阅读说明：本技术 一种生产硫酸巴龙霉素的方法 () 是由 曹峥 付静 杨亮 吴勇杰 张瑾成 于 2020-08-13 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种生产硫酸巴龙霉素的方法。该生产硫酸巴龙霉素的方法,将链霉菌在摇瓶中的培养,之后接种于种子罐在26-30℃下进行培养,最后种子罐转移至发酵罐中于26-30℃下进行发酵培养,发酵液经过酸化处理,利用离子交换树脂吸附、解析、浓缩、成盐、脱色、喷雾干燥得到成品。通过该方法得到的硫酸巴龙霉素发酵液产量提高60％～90％。本发明具有能够降低了生产成本,提高了产品利润,最终实现硫酸巴龙霉素的安全、高效、稳定生产的效果。()

一种生产硫酸巴龙霉素的方法

技术领域

本发明涉及生物制药技术领域，特别涉及一种生产硫酸巴龙霉素的方法。

背景技术

巴龙霉素(Paromomycin Sulfate，商品名为巴母霉素)是由链霉菌chrestomyceticus发酵产生的一种氨基糖苷类抗生素，可用于治疗细菌性痢疾及其他肠胃细菌感染，是治疗阿米巴痢疾特效药。其分子式 C23H47N5O18S，分子量为713.71，结构式如下：

硫酸巴龙霉素是一种广谱抗菌素，曾用于几种原虫病和细菌性疾病的治疗，最近用以治疗牛肉绦虫、猪肉绦虫、短膜壳绦虫和阔节裂头虫感染者也有效果。

目前，国内通过发酵生产硫酸巴龙霉素的产量较低，需求量大但产能不足的情况下，这对工业化生产极为不利，从而导致药品价格过高，对药品的推广造成困难。

因此，基于目前现有技术的状况，需要研发一种生产硫酸巴龙霉素的方法，能够降低了生产成本，提高了产品利润，最终实现硫酸巴龙霉素的安全、高效、稳定生产素。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供了一种生产硫酸巴龙霉素的方法，步骤如下：

S1，取链霉菌甘油冷冻管，进行接种，种子培养基在26-30℃，200-300 rpm的摇床上培养40-50h；

S2，摇瓶种子接入种子罐中，温度26-30℃，转速400rpm、风量为 1:0.5～1:1.5vvm，培养40-50h；

S3，种子罐接入发酵罐中，发酵罐内设有发酵培养基，温度26-30℃，转速180rpm，风量为1:0.5～1:1.5vvm，进行培养；当发酵在20-40h时，流加铵盐溶液，发酵液培养5-8天后进行放罐；

S4，取步骤S3中链霉菌发酵液，向发酵液中添加酸，调节发酵液pH 值为5.5-6.5；

S5，将步骤S4中所得酸化液以0.3-3mL/min的流速进行上柱，上柱至阳离子交换树脂，进行吸附；吸附完成后，使用水以1-5mL/min的流速进行洗涤；

S6，将步骤S5中所得离子柱，使用氨水进行解析，当解析液旋光大于 0时候，开始收集，直至旋光为0停止收集；

S7，将步骤S6所得解析液进行浓缩；

S8，向步骤S7所得浓缩液中加入硫酸，直至pH为5.0-6.0，搅拌30-90 min；

S9，将步骤S8中所得盐溶液进行真空干燥；

在一些实施方式中，其S1种子培养基为：糊精1.0-30g/L，干酪素2-6 g/L，花生饼粉10-30g/L，碳酸钙1-5g/L，七水硫酸镁0.1-0.5g/L，pH 6.0-7.0。

在一些实施方式中，其步骤S3中所述发酵培养基为可溶性淀粉50-60 g/L，干酪素10-20g/L，酵母浸粉5-15g/L，碳酸钙1-5g/L，七水硫酸镁1-2 g/L，磷酸氢二钾1-3g/L，淀粉酶0.05-0.06g/L，pH 6.0-7.0。

在一些实施方式中，其步骤S3中所述铵盐溶液为硫酸铵或氯化铵，铵盐溶液的浓度为5％-10％，铵盐溶液的补料流速为10-20ml/min。

在一些实施方式中，其步骤S4所述酸为草酸或盐酸，浓度为2-5mol/L。

在一些实施方式中，步骤S5所述阳离子交换树脂为001×7、001×4 或D001型阳离子交换树脂。

在一些实施方式中，其步骤S5中所述水为去离子水或纯化水。

在一些实施方式中，其步骤S6中所氨水浓度为1-5mol/L，解析流速为 1-4mL/min。

在一些实施方式中，其步骤S8中所加硫酸的浓度为3-6mol/L。

在一些实施方式中，其步骤S9中所述真空干燥箱的温度为50-80℃，真空度为-0.075～-0.01MPa，干燥时间为12-36h。

本发明的生产硫酸巴龙霉素的方法，其有益效果是，链霉菌在摇瓶中的培养，之后接种于种子罐在26-30℃下进行培养，最后种子罐转移至发酵罐中于26-30℃下进行发酵培养，发酵液经过酸化处理，利用离子交换树脂吸附、解析、浓缩、成盐、脱色、喷雾干燥得到成品。通过该方法得到的硫酸巴龙霉素发酵液产量提高60％～90％。该方法能够降低了生产成本，提高了产品利润，最终实现硫酸巴龙霉素的安全、高效、稳定生产。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1一种生产硫酸巴龙霉素的方法

步骤如下：

S1，取链霉菌甘油冷冻管，进行接种，种子培养基在26℃，200rpm 的摇床上培养50h；

S2，摇瓶种子接入种子罐中，温度26℃，转速400rpm、风量为 1:0.5vvm，培养50h；

S3，种子罐接入发酵罐中，温度26℃，转速180rpm，风量为1:0.5vvm，进行培养。当发酵在40h时，以20mL/min的流速进行流加5％的硫酸铵溶液，发酵液培养8天后进行放罐；

S4，取步骤S3中链霉菌发酵液，向发酵液中添加2mol/L草酸溶液，调节发酵液pH值为6.5；

S5，将步骤S4中所得酸化液以0.3mL/min的流速进行上柱，上柱至 001×7型阳离子交换树脂，进行吸附。吸附完成后，使用去离子水以1 mL/min的流速进行洗涤；

S6，将步骤S5中所得离子柱，使用1mol/L氨水以1mL/min的速度进行解析，当解析液旋光大于0时候，开始收集，直至旋光为0停止收集；

S7，将步骤S6所得解析液进行浓缩；

S8，向步骤S7所得浓缩液中加入3mol/L硫酸，直至pH为6.0，搅拌 90min；

S9，将步骤S8中所得盐溶液在温度为50℃，真空度为-0.075MPa进行真空干燥36h后获得成品。

上述种子培养基为：糊精1.0g/L，干酪素2g/L，花生饼粉10g/L，碳酸钙1g/L，七水硫酸镁0.1g/L，pH 6.0。

发酵培养基为可溶性淀粉50g/L，干酪素10g/L，酵母浸粉5g/L，碳酸钙1g/L，七水硫酸镁1g/L，磷酸氢二钾1g/L，淀粉酶0.05g/L，pH 6.0。

实施例2一种生产硫酸巴龙霉素的方法

步骤如下：

S1取链霉菌甘油冷冻管，进行接种，种子培养基在30℃，300rpm的摇床上培养40h；

S2摇瓶种子接入种子罐中，温度30℃，转速400rpm、风量为1:1.5vvm，培养40h；

S3，种子罐接入发酵罐中，温度30℃，转速180rpm，风量1:1.5vvm，进行培养。当发酵在20h时，以10mL/min的流速进行流加10％的硫酸铵溶液，发酵液培养5天后进行放罐；

S4，取步骤S3中链霉菌发酵液，向发酵液中添加5mol/L草酸溶液，调节发酵液pH值5.5；

S5，将步骤S4中所得酸化液以3mL/min的流速进行上柱，上柱至001 ×4型阳离子交换树脂，进行吸附。吸附完成后，使用纯化水以5mL/min 的流速进行洗涤；

S6，将步骤S5中所得离子柱，使用5mol/L氨水以4mL/min的速度进行解析，当解析液旋光大于0时候，开始收集，直至旋光为0停止收集；

S7，将步骤S6所得解析液进行浓缩；

S8，向步骤S7所得浓缩液中加入6mol/L硫酸，直至pH为5.0，搅拌 30min；

S9，将步骤S8中所得盐溶液进行真空干燥，在温度为80℃，真空度为-0.01MPa进行真空干燥12h后获得成品。

上述种子培养基为：糊精30g/L，干酪素6g/L，花生饼粉30g/L，碳酸钙5g/L，七水硫酸镁0.5g/L，pH 7.0。

发酵培养基为可溶性淀粉60g/L，干酪素20g/L，酵母浸粉15g/L，碳酸钙5g/L，七水硫酸镁2g/L，磷酸氢二钾3g/L，淀粉酶0.06g/L，pH 7.0。

实施例3一种生产硫酸巴龙霉素的方法

步骤如下：

S1，取链霉菌甘油冷冻管，进行接种，种子培养基在28℃，250rpm 的摇床上培养48h；

S2，摇瓶种子接入种子罐中，温度28℃，转速400rpm、风量为1:1vvm，培养48h；

S3，种子罐接入发酵罐中，温度28℃，转速180rpm，风量为1:1vvm，进行培养。当发酵在30h时，以14mL/min的流速进行流加8％的硫酸铵溶液，发酵液培养7天后进行放罐；

S4，取步骤S3中链霉菌发酵液，向发酵液中添加3mol/L草酸溶液，调节发酵液pH值为6.0；

S5，将步骤S4中所得酸化液以2mL/min的流速进行上柱，上柱至D001 型阳离子交换树脂，进行吸附。吸附完成后，使用纯化水以3mL/min的流速进行洗涤；

S6，将步骤S5中所得离子柱，使用3mol/L氨水以3mL/min的速度进行解析，当解析液旋光大于0时候，开始收集，直至旋光为0停止收集；

S7，将步骤S6所得解析液进行浓缩；

S8，向步骤S7所得浓缩液中加入5mol/L硫酸，直至pH为5.5，搅拌 60min；

S9，将步骤S8中所得盐溶液进行真空干燥，在温度为70℃，真空度为-0.045MPa进行真空干燥30h后获得成品。

上述种子培养基为：糊精1.0-30g/L，干酪素2-6g/L，花生饼粉10-30 g/L，碳酸钙1-5g/L，七水硫酸镁0.1-0.5g/L，pH 6.0-7.0。

发酵培养基为可溶性淀粉50-60g/L，干酪素10-20g/L，酵母浸粉5-15 g/L，碳酸钙1-5g/L，七水硫酸镁1-2g/L，磷酸氢二钾1-3g/L，淀粉酶 0.05-0.06g/L，pH 6.0-7.0。

以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。