Hz,2H),2.11–2.02(m,2H),1.61–1.52(m,2H),1.26(s,6H),1.24–1.19(m, 6H),1.15–1.05(m,2H),0.86(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:474[M+H]⁺. HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₃₁H₄₀NO₃ ⁺474.3003；Found474.2996

7.化合物I-18～I-20、I-22合成通式如下：

实施例19

化合物I-18

化合物6制备：以化合物2和3-氨基硼酸为原料，参照化合物3方法获得化合物6(88mg,50％)。

化合物7制备：取25ml反应管，加入化合物6(25mg,0.07mmol)、DMAP (1.3mg,0.01mmol)，EDCI(20mg,0.10mmol)，DIPEA(36ul,0.21mmol) 室温下搅拌30min，后加入N-乙酰-L-异亮氨酸(0.08mmol)，反应12h,TLC 检测反应完毕。加入饱和NaHCO₃，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和NaCl 洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到酰胺中间体7。

化合物I-18制备：取25ml反应管，加入上述酰胺中间体7(0.038mmol)， DCM 1mL，置于冰乙醇浴中(-15℃)，缓慢滴加0.2ml BBr₃(1.0M in DCM)，自然升温反应12h，TLC检测反应完毕。置于冰水浴中，加入0.1ml MeOH 淬灭，加入2ml饱和碳酸氢钠，二氯甲烷，分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，制备分离纯化得化合物I-18(10mg,30％)。MS(ESI)m/z:483[M+H]⁺. HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₉H₄₃N₂O₄ ⁺483.3217；Found 483.3213.

实施例20

化合物I-19

以化合物6，N-乙酰基甘氨酸为起始原料，参照化合物I-18的合成方法来获得化合物I-19(19mg，30％)。¹H NMR(400MHz,Acetone)δ9.15(s,1H), 7.68–7.55(m,4H),7.44(brs,1H),7.29(t,J＝7.9Hz,1H),7.13–7.08(m,1H), 6.50(s,2H),3.98(d,J＝5.7Hz,2H),1.97(s,3H),1.63–1.52(m,2H),1.33– 1.18(m,12H),1.17–1.07(m,2H),0.85(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z:427 [M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₅H₃₅N₂O₄ ⁺427.2591；Found427.2587.

实施例21

化合物I-20

以化合物6，N-乙酰基甘氨酸为起始原料，参照化合物I-18的合成方法来获得化合物I-20(12mg，35％)。¹H NMR(400MHz,Acetone)δ9.73(s,1H), 8.14(d,J＝8.0Hz,1H),7.81–7.71(m,2H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(t,J＝ 8.0Hz,1H),7.21(d,J＝7.7Hz,1H),6.52(s,2H),2.91(s,2H),1.66–1.52(m, 2H),1.33–1.19(m,12H),1.16–1.07(m,2H),0.85(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI) m/z:501[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₇H₃₁Cl₂N₂O₃ ⁺501.1706； Found 501.1702.

实施例22

化合物I-22

取25ml反应管，加入化合物I-3(10mg,0.03mmol)、HATU(14mg,0.036 mmol)，DIPEA(16ul,0.09mmol),1-金刚烷酸(7mg，0.036mmol)，反应12h,TLC检测反应完毕。加入饱和NaHCO₃，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和NaCl洗，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析分离得到化合物I-22(1.5 mg，10％)。MS(ESI)m/z:490[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd forC₃₂H₄₄NO₃ ⁺490.3316；Found 490.3306.

8.化合物I-23、I-24合成路线如下：

实施例23、24

化合物I-23和化合物I-24

取25ml反应管，加入化合物6(25mg,0.07mmol)，DMF 1ml,TBAI(2.6 mg，0.007mmol)，K2CO3(19.3mg，0.14mmol),卞溴(10ul,0.084mmol) 混合均匀后置于80℃油浴中，反应12h,TLC检测反应完毕，冷却至室温，加水乙醚分液萃取，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，柱层析纯化得到单苄基产物8(12mg，38％)和双苄基产物9(25mg,60％)。(Hexanes:EA＝20:1)

另取两个10ml反应管，分别加入上述苄基产物，DCM 1ml,置于冰乙醇中，缓慢低加入5.0eq BBr₃(1.0M in DCM),自然升温反应5h，加入甲醇和饱和碳酸氢钠淬灭，DCM分液，减压浓缩，柱层析得到化合物I-23(8mg，27％) ¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.40–7.28(m,6H),6.75–6.68(m,2H),6.67– 6.62(m,1H),6.56(s,2H),4.99(s,2H),4.35(s,2H),4.26(brs,1H),1.59–1.53 (m,2H),1.26(s,6H),1.23–1.17(m,6H),1.16–1.07(m,2H),0.85(t,J＝6.8Hz, 3H).MS(ESI)m/z:418[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₂₈H₃₆NO₂ ⁺418.2741Found 418.2731.化合物I-24(16mg，45％)¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)δ7.40–7.31(m,5H),7.30–7.20(m,6H),6.85–6.78(m,1H), 6.75–6.67(m,2H),6.51(s,2H),4.96(s,2H),4.69(s,4H),1.58–1.49(m,2H), 1.29–1.15(m,12H),1.14–1.05(m,2H),0.84(t,J＝6.8Hz,3H).MS(ESI)m/z: 508[M+H]⁺.HRMS(ESI)m/z:[M+H]⁺Calcd for C₃₅H₄₂NO₂ ⁺508.3210；Found508.3200.

抗肿瘤活性测试部分

具体试验方法如下：

1、种细胞

人肝癌细胞HepG2、人肺癌细胞A549用DMEM完全培养液(含10％胎牛血清和1X青霉素-链霉素双抗溶液)在培养皿中培养，取对数生长期细胞, 当细胞培养生长至70％-80％融合时，胰酶消化后用培养液重悬细胞并计数，配制成密度约7×104个/mL细胞悬液，以每孔100μL细胞悬液将细胞接种于96孔板，37℃培养箱中培养至细胞贴壁。

2、加药

以DMSO为溶剂配制浓度20mg/mL的受试化合物，实验时用培养液稀释至所需工作浓度。96孔板弃培养液后，实验组分别加入不同工作浓度的化合物溶液100μL，空白对照组加入培养液100μL，阳性对照组加入不同浓度的抗肿瘤药物顺铂、吉西他滨溶液100μL，将96孔板继续放置培养箱中培养。

3、CCK8检测法

培养48h后每孔加入10μL的CCK8试剂，轻轻拍打培养板以帮助混匀， 37℃培养箱中孵育1-2小时，用酶标仪测定450nm吸光度值。实验重复3次后取平均值。上述化合物测试浓度为2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、 20μg/mL、40μg/mL，结果如下表2所示。

表2.化合物对肝癌(HepG2)和肺癌(A549)细胞的抑制活性

实验结果与讨论：

除化合物I-3、I-7、I-12、I-19和I-24外，其余化合物对HepG2细胞的抑制效果均优于阳性药顺铂，其中化合物I-4对HepG2细胞的抑制效果与阳性药物吉西他滨相当；上述化合物对肺癌A549细胞也有抑制效果，但抑制活性稍逊于阳性药物顺铂和吉西他滨。

由以上实验结果可知，本发明提供的具有生物活性的1,1′-联苯-2，6-二酚类化合物具有抑制肿瘤细胞增殖的活性，具有重大的药物研发潜力，可作为先导化合物用于抗癌药物的开发。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者终端设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者终端设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括……”或“包含……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者终端设备中还存在另外的要素。此外，在本文中，“大于”、“小于”、“超过”等理解为不包括本数；“以上”、“以下”、“以内”等理解为包括本数。

尽管已经对上述各实施例进行了描述，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改，所以以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利保护范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围之内。