防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂
阅读说明：本技术 防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂 (Botanical biocontrol bacterium preparation for preventing and treating rubber anthrax ) 是由 刘文波 秦春秀 缪卫国 陈代朋 于 2021-08-02 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂,其由EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物组成,两面针水提物的含量为0.1-0.3wt％,柑橘皮乙醇提取物的含量为0.1-0.3wt％,EM菌总活菌数≥5×10～(7)cfu/ml。本发明的植物源生防菌制剂的有效成分由EM菌及其发酵代谢产物、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物组成,属于不同作用机理的活性成分,协同作用下对橡胶炭疽菌抑制效果更好,能够有效防治橡胶炭疽病,且各组分均属于绿色的、环境友好的、无毒害的、兼有药效和肥效双重生物调节功能的活性成分。(The invention provides a botanical biocontrol bacterium preparation for preventing and treating rubber anthrax, which consists of EM (effective microorganisms) fermentation liquor, radix zanthoxyli aqueous extract and citrus peel ethanol extract, wherein the content of the radix zanthoxyli aqueous extract is 0.1-0.3 wt%, the content of the citrus peel ethanol extract is 0.1-0.3 wt%, and the total viable count of EM is more than or equal to 5 multiplied by 10 7 cfu/ml. The active ingredients of the botanical biocontrol bacteria preparation disclosed by the invention consist of EM (effective microorganisms) and fermentation metabolites thereof, Zanthoxylum nitidum aqueous extracts and citrus peel ethanol extracts, belong to active ingredients with different action mechanisms, have a better inhibition effect on rubber anthracnose under the synergistic effect, can effectively prevent and treat the rubber anthracnose, and belong to green, environment-friendly and non-toxic active ingredients with double biological regulation functions of pesticide effect and fertilizer effect.)
技术领域
本发明涉及一种植物源生防菌制剂，尤其涉及防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂。
背景技术
炭疽菌能够侵染多种植物引起炭疽病，该类病害分布广泛，危害严重，是植物病理学家重点研究的对象之一，橡胶树炭疽病是其中危害最为严重的一种。橡胶树炭疽病是由胶孢炭疽菌侵染引起的，在海南、云南地区引起了无数橡胶树叶片脱落，甚至整株死亡，给当地的橡胶产业发展造成了严重损失。
炭疽菌主要以菌丝体形式在病枝中越冬，在适合的条件下产生分生孢子作为初侵染源。橡胶树幼苗、幼龄树直至成龄开割胶树均可被炭疽菌侵染而发病。病菌能够侵染嫩叶、叶柄、嫩梢和果实等部位，引起嫩叶脱落、嫩梢回枯和果实腐烂，甚至形成僵果悬挂在树上，严重时会引起橡胶树的重复落叶和嫩梢回枯，推迟开割时间。该病害被认为是造成天然橡胶树减产的主要原因之一。目前对于橡胶炭疽病的防治仍以化学杀菌剂为主，然而，化学农药造成的病菌抗药性、毒性和环境污染问题日益突出，成为制约农业可持续发展的主要障碍，生防微生物具有环境兼容性好、无毒无害的优点，是化学农药的理想替代品。因此，用生防微生物防治橡胶树炭疽病对实现农业的可持续发展具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂。
本发明的第一个方面是提供一种防治橡胶炭疽菌的植物源生防菌制剂，其由EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物组成，两面针水提物的含量为0.1-0.3wt％，柑橘皮乙醇提取物的含量为0.1-0.3wt％，EM菌总活菌数≥5×107cfu/ml。
优选地，所述EM菌发酵液由粉碎的玉米芯、豆渣、中药渣加水混合制成发酵基质后接种EM菌发酵9～12d后，过滤得到。
进一步优选地，所述中药渣由黄柏药渣、白芷药渣、芦根药渣组成。
更进一步优选地，所述发酵基质含水量为60～70％，按照重量份数计包括：粉碎的玉米芯40-50份、豆渣40-50份、黄柏药渣5-10份、白芷药渣5-10份、芦根药渣5-10份和适量水。
本发明的第二个方面是提供一种如本发明第一个方面所述的植物源生防菌制剂的制备方法，包括以下步骤：(1)取两面针按照水提法制得两面针水提物；(2)取柑橘皮按照醇提法制得柑橘皮乙醇提取物；(3)将粉碎的玉米芯、豆渣、中药渣加水混合制成发酵基质后接种EM菌发酵9～12d后，过滤得到EM菌发酵液；(4)将EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物混合均匀既得。
本发明的第三个方面是提供本发明第一个方面所述的植物源生防菌制剂在防治橡胶炭疽菌中的应用。
本发明的第四个方面是提供本发明第一个方面所述的植物源生防菌制剂在防治橡胶炭疽病中的应用。
本发明的植物源生防菌制剂的有效成分由EM菌及其发酵代谢产物、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物组成，属于不同作用机理的活性成分，协同作用下对橡胶炭疽菌抑制效果更好，能够有效防治橡胶炭疽病，且各组分均属于绿色的、环境友好的、无毒害的、兼有药效和肥效双重生物调节功能的活性成分。
具体实施方式
下面结合具体的实施例对本发明作进一步的说明，以更好地理解本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1
取两面针按照水提法制得两面针水提物；取柑橘皮按照醇提法制得柑橘皮乙醇提取物。
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯40份、豆渣50份、黄柏药渣10份、白芷药渣10份、芦根药渣10份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵12d后，过滤得到EM菌发酵液。
将EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物混合均匀，使得两面针水提物的含量为0.1wt％，柑橘皮乙醇提取物的含量为0.3wt％，EM菌总活菌数5×107cfu/ml，既得。
对照例1(与实施例1对应)
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯40份、豆渣50份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵12d后，过滤得到EM菌发酵液，EM菌总活菌数5×107cfu/ml。
实施例2
取两面针按照水提法制得两面针水提物；取柑橘皮按照醇提法制得柑橘皮乙醇提取物。
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯50份、豆渣40份、黄柏药渣5份、白芷药渣10份、芦根药渣5份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵10d后，过滤得到EM菌发酵液。
将EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物混合均匀，使得两面针水提物的含量为0.3wt％，柑橘皮乙醇提取物的含量为0.1wt％，EM菌总活菌数8×107cfu/ml，既得。
对照例2(与实施例2对应)
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯50份、豆渣40份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵10d后，过滤得到EM菌发酵液。
实施例3
取两面针按照水提法制得两面针水提物；取柑橘皮按照醇提法制得柑橘皮乙醇提取物。
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯40份、豆渣50份、黄柏药渣10份、白芷药渣5份、芦根药渣5份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵9d后，过滤得到EM菌发酵液。
将EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物混合均匀，使得两面针水提物的含量为0.12wt％，柑橘皮乙醇提取物的含量为0.2wt％，EM菌总活菌数6×107cfu/ml，既得。
对照例3(与实施例3对应)
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯40份、豆渣50份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵9d后，过滤得到EM菌发酵液。
实施例4
取两面针按照水提法制得两面针水提物；取柑橘皮按照醇提法制得柑橘皮乙醇提取物。
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯50份、豆渣40份、黄柏药渣8份、白芷药渣7份、芦根药渣9份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵11d后，过滤得到EM菌发酵液。
将EM菌发酵液、两面针水提物和柑橘皮乙醇提取物混合均匀，使得两面针水提物的含量为0.2wt％，柑橘皮乙醇提取物的含量为0.25wt％，EM菌总活菌数9×107cfu/ml，既得。
对照例4(与实施例4对应)
按照重量份数计，取粉碎的玉米芯50份、豆渣40份和适量水制成发酵基质，控制发酵基质含水量为60～70％区间，然后接种EM菌发酵11d后，过滤得到EM菌发酵液。
实施例5：抑菌实验
PDA培养基的配制：称取去皮马铃薯200g，切块煮沸30min，然后用纱布过滤取汁，再加20.0g葡萄糖及20.0g琼脂，溶化后补足水到1000mL，分装到10个150mL的三角瓶，121℃灭菌30min，即可。
在无菌条件下，取20mL经灭菌后冷却至45℃左右的PDA培养基加入培养皿，制成PDA平板。放置24h后，在平板中央接种病原菌橡胶炭疽菌菌丝，37℃培养24h。在已长好的橡胶炭疽菌平皿中，用直径1cm打孔器在菌落边缘切取菌落圆块，备用。
分别取实施例1-4的植物源生防菌制剂，用无菌水稀释发酵液至总活菌数为5×105cfu/ml的稀释液，向PDA平板中加入100μL的植物源生防菌制剂稀释液，用涂布器涂匀，每个处理5个重复。将切取的橡胶炭疽菌菌块接种在涂好的平板中央，有菌丝的一面接触平板。37℃培养24h，用直尺“十字交叉法”测量橡胶炭疽菌菌落直径(单位为cm)，结果取其平均值。另取与各个实施例对应的对照例的混合发酵液，4000r/min离心30min，上清液经过0.22μL膜过滤，滤除菌体，得无菌发酵上清液，作为对照。按如下公式计算抑菌率：
抑菌率＝(D对照-D处理)/D对照×100％。结果见表1。
表1
抑菌率
实施例1
99.12％
实施例2
99.01％
实施例3
98.39％
实施例4
98.76％
由上表可知，本发明对于橡胶橡胶炭疽菌具有良好的抑制作用。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
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