发明内容

技术问题

本发明提供脂肪肝疾病的预防或改善功效优良的新型嗜柠檬酸明串珠菌属乳酸菌。

技术方案

因此，本发明人致力于从传统发酵食品中寻找具有对预防或改善脂肪肝疾病的效果的乳酸菌菌株，其结果，分离、鉴别出作为新型魏斯氏菌属乳酸菌菌株的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104(Leuconostoc citreum WiKim0104)，从而完成本发明。

本发明的一实例提供一种用于预防或改善炎症、肥胖或脂肪肝疾病的组合物，包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物作为有效成分。

上述脂肪肝疾病可以为选自由单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化组成的组中的一种以上。

上述组合物可以为食品组合物、食品发酵用乳酸菌发酵剂组合物、饲料或饲料添加剂组合物或者药学组合物。

上述食品组合物可以包括保健功能食品、饮料、棒状食品或发酵乳。

本发明的再一实例提供嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物的用途，用于预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病。

上述脂肪肝疾病可以包括选自由单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化组成的组中的一种以上。

本发明可以用做食品组合物、食品发酵用乳酸菌发酵剂组合物、饲料或饲料添加剂组合物或者药学组合物。

本发明的一实例提供一种预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的方法，包括向有需要的个体给药包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物的组合物的步骤。上述个体可以为包括人类在内的动物。

本发明提供一种预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的方法，上述脂肪肝疾病包括选自由单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化组成的组中的一种。

本发明提供一种嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104。

本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104为源自泡菜的嗜柠檬酸明串珠菌新型菌株。虽然本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104是从泡菜中分离、鉴定的，但其获取途径不限于此。

对通过本发明的实施例分离的乳酸菌菌株进行用于鉴定及分类微生物的16S核糖体DNA(16S rDNA)碱基序列分析的结果显示，具有SEQ ID NO:1的核酸序列。

因此，将具有SEQ ID NO:1的16S核糖体DNA碱基序列的本发明的微生物命名为嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104，于2018年12月14日保藏于韩国微生物保藏中心(保藏编号：KCCM12420P)。

本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104为革兰氏阳性菌，为在好氧条件和厌氧条件中均可生长的兼性厌氧菌(facultative anaerobe)，不形成孢子，无运动性，细胞呈杆菌的形态。

在下述实施例中，确认本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104在肝细胞(HepG2cells)中抑制脂肪酸合成酶(FAS，fatty acid synthase)、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)(脂肪生成相关基因(lipogenic-related gene))、环氧化酶-2(COX-2，cyclooxygenase-2)、及核因子-κ(NF-κ)(炎症相关基因(inflammatory related gene))的表达。通过上述内容确认嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104菌株可以通过抑制约30％至35％的HepG2细胞的脂肪肝生成来预防或改善脂肪肝。因此，本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104能够以多种方式用于预防、治疗或改善人类或动物的脂肪肝疾病。

并且，可通过下述实施例确认，包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104作为有效成分的组合物抑制肝细胞(HepG2 cells)内脂肪的积聚及炎症，具有减少体重的功效并改善血液中的肝功能数值，减少肝组织内脂肪代谢、炎症及肝纤维化相关因子基因的表达。因此，上述组合物可以用做用于预防、治疗或改善炎症、肥胖或选自由单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化组成的组中的一种以上的脂肪肝疾病的组合物的有效成分。

本发明提供一种用于预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的组合物，包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物作为有效成分。

本发明的组合物所包含的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104能够以活菌体或死菌体的形态存在，并且，还能够以干燥或冷冻干燥的形态存在。适合包含于多种组合物的乳酸菌形态及制剂化方法在本发明所属技术领域内是广为人知的。例如，嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104可以制剂化为在公知的液体培养基或固体培养基中培养后获得的培养物，或为将上述菌株与追加成分共同培养而获得的发酵物，或使用有机溶剂提取上述菌株的提取物，或通过溶解上述菌株的细胞膜或经破碎或均质化处理的溶解物(或破碎物)等形态，但不限定于此。

在一具体例中，上述组合物可以为包含以活菌或死菌形态存在的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104菌株的组合物。

在本发明中，上述脂肪肝疾病可以包括单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化。

并且，上述脂肪肝疾病可以包括所有酒精性脂肪肝和非酒精性脂肪肝，例如，可以为由高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝。上述非酒精性脂肪肝疾病(non-alcoholic fattyliver disease，NAFLD)可以包括所有原发性和继发性非酒精性脂肪肝，例如，可以为原发性高血脂症、糖尿病或因肥胖导致的非酒精性脂肪肝。

在一具体例中，上述组合物可以为包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104菌株的培养物、破碎物、发酵物或提取物的用于预防或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的药学组合物。

在将本发明的组合物用作药剂学组合物的情况下，除上述嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104菌株以外，本发明的药剂学组合物可以使用药剂学上适合且在生理学上可接受的辅助剂来制备，上述辅助剂可以使用赋形剂、崩解剂、甜味剂、结合剂、包衣剂、膨胀剂、润滑剂、滑泽剂或香味剂等。

为了给药，除上述记载的有效成分外，上述药剂学组合物还可以包含一种以上的药剂学上可接受的载体来优选地制剂化为药剂学组合物。

例如，为了制剂化为片剂或胶囊剂的形态，有效成分可以与乙醇、甘油、水等口服、无毒且药剂学上可接受的非活性载体结合。并且，在希望或必要的情况下，可以包含适当的结合剂、润滑剂、崩解剂及发色剂或它们的混合物。适当的结合剂包括淀粉、明胶、葡萄糖或β-乳糖等的天然糖、玉米甜味剂、阿拉伯胶、黄芪胶或油酸钠等的天然或合成胶、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠等，但不限定于此。崩解剂包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等，但不限定于此。在可制剂化为液相溶液的组合物中，药剂学上可接受的载体可以使用灭菌及适于活体的生理盐水、灭菌水、林格氏液、缓冲生理盐水、白蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇及混合上述成分中的一种以上来使用，可以根据需要添加抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂等其他常规添加剂。并且，还可添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、结合剂及润滑剂来制剂化为水溶液、悬浮液、乳浊液等的注射用剂型、丸药、胶囊、颗粒或片剂。

进而，可以将在Remington's Pharmaceutical Science，Mack PublishingCompany，Easton PA公开的方法用作相关领域的适当方法，根据各种疾病或根据成分来优选地进行制剂化。

在一具体例中，本发明提供一种包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物、其发酵物或其提取物作为有效成分的用于预防或改善炎症、肥胖或脂肪肝疾病的食品组合物。上述食品组合物可以包括保健功能食品、饮料或棒状食物等形态。

在本发明中，包含上述菌株作为有效成分的食品组合物可以包括发酵乳等饮料。因此，本发明提供包含由嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104或其培养物组成的用于发酵的乳酸菌发酵剂。

本发明的食品组合物能够以与上述药剂学组合物相同的方式制剂化来用作功能性食品，或可添加于各种食品。能够添加本发明的组合物的食品有例如饮料类、维生素复合物、健康辅助食品等。

本发明的食品组合物可以包含制备食品时通常添加的成分，例如，包含蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂及香味剂。上述碳水化合物的例有常规糖以及糖醇，上述常规糖为例如葡萄糖、果糖等的单糖、例如麦芽糖、蔗糖、寡糖等的二糖以及例如糊精、环糊精等的多糖，上述糖醇为木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等。香味剂可以使用天然香味剂(索马甜、甜叶菊提取物(例如莱鲍迪苷A、甘草皂苷等))及和合成香味剂(糖精、阿巴斯甜等)。例如，在将本发明的食品组合物制备为饮剂或饮料类的情况下，还可以包含柠檬酸、液相果糖、白糖、葡萄糖、草酸、苹果酸、果汁及各种植物提取液等。

上述本发明的组合物可以用作饲料添加剂或饲料。

在用作饲料添加剂的情况下，上述组合物可以制备为20％至90％的高浓缩液，或制备为粉末或颗粒形态。上述饲料添加剂还可以包含柠檬酸、富马酸、己二酸、乳酸、苹果酸等有机酸，或磷酸钠、磷酸钾、酸性焦磷酸盐、多磷酸盐(综合磷酸盐)等磷酸盐，或多酚、儿茶素、α-生育酚、迷迭香提取物、维生素C、绿茶提取物、甘草提取物、壳聚糖、鞣酸、植酸等天然抗氧化剂中的一种或一种以上。在用作饲料的情况下，上述组合物可以制剂化为常规饲料形态，可以同时包含常规饲料成分。

上述饲料添加剂及饲料还可以包含：谷物，例如粉碎或破碎的小麦、燕麦、大麦、玉米及大米；植物性蛋白质饲料，例如以油菜、大豆及向日葵为主要成分的饲料；动物性蛋白质饲料，例如血粉、肉粉、骨粉及鱼粉；糖分及乳制品，例如由各种奶粉及乳浆粉末组成的干燥成分等，此外，还可以包含营养补充剂、消化及吸收促进剂、生长促进剂等。

上述饲料添加剂可以向动物单独给药，也可以与可食用载体中的其他饲料添加剂组合来给药。并且，上述饲料添加剂可以作为追肥，或通过将它们直接与动物饲料混合，或以与饲料分开的单独的口服剂型来轻松地向动物给药。在将上述饲料添加剂与动物饲料分开给药的情况下，可以与本发明所属技术领域公知的药剂学上可接受的食用载体组合来制备为立即释放或缓释的剂型。上述可食用载体可以为固体或液体，例如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、大豆片、花生油、橄榄油、芝麻油及丙二醇。在使用固体载体的情况下，饲料添加剂可以为片剂、胶囊剂、散剂、锭剂或含糖片剂或微分散形态的追肥。在使用液体载体的情况下，饲料添加剂可以为明胶软胶囊、糖浆剂或悬浮液、乳液或溶液剂的剂型。

并且，上述饲料添加剂及饲料可以包含辅助剂，例如保存剂、稳定剂、湿润剂或乳化剂、增溶剂等。上述饲料添加剂可以通过浸渍、喷雾或混合的方式添加到动物饲料中来使用。

本发明的饲料或饲料添加剂可以应用于包括哺乳动物、家禽及鱼类在内的多种动物的饮食中。

在本发明中，动物包括哺乳动物，作为哺乳动物，不仅可以用于猪、牛、羊、山羊、实验用啮齿动物，还可以用于除实验用啮齿动物之外的宠物(例如狗、猫)等，作为上述家禽，可以用于鸡、火鸡、鸭、鹅、雉鸡及鹌鹑等，作为上述鱼类，可以用于鳟鱼等，但不限于此。

基于单次剂量，本发明的组合物可以包含约10⁶cfu/ml至10¹²cfu/ml的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104菌株，例如，可以包含10⁷cfu/ml至10¹¹cfu/ml、10⁸cfu/ml至10¹⁰cfu/ml。在给药菌株的情况下，优选地，以活菌状态给药，可以在摄取之前杀灭或以衰减(attenuation)状态给药。并且，在使用培养上清液等来制备的情况下，还可以进一步进行通过热处理过程的灭菌化过程。具备最低功效所需的菌株量及每日摄取的程度可以根据摄取者的身体或健康状态而改变，但通常可以约为10⁶cfu/ml至10¹²cfu/ml，例如，可以为10⁷cfu/ml至10¹¹cfu/ml、10⁸cfu/ml至10¹⁰cfu/ml。

本发明另一实例可以提供嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104预防、治疗或改善人类或动物的炎症、肥胖或脂肪肝疾病的用途。

本发明另一实例提供嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的用途。

本发明还有一实例提供用于预防、改善或治疗肥胖或脂肪肝疾病的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物。

本发明的一实例提供一种预防、改善或治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病的方法，包括向有需要的个体给药包含嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104、其培养物、其破碎物或其提取物的组合物的步骤。上述个体为包括人类在内的动物，上述动物只要是摄取饲料的上述提及的动物，就都可以包括在本发明的范围内。上述脂肪肝疾病可以包括选自由单纯性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化组成的组中的一种以上。

参照详细后述的实施例，可以明确理解本发明的优点、特征以及实现这些优点及特征的方法。但是，本发明不限于以下公开的实施例，而是能够以多种不同的实施方式实现，这些实施例仅为了使本发明的公开得以完整且向本发明所属技术领域的普通技术人员充分地告知本发明的范畴而提供，本发明仅由发明要求保护范围定义。

发明的效果

本发明的嗜柠檬酸明串珠菌WiKim0104为从泡菜中分离的乳酸菌，表现出通过抑制细胞内脂肪积聚及减少脂肪肝相关基因的表达来抑制脂肪肝生成的效果，可通过多种方式用于预防、改善及治疗炎症、肥胖或脂肪肝疾病。进而，可以有效地用作用于发酵的发酵剂。