本发明涉及一种二肽及其制备方法和应用、金属-β-内酰胺酶抑制剂和药物组合物。该二肽的氨基上连接有保护基团,该二肽由第一氨基酸的羧基与第二氨基酸的氨基经缩合反应合成,第一氨基酸选自丙氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和天冬氨酸中的一种,第二氨基酸为半胱氨酸。上述二肽对金属-β-内酰胺酶的活性有良好的抑制作用,可作为MBLIs的活性成分。