用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物及其制备方法
阅读说明：本技术 用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物及其制备方法 (Ceramic composition for preventing, treating or improving diabetes and preparation method thereof ) 是由 金翰成 金泽中 李韩阿 崔文硕 金舒炫 黃栋铉 曹胜铉 于 2019-12-04 设计创作，主要内容包括：本发明涉及使用陶瓷组合物的对糖尿病的预防、治疗或改善,上述陶瓷组合物包含作为远红外线放射率高的矿物的麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母,具体地,可以通过陶瓷组合物的增加IRS1信使核糖核酸的表达、增加IRS2信使核糖核酸的表达、降低血糖及改善胰岛素分泌功能效果来预防、治疗或改善糖尿病,并且可以用于预防、治疗或改善糖尿病用医疗设备及饰品。(The present invention relates to prevention, treatment or amelioration of diabetes mellitus using a ceramic composition comprising maifanite, vesuvianite, carbon, volcanic ash and biotite, which are minerals having high far infrared radiation rate, and more particularly, to prevention, treatment or amelioration of diabetes mellitus by increasing the expression of IRS1 messenger ribonucleic acid, increasing the expression of IRS2 messenger ribonucleic acid, lowering blood sugar and improving the functional effect of insulin secretion in a ceramic composition, and to medical devices and accessories for prevention, treatment or amelioration of diabetes mellitus.)
技术领域
本发明涉及用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物，其包含作为远红外线放射率高的矿物的麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母。
背景技术
糖尿病是因用于帮助所摄取的食物分解为糖并转运到血液中的胰岛素分泌量不足或其功能不能正常起到作用而使血糖浓度升高的疾病。根据大韩糖尿病学会及近期疾病管理总部的公布，据预测，韩国国内糖尿病患病率持续增加，由此产生的各种慢性疾病及并发症的增加严重影响韩国国民的健康。在因糖尿病的血糖调节的维持血糖平衡未能长期进行的情况下，可导致高血糖症(hyperglycemia)及胰岛素耐受性(Insulin resistance，IR)，尤其，已知高血糖症可导致如心脑血管疾病、中风、慢性肾脏疾病等的微血管或大血管并发症，并由此增加死亡率。因此，早期预防及管理成为各种慢性疾病的原疾病的糖尿病是改善韩国国民保健的必要问题。根据报告韩国国内糖尿病现状及特征的研究，对经济合作与发展组织(Organization for Economic Cooperation and Development，OECD)各国的与各种死亡原因相对应的死亡率(以2013年为准)进行比较并分析，结果表明韩国国内基于糖尿病的死亡率达到28.9人/每10万人口，这在经济合作与发展组织国家中排名第七。
糖尿病大致分为1型糖尿病、2型糖尿病、以及其他糖尿病。占整体糖尿病的10％的1型糖尿病是在由于先天因素、自身免疫性疾病、病毒等的原因导致分泌胰岛素的胰腺无法正常工作而产生极少量或几乎不产生胰岛素的情况下发生。在这种情况下，需要从外部供应不足的胰岛素。占整体糖尿病的90％的2型糖尿病是在具有遗传易感性的人暴露于暴食、肥胖、运动不足、压力等的环境因素从而胰腺功能下降的情况下发生，其具有没有症状或症状出现缓慢的特征。此外，其他糖尿病是在因胰腺炎、胰腺手术引起的胰腺组织的损伤或胰岛素拮抗激素分泌障碍的情况下发生，其分为基于要药剂或化学物质的继发性糖尿病、妊娠糖尿病、耐糖障碍等。
糖尿病是一种无论哪种类型都难以治愈的疾病，因此需要包括注射胰岛素、口服降糖药的药物治疗及改善生活习惯等的预防疾病和持续管理。但是，在胰岛素疗法的情况下，会伴随心理问题、体重增加、低血糖、血脂异常等副作用，在药物疗法的情况下，若长期服用，则不能排除心力衰竭、肾病、肝病、胰腺炎等多种副作用。此外，近来提出了包括着重于血糖正常化的维修胃袖状切除术、Roux-en-Y胃旁路手术的各种形式的糖尿病及根据进展可实施的手术疗法，但是因为需要大量经费且术后需要不断管理，因此在糖尿病的预防及管理方面，增加个人的努力以及加重疾病负担。
作为现有糖尿病足的治疗方法大致包括手术治疗和非手术治疗。手术治疗是在未进行初始管理的情况下进行，例如，清创术、软组织移植、截肢术等。在这种情况下，具有患者需要承担高额的费用并伴随痛苦的缺点。在非手术治疗的情况下，主要是指糖尿病足发病初期所进行的伤口消毒管理，其使用如下的机构：使用湿敷绷带促进患部肉芽组织的增殖。最近，为了使治疗效果最大化，水解胶体(hydrocolloid)消毒、低频超声波治疗等也作为加速患部伤口治愈过程的方法公开，但其作为高价消毒制剂，实际情况是需要更多的考虑经济性的研究。
并且，作为使用天然矿物的现有技术，在韩国授权专利第10-1199895号公开了包含天然矿物及其溶解物作为有效成分的用于预防及治疗糖尿病的组合物，然而尚未公开作为使用矿物溶解物的使用混合天然矿物的、用于预防、治疗或改善糖尿病的组合物。
因此，本发明人提供使用天然矿物的用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物，上述天然矿物放射远红外线。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：韩国授权专利10-1199895号
非专利文献
非专利文献1：Eun-Mo Song et al.Effects of Far-infrared Therapy onWeight Loss in Korean Obese Women，J Korean Med Obes Res，2012，vol.12，no.1，pp.20-32
非专利文献2：Kokura，Satoshi，et al.Whole body hyperthermia improvesobesity-induced insulin resistance in diabetic mice，Int JHyperthermia.2007May；23(3):259-65.
非专利文献3：权赫相、金元镐、李大淵、朴相益，我国糖尿病的现状和仲裁研究的必要性，每周健康和疾病，2015，第8卷第32号pp.746-753
发明内容
技术问题
占整体糖尿病的90％的2型糖尿病可在具有遗传易感性的人暴露于暴食、肥胖、运动不足、压力等的环境因素从而胰腺功能下降的情况下发生，其具有没有症状或症状出现缓慢的特征，糖尿病的发生及维持与胰岛素分泌障碍及其由此的血糖上升有关。
因此，本发明提供具有降低血糖和改善胰岛素分泌功能效果的用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物。并且，提供具有促进血液循环、改善骨骼肌疾病、增加骨密度效果及缓解疼痛效果的用于预防、治疗或改善糖尿病足的陶瓷组合物。
解决问题的手段
本发明的发明人发现包含放射远红外线的矿物的陶瓷组合物具有增加IRS1信使核糖核酸(mRNA)的表达、增加IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达、降低血糖及改善胰岛素分泌功能效果，并通过提供包含上述陶瓷组合物的医疗设备及饰品来解决了上述问题。
在本发明的一实施方式中，陶瓷组合物可表现出增进新陈代谢、增进排泄废物、扩张毛细血管、抗炎、抗氧化、增加IRS1信使核糖核酸(mRNA)的表达、增加IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达、降低血糖及改善胰岛素分泌功能效果。
在本发明的一实施方式中，可将上述陶瓷组合物加热至35℃至40℃的温度，以每次2小时至6小时、每周4次至6次的频率用加热的陶瓷组合物进行温热刺激，进行3周至5周。
在本发明的一实施方式中，上述糖尿病可以是由于胰腺功能下降及葡萄糖的利用能力减少而引起的2型糖尿病。
并且，在本发明的一实施方式中，糖尿病可以是糖尿病足。更具体地，可以使用选自由促进血液循环、改善骨骼肌疾病、增加骨密度效果及缓解疼痛效果组成的组中的一种以上的活性来治疗糖尿病足。
在本发明的一实施方式中，陶瓷组合物可包含麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母。
在本发明的一实施方式中，陶瓷组合物可通过包括如下的步骤来制备：步骤1)，将麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母粉碎成350目至700目；步骤2)，将上述粉碎物以100重量份的麦饭石、0.5重量份至1.5重量份的火山石，0.05重量份至0.15重量份的碳、1重量份至3重量份的火山灰及0.5重量份至1.5重量份的黑云母的配合比添加，并添加溶剂后，进行粉碎；步骤3)，将上述粉碎物颗粒化；步骤4)，将颗粒形状的微粉碎物放入模具并进行加压成型；以及步骤5)，对上述加压成型物进行加热烧成。
在本发明的一实施方式中，所制备的陶瓷组合物可包含在用于预防、治疗或改善糖尿病的医疗设备。
在本发明的一实施方式中，所制备的陶瓷组合物可包含在用于预防、治疗或改善糖尿病的饰品。
发明的效果
根据本发明的一实施方式，可提供具有增加IRS1信使核糖核酸(mRNA)的表达、增加IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达、降低血糖及改善胰岛素分泌功能效果的包含放射远红外线的矿物用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物。
附图说明
图1为在正常胰腺β细胞株上进行陶瓷组合物刺激的图(NDC为陶瓷组合物)。
图2为在对正常胰腺β细胞株进行1小时及24小时的葡萄糖注入及陶瓷组合物刺激后，测定IRS1信使核糖核酸(mRNA)的表达量的图表(Gluco为葡萄糖，NDC为陶瓷组合物)。
图3为在对正常胰腺β细胞株进行1小时及24小时的葡萄糖注入及陶瓷组合物刺激后，测定IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达量的图表(Gluco为葡萄糖，NDC为陶瓷组合物)。
图4为在对正常胰腺β细胞株进行24小时的葡萄糖注入及陶瓷组合物刺激后，测定胰岛素的分泌量的图表(Gluco为葡萄糖，NDC为陶瓷组合物)。
图5为对大鼠进行陶瓷组合物及温热刺激的过程的示意图。
图6为在正常大鼠和携带2型糖尿病基因的大鼠、携带2型糖尿病基因且进行了陶瓷组合物刺激的大鼠中的实验前和实验开始14天、28天后测定血糖的图表(Gluco为葡萄糖，NDC为陶瓷组合物)。
图7为在正常大鼠和携带2型糖尿病基因的大鼠、携带2型糖尿病基因且进行了陶瓷组合物刺激的大鼠中的实验结束时测定胰岛素分泌量的图表(Gluco为葡萄糖，NDC为陶瓷组合物)。
图8为示出在5周龄的雄性大鼠中诱导糖尿病足的过程的图。
图9为测定不具有糖尿病足的正常组、糖尿病足携带组、糖尿病足及陶瓷组合物刺激组，糖尿病足及湿敷绷带刺激组的刺激前、刺激2周后及刺激4周后的骨密度变化的图表(NDC为陶瓷组合物)。
具体实施方式
以下，将详细说明本发明的实施方式，以便本领域技术人员可以容易地实施本发明。提供本发明的实施方式以向本领域技术人员更完整地说明本发明。因此，可以以各种不同方式变形本发明的实施方式，本发明的范围不限于以下说明的实施方式。
在本发明的整篇说明书中，当某部分“包括”某结构要素时，除非另有相反记载，否则还包括其他结构要素，而不是排除其他结构要素。
在本发明的整篇说明书中使用的术语“～(的)步骤”或“～的步骤”不表示“用于～的步骤”。
在本发明的整篇说明书中使用的术语“预防”指用组合物的效果抑制发病或延迟发病的所有行为。在本发明中，“改善”或“治疗”指用组合的效果使上述疾病症状的好转或有益地改变的所有行为。
本发明涉及包含放射远红外线的矿物作为有效成分的用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物。
根据本发明的一实施方式，上述陶瓷组合物可通过放射远红外线来表现出增进新陈代谢、增进排泄废物、扩张毛细血管、抗炎、抗氧化、增加IRS1信使核糖核酸(mRNA)的表达、增加IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达、降低血糖及改善胰岛素分泌功能效果。
根据本发明的一实施方式，预防、治疗或改善糖尿病可通过如下方式实施：将上述陶瓷组合物加热至35℃至40℃的温度，以每次2小时至6小时、每周4次至6次的频率用加热的陶瓷组合物进行温热刺激，进行3周至5周。
根据本发明的一实施方式，糖尿病可选自由胰腺功能不全引起的1型糖尿病、具有遗传易感性的人因环境因素而导致胰腺功能下降引起的2型糖尿病及继发性糖尿病、妊娠糖尿病、耐糖障碍等的其他糖尿病组成的组中，具体地，可以是2型糖尿病。
并且，在本发明的一实施方式中，糖尿病可以是糖尿病足。更具体地，可以使用具有选自促进血液循环、改善骨骼肌疾病、增加骨密度效果及缓解疼痛效果的陶瓷组合物来治疗糖尿病足。
根据本发明的一实施方式，上述陶瓷组合物可用于预防、治疗或改善糖尿病，其包含作为放射远红外线的天然矿物的麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母。
上述麦饭石是由每立方厘米(cm3)约有3万个至15万个孔形成的超多孔质原石，具有非常强的吸附力，作为包含约25000多种无机盐类的矿物，并且显示出加热时会发出大量的远红外线的特征。
上述火山石仅由纯无机物组成，因此不仅包含各种必需的矿物成分，而且还显示出放射高远红外线的特征。
上述碳是石墨结构的碳六边形球层重叠并连接成链状的结构，并且是通过烃经热解或不完全燃烧而生成的，其放射远红外线。
上述火山灰(pozzolan)由火山灰组成，其作为一种蜡石，在5μm至20μm波长中放射出90％至97％远红外线。
并且，与黄土、麦饭石相比，上述黑云母是具有约3倍以上的远红外线放射率且含有大量锗的矿物。
并且，根据本发明的一实施方式，上述陶瓷组合物可包含100重量份的麦饭石、0.5重量份至1.5重量份的火山石、0.05重量份至0.15重量份的碳、1重量份至3重量份的火山灰及0.5重量份至1.5重量份的黑云母。
并且，根据本发明的一实施方式，提供陶瓷组合物以单独的方式或与药学活性物质结合或适当集合使用的预防、治疗或改善糖尿病的方法。
本发明提供放射远红外线的陶瓷组合物的制备方法。
根据本发明的一实施方式，上述陶瓷组合物可通过包括如下步骤来制备：步骤1)，将麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母粉碎成350目至700目；步骤2)，将上述粉碎物以100重量份的麦饭石、0.5重量份至1.5重量份的火山石，0.05重量份至0.15重量份的碳、1重量份至3重量份的火山灰及0.5重量份至1.5重量份的黑云母的配合比添加，并添加溶剂后，进行粉碎；步骤3)，将上述粉碎物颗粒化；步骤4)，将颗粒形状的微粉碎物放入模具并进行加压成型；以及步骤5)，对上述加压成型物进行加热烧成。
在上述步骤1)中，若粉碎成小于350目，则因粒子大小过大而难以进行之后的微粉碎作业，若粉碎成大于700目，则因粉碎工程的时间过长而导致降低生产性，因此，优选地，粉碎成350目至700目。
优选地，上述步骤2)中的粉碎为通过向100重量份的步骤1)的麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母混合物添加60重量份至80重量份的溶剂并进行粉碎。
优选地，上述步骤2)中的粉碎是指微粉碎至1000目至3000目。若粉碎成小于1000目，则成型后产品的表面变得粗糙，若粉碎成大于3000目，则因粉碎工程时间过长而导致生产性降低。
在上述步骤3)中，可通过注入空气以具有颗粒形状来防止在加压成型工程中对产品产生裂纹及裂缝。
在上述步骤4)中，加压成型可以原样使用粉碎物，也可以重新粉化使用。
在上述步骤5)中，优选地，加热烧成是在900℃至1200℃的温度下加热烧成10小时至24小时。在低于900℃下加热烧成的情况下，因烧成时间短而表面不佳，在高于1200℃下加热烧成的情况下，上述矿物的电特性急剧降低或物理性质可发生变化。并且，在加热烧成少于10小时的情况下，烧成可能无法完成，在加热烧成超过24小时的情况下，生产性不佳。
在上述步骤5)之后，可自然冷却。
在上述步骤5)之后，还可以研磨加热烧成物的表面。将切割石放入震动抛光机、离心抛光机等来切割表面后，可将上述切割物放入抛光研磨机并用抛光石及抛光用化合物研磨表面。可通过上述两个步骤在研磨表面时使外观美观，从而用于医疗设备及饰品。
并且，在上述步骤2)之后，可用银纳米微粒子涂敷粉碎物。上述银纳米微粒子的涂敷可使陶瓷组合物的抗菌性最大化。
当将溶解有硼酸钠的水溶液添加到混合了表面活性剂和硝酸银的混合溶液时，上述银纳米微粒子涂敷的微粉碎物生成通过还原阴离子而生成的银微粒子，之后为了去除银微粒子的杂质，重复三次以5000rpm至8000rpm的速度离心分离并弃去上清液的过程，从而使用银胶体。通过混合搅拌用上述银胶体和0.5％的盐酸或氢氟酸溶液处理的上述微粉碎物来生成。
在生成上述银微粒子时所使用的表面活性剂可通过防止微粒子的生长来制备稳定的银胶体，可以使用阳离子、阴离子、非离子表面活性剂。
通过上述制备方法制备的陶瓷组合物可包含在用于预防、治疗或改善糖尿病的陶瓷组合物。
通过上述制备方法制备的陶瓷组合物可包含在用于预防、治疗或改善糖尿病的医疗设备。
通过上述制备方法制备的陶瓷组合物可包含在用于预防、治疗或改善糖尿病的饰品。
根据本发明的一实施方式，上述用于预防、治疗或改善糖尿病的医疗设备可选自由低频治疗设备、远红外线治疗设备、热敷及冷敷设备、热敷及冷敷贴、垫、按摩设备、拔罐设备、矫正器、轮椅及护具组成的组中，具体地，可以是垫，更具体地，可以是温热垫，但不限于此。
并且，根据本发明的一实施方式，上述用于预防、治疗或改善糖尿病的饰品可选自由戒指、项链、吊坠、手链、胸针、手表、袖扣、发夹、发箍、腰带、吊带、眼镜架及领带夹组成的组中，但不限于此。
本发明的对象为需要治疗糖尿病的哺乳动物。通常，对象是人类糖尿病患者。在本发明的一实施方式中，对象可以是非人类的灵长类动物、在模型系统中使用的动物(例如，用于药剂的筛选、表征及评估的小鼠及大鼠)以及其他哺乳动物，例如，兔子、豚鼠、仓鼠、狗、猫、黑猩猩、大猩猩、猴子。
在本发明的一实施方式中，为了治疗糖尿病患者，上述药学组合物可以单独或与激素治疗、药物治疗及生物反应调节剂组合使用。
在本发明的具体实施例中，在对作为胰腺β细胞株的RINm5F细胞刺激陶瓷组合物的结果，本发明人确认了IRS1信使核糖核酸的表达增加(参照图2)、IRS2信使核糖核酸的表达增加(参照图3)及胰岛素分泌增加效果(参照图4)。并且，在携带2型糖尿病基因的大鼠中，在处理陶瓷组合物及温热刺激的情况下，确认了血糖降低(参照图6)及胰岛素分泌增加的效果(参照图7)。
IRS-1和IRS-2作为胰岛素信号传导的介质，是细胞内胰岛素受体和复杂信号分子之间的对接蛋白，其维持细胞生长、生存、代谢等的功能。IRS-1在骨骼肌中对糖摄入起重要作用，IRS-1在肌肉中的表达和功能存在缺陷在肥胖和2型糖尿病等的胰岛素耐受性疾病中报告。已知IRS-2不仅调节胰腺β细胞的发育和生存，还调节胰岛素作用。
胰岛素由胰腺的β细胞合成、分泌，起到恒定维持血液中的葡萄糖的量的作用，当血糖升高通过分泌使血液内的葡萄糖流入细胞来以糖原形式存储，并抑制干细胞的葡萄糖。若胰岛素的合成和分泌不足或起不到充分的作用，则可能导致发生排泄含葡萄糖尿的糖尿病。
血糖是血液中所含的葡萄糖，通过以肝作用为中心的各种激素的相互作用来维持糖的消耗和供应的均衡，从而在血液内维持适当量，并用作细胞内线粒体及大脑的能源。
以下，将参照实施例及实验例更详细地说明本发明。然而以下实施例及实验例仅用于帮助理解本发明，而不旨在将本发明的范围限制于此。
实施例1：陶瓷组合物的制备
以500目的大小粉碎麦饭石、火山石、碳、火山灰、及黑云母后，将95.9kg的麦饭石、1kg的火山石、0.1kg的碳、2kg的火山灰及1kg的黑云母放入球磨机，添加70kg的水后，以2000目的大小进行微粉碎。用上述微粉碎物涂敷上述微粉碎物后，用喷雾干燥机注入空气来具有颗粒形状。将上述银纳米微粒子颗粒放入模具并压缩成型后，在1000℃下加热烧成18小时，研磨表面，以制备陶瓷组合物。
实施例2：确认在胰腺β细胞中基于陶瓷组合物刺激的IRS-1(Insulin receptorsubstrate 1)及IRS-2(Insulin receptor substrate 2)的表达效果
2-1：胰腺β细胞的培养
用包含10％的牛胎儿血清(FBS，fetal bovine serum)、1％的青霉素/链霉素(penicillin/streptomycin)的RPMI1640培养基在100×20mm的培养皿中，在37℃、5％的CO2的条件下培养作为胰腺β细胞株的RINm5F细胞。每2～3天进行一次继代培养，以维持细胞。
2-2：葡萄糖的注射及陶瓷组合物的刺激、胰腺β细胞的培养
为了确认陶瓷组合物刺激的胰岛素分泌诱导效果，将在实施例2-1中培养的胰腺β细胞分为对照(Con)组(RIN-m5F细胞)、对照-葡萄糖(Con-gluco)组(RIN-m5F细胞+葡萄糖)、对照-陶瓷组合物组(RIN-m5F细胞+陶瓷组合物刺激)。
在对照组中，将上述培养的RIN-m5F细胞以每孔(well)3.0×105个分配在6孔板(6-well plat)中。在对照-葡萄糖组中，将上述培养的RIN-m5F细胞以每孔(well)3.0×105个分配在6孔板(6-well plat)中，并在20mM的葡萄糖培养基中培养。在陶瓷组合物-对照组中，将上述培养的RIN-m5F细胞以每孔(well)3.0×105个分配在6孔板(6-well plat)中，并在培养箱(incubator)内相应细胞培养皿(Cell culture dish)上、下放置通过上述实施例1制备的陶瓷组合物来进行培养。
2-3：使用逆转录聚合酶链反应测定IRS-1及IRS-2的合成
用KRBB-HEPES缓冲液清洗两次在实施例2-2中培养的RIN-m5F细胞并培养1小时。培养后，分别用包含20mM的葡萄糖的KRBB-HEPES缓冲液再次培养，之后用试剂盒(trizol)提取总核糖核酸(RNA)。
合成cDNA后，用SYBR green进行链式反应。此时选择的引物(primer)是IRS-1及IRS-2引物。
表1
其结果，确认了对照-陶瓷组合物组中的IRS1信使核糖核酸的表达量优于对照组及对照-葡萄糖组，用陶瓷组合物刺激1小时或24小时的对照-陶瓷组合物组的IRS1信使核糖核酸的表达量优于对照组及对照-葡萄糖组。并且，确认了如下内容：对照-陶瓷组合物组的IRS2的信使核糖核酸的表达量优于对照组及对照-葡萄糖组，用陶瓷组合物刺激1小时或24小时的对照-陶瓷组合物组IRS1信使核糖核酸的表达量优于对照-葡萄糖组。
因此，确认了陶瓷组合物刺激有效增加IRS1及IRS2信使核糖核酸(mRNA)的表达(参照图2至图3)。
实施例3：在胰腺β细胞中测定基于陶瓷组合物刺激的胰岛素分泌量
将在上述实施例2-1中培养的RIN-m5F细胞以每孔3.0×105个分配在6孔板(6-well plat)中，并在完全培养基中培养3天后，用在上述实施例1中制备的陶瓷组合物进行刺激。用KRBB-HEPES缓冲液清洗两次，再换成包含20mM的葡萄糖的KRBB-HEPES缓冲液培养1小时，之后取上清液并离心10分钟，使用胰岛素Elisa试剂盒(Insulin ElisaKit)测定胰岛素的量。
其结果，确认了用陶瓷组合物刺激的对照-陶瓷组合物组的胰岛素的量明显高于不加以刺激的对照组。
因此，确认了陶瓷组合物刺激有效增加胰岛素的分泌(参照图4)。
实施例4：测定携带2型糖尿病的大鼠中基于陶瓷组合物垫及温热刺激的血糖
4-1：对大鼠施加陶瓷组合物垫及温热刺激
将15只携带2型糖尿病的5周龄(24.66±1.16g)C57BL/6雄性大鼠和30只携带2型糖尿病的5周龄(38.77±1.86g)DB/DB雄性大鼠分为对照组(正常组)、糖尿病(Diabetes)组(2型糖尿病携带组)、糖尿病+陶瓷组合物组(携带2型糖尿病及陶瓷组合物刺激组)。使用利用陶瓷组合物的垫，将陶瓷垫加热至38℃，以每日1次(4小时)，每周5次，进行4周的温热刺激。
4-2：大鼠的血糖变化的测定
为了测定接受陶瓷组合物垫及温热刺激的血糖降低效果，在刺激前及通过上述实施例4-1的方法刺激后的第14天及第28天后，从大鼠的心脏采血，并用血糖仪测定血糖。
其结果，确认了未加以刺激的糖尿病足的血糖值高，而接受陶瓷组合物垫及温热刺激的糖尿病+陶瓷组合物组的血糖值则随着时间的推移明显降低。另外，在第四周示出与对照组相似水平的血糖值。
因此，确认了陶瓷组合物及温热刺激有效降低血糖(参照图6)。
实施例5：测定携带2型糖尿病的大鼠中基于陶瓷组合物垫及温热刺激的胰岛素分泌量
为了测定接受陶瓷组合物垫及温热刺激的大鼠的胰岛素分泌量，以与上述实施例5-1相同的方法实验后，从大鼠的心脏采血，之后使用大鼠胰岛素Elisa试剂盒(MouseInsulin Elisa Kit)测定胰岛素的量。
其结果，确认了未加以刺激的糖尿病足的胰岛素量低，而接受陶瓷组合物垫及温热刺激4周的糖尿病+陶瓷组合物组的胰岛素量则高于对照组。
因此，确认了陶瓷组合物及温热刺激有效增加胰岛素分泌量(参照图7)。
实施例6：在诱导糖尿病足的大鼠中确认骨密度值增加效果
6-1：对大鼠诱导糖尿病足
为了对大鼠诱导糖尿病足，使用15只携带2型糖尿病的5周龄(24.66±1.16g)C57BL/6雄性大鼠和45只携带2型糖尿病基因的5周龄(38.77±1.86g)DB/DB雄性大鼠。麻醉上述大鼠后，在脚背上标记一个矩形伤口，并去除对应于0.5×0.3mm标准面积的皮肤层。
6-2：对携带糖尿病足的大鼠加以陶瓷组合物垫及温热刺激
将实施例6-1的诱导糖尿病足的大鼠分为对照组(正常组)、糖尿病足(DiabeticFoot)足(糖尿病足携带组)、糖尿病足+陶瓷组合物足(携带糖尿病足及陶瓷组合物刺激组)及糖尿病足+湿敷绷带(WetBand)组(携带糖尿病足及湿敷绷带刺激组)。在上述大鼠的下方的使用陶瓷组合物制造的垫加热至38℃，以每天1次(4小时)、每周5次，共进行4周的温热刺激。
6-3：对携带糖尿病足的大鼠加以湿敷绷带刺激
对实施例6-2的诱导糖尿病足的大鼠中的糖尿病足+湿敷绷带组进行最基本的湿敷。目视确认上述大鼠的糖尿病足的伤口的发生后，用生理盐水清洗患部并用必妥碘(Betadine)溶液进行消毒。之后，用浸有生理盐水的湿纱布敷料覆盖患部，为了防止敷料的损坏，用干纱布和创可贴再次固定。以每周1次(4小时)、每周5次，共进行4周的上述湿敷绷带刺激。
6-4：拍摄生物体内微层
为了观察通过实施例6-1至实施例6-3获得的大鼠的跗骨(Tarsal，T)和外周肌肉的结构变化，使用体内显微计算机断层扫描在实验前和实验开始第14天、28天后进行拍摄。之后，基于所拍摄的影像获得诱导糖尿病足部位的骨密度(Bone mineral density，BMD)的结构参数。
其结果，确认了诱导糖尿病足的两周的糖尿病足组、糖尿病足+陶瓷组合物组及糖尿病足+湿敷绷带组的骨密度值虽然有所降低，但具有明显高于相比诱导4周的糖尿病足+陶瓷组合物组的骨密度值增加效果。并且，确认了改善程度比一般的湿敷绷带刺激更有效(参照图9)。
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