阅读说明：本技术 1-（（5-叔丁基-2-羟基苯胺）亚甲基）-2-萘酮及其制备方法和应用 (1- ((5-tert-butyl-2-hydroxyaniline) methylene) -2-naphthalenone and preparation method and application thereof ) 是由 邢爱萍 曾岱 苑娟 褚意新 韩红艳 王新灵 张淑玲 于 2020-07-24 设计创作，主要内容包括：本发明公开了1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮及其制备方法和应用,该化合物以2-羟基-1-萘甲醛和2-氨基-4-叔丁基酚为原料,以无水乙醇或甲醇为溶剂,制备而成。本发明制备的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮,对DPPH自由基具有较强的抑制作用,远远高于维生素E对DPPH自由基的抑制作用。这表明,本发明的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮具有良好的抗氧化作用,可有效用于制备抗衰老药物,是延缓衰老药物上的创新。本发明的合成工艺简单、操作方便,原料易得且生产成本低,易于工业化生产,具有很好的社会和经济效益。(The invention discloses 1- ((5-tert-butyl-2-hydroxyaniline) methylene) -2-naphthalenone and a preparation method and application thereof, and the compound is prepared by taking 2-hydroxy-1-naphthaldehyde and 2-amino-4-tert-butylphenol as raw materials and absolute ethyl alcohol or methyl alcohol as a solvent. The 1- ((5-tert-butyl-2-hydroxyaniline) methylene) -2-naphthalenone prepared by the invention has stronger inhibition effect on DPPH free radicals, which is far higher than the inhibition effect of vitamin E on DPPH free radicals. The result shows that the 1- ((5-tert-butyl-2-hydroxyaniline) methylene) -2-naphthalenone has good antioxidation, can be effectively used for preparing the anti-aging drug, and is an innovation in the anti-aging drug. The invention has the advantages of simple synthesis process, convenient operation, easily obtained raw materials, low production cost, easy industrial production and good social and economic benefits.)

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮及其制备方法和 应用

技术领域

本发明涉及1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮及其制备方法和应用，属于医药领域。

背景技术

自由基是指含有未成对电子、性质活跃的化学原子、分子或基团，与生物有关的自由基，主要包括以N、S、O、C、H、过渡金属为中心的自由基。在正常情况下，机体有丰富的抗氧化酶(如：SOD、GSH-P)可以很好的清除机体内多余的自由基使机体保持健康，如果在病理状态下打破该平衡，自由基就会攻击其他组织、细胞获得配对电子，可引发动老年痴呆症、心血管疾病、冠心病和肿瘤等疾病。自由基的反应是一个链式反应，当两个自由基结合成电子对时反应停止，延缓机体内部衰老和预防某些疾病。目前存在的抗氧化剂虽然具有很好的抗氧化效果，但同样也存在着一些缺陷，有些还具有毒副作用，因此通过化学反应合成高效、低毒的具有抗氧化活性的化合物具有重大意义。

目前对自由基清除的研究方法主要有两类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中DPPH法是体外模型中最常用的方法。DPPH自由基能够发生共振稳定作用，N原子上的成单电子与苯环形成p-π共轭，因此DPPH自由基具有较好的稳定性。具有单电子的DPPH自由基在517nm处有强吸收，其乙醇溶液呈现出较深的紫色。当向溶液中加入抗氧化剂时，自由基与抗氧化剂发生了单电子配对作用，导致DPPH自由基被还原成黄色的DPPH-H分子，使溶液的颜色褪去，其褪色程度与所接受的电子数量成定量关系，因而可以通过吸光度的变化进行定量分析。当DPPH自由基与抗氧化剂反应后，517nm波长处的吸收值降低，其降低的程度与接收的电子(抗氧化剂清除自由基活性)呈定量关系，可以用分光光度计测定。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的是提供一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮及其制备方法和应用，该化合物制备方法简单，具有良好的抗氧化作用。

为了实现上述目的，本发明的技术方案之一是：

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，结构式如下：

本发明的技术方案之一是：一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的制备方法，以2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛为反应原料，无水乙醇或甲醇作为反应溶剂，回流反应制得1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。具体步骤为：

(1)将2-氨基-4-叔丁基酚、2-羟基-1-萘甲醛和无水乙醇或甲醇混合，回流反应；

(2)反应液抽滤得固体，洗涤后烘干，重结晶，得到砖红色固体粉末，即为1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。

2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛的摩尔比为1.0～1.2：1.0～1.2。

优选的，2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛的摩尔比为1：1。

(2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛)：(无水乙醇或甲醇)的质量比为1:40～150。

回流反应的温度为75～85℃，时间为7-10h。

洗涤和重结晶所用试剂均为无水乙醇。

上述制备方法，还包括将砖红色固体粉末进行纯化，即将砖红色固体粉末完全溶解于甲醇中，并搅拌1～2h，过滤，滤液自然挥发，直至析出棒状晶体，即为纯化的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。

本发明的技术方案之一是：一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮在制备抑制DPPH自由基药物方面的应用。

本发明的技术方案之一是：一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮在制备抗氧化剂方面的应用。

本发明的有益效果：

1、本发明以2-羟基-1-萘甲醛和2-氨基-4-叔丁基酚为原料，以无水乙醇或甲醇为溶剂，制备1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，有效解决了醛胺缩合问题。

2、本发明制备的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮为一种新型化合物，该化合物除了具有萘环结构，还具有酚类结构，具有广泛的生物活性。

3、本发明制备的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，对DPPH自由基具有较强的抑制作用，远远高于维生素E对DPPH自由基的抑制作用。这表明，本发明的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮具有良好的抗氧化作用，可有效用于制备抗衰老药物，是延缓衰老药物上的创新。

4、本发明的合成工艺简单、操作方便，原料易得且生产成本低，易于工业化生产，具有很好的社会和经济效益。

附图说明

图1为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的¹H NMR结果图。

图2为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的¹³C NMR结果图。

图3为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的红外结果图。

图4为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的结构单元图。

图5为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的堆积图。

图6为本发明化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮通过DPPH法测定抗氧化活性与常用抗氧化剂维生素E对比图。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

实施例1

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，结构式如下：

一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)向反应瓶中加入摩尔比为1:1的2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛；

(2)向步骤(1)的反应瓶中加入无水乙醇，(2-氨基-4-叔丁基酚+2-羟基-1-萘甲醛)：无水乙醇的质量比1:100，于80℃回流反应8h；

(3)将步骤(2)的反应液抽滤得固体，用无水乙醇充分洗涤后烘干，再于无水乙醇中重结晶，得到砖红色固体粉末，即为1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮粗品；

(4)将0.5mmol砖红色固体粉末完全溶解于20ml甲醇中，并搅拌1h，过滤，滤液自然挥发，直至析出棒状晶体，即为纯化的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。

所制备的化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的¹H NMR结果如图1所示：¹H NMR(500MHz,DMSO)δ15.86(d,J＝9.5Hz,1H),10.10(s,1H),9.51(d,J＝9.6Hz,1H),8.40(d,J＝8.3Hz,1H),7.80(dd,J＝9.5,5.5Hz,2H),7.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.50(t,J＝7.4Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),7.11(dd,J＝8.4,1.8Hz,1H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝9.3Hz,1H),1.34(s,9H)。

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮¹³C NMR结果如图2所示：¹³C NMR(126MHz,DMSO)δ177.78,150.07,146.73,143.05,138.14,134.35,129.42,128.45,126.27,125.55,123.92,123.40,120.31,115.85,115.09,108.10,99.99,34.71,31.88。

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的红外结果如图3所示：红外光谱(cm^-1，KBr)：3437(br)，2949(w)，1624(s)，1542(m)，1513(w)，1489(m)，1335(w)，1300(m)，1198(w)，1158(w)，1077(w)，836(w)，746(w)，727(w)，630(w)，567(w)。

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的X射线单晶衍射的实验条件和结果如下：

选取大小为0.19×0.15×0.10mm³的单晶，用Xcalibur、Eos、Gemini衍射仪收集数据，采用石墨单色化的Cu Kα射线并以ω-θ模式扫描单晶结构数据。在5.100<θ<70.619°范围内收集到4786个衍射点，其中独立衍射点个数为2890(R_int＝0.0499)。经验吸收校正采用SADABS程序。化合物的分子结构由直接法解出，用SHELXTL全矩阵最小二乘法精修。所有的非氢原子采用各向异性热参数精修，最后用理论加氢法确定氢原子的位置。

所制备的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮单晶，其详细的晶体测定数据见表1，晶体结构见图4和图5，该化合物属于正交晶系，空间群为P2₁2₁2₁，晶胞参数为

α＝90°，β＝90°，γ＝90°，

表1、化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的晶体结构数据

实施例2

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，结构式如下：

一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)向反应瓶中加入摩尔比为1:1.2的2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛；

(2)向步骤(1)的反应瓶中加入甲醇，(2-氨基-4-叔丁基酚+2-羟基-1-萘甲醛)：甲醇的质量比为1:40，于75℃回流反应10h；

(3)将步骤(2)的反应液抽滤得固体，用无水乙醇充分洗涤后烘干，再于无水乙醇中重结晶，得到砖红色固体粉末，即为1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮粗品；

(4)将0.1mmol砖红色固体粉末完全溶解于10ml甲醇中，并搅拌2h，过滤，滤液自然挥发，直至析出棒状晶体，即为纯化的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。

所制备的化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的¹H NMR结果、¹³CNMR结果、红外结果、X射线单晶衍射结果同实施例1。

实施例3

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮，结构式如下：

一种1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的制备方法，包括以下步骤：

(1)向反应瓶中加入摩尔比为1.2:1的2-氨基-4-叔丁基酚和2-羟基-1-萘甲醛；

(2)向步骤(1)的反应瓶中加入甲醇，(2-氨基-4-叔丁基酚+2-羟基-1-萘甲醛)：甲醇的质量比1:150，于85℃回流反应7h；

(3)将步骤(2)的反应液抽滤得到固体，用无水乙醇充分洗涤后烘干，再于无水乙醇中重结晶，得到砖红色固体粉末，即为1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮粗品；

(4)将0.3mmol砖红色固体粉末完全溶解于15ml甲醇中，并搅拌1h，过滤，滤液自然挥发，直至析出棒状晶体，即为纯化的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮。

所制备的化合物1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮的¹H NMR结果、¹³CNMR结果、红外结果、X射线单晶衍射结果同实施例1。

实验例

本发明1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮用于对DPPH自由基的抑制作用，其抑制率测定方法是：

1、试剂的配制

DPPH溶液的配制：称取4mg的1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH)，用二甲基亚砜溶解，超声助溶，定容至100ml棕色容量瓶中，置于棕色广口瓶中，现配现用。

维生素E溶液的配制：取维生素E胶囊1粒(100mg/粒)，剪破胶囊壳，用二甲基亚砜溶解，超声助溶，定容至100ml容量瓶中。

1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮样品溶液的配制：称取1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮10mg，用二甲基亚砜溶解，定容至10ml容量中。

2、预试

取DPPH溶液2ml，往其中加入所配制的样品溶液，加样时，先少量随后逐渐加量，边加边混合，随时观察溶液的颜色褪去情况，当加入1ml样品溶液时，紫色DPPH溶液颜色基本褪去。故1ml样品溶液即为样品的最大用量，在这个最大用量的基础上，往前设置8个用量，分别为25、50、100、200、400、600、800、1000μl。

3、测量

A_c值的测量：吸取所配制的DPPH溶液2ml于玻璃瓶中，并向其中加入1ml的二甲基亚砜，充分混合，在517nm处测得吸光度A值为A_c(A_c在0.7-0.9之间)。

A_i值的测量：吸取所配制的DPPH溶液2ml于玻璃瓶中，加入样品溶液xμl(x的值为根据预试结果确定的样品溶液用量)，再加入(1000-x)μl二甲基亚砜，混合均匀，于暗处静置30min后，在517nm处测得吸光度A值为A_i。

A_j值的测量：吸取样品溶液xμl(x的值为根据预试结果确定的样品溶液用量)，再加入(3000-x)μl二甲基亚砜，在517nm处测得吸光度A值为A_j。

阳性对照物维生素E的测量参照1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮样品的测量方法。

通过下面公式计算样品、阳性对照物维生素E对DPPH自由的清除率。P为抑制率：

本发明化合物和阳性对照物维生素E对DPPH自由基的抑制活性见表2、3和图6：

表2、不同浓度的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮对DPPH自由基的抑制率

表3、不同浓度的维生素E对DPPH自由基的抑制率

注：样品浓度计算方法为(A_i值测定中)：(样品溶液浓度×样品溶液体积)/(样品溶液体积+二甲基亚砜体积)。

从体外抗氧化实验的测定结果来看，本发明的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮对DPPH自由基的抑制作用比较强，远远强于市面上常用的抗氧化剂维生素E。表明本发明合成的1-((5-叔丁基-2-羟基苯胺)亚甲基)-2-萘酮在抗氧化活性上有较大的优越性。以此为基础，可以对此化合物展开进一步的药理和生理活性的研究。