具体实施方式

本发明提供了一种胆汁酸衍生物的盐，通过将式(I)结构的化合物和酸反应得到，

其中，R₁为氢、取代的或未被取代的C1～C12烷基或者卤素；

各R₂独立地选自取代的或未被取代的C1～C12烷基、卤素、氰基、羟基、硝基、磺酸基和羧基中的任意一种或多种；

m为0、1、2、3或4；

各R₃独立地选自取代的或未被取代的C1～C12烷基、卤素、羟基、C6～C30的芳基中的一种或多种；

n为0、1、2、3、4或5；

所述酸为无机酸或有机酸；

所述无机酸选自盐酸；

其中，结构式中的表示化合物的立体构型可以在纸面以上或纸面以下，

所述有机酸选自甲磺酸、草酸、对甲苯磺酸、L-酒石酸、富马酸、马来酸，优选甲磺酸，对甲苯磺酸。

本发明中，在一些实施方案中，所述R₁为氢、取代的或未被取代的C2～C6烷基或者卤素，优选为氢、氟、氯、溴、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基或正己基。

各R₂独立地选自取代的或未被取代的C2～C6烷基、卤素、氰基、羟基、硝基、磺酸基和羧基中的任意一种或多种，在一些实施方案中，各R₂独立地选自氟、氯、溴、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、羟基、硝基、磺酸基和羧基。

各R₃独立地选自取代的或未被取代的C2～C6烷基、卤素、羟基、C6～C18的芳基中的一种或多种，在一些实施方案中，各R₃独立地选自为氟、氯、溴、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、羟基、苯基、萘基、蒽基或菲基。

具体的，式(I)所示化合物具有为(F-1)，式(F-2)，式(F-3)，式(F-4)，式(F-5)，式(F-6)，式(F-7)、式(F-8)，(F-9)，式(F-10)，式(F-11)，式(F-12)，(F-13)，式(F-14)，式(F-15)，式(F-16)，(F-17)，式(F-18)，式(F-19)，式(F-20)，(F-21)，式(F-22)，式(F-23)，式(F-24)，(F-25)，式(F-26)，式(F-27)，式(F-28)，(F-29)，式(F-30)，式(F-31)或式(F-32)，

更具体的，所述胆汁酸衍生物的盐为式(F-1)，式(F-2)，式(F-3)，式(F-4)，式(F-5)，式(F-6)，式(F-7)、式(F-8)，(F-9)，式(F-10)，式(F-11)，式(F-12)，(F-13)，式(F-14)，式(F-15)，式(F-16)，(F-17)，式(F-18)，式(F-19)，式(F-20)，(F-21)，式(F-22)，式(F-23)，式(F-24)，(F-25)，式(F-26)，式(F-27)，式(F-28)，(F-29)，式(F-30)，式(F-31)或式(F-32)化合物的盐酸，甲磺酸、草酸、对甲苯磺酸、L-酒石酸、富马酸或马来酸盐。

本发明通过将式(I)结构的化合物与合适的盐通过离子键或共价键相结合，可以改变分子中的电荷分布，调整化合物的理化性质，通过实验发现，本发明提供的化合物的盐不仅制备过程简单、利于工艺放大，而且物理性状优于游离碱状态，熔点提高、溶解性提高，纯度高，稳定性较游离碱化合物有显著提高。

本发明还提供了一种胆汁酸衍生物的盐的制备方法，包括：

将式(I)所示的化合物、第一溶剂和酸混合反应，得到胆汁酸衍生物的盐

所述酸为无机酸或有机酸；

所述无机酸选自盐酸：所述有机酸选自甲磺酸、草酸、对甲苯磺酸、L-酒石酸、富马酸、马来酸，优选甲磺酸，对甲苯磺酸；

所述第一溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇、2-丁酮、四氢呋喃、二氯甲烷、乙腈、甲基叔丁基醚、丙酮、、乙酸乙酯、甲酸甲酯、乙酸异丙酯和正己烷中的一种或几种。

按照本发明，本发明将式(I)所示的化合物、第一溶剂和酸混合反应，得到胆汁酸衍生物盐；其中，所述式(I)所示的化合物与酸中的氢离子的摩尔比为1∶(0.9～1.5)，更优选为1∶(1.0～1.2)。在一些实施方案中，所述第一溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇和二氯甲烷中的一种或几种。本发明中，为了使反应更好的进行，本发明优选按照以下方法进行制备：

(1)先将式(I)所示化合物溶解于第一溶剂中；

(2)然后向所得溶液中加入酸并充分混合反应，得到反应液；

(3)向步骤(2)所得反应液中加入第二溶剂，搅拌后析出固体，或浓缩后产生固体，或降温后析出固体；

所述第一溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、异丁醇和二氯甲烷中的一种或几种；所述第二溶剂为乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、丙酮、甲酸甲酯、乙酸异丙酯、四氢呋喃中的至少一种或几种；且所述第二溶剂与第一溶剂极性不同；所述第一溶剂和第二溶剂的体积比为1∶(1～7)。更具体的，所述第一溶剂和第二溶剂的体积比的组合为：甲醇∶二氯甲烷＝1∶(1～5)、甲醇∶乙酸乙酯＝1∶(2～6)、甲醇∶乙腈＝1∶(1～2)、甲醇∶乙酸乙酯∶乙腈＝1∶3∶1、异丙醇∶二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1∶6、异丙醇∶乙酸乙酯＝1∶(2～6)、甲醇∶乙腈∶甲酸甲酯＝1∶1∶4、乙醇∶乙酸乙酯＝1∶(2～6)、乙醇∶二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1∶6、异丙醇∶甲基叔丁基醚＝1∶(1～6)或甲醇∶甲基叔丁基醚＝1∶(1～6)。

更具体的，所述第一溶剂和第二溶剂的体积比为甲醇∶二氯甲烷＝1∶(3～4)、甲醇∶乙酸乙酯＝1∶(3～4)、甲醇∶乙腈＝1∶(1～2)、甲醇：乙酸乙酯∶乙腈＝1∶3∶1、异丙醇∶二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1∶6、异丙醇∶乙酸乙酯＝1∶(2～4)、甲醇∶乙腈∶甲酸甲酯＝1∶1∶4、乙醇∶乙酸乙酯＝1∶(3～4)、乙醇∶二氯甲烷∶乙酸乙酯＝1∶1∶6、异丙醇∶甲基叔丁基醚＝1∶(2～4)或甲醇∶甲基叔丁基醚＝1∶(2～6)。

式(I)所示化合物的酸加成盐的制备方法，所述步骤(1)中式(I)所示化合物溶于第一溶剂中所得溶液的浓度为0.2g/mL～2g/mL。

为促进式(I)所示化合物溶解于第一溶剂中，可以搅拌或超声促溶，溶解温度为15℃～50℃。在一些更具体的实施方案中，步骤(1)中式(I)所示化合物溶解于第一溶剂中的温度可以是15～20℃，或者为20～45℃。

本发明还提供了一种式(S-1)所示的胆汁酸衍生物盐的晶型，命名为晶型A，

所述晶型A的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为9.58°±0.2°、13.79°±0.2°、16.81°±0.2°、19.19°±0.2°的衍射峰。更具体的，所述晶型A的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为6.68°±0.2°、9.58°±0.2°、11.37°±0.2°、13.30°±0.2°、13.79°±0.2°、16.81°±0.2°和19.19°±0.2°的衍射峰。更具体的，所述晶型A的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为6.68°±0.2°、9.58°±0.2°、10.08°±0.2°、10.41°±0.2°、11.37°±0.2°、11.72°±0.2°、13.30°±0.2°、13.79°±0.2°、14.78°±0.2°、15.71°±0.2°、15.96°±0.2°、16.81°±0.2°、17.89°±0.2°、19.19°±0.2°、20.02°±0.2°、20.71°±0.2°、21.75°±0.2°、23.66°±0.2°、24.61°±0.2°、25.65°±0.2°、26.38°±0.2°、26.59°±0.2°和28.96°±0.2°的衍射峰；所述晶型A的差示扫描量热曲线包含176.5℃±3℃的吸热峰。

更具体的，所述晶型A具有以下特征：(1)其X射线粉末衍射图谱与图2实质上相同，和/或(2)其差示扫描量热曲线与图3实质上相同。本发明中，本发明式(S-1)所示胆汁酸衍生物的盐的晶型按照前述的胆汁酸衍生物盐的制备方法即可得到，其中，第一溶剂可以为甲醇或异丙醇，所述第二溶剂为乙酸乙酯或甲基叔丁基醚；所述反应中，第一溶剂为异丙醇与第二溶剂为乙酸乙酯时，它们的体积比为1∶(1～5)；或者为1∶(2～4)；第一溶剂为甲醇与第二溶剂为甲基叔丁基醚时，它们的体积比为1∶(1～4)；或者为1∶(2～3)。

本发明还提供了一种式(S-9)所示的胆汁酸衍生物盐的晶型，命名为晶型B，

其中，所述晶型B的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.88°±0.2的衍射峰；更具体的，所述晶型B的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、7.12°±0.2°、9.05°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.88°±0.2°、15.71°±0.2°、17.48°±0.2°和18.15°±0.2°的衍射峰；更具体的，晶型B的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、7.12°±0.2°、9.05°±0.2°、10.15°±0.2°、10.72°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.26°±0.2°、14.88°±0.2°、15.15°±0.2°、15.71°±0.2°、17.48°±0.2°、18.15°±0.2°、19.72°±0.2°、20.19°±0.2°、20.35°±0.2°、21.22°±0.2°、22.74°±0.2°、23.44°±0.2°、23.99°±0.2°和32.03°±0.2°的衍射峰。

更具体的，所述晶型B具有以下特征：(1)其X射线粉末衍射图谱与图5实质上相同，和/或(2)其差示扫描量热曲线和热重分析曲线与图6实质上相同。

本发明中，本发明式(S-9)所示的胆汁酸衍生物盐的晶型方法按照前述的胆汁酸衍生物盐的制备方法即可得到，其中，第一溶剂可以为异丙醇，异丙醇与第二溶剂的体积比为1∶(6～10)；或者为1∶(7～8)；具体的，当所述第二溶剂为乙酸乙酯时，反应中，异丙醇与乙酸乙酯的体积比为1∶(6～10)；或者为1∶(7～8)。

本发明还提供了一种式(S-9)所示的胆汁酸衍生物盐的晶型，命名为晶型C，

其中，所述晶型C的X射线粉末衍射图谱包含2θ角为6.47°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°的衍射峰，更具体的，所述晶型C的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为6.47°±0.2°、9.19°±0.2°、11.15°±0.2°、11.39°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°、15.67°±0.2°、18.48°±0.2°、18.74°±0.2°和20.76°±0.2°的衍射峰；；更具体的，所述晶型C的X射线粉末衍射图谱中包含2θ角为6.47°±0.2°、9.19°±0.2°、10.47°±0.2°、11.15°±0.2°、11.39°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°、15.67°±0.2°、16.06°±0.2°、17.49°±0.2°、17.85°±0.2°、18.13°±0.2°、18.48°±0.2°、18.74°±0.2°、19.19°±0.2°、19.92°±0.2°、20.76°±0.2°、21.02°±0.2°、21.91°±0.2°、23.07°±0.2°、23.90°±0.2°和24.88°±0.2°的衍射峰。

更具体的，所述晶型C具有以下特征：(1)其X射线粉末衍射图谱与图7实质上相同，和/或(2)其差示扫描量热曲线和热重分析曲线与图8实质上相同。

本发明中，本发明式(S-9)所示的胆汁酸衍生物盐的晶型按照前述的胆汁酸衍生物盐的制备方法即可得到，其中，第一溶剂可以为乙醇，且乙醇与第二溶剂的体积比优选为1∶(2～5)；或者为1∶(3～4)，当所述第二溶剂为乙酸乙酯时，反应中，乙醇与乙酸乙酯的体积比为1∶(2～5)；或者为1∶(3～4)。

本发明还提供了一种本发明所述的胆汁酸衍生物盐或其溶剂化物或本发明所述的晶型胆汁酸衍生物盐在制备治疗或减轻FXR相关的疾病的药物中的应用；其中，所述FXR相关的疾病选自慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症。所述慢性肝病包括原发性胆汁淤积性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝纤维化相关疾病、药物导致的胆汁淤积、进行性家族性肝内胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病中的一种或多种；所述门脉高压症选自肝纤维化、肝硬化、脾肿大或其它原因引起的门静脉压力升高；所述代谢性疾病包括高胆固醇血症、血脂异常、胆固醇结石和高甘油三酯血症。

本发明所述的药物中，既可以只有胆汁酸衍生物的盐一种药物活性成分，也可以同时包含胆汁酸衍生物的盐和其他药物化合物，用于治疗或减轻上述慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症等疾病。本发明提供的应用中，本发明胆汁酸衍生物的盐可以作为单独的活性试剂给药，或者可以与其它治疗剂联合给药，包括具有相同或相似治疗活性并且对于此类联合给药确定为安全且有效的其它化合物；本发明提供治疗、预防或改善疾病或病症的应用中，包括给予安全有效量的包含本发明公开的胆汁酸衍生物的盐与一种或多种治疗活性剂的联合药物。在一些实施方案中，联合药物包含一种或两种其他治疗剂。

还在另一方面，本发明提供一种用于激活FXR受体的方法，包括向有需要的个体或样本给予有效量的本发明公开的胆汁酸衍生物盐。

还在另一方面，本发明提供一种用于预防、治疗或减轻FXR相关的疾病的方法，包括向有需要的个体给予治疗有效量的本发明公开的胆汁酸衍生物的盐、晶型状态的胆汁酸衍生物的盐或本发明公开的包含胆汁酸衍生物的盐药物组合物。

定义和一般术语

除非另有说明，本发明所用在说明书和权利要求书中的术语具有下述定义。

除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。术语“包含”，“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。

术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。

本发明所使用的术语“当量”数或其缩写“eq.”，是按照化学反应的当量关系，以每步中所用基本原料为基准(1当量)，所需要的其他原材料的当量用量。

晶型在本发明中可认为由图表“描绘”的图形数据表征。这些数据包括，例如粉末X射线衍射图谱、拉曼光谱、傅立叶变换-红外光谱、DSC曲线、TGA曲线和固态NMR光谱。技术人员将理解，这类数据的图形表示可发生小的变化(例如峰相对强度和峰位置)，原因是诸如仪器响应变化和样品浓度及纯度变化的因素，这对于技术人员是公知的。尽管如此，技术人员能够比较本文图中的图形数据和对未知晶型产生的图形数据，并可确认两组图形数据是否表征相同的晶型。

可用熟知的技术检测、鉴定、分类和定性多晶型物，这些技术例如但不限于：差示扫描量热法(DSC)、热重分析法(TGA)、X射线粉末衍射法(XRPD)、单晶X射线衍射法、振动光谱法、溶液量热法、固态核磁共振法(SSNMR)、傅立叶变换红外光谱(FT-IRspectmm)法、拉曼光谱(Ramanspectrum)法、热载台光学显微术、扫描电镜术(SEM)、电子晶体学、以及定量分析、粒度分析(PSA)、表面区域分析、溶解度和溶出速度。除非另有说明，当文中提及光谱或以图形形式出现的数据(例如，XRPD、红外、拉曼和NMR谱)时，术语“峰”是指本领域的普通技术人员可识别的非背景噪音造成的峰或其它特殊特征。术语“有效峰”是指至少为光谱或数据中其它峰的中间大小(例如高度)或至少为光谱或数据中其它峰的中间大小的1.5、2或2.5倍的峰。

正如在X射线粉末衍射(XRPD)领域中所熟知的，对任何指定的晶型而言，获得X-射线粉末衍射(XRPD)图时所用装置、湿度、温度、粉末晶体的取向以及其它参数均可能引起衍射图中峰的外观、强度和位置的一些变异性。根据本试验所用仪器状况，衍射峰存在±0.2°的误差容限。

与本文提供的图2或图5或图7“实质上相同”的X-射线粉末衍射图是指本领域技术人员认为具有与图2或图5或图7的XRPD图的化合物相同的XRPD图，或更可能其可稍微不同。这样的XRPD图可不必要显示本文所呈现的衍射图的每个峰，和/或可显示由于在获得数据时涉及的条件差异而导致的所述峰的外观、强度或位移的轻微变化。本领域技术人员通过比较它们的XRPD图，能够确定结晶化合物的样品是否具有与本文公开的晶型相同的晶型或不同的晶型。类似地，本领域技术人员能够确定给出的得自XRPD图的衍射角(以°2θ表示)是否在与本文呈现的数值大致相同的位置。在本发明的上下文中，X-射线粉末衍射图中的2θ值均以度(°)为单位。

同样，正如差示扫描量热(DSC)领域中所熟知的，DSC曲线的熔化峰高取决于与样品制备和测试仪器条件等许多有关的因素，而峰位置对实验细节相对不敏感。因此，在一些实施方案中，本发明的结晶化合物的特征在于具有特征峰位置的DSC图，具有与本发明附图中提供的DSC图实质上相同的性质。根据本试验所用仪器状况和/或样品的制备情况，熔化峰存在±3℃、±4℃或±5℃的误差容限。在一些具体实施方案中，在一些具体实施方案中，本发明所述的盐酸盐晶型A在176.55℃处有一吸热峰，热焓值为56.32J/g，起始温度为170.20℃；甲磺酸盐晶型B，在137.5℃有一个吸热峰，热焓值为34.223J/g，起始温度为125.5℃；甲磺酸盐晶型C，在186℃有一个吸热峰，热焓值为57.814J/g，起始温度为180.4℃。

正如热重分析(TGA)领域中所熟知的，热重分析(TGA)是在程序控制温度下，测定物质的质量与温度关系的一种技术。TGA曲线显示的质量变化及温度范围取决于样品制备和仪器等许多因素，不同仪器以及不同样品之间，TGA的质量变化可能存在差别，失重率可能存在±5％、±4％、±3％或±2％的误差容限，因此所述的通过TGA测定的在一定温度范围内的失重率不能视为绝对的。在一些具体实施方案中，本发明所述的盐酸盐晶型A在170℃之前温度范围内失重为2.088％；甲磺酸盐晶型B，在约130℃前有约0.66％的失重；甲磺酸盐晶型C，在约180℃前有约0.53％的失重。

X-射线粉末衍射、DSC曲线图、TGA曲线图、拉曼光谱图和傅立叶变换-红外光谱图“实质上相同”是指X-射线粉末衍射图、DSC曲线图、TGA曲线图、拉曼光谱图和傅立叶变换一红外光谱图中至少有50％，或至少60％，或至少70％，或至少80％，或至少90％，或至少95％，或至少99％的峰显示在图中。

X-射线粉末衍射图中的衍射峰的“相对强度”是指X-射线粉末衍射图(XRPD)的所有衍射峰中第一强峰的强度为100％时，其它峰的强度与第一强峰的强度的比值。

本发明所述的式(I)所示的化合物的盐酸盐晶型A以基本上纯净的结晶形态存在。

术语“基本上纯净的”是指化学纯度和晶型纯度，更具体地讲，一种晶型基本上不合另外一种或多种晶型，即晶型的纯度至少或至少80％，或至少85％，至少90％，或至少93％，或至少95％，或至少98％，或至少99％，或至少99.5％，或至少99.6％，或至少99.7％，或至少99.8％，或至少99.9％，或晶型中含有其它晶型，所述其它晶型在晶型的总体积或总重量中的百分比少于20％，或少于10％，或少于5％，或少于3％，或少于1％，或少于0.5％，或少于0.1％，或少于0.01％。

本发明的晶体的纯度可以通过，例如已知方法诸如X-射线粉末衍射学、热重分析等来测定。本发明的晶体或混合晶体的纯度不需要是100％，并且可以不低于80％，优选地不低于90％，更优选地不低于95％，并且最优选地不低于98％。优选在该范围内的纯度以保证质量。

本发明所用的术语“约”和“大约”通常是指在给定的值或范围的±10％以内，适当地在±5％以内，特别是在1％以内。或者，对于本领域普通技术人员而言，术语“约”和“大约”表示在平均值的可接受的标准误差范围内。

本发明提供的一种胆汁酸衍生物的盐、其晶型结构及它们的制备方法和应用，本发明提供的胆汁酸衍生物的盐，通过将式(I)结构的化合物和酸反应得到，结果表明，本发明通过将式(I)结构的化合物和特定的酸反应，使得得到的盐具有好的溶解性和稳定性，且同样具有FXR受体激动活性，可改善胆汁淤积，降低门脉压力，改善肝功能，可用于制备治疗或缓解慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症及其相关疾病的药物。

下面将结合本发明实施例的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

化合物的结构是通过核磁共振(¹H-NMR)来确定的。¹H-NMR位移(6)以百万分之一(ppm)的单位给出。¹H-NMR分析采用的仪器是配备有B-ACS 120自动进样系统的BrukerAdvance 400。测定溶剂为氚代氯仿(CDCl₃)、氘代甲醇(CD₃OD)或者氚代二甲亚砜(DMSO-d₆)等常用的氘代溶剂。LC-MS的测定用Agilen-6120Quadrupole LC/MS质谱仪。

对所得到的盐的固体形式采用X射线粉末衍射(XRPD)进行分析。实验所得固体样品用D8 advance粉末X射线衍射分析仪(Bruker)和D2 phaser粉末X射线衍射分析仪(Bruker)进行分析。该仪器配备了LynxEye检测器。D8 advance粉末X射线衍射分析仪(Bruker)测试样品使用Cu Kα辐射，2θ扫描角度从3°到40°，扫描步长为0.02°。测定样品时的光管电压和光管电流分别为40KV和40mA。D2 phaser粉末X射线衍射分析仪(Bruker)测试样品使用Cu Kα辐射，测定样品时的光管电压和光管电流分别为30KV和10mA。

对所得到的化合物或盐的固体形式采用偏光显微镜分析(PLM)，PLM分析采用的仪器型号为ECLIPSE LV100POL偏光显微镜(尼康，日本)。

对所得到的盐的固体形式采用热重分析(TGA)，热重分析仪的型号为TGA Q500或Discovery TGA 55(TA，美国)。将样品置于已平衡的开口铝制样品盘中，质量在TGA加热炉内自动称量。样品以10℃/min的速率加热至最终温度。

对所得到的盐的固体形式采用差示扫描量热分析(DSC)，差示扫描量热分析的仪器型号为DSC Q200或Discovery DSC 250(TA，美国)。样品经精确称重后置于DSC扎孔样品盘中，并记录下样品的准确质量。样品以10℃/min的升温速率加热至最终温度。

对所得到的盐的固体形式采用动态水分吸脱附分析(DVS)分析，动态水分吸脱附分析采用的仪器型号为IGA Sorp(Hidentity Isochema)。样品测量采用梯度模式，测试的湿度范围为0％至90％，每个梯度的湿度增量为10％。

实施例中无特殊说明，反应温度为室温；室温为20℃～30℃。

HPLC是指高效液相色谱；HPLC的测定使用安捷伦1200高压液相色谱仪(ZorbaxEclipse Plus C¹⁸ 150×4.6mm色谱柱)。

结晶型可通过多种方法制备，包括但不限于例如从适合的溶剂混合物中结晶或重结晶、升华、从另一相固态转化、从超临界流体液体结晶和喷雾等。

可在真空下过滤经冷却的结晶混合物，经分离的固体产物用适合溶剂(例如，冷的重结晶溶剂)洗涤。洗涤后，产物可在氮吹扫下干燥以得到所需的结晶型。产物可通过适合的光谱或分析技术分析，包括但不限于例如，X-射线单晶衍射分析、X-射线粉末衍射(XRPD)分析、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)、傅立叶变换-红外光谱(FT-IR)分析和拉曼光谱(Raman spectrum)分析等。以保证化合物的结晶型已经形成。

下面简写词的使用贯穿本发明：

ACN 乙腈

DCM 二氯甲烷

EtOH 乙醇

EA，EtOH 乙酸乙酯

g 克

IPA 异丙醇

MTBE 甲基叔丁基醚

MeOH 甲醇

M，mol/L 摩尔每升，即1L溶液中所含溶质的物质的量；

mL，ml 毫升

mmol 毫摩尔；

v 体积

以下实施例中溶剂的比例，如无特殊说明，均为体积比。以下缩写

(一)制备实施例

实施例1：化合物1的合成

采用专利CN201810930184.X实施例1描述的方法制备得到类白色固体化合物1。

该固体用偏光显微镜分析(PLM)，无双折射现象，其DSC-TGA谱图如图1所示，DSC两个吸热峰起始温度分别位于41.6℃和72.6℃。TGA显示在100℃前失重6.2％。DVS显示在湿度10％～90％条件下，吸湿1.933％～7.0146％。化合物1熔点低，易吸湿，不利于制剂。XRPD显示该固体为无定型状态，且实施例1化合物熔点较低，不利于制剂。

实施例2化合物1盐酸盐的制备

在室温下将实施例1化合物(1.0eq.)加入到40-60μL MeOH中搅拌将其溶解，然后加入1.5μL盐酸(，1.0eq.)搅拌，未析出固体，然后加入100μL ACN，未析出固体。反应瓶加盖后室温下缓慢挥发，得到固体，对所得固体样品进行检测。XRPD显示该固体没有明显衍射峰，为无定型形态。

UPLC-MS：(m/z)：590.3610[M+H]⁺；

¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz，ppm)：8.98(d，J＝6.8Hz，2H)，8.03(d，J＝6.8Hz，2H)，6.02(t，J＝2.8Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.47(m，1H)，4.16(m，2H)，3.50(brs，1H)，3.14(m，1H)，2.42(m，1H)，2.16(m，1H)，1.91(m，1H)，1.81(m，2H)，1.77(m，1H)，1.76(m，1H)，1.72(m，1H)，1.70(m，1H)，1.53(m，1H)，1.50(m，1H)，1.47(m，1H)，1.45(m，1H)，1.42(m，2H)，1.39(m，1H)，1.32(m，1H)，1.30(m，1H)，1.27(m，1H)，1.19(m，1H)，1.18(m，1H)，1.17(m，1H)，1.16(m，1H)，1.14(m，1H)，1.10(m，1H)，0.99(m，1H)，0.94(d，3H)，0.89(m，1H)，0.82(m，6H)，0.60(s，3H)；

¹³C-NMR(DMSO-d₆，400MHz，ppm)：157.56、157.47、143.20、123.65、77.78、77.73、71.04、68.82、67.50、67.45、67.33、67.26、56.12、50.58、45.78、42.54、41.75、40.41、39.78、36.28、36.22、35.99、35.65、33.99、33.11、32.71、32.26、32.19、30.89、28.40、23.55、23.52、22.63、20.87、18.82、12.18、12.09：

P-NMR：(DMSO-d₆，162MHz，ppm)：-6.07。

根据¹H-NMR结果，可看出吡啶环上的4个氢发生明显化学位移，提示吡啶环有电子转移，形成了盐酸盐。

DSC检测此方法制备得到的化合物1盐酸盐无定型固体粗品在约84.3，109.0，132.0℃有三个起始吸热峰；因此成盐后固体熔点较化合物1有明显提高。

TGA检测此方法制备得到的化合物1盐酸盐无定型固体粗品在约140℃有2.4％的失重。

实施例3：化合物1盐酸盐晶型A制备

将化合物1(1.0g)加入到2-3mL异丙醇中，在40-60℃条件下搅拌，待溶清后加入150μL盐酸(1.05eq.)。然后缓慢加入6-10mL EtOAc。搅拌后有固体析出，继续搅拌2-4h后缓慢降温，降至室温后继续搅拌1-2h，过滤，所得固体60-70℃干燥过夜。

(1)¹H-NMR检测结果与实施例2基本一致，吡啶环上的4个氢发生明显化学位移，证明形成了盐酸盐。对上述方法制备得到的化合物1盐酸盐进一步进行检测。

(2)岛津离子色谱系统，PDM-IC-001测定氯离子含量，结果显示样品中氯离子含量为5.6％，理论上，单盐酸盐中氯离子含量为5.8％，因此结果表明本方法制备得到了实施例2化合物1盐酸盐，且化合物1与盐酸的化学计量比为1∶1。

(3)X-射线粉末衍射：将所得固体进行XRPD检测，得到的谱图见附图2，图2中具有明显的衍射峰，表明该固体为晶型状态，认定其为化合物1的盐酸盐晶型A，其具体数据结果如下表2所示，衍射峰位置可存在±0.2°的误差容限。

表2晶型A的X-射线粉末衍射公析结果

(4)DSC检测实施例3制备得到的化合物1盐酸盐晶型A，得到DSC曲线谱图见附图3。

晶型A在约176.55℃处有一吸热峰，热焓值为56.32J/g，起始温度(onset)为170.20℃，可认为化合物的熔点为170℃，相较于成盐之前的化合物1和盐酸盐无定型均有明显提高。

(5)TGA检测实施例3制备得到的化合物1盐酸盐晶型A，得到TGA曲线谱图见附图4。

显示该样品在大约170℃前，有2.088％的失重，表明样品不含结晶水。

结晶方法的一些等效条件替换，得到的盐酸盐固体可能会显示出有差异的XRPD图谱，有时会显示出额外的峰，但是在TGA和DSC上显示出相似的热学性能。这些在XRPD上的差异是由结晶度和择优取向等原因引起的。当晶型溶残含量不同时，得到的盐酸盐晶型A固体可能会在TGA和DSC上显示出有差异的热学性能，只要包含上表2中的主要衍射峰9.58°±0.2°、13.79°±0.2°、16.81°±0.2°、19.19°±0.2°，或者包含主要衍射峰6.68°±0.2°、9.58°±0.2°、11.37°±0.2°、13.30°±0.2°、13.79°±0.2°、16.81°±0.2°和19.19°±0.2°，或者包含主要衍射峰6.68°±0.2°、9.58°±0.2°、11.37°±0.2°、11.72°±0.2°、13.30°±0.2°、13.79°±0.2°、14.78°±0.2°、15.96°±0.2°、16.81°±0.2°、17.89°±0.2°、19.19°±0.2°、20.02°±0.2°、20.71°±0.2°、21.75°±0.2°、24.61°±0.2°和28.96°±0.2°就认为获得的是盐酸盐晶型A。

将化合物与合适的酸通过离子键或共价键相结合，可以改变分子中的电荷分布，调整活性分子的理化性质，并且成盐后更利于获得多样化的固体形式。按照本实施例的制备方法获得的盐酸盐晶型A，根据DSC曲线可以发现，晶型A较实施例2制备的盐酸盐无定型的熔点有显著的提高。

实施例4：草酸盐的制备

室温条件下，将10.9mg的实施例1化合物加入到40-60μL MeOH中搅拌将其溶解，然后加入1.665mg草酸，未析出固体。然后加入120-150μL EtOAc，未析出固体。挥干溶剂，然后对其所得固体样品进行表征。XRPD显示该固体只有1个明显衍射峰，基本为无定型形态。

换用异丙醇/C酸乙酯(v/v)＝1∶3，乙醇/乙酸乙酯(v/v)＝1∶3，均未得到含晶型的产品。

实施例5：L-酒石酸盐的制备

室温条件下，将10.9mg的实施例1化合物加入到120-150μL IPA/DCM(v/v＝2∶1)溶液中，40-50℃加热中搅拌将其溶解，然后加入L-酒石酸(2.8mg，1.0eq.)，未析出固体。然后加入300-400μL EtOAc，未析出固体。XRPD显示该固体为无定型形态。

换用异丙醇/甲基叔丁基醚(v/v)＝1∶3，乙醇/乙酸乙酯(v/v)＝1∶3，甲醇/乙酸异丙酯(v/v)＝1∶4均未得到含晶型的产品。

实施例6：对甲苯磺酸盐制备

室温条件下，将10.4mg的实施例1化合物加入到50-60μL异丙醇中，40-50℃加热中搅拌将其溶解，然后加入对甲苯磺酸一水合物(3.4mg，1.0eq.)，未析出固体。然后加入150-200μL EtOAc，有粘稠状样品出现，未析出固体。蒸干溶剂后得到固体，¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)可检测到对甲苯磺酸的苯环氢信号以及化合物1的吡啶环氢信号的位移，可以说明成盐。

实施例7：富马酸盐制备

室温条件下，将10.8mg的实施例1化合物加入到50-60μL异丙醇中，40-50℃加热中搅拌将其溶解，然后加入对富马酸(2.0mg，1.0eq.)，未析出固体。然后加入150-200μLEtOAc，有粘稠状样品出现，未析出固体。XRPD显示该固体为无定型形态。

换用异丙醇/二氯甲烷(v/v)＝1∶4，乙醇/丙酮(v/v)＝1∶6，甲醇/乙酸异丙酯(v/v)＝1∶4均未得到含晶型的产品。

实施例8：马来酸盐制备

室温条件下，将10.2mg的实施例1化合物加入到50-60μL异丙醇中，40-50℃加热中搅拌将其溶解，然后加入对马来酸(2.0mg，1.0eq.)，未析出固体。然后加入120-150μL 2-丁酮，有粘稠状样品出现，未析出固体。

实施例9：甲磺酸盐制备方法一

室温条件下，将100.9mg(0.17mmol)的实施例1化合物加入到100-120μL异丙醇中搅拌将其溶解，然后加入11μL甲磺酸(0.17mmol，1.0eq.)，加入乙酸乙酯700-800μL后有粘稠状样品出现，搅拌2-3天后得到固体，在40-50℃条件下加入100-150μL乙醇将溶液澄清，搅拌2-4小时得到固体。X-射线单晶衍射(XRPD)检测显示该固体为晶型形式，认定其为化合物1的甲磺酸盐晶型B。

(1)¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz，ppm)：8.89(d，J＝6Hz，2H)，7.88(d，J＝6Hz，2H)，5.95(m，1H)，4.52-4.62(m，1H)，4.42-4.50(m，1H)，4.13-4.18(m，2H)，3.50(brs，1H)，3.14(m，1H)，2.38(m，1H)，2.34(s，3H)，2.16(m，1H)，1.92(m，1H)，1.81(m，2H)，1.77(m，1H)，1.76(m，1H)，1.72(m，1H)，1.71(m，1H)，1.51(m，1H)，1.50(m，1H)，1.47(m，1H)，1.45(m，1H)，1.42(m，2H)，1.39(m，1H)，1.32(m，1H)，1.30(m，1H)，1.27(m，1H)，1.19(m，1H)，1.18(m，1H)，1.17(m，1H)，1.16(m，1H)，1.14(m，1H)，1.10(m，1H)，0.99(m，1H)，0.94(d，3H)，0.90(m，1H)，0.84(m，6H)，0.61(s，3H)。

氢谱中包含甲磺酸的甲基信号，且观察到吡啶环4个氢的明显化学位移，形成了甲磺酸盐。

(2)化合物1甲磺酸盐晶型B的XRPD谱图见附图5。XRPD谱图中具有明显的衍射峰，表明该固体为晶型状态，本实施例制备得到的甲磺酸盐晶型B，其具体数据结果如下表3所示，峰位置可存在±0.2°的误差容限。

表3晶型B的X-射线粉末衍射分析结果

(3)TGA检测实施例9制备得到的甲磺酸盐晶型B，在约130℃前有约0.66％的失重，表明样品不含结晶水。

(4)DSC检测实施例9制备得到的甲磺酸盐晶型B，在137.5℃有一个吸热峰，热焓值为34.223J/g，起始温度为125.5℃，可认为该晶型的熔点在约125.5℃。TGA和DSC的复合谱图见附图6。

晶型溶残含量不同，得到的甲磺酸盐固体可能会在TGA和DSC上显示出有差异的热学性能，或者显示出有差异的XRPD图谱，有时会显示出额外的峰，但是只要包含上表3中的2θ角为4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.88°±0.2的主要衍射峰，或者4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、7.12°±0.2°、9.05°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.88°±0.2°、15.71°±0.2°、17.48°±0.2°和18.15°±0.2°的主要衍射峰，或者包含2θ角为4.52°±0.2°、5.20°±0.2°、7.12°±0.2°、9.05°±0.2°、10.15°±0.2°、10.72°±0.2°、13.34°±0.2°、13.58°±0.2°、14.26°±0.2°、14.88°±0.2°、15.15°±0.2°、15.71°±0.2°、17.48°±0.2°、18.15°±0.2°、19.72°±0.2°、20.19°±0.2°、20.35°±0.2°、21.22°±0.2°、22.74°±0.2°、23.44°±0.2°、23.99°±0.2°和32.03°±0.2°的主要衍射峰就认为获得的是甲磺酸盐晶型B。

实施例10：甲磺酸盐制备方法二

室温条件下，将30.5mg(0.0517mmol)的实施例1化合物加入到100-120μL乙醇中搅拌将其溶解，然后加入3.35μL甲磺酸(0.0517mmol，1.0eq.)，在40-50℃条件下加入300-400μL乙酸乙酯后有粘稠状样品出现，搅拌30-60min后有固体产生。X-射线单晶衍射(XRPD)检测显示该固体为晶型形式，本实施例制备得到的晶型即甲磺酸盐晶型C。

(1)¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz，ppm)：与实施例9一致。

(2)制备实施例10得到的甲磺酸盐晶型C的XRPD谱图见附图7。

XRPD谱图中具有明显的衍射峰，表明该固体为晶型状态，认定其为化合物1的甲磺酸盐晶型C，其具体数据结果如下表4所示，峰位置可存在±0.2°的误差容限。

表4晶型C的X-射线粉末衍射分析结果

(3)TGA检测实施例10制备得到的甲磺酸盐晶型C，在约180℃前有约0.53％的失重，表明样品不含结晶水。

(4)DSC检测实施例10制备得到的甲磺酸盐晶型C，在186℃有一个吸热峰，热焓值为57.814J/g，起始温度为180.4℃，可认为该晶型的熔点在约180℃。TGA和DSC的复合谱图见附图8。甲磺酸盐晶型B晶型和C晶型的TGA和DSC数据表明，晶型C相对于晶型B具有更好的热稳定性。

晶型溶残含量不同，得到的甲磺酸盐固体可能会在TGA和DSC上显示出有差异的热学性能，或者显示出有差异的XRPD图谱，有时会显示出额外的峰，但是只要包含上表4中2θ角为6.47°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°的主要衍射峰；或者包含2θ角为6.47°±0.2°、9.19°±0.2°、11.15°±0.2°、11.39°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°、15.67°±0.2°、18.48°±0.2°、18.74°±0.2°和20.76°±0.2°的主要衍射峰，或者6.47°±0.2°、9.19°±0.2°、10.47°±0.2°、11.15°±0.2°、11.39°±0.2°、12.04°±0.2°、12.53°±0.2°、13.15°±0.2°、14.76°±0.2°、15.67°±0.2°、16.06°±0.2°、17.49°±0.2°、17.85°±0.2°、18.13°±0.2°、18.48°±0.2°、18.74°±0.2°、19.19°±0.2°、19.92°±0.2°、20.76°±0.2°、21.02°±0.2°、21.91°±0.2°、23.07°±0.2°、23.90°±0.2°和24.88°±0.2°的主要衍射峰就认为获得的是甲磺酸盐晶型C。

实施例11：化合物1盐酸盐晶型A与甲磺酸盐晶型的稳定性对比

化合物1的DVS显示在湿度10～90％，吸湿1.933％～7.0146％，该化合物引湿性强不利于保存，得到盐固体形式之后采用动态水分吸脱附分析(DVS)进行分析，对比盐酸盐晶型A和甲磺酸盐晶型C的吸湿性，结果见表5。

表5：化合物1盐酸盐晶型A和甲磺酸盐晶型C的DVS分析结果

根据上表可知：(1)盐酸盐晶型A整体引湿性小于甲磺酸盐晶型C，(2)盐酸盐晶型A的引湿性在相对湿度低于75％时较小，(3)吸湿后的盐酸盐晶型A仍可以保持晶型状态；盐酸盐晶型A的吸湿性弱于甲磺酸盐晶型C，盐酸盐晶型A吸湿后稳定性优于甲磺酸盐晶型C。

实施例12：化合物盐酸盐晶型A对于热处理和研磨的稳定性

将晶型A在DSC中程序升温至100℃加热或在80℃保持24h，得到的样品XRPD检测结果如图9所示，XRPD图谱显示所得样品主要衍射峰皆没有发生变化。

将一定量的盐酸盐晶型A加入到研钵中并在室温下研磨5分钟，得到的样品XRPD检测结果如图10所示，XRPD图谱显示所得样品主要衍射峰皆没有发生变化。

综上实施例12和13的研究结果，盐酸盐晶型A较化合物1熔点显著升高，且对于升温和研磨均可以保持稳定晶型；盐酸盐晶型A的吸湿性弱于甲磺酸盐晶型C，并且吸湿后甲磺酸盐晶型C变为无定型，而盐酸盐晶型A仍可保持晶型状态，从储存和加工方面考虑，盐酸盐晶型A的固体形式更适于进一步开发。

(二)效果实施例

效果实施例1：化合物1及实施例3制备得到的盐酸盐对17α-乙炔基雌二醇(E2-17α)诱导大鼠胆汁淤积作用

实验方法：E2-17α颈部皮下注射给药，造模7天同时灌胃给予受试化合物，最后一天给药后，大鼠禁食不禁水，次日实验，24h后处理。20％乌拉坦(7ml/kg)腹腔注射麻醉大鼠。麻醉后固定于鼠板上，自上腹部剑突部位向下作腹正中切口，切口3～4cm，分离胆总管，用PE-10聚乙烯导管(内径0.28mm，外径0.61mm)进行胆管插管手术。术中用暖灯、空调将体重维持在37℃～38℃之间防止低温胆汁流速变化。插管完成后，缝合皮肤，防止腹腔水分蒸发，胆管插管的另一端引出，流到固定好的0.2mL收集管中，每15min采集1次连续收集8次。

实验前精密称取并记录胆汁收集管重量记B₁，实验收集完胆汁后称取胆汁与收集管总重记A₂，相减计算出管内胆汁重量，按照1g/mL换算成体积。每组大鼠胆汁分泌量以均数±标准差(Meau土S.D)表示。

胆汁流速计算(μL/kg/min)＝(A₂-B₁)×1000000/体重

收集完胆汁，大鼠下腔静脉采血，血样室温静置2h，离心4000rpm×15min，常规分离血清检测ALT、AST、ALP，剩余血清分装收集并放入-20℃冷冻保存待后检测。

实验结果表明化合物1盐酸盐在促进胆汁排泄效果方面优于化合物1，与E2-17α组相比化合物1和化合物1盐酸盐促进胆汁排泄作用强度显著增加。化合物1及其盐酸盐的胆汁排出量在给药后120分钟后，仍高于模型组(E₂-17α组)。化合物1及其盐酸盐对于胆汁排泄障碍相关疾病具有治疗作用。

效果实施例2：化合物1的盐酸盐对AMLN饮食诱导的ob/ob小鼠NASH药效作用

试验方法：(1)C57小鼠和ob/ob小鼠，适应性饲养1周。①C57小鼠给予LFD饮食(正常小鼠组)，ob/ob小鼠分为两组：②15只给予LFD饮食(空白对照组)、剩余给予AMLN饮食(含40kcal％脂肪，20kcal％果糖和2％胆固醇)，饲养14周。(2)抽样检测病理：C57+LFD饮食组(n＝3)，ob/ob+AMLN饮食组(n＝3)，根据NAFLD活动度积分评价肝脏病变，推测模型构建程度；ob/ob+AMLN饮食组小鼠检测空腹血糖(FBG)；眼眶采血，分离取血清，检测血清中ALT和胰岛素(INS)(3)根据HOMA-IR＝INS(μU/mL)×FBG(mM)/22.5计算胰岛素抵抗程度(HOMA-IR)。

实验结果表明化合物1盐酸盐能显著降低AMLN饮食诱导的Lep^ob/Lep^ob小鼠NASH模型NASH总评分，降低AMLN饮食诱导的Lep^ob/Lep^ob小鼠NASH模型小叶内炎症和肝细胞气球样变，抑制NASH病程进一步发展，且能明显降低NASH小鼠肝纤维化。化合物1盐酸盐还能明显降低小鼠血清中ALT，AST水平，表现出对NASH小鼠肝损伤的修复和保护作用。

以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。